電子交叉配血技術(shù)在紅細(xì)胞不規(guī)則抗體陽性患者交叉配血中的應(yīng)用研究*

劉學(xué)軍，劉金蓮，馬婷婷，黃寶甲，莫秋紅，李麗蘭

南寧輸血醫(yī)學(xué)研究所/南寧中心血站，廣西南寧 530007

電子交叉配血是指在血型鑒定和抗體篩查的基礎(chǔ)上，直接用計算機(jī)系統(tǒng)為患者選擇血型相容的血液[1]。電子交叉配血技術(shù)最早應(yīng)用于瑞典的一家醫(yī)院，他們從1983年開始采用該技術(shù)為ABO/RhD血型抗原確認(rèn)且紅細(xì)胞不規(guī)則抗體陰性的患者實施ABO/RhD相容的交叉配血，所發(fā)放血液超過25萬U[2]。目前該技術(shù)在國外的一些較發(fā)達(dá)的地區(qū)已廣泛應(yīng)用[3]。在我國，香港CHAN等[4]于1996年報道了ABO/RhD相容的電子交叉配血在外科輸血的實施和應(yīng)用，使香港成為亞洲最早實施電子交叉配血的地區(qū)。2008年，廣東省東莞市中心血站何子毅等[5]率先在我國大陸開展電子交叉配血的研究和臨床應(yīng)用工作。目前，紅細(xì)胞相關(guān)電子交叉配血的報道主要集中在針對紅細(xì)胞不規(guī)則抗體陰性的患者實施ABO/RhD相容的電子交叉配血的應(yīng)用中，而針對紅細(xì)胞不規(guī)則抗體陽性患者實施的電子交叉配血的相關(guān)報道還較少見。本研究主要針對紅細(xì)胞不規(guī)則抗體陽性且特異性明確的患者，在本實驗室已建立的紅細(xì)胞血型抗原/抗原基因型已知獻(xiàn)血者數(shù)據(jù)庫的基礎(chǔ)上，開展電子交叉配血的應(yīng)用研究?，F(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集2020年1月至2021年4月南寧市各醫(yī)院送檢的不規(guī)則抗體篩查陽性和(或)交叉配血不相合的137例患者的137份血液標(biāo)本。137例患者中男68例，女69例，年齡2 d至99歲(新生兒溶血病案例4例，中位年齡為5.5 d，其余案例133例，中位年齡為51.5 歲) ，分別采集不抗凝靜脈血和乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)抗凝靜脈血各5 mL，用于血清學(xué)檢測。

1.2儀器與試劑 Eppendorf離心機(jī)(德國Eppendorf)；久保田KA-2200離心機(jī)(日本KUBOTA)；ID-Incubator 37SI(美國BIO-RAD)；ID-Centrifuge 12SⅡ離心機(jī)(美國BIO-RAD)；恒溫水槽DK-8B(上海精宏實驗設(shè)備有限公司)；抗球蛋白檢測卡(瑞士DiaMed，批號：50531.60.17)；抗-A、抗-B(上海血液生物，批號：20200202)；抗-D單克隆試劑(上海血液生物，批號：20201802)；抗球蛋白試劑(上海血液生物，批號：20195002)；聚凝胺介質(zhì)試劑(珠海貝索,批號：A201203)；抗體鑒定譜細(xì)胞(上海血液生物，批號：20201113)；抗體篩查細(xì)胞(上海血液生物,批號：20210130)；抗體篩查細(xì)胞(江蘇力博，批號：202008013)；Makropanel16(荷蘭Sanquin，批號：8000452938)；各種抗血清試劑等。

1.3血型和不規(guī)則抗體鑒定方法 按照《全國臨床檢驗操作規(guī)程》中血型血清學(xué)檢查方法操作，應(yīng)用鹽水法進(jìn)行ABO、RhD血型和其他血型系統(tǒng)紅細(xì)胞抗原檢測，應(yīng)用鹽水法、聚凝胺法、抗球蛋白法和(或)微柱凝膠卡法、酶法、吸收放散法等進(jìn)行紅細(xì)胞不規(guī)則抗體的檢測和鑒定。

1.4電子交叉配血 針對不規(guī)則抗體檢測陽性且特異性明確的患者，應(yīng)用已建立的免疫血液學(xué)實驗室臨床檢測綜合管理系統(tǒng)實施電子交叉配血。電子交叉配血基本條件：(1)患者ABO和RhD血型確定；(2)患者標(biāo)本不規(guī)則抗體陽性且特異性明確；(3)實驗室建立的紅細(xì)胞血型抗原/抗原基因已知型獻(xiàn)血者數(shù)據(jù)庫包含有患者不規(guī)則抗體所對應(yīng)抗原的血型系統(tǒng)及該抗原為陰性的供者數(shù)據(jù)。電子交叉配血的原則：為患者找尋其體內(nèi)不規(guī)則抗體所對應(yīng)抗原陰性，且ABO和RhD血型相容的血液產(chǎn)品或獻(xiàn)血者。

1.5血清學(xué)實驗驗證 應(yīng)用鹽水法、聚凝胺法和抗球蛋白法對電子交叉配血相容血液進(jìn)行血型血清學(xué)交叉配血。

2 結(jié) 果

2.1不規(guī)則抗體分布情況 納入本研究的137份標(biāo)本中，紅細(xì)胞不規(guī)則抗體特異性分布情況見表1。主要涉及Rh、MNS、Lewis、Kidd和Duffy等5個血型系統(tǒng)。

表1 137份標(biāo)本紅細(xì)胞不規(guī)則抗體特異性分布情況

2.2電子交叉配血和血型血清學(xué)交叉配血驗證結(jié)果 應(yīng)用電子交叉配血成功為本研究的137例紅細(xì)胞不規(guī)則抗體陽性的患者找到相合的供者或血液制品，血型血清學(xué)交叉配血驗證結(jié)果與電子交叉配血結(jié)果一致，均為相容137例，不相容0例。

3 討 論

對于紅細(xì)胞不規(guī)則抗體陽性的患者，當(dāng)需要輸血治療時，為其找到與之體內(nèi)抗體所對應(yīng)的抗原為陰性的供者，是為患者提供相配合的血液和實施有效輸血治療的關(guān)鍵。電子交叉配血在紅細(xì)胞不規(guī)則抗體陽性且特異性明確患者中的成功實施，其先決條件是實驗室已建立適應(yīng)當(dāng)?shù)嘏R床輸血的紅細(xì)胞血型抗原/抗原基因型已知的獻(xiàn)血者數(shù)據(jù)庫，且所建立的數(shù)據(jù)庫包含與患者紅細(xì)胞不規(guī)則抗體所對應(yīng)的紅細(xì)胞抗原陰性的供者。在前期工作中，本課題組針對劉金蓮等[6]報道的南寧地區(qū)疑難輸血患者紅細(xì)胞不規(guī)則抗體分布情況初步建立了南寧紅細(xì)胞血型抗原/抗原基因型已知的獻(xiàn)血者數(shù)據(jù)庫，目前該數(shù)據(jù)庫主要涵蓋Rh、MNS、Lewis、Kidd和Duffy 等5個血型系統(tǒng)，以固定獻(xiàn)血者為主要對象，在血站常規(guī)檢測ABO和RhD血型的基礎(chǔ)上，采用血清學(xué)方法和(或)分子生物學(xué)檢測方法對所涵蓋的5個血型系統(tǒng)進(jìn)行血型檢測。目前本血站已建立的獻(xiàn)血者數(shù)據(jù)庫中，包含Rh血型系統(tǒng)DCcEe已知型供者23 754人，其中RhD陰性供者1 781人，ccdee供者934人，CCDee供者2 444人，ccDEE供者576人；包含MNS系統(tǒng)供者482人，其中NN供者210人，MM供者62人，ss供者19人，Mur陰性供者191人；包含Lewis系統(tǒng)供者335人，其中Lea-b+供者179人，Lea+b-供者90人，Lea-b-供者66人；包含Kidd系統(tǒng)供者304人，其中Jka-b+供者215人，Jka+b-供者89人；包含Duffy系統(tǒng)供者80人，均為Fya+b-供者。在本研究的137份紅細(xì)胞不規(guī)則抗體特異性明確的標(biāo)本中，Rh系統(tǒng)抗體占比最高，為56.93%(78/137)，其次為MNS系統(tǒng)抗體，占18.25%(25/137)。以目前本實驗室已建立的南寧市紅細(xì)胞血型抗原/抗原基因型已知的獻(xiàn)血者數(shù)據(jù)庫為基礎(chǔ)，通過電子交叉配血，均成功為這些患者找到其抗體所對應(yīng)抗原陰性的相配合的血液，血清學(xué)交叉配血驗證結(jié)果與電子交叉配血結(jié)果完全一致，血液輸注后，對患者進(jìn)行電話回訪，無患者發(fā)生溶血性輸血反應(yīng)，顯示了其安全性和可靠性。

應(yīng)用電子交叉配血為紅細(xì)胞不規(guī)則抗體陽性患者成功實施交叉配血的另一必要條件是患者的抗體特異性鑒定明確且無臨床有意義抗體的漏檢。由于血型抗原具有人群多態(tài)性，不同地區(qū)人群紅細(xì)胞血型系統(tǒng)不規(guī)則抗體的分布亦有所差異。例如，Dia抗原表達(dá)幾乎限制在蒙古族人群中，土著美洲人、南美印第安人的表達(dá)頻率約為36%，日本人的表達(dá)頻率約為12%，中國人的表達(dá)頻率約為5%，高加索人和黑種人表達(dá)頻率約為0.01%[7]。因此，實驗室應(yīng)根據(jù)當(dāng)?shù)乜乖娜巳憾鄳B(tài)性特征和輸血患者抗體分布情況制訂相應(yīng)檢測策略，以確保抗體鑒定準(zhǔn)確，避免臨床有意義抗體的漏檢情況發(fā)生。隨著檢測技術(shù)和實驗室管理水平的不斷提高，抗體漏檢率越來越低。英國NEQAS的室間質(zhì)量評價數(shù)據(jù)中，抗體漏檢率從1984-1985年的6.65%下降到1996-1997年的0.07%[8]。據(jù)GARRATTY等[9]估算，具有潛在臨床意義抗體的漏檢率約為1∶17 000。英國BCSH 《輸血實驗室血液相容性檢測程序編制指南》根據(jù)具有臨床意義抗體的相關(guān)數(shù)據(jù)，對抗體篩檢細(xì)胞所應(yīng)涵蓋的抗原及抗原組合標(biāo)準(zhǔn)作出詳細(xì)規(guī)定，如遵照該指南操作，抗體篩檢的敏感性高于交叉配血試驗[10]。

電子交叉配血能為血型抗原確認(rèn)和(或)抗體特異性明確的患者，特別是針對稀有血型抗原或具有稀有血型抗體的患者能夠快速找到相匹配的供者，使患者能夠得到及時有效的治療。相較于傳統(tǒng)的血清學(xué)交叉配血，電子交叉配血已被證實具有很多優(yōu)點[11]，其最大的優(yōu)勢是檢測時間比血型血清學(xué)交叉配血縮短[12-13]。電子交叉配血或?qū)⑹禽斞聵I(yè)未來發(fā)展的趨勢，電子交叉配血的實施和應(yīng)用有望為輸血的安全有效提供保障。