四君消痞湯對糖尿病胃輕癱大鼠胃腸動力及胃腸激素的影響

李吉慶，林道斌，張永杰

廣州中醫(yī)藥大學(xué)附屬海南省中醫(yī)院內(nèi)分泌科，廣州 珠海 570203

糖尿病胃輕癱（diabetic gastroparesis，DGP）為糖尿病的常見并發(fā)癥之一，約50%糖尿病患者會發(fā)生DGP［1］。本病的典型癥狀為胃脘脹滿不適、惡心嘔吐以及噯氣等，餐后癥狀加劇，常使患者難以控制飲食習(xí)慣而導(dǎo)致血糖波動［2］。西醫(yī)常用胃腸動力劑治療本病，但存在副作用過多和易復(fù)發(fā)等缺點(diǎn)。中醫(yī)藥能明顯改善相關(guān)臨床癥狀和延緩復(fù)發(fā)。四君消痞湯由我院全國名老中醫(yī)張永杰教授所創(chuàng)，本方根據(jù)消渴日久，氣陰耗傷，脾胃虛弱的病機(jī)特點(diǎn)組方。本研究觀察四君消痞湯對DGP大鼠癥狀改善作用，探討其對DGP大鼠血糖水平、體質(zhì)量、胃排空率、腸道推進(jìn)率以及胃腸激素的影響。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物5～6 周齡SPF 級健康SD 大鼠60只，雌雄各半，體質(zhì)量（200±20）g，由長沙天勤生物技術(shù)有限公司提供，實(shí)驗(yàn)動物許可證號：SCXK（湘）2014-0011，分每籠5 只喂養(yǎng)，室溫22～25℃，濕度55%～65%，保持12 h 光照，晝夜循環(huán)，大鼠飼養(yǎng)及灌胃由專人負(fù)責(zé)。

1.2 藥物四君消痞湯中藥飲片（黨參30 g，白術(shù)20 g，茯苓15 g，桔梗10 g，升麻10 g，厚樸10 g，炙甘草5 g）由海南省中醫(yī)院中藥房提供，符合中華人民共和國藥典（2015版）規(guī)定，藥物清水煎煮取汁；多潘立酮（西安楊森制藥公司，批號：H22133067，規(guī)格：10 mg/片）。

1.3 試劑與儀器鏈脲佐菌素（streptozotocin，STZ，上海源葉生物科技有限公司）；苯酚紅（南京化學(xué)試劑股份有限公司）；P 物質(zhì)（substance P，SP）、胃泌素（gastrin，GAS）、胃動素（motilin，MTL）均由上海滬崢生物科技有限公司提供；血糖儀及血糖試紙（三諾生物傳感股份有限公司）；Multlskan Mk3 酶標(biāo)儀（賽默飛世爾儀器有限公司）；歐姆龍血糖儀（天津達(dá)爾泰有限公司）。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 大鼠分組與模型制備適應(yīng)性喂養(yǎng)1 周后，隨機(jī)挑選10 只大鼠入正常組予常規(guī)飼養(yǎng)，其余大鼠禁食不禁水12 h后，腹腔一次性注射1%STZ液，45 mg/kg（體質(zhì)量）。72 h后空腹血糖＞16.7 mmol/L者予高脂高糖飼料喂養(yǎng)（配料為雞蛋∶奶粉∶蔗糖∶豬油∶普通飼料=2∶5∶20∶15∶58），不定時喂養(yǎng)，即單數(shù)日上午投食，雙數(shù)日下午投食［3］。4周后糖尿病胃輕癱模型大鼠成功標(biāo)準(zhǔn)［4］：1）空腹血糖＞16.7 mmol/L；2）體質(zhì)量較正常組下降（P＜0.05）；3）大鼠皮毛色澤、精神狀態(tài)、大便性狀與正常組比較有明顯差異。4 周后3 只大鼠造模期間死亡，造模成功44只，將造模成功大鼠40 只隨機(jī)分為模型組、多潘立酮組及四君消痞湯高、低劑量組，每組10只。

1.4.2 給藥方法按照換算公式確定給藥劑量，多潘立酮組予臨床劑量1 倍即0.5 mg/kg 灌胃，四君消痞湯高、低劑量組分別以5、1.25 g/kg 灌胃，正常組、模型組予生理鹽水10 mL/kg 灌胃，給藥4周。給藥期間各組大鼠均常規(guī)飼養(yǎng)。

1.5 觀察指標(biāo)

1.5.1 一般情況觀察造模和給藥期間大鼠飲食、活動、毛色、大小便等情況，每周記錄體質(zhì)量。

1.5.2 胃排空率及小腸推進(jìn)率測定末次給藥結(jié)束后禁食不禁水12 h，予5%酚紅2 mL灌胃。30 min后常規(guī)麻醉脫頸處死大鼠，剖腹結(jié)扎胃幽門及賁門，取胃并沿胃大彎將胃體剖開。洗凈胃體，胃內(nèi)容物定容20 mL，加0.5 mol/L 氫氧化鈉20 mL 混勻，靜置1 h后取5 mL上清液，加入0.5 mL20%三氯乙酸去蛋白，離心后取上清液，酶標(biāo)儀波長560 nm，測量光密度（optical density，OD）值。

胃排空率（%）=（1-實(shí)測酚紅OD 值/標(biāo)準(zhǔn)酚紅OD值）×100%

小腸推進(jìn)率測定，小腸取出后拉直鋪開，測量酚紅從幽門開始在小腸中的移動距離，計(jì)算公式為：酚紅移動距離/小腸全長×100%

1.5.3 大鼠血糖、血清GAS、血漿MTL和SP檢測大鼠處死后取腹主動脈血5 mL備用，采用血糖儀及血糖試紙檢測血糖指標(biāo)，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（Enzymelinked immunosorbent assay，ELISA）法測定胃腸激素水平。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 25.0軟件分析數(shù)據(jù)，計(jì)量資料以±s表示，組間比較采用F檢驗(yàn)；多組間比較采用單因素方差分析，方差不齊采用Games Howell方法分析，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 造模期大鼠一般情況、體質(zhì)量及血糖正常組大鼠飲食、活動正常，毛色光滑，糞便質(zhì)地可。其余大鼠造模3 天后逐漸出現(xiàn)多飲、多尿、多食，活動減少，毛色干枯，精神疲憊，大便溏。造模第4周，與正常組相比，模型大鼠體質(zhì)量下降，血糖升高（P＜0.05）。給藥后，各給藥組體質(zhì)量均較模型組增加（P＜0.05），給藥第2 周，四君消痞湯高劑量組較多潘立酮組體質(zhì)量增加明顯（P＜0.05）。給藥后，多潘立酮組及四君消痞高、低劑量組大鼠多飲、多尿、多食逐漸好轉(zhuǎn)，活躍喜動，毛色光澤，大便成形。見表1—2。

表1 造模第4周各組大鼠體質(zhì)量及血糖比較（±s）

表1 造模第4周各組大鼠體質(zhì)量及血糖比較（±s）

注：a表示與正常組比較，P＜0.05

組別正常組模型組多潘立酮組四君消痞湯高劑量組四君消痞湯低劑量組鼠數(shù)10 10 10 10 10體質(zhì)量（g）256.8±7.39 181.80±11.30a 184.0±9.21a 183.7±9.19a 184.30±8.74a血糖（mmol/L）5.76±1.14 20.71±1.36a 20.32±1.12a 20.08±1.18a 21.20±1.99a

2.2 血糖與血清MTL、GAS、SP 含量與正常組相比，模型組大鼠血糖升高，血清MTL、GAS、SP 含量下降；與模型組相比，給藥組血糖降低，血清MTL、GAS、SP 升高（P＜0.05）；四君消痞高劑量組血清GAS較多潘立酮組升高（P＜0.05）。見表3。

表3 各組大鼠干預(yù)后血糖及胃腸激素水平比較（±s）

表3 各組大鼠干預(yù)后血糖及胃腸激素水平比較（±s）

注：a表示與正常組比較，P＜0.05；b表示與模型組比較，P＜0.05；c表示與多潘立酮組比較，P＜0.05

組別正常組模型組多潘立酮組四君消痞湯高劑量組四君消痞湯低劑量組鼠數(shù)10 10 10 10 10血糖（mmol/L）5.25±0.72 20.87±1.11a 19.00±0.70b 18.96±1.00b 19.15±0.93b GAS（pg/mL）63.58±3.06 45.23±3.23a 82.85±3.66b 87.34±3.95bc 83.32±3.40b MTL（pg/mL）476.55±8.17 371.07±10.77a 562.02±11.37b 543.27±10.95b 532.27±12.45b SP（ng/L）188.79±10.24 126.155±9.17a 268.51±14.67b 259.64±9.79b 247.28±11.31b

2.3 胃排空率及小腸推進(jìn)率與正常組相比，模型組胃排空率及小腸推進(jìn)率均下降；與模型組相比，各給藥組胃排空率及小腸推進(jìn)率均有不同程度提高。上述差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表4。

表2 各組大鼠干預(yù)后體質(zhì)量變化情況比較（±s） g

表2 各組大鼠干預(yù)后體質(zhì)量變化情況比較（±s） g

注：a表示與正常組比較，P＜0.05；b表示與模型組比較，P＜0.05；c表示與多潘立酮組比較，P＜0.05

組別正常組模型組多潘立酮組四君消痞湯高劑量組四君消痞湯低劑量組鼠數(shù)10 10 10 10 10干預(yù)第1周276.60±7.89 186.90±11.48a 199.10±8.60b 203.80±8.39b 197.60±7.08b干預(yù)第2周301.10±5.27 194.00±11.18a 211.80±7.06b 227.40±6.23bc 215.40±6.83b干預(yù)第3周320.75±6.31 200.00±10.89a 220.50±6.99b 250.50±5.33bc 225.90±6.90b干預(yù)第4周336.80±9.21 206.70±10.68a 230.50±6.02b 271.00±6.87bc 235.30±7.27b

表4 各組大鼠胃排空率與小腸推進(jìn)率比較（±s）%

表4 各組大鼠胃排空率與小腸推進(jìn)率比較（±s）%

注：a表示與正常組比較，P＜0.05；b表示與模型組比較，P＜0.05

組別正常組模型組多潘立酮組四君消痞湯高劑量組四君消痞湯低劑量組鼠數(shù)10 10 10 10 10胃排空率71.11±7.94 39.84±8.60a 64.97±11.44b 66.47±13.86b 56.62±11.02b腸道推進(jìn)率72.55±6.33 38.77±11.58a 64.47±9.60b 67.23±12.05b 54.29±9.46b

3 討論

中醫(yī)理論中無“糖尿病胃輕癱”病名，但根據(jù)其癥狀，可歸為“消渴、痞滿、胃脹”等范疇，中醫(yī)認(rèn)為本病主要病機(jī)為消渴日久，中氣虛弱，脾胃氣機(jī)不利，胃腑通降失常所致［5］。正如朱丹溪所云：“有中氣虛弱，不能運(yùn)化精微為痞者；有飲食痰飲不能施化為痞者。”［6］本研究采用四君子湯方中黨參補(bǔ)中益氣，和胃生津，為君藥，臣以白術(shù)、茯苓健脾之際，再添利濕之效使?jié)駸o所聚，痰無所生。佐用桔梗、厚樸行氣除滯，消痞除脹。再加升麻提升脾胃之氣，配合厚樸下氣除滿之功，一上一下恢復(fù)脾升胃降之機(jī)。炙甘草為使，益脾氣，調(diào)和諸藥，全方共奏益氣健脾之效。

DGP 患者由于胃腸功能紊亂，極易引起血糖波動，進(jìn)而造成血糖控制不佳及消瘦［7］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，經(jīng)過藥物干預(yù)后，給藥組大鼠血糖水平及體質(zhì)量較模型組改善。

胃腸激素是指由胃腸黏膜的化學(xué)信使細(xì)胞分泌的激素，能夠和神經(jīng)系統(tǒng)一道調(diào)節(jié)消化器官的運(yùn)動、吸收和分泌［8］。糖尿病患者長期高糖毒性作用以及自主神經(jīng)病變，可導(dǎo)致胃腸道激素水平紊亂，造成胃腸道功能失調(diào)。研究顯示，在糖尿病小鼠體內(nèi)注射一定劑量胃腸激素，會使其胃排空率發(fā)生變化［9］。宋玉鵬等［10］的實(shí)驗(yàn)表明，DGP患者或DGP動物模型均存在胃腸激素GAS、MTL、SP低于正常水平的情況。GAS 主要為胃竇和十二指腸黏膜中G 細(xì)胞所分泌的胃腸激素，既可促進(jìn)胃蛋白酶和胃酸分泌，也可引起胃底舒張和胃竇收縮，從而加速胃腸運(yùn)動［11］。MTL 為促胃腸運(yùn)動激素，主要由十二指腸和近端空腸黏膜中的M0 細(xì)胞分泌，可以作用于胃腸平滑肌特異性受體，促進(jìn)胃排空。據(jù)報(bào)道［12］，DGP 患者胃排空延長、收縮減弱與MTL分泌下降有關(guān)。SP 廣泛分布于腸道神經(jīng)系統(tǒng)，可作為神經(jīng)遞質(zhì)參與胃腸運(yùn)動的調(diào)控。SP 不但對胃腸縱行肌和環(huán)形肌具有雙重收縮效應(yīng)，還可以刺激胃腸壁內(nèi)神經(jīng)元，增強(qiáng)胃腸平滑肌收縮［13］，本實(shí)驗(yàn)中與正常組相比，模型組大鼠胃排空率、腸道推進(jìn)率降低，胃腸激素GAS、MTL、SP 水平下降，與文獻(xiàn)報(bào)道一致。而給藥組經(jīng)過藥物干預(yù)后，胃腸激素水平提高，胃排空率及腸道推進(jìn)率上升，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

綜上所述，四君消痞湯可刺激胃腸激素的分泌而發(fā)揮改善胃腸運(yùn)動的作用。并且通過對胃腸狀態(tài)的良性調(diào)整可進(jìn)一步穩(wěn)定血糖水平，恢復(fù)體質(zhì)量。