口腔扁平苔蘚患者血清NGF、sPD-1、RANTES水平與免疫功能的相關(guān)性分析

劉亞娟，張文濤

1.陜西中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院口腔科，陜西咸陽(yáng) 712000;2.西安高新醫(yī)院口腔科，陜西西安 710075

口腔扁平苔蘚(OLP)是臨床上較為常見(jiàn)的口腔黏膜慢性炎癥性疾病之一，多見(jiàn)于中年女性人群，發(fā)病率為0.5%～4.0%，如不予以積極有效的治療可能有惡性病變的風(fēng)險(xiǎn)[1]。OLP的發(fā)病與患者機(jī)體的炎性反應(yīng)和免疫狀態(tài)均具有一定的關(guān)聯(lián)[2]。其中神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)的異常升高可能對(duì)炎癥介質(zhì)釋放起到刺激作用，可進(jìn)一步增強(qiáng)炎性反應(yīng)，其在多種疾病的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用[3]?？扇苄猿绦蛐运劳鍪荏w1(sPD-1)是近年來(lái)所發(fā)現(xiàn)的一種和T淋巴細(xì)胞功能異常變化密切相關(guān)的調(diào)控因子，可通過(guò)和其配體特異性結(jié)合發(fā)揮抑制T、B細(xì)胞功能的作用，從而抑制T細(xì)胞的增殖，介導(dǎo)多種疾病的發(fā)生、發(fā)展[4]。調(diào)節(jié)活化正常T細(xì)胞表達(dá)和分泌因子(RANTES)屬于CC亞族趨化因子之一，對(duì)多種細(xì)胞，如T細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞及嗜酸性/堿性粒細(xì)胞均有調(diào)控作用，繼而可能參與了多種疾病的發(fā)生、發(fā)展[5]。鑒于此，本文通過(guò)研究OLP患者血清NGF、sPD-1、RANTES水平與外周血T淋巴細(xì)胞亞群和體液免疫指標(biāo)的相關(guān)性，以期為OLP的診治提供參考，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 將陜西中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院2018年3月至2020年3月收治的75例OLP患者納入研究。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)符合第4版《口腔黏膜病學(xué)》[6]中所制定的OLP相關(guān)診斷及分型標(biāo)準(zhǔn)；(2)首次發(fā)病；(3)入組前尚未接受任何相關(guān)治療；(4)經(jīng)病理學(xué)檢查確診。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)入組前30 d內(nèi)接受過(guò)抗菌藥物治療；(2)入組前90 d內(nèi)接受過(guò)糖皮質(zhì)激素和(或)免疫制劑等藥物治療；(3)合并全身系統(tǒng)性疾病或惡性腫瘤；(4)伴有牙齦炎或牙周炎等口腔疾病；(5)妊娠期或哺乳期女性。根據(jù)疾病類型將75例OLP患者分為糜爛型組(40例)及非糜爛型組(35例)。糜爛型組男13例，女27例；年齡21～69歲，平均(50.32±10.33)歲；病程1個(gè)月至3年，平均(1.33±0.26)年。非糜爛型組男11例，女24例；年齡22～73歲，平均(50.56±10.41)歲；病程1個(gè)月至4年，平均(1.37±0.24)年。另選取同期于本院進(jìn)行體檢的健康志愿者35例作為對(duì)照組。其中男10例，女25例；年齡22～69歲，平均(50.44±10.38)歲。各組性別、年齡等比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。各組受試者均簽署知情同意書(shū)，本院倫理委員會(huì)已批準(zhǔn)本研究。

1.2方法

1.2.1血清NGF、sPD-1、RANTES水平檢測(cè) 分別采集患者入院后次日清晨、健康志愿者體檢當(dāng)天空腹靜脈血5 mL，以3 000 r/min離心10 min(離心半徑為10 cm)，獲取血清。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法進(jìn)行NGF、sPD-1、RANTES水平檢測(cè)，操作嚴(yán)格遵循試劑盒說(shuō)明書(shū)。相關(guān)試劑盒均購(gòu)自上海創(chuàng)祥生物科技有限公司。

1.2.2外周血T淋巴細(xì)胞亞群水平檢測(cè) 采集患者入院后次日清晨、健康志愿者體檢當(dāng)天靜脈血2 mL，以乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝處理備用。采用BriCyte E6流式細(xì)胞儀(深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司)檢測(cè)CD3+、CD4+及CD8+。

1.2.3體液免疫指標(biāo)檢測(cè) 分別采集患者入院后次日清晨、健康志愿者體檢當(dāng)天空腹靜脈血2 mL，在室溫條件下3 000 r/min離心10 min，獲取血清后立即送檢。采用免疫散射比濁法檢測(cè)體液免疫指標(biāo)，包括免疫球蛋白(Ig)G、IgA及IgM，操作嚴(yán)格遵循試劑盒說(shuō)明書(shū)完成。相關(guān)試劑盒均購(gòu)自武漢博士德生物科技有限公司。

2 結(jié) 果

2.13組血清NGF、sPD-1、RANTES水平比較 糜爛型組和非糜爛型組的血清NGF、sPD-1、RANTES水平均明顯高于對(duì)照組，且糜爛型組高于非糜爛型組(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 3組血清NGF、sPD-1、RANTES水平比較

2.23組T淋巴細(xì)胞亞群比較 糜爛型組和非糜爛型組CD3+、CD4+均低于對(duì)照組，且糜爛型組低于非糜爛型組(P<0.05)；糜爛型組和非糜爛型組的CD8+均高于對(duì)照組，且糜爛型組高于非糜爛型組(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 3組T淋巴細(xì)胞亞群比較

2.33組體液免疫指標(biāo)水平比較 糜爛型組和非糜爛型組的IgM水平均高于對(duì)照組，且糜爛型組高于非糜爛型(P<0.05)；3組IgG、IgA水平比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表3。

表3 3組體液免疫指標(biāo)水平比較

2.4血清NGF、sPD-1、RANTES水平與外周血T淋巴細(xì)胞亞群和體液免疫指標(biāo)的相關(guān)性分析 經(jīng)Pearson相關(guān)分析可得，OLP患者血清NGF、sPD-1、RANTES水平與CD3+、CD4+均呈負(fù)相關(guān)，與CD8+、IgM水平均呈正相關(guān)(P<0.05)；血清NGF、sPD-1、RANTES水平與IgG、IgA水平均無(wú)相關(guān)性(P>0.05)。見(jiàn)表4。

表4 相關(guān)性分析

3 討 論

OLP是發(fā)生在口腔黏膜的一組慢性炎癥性自身免疫性疾病，會(huì)對(duì)患者的口腔黏膜組織(包括頰黏膜、舌背部及牙齦組織等)造成不同程度的影響[7]。OLP患者可伴有皮膚、指甲及其他部位的損傷，慢性、非自限性、有惡性變潛力是該病的特點(diǎn)。目前關(guān)于該病的具體病因及發(fā)病機(jī)制尚存在一定的爭(zhēng)議，可能與免疫、感染及遺傳等多種因素相關(guān)。目前普遍認(rèn)為，T淋巴細(xì)胞所介導(dǎo)的免疫功能改變?cè)谠摬〉陌l(fā)生、發(fā)展過(guò)程中起至關(guān)重要的作用[8-10]。NGF可通過(guò)和其高親和力受體TrkA相結(jié)合繼而發(fā)揮生物學(xué)功能，NGF的異常增加可能導(dǎo)致炎性反應(yīng)的增強(qiáng)，繼而促進(jìn)炎癥介質(zhì)的釋放，促進(jìn)炎癥的發(fā)生、發(fā)展。正常生理調(diào)節(jié)下，適量的程序性死亡受體1/程序性死亡受體1配體(PD-1/PD-L1)信號(hào)通路可對(duì)T細(xì)胞增殖及細(xì)胞因子的產(chǎn)生起抑制作用，進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)對(duì)B細(xì)胞和T細(xì)胞的調(diào)節(jié)，限制自身反應(yīng)性T細(xì)胞效應(yīng)及靶器官損害。而當(dāng)上述信號(hào)通路所提供的負(fù)調(diào)節(jié)信號(hào)過(guò)強(qiáng)，可能會(huì)抑制T細(xì)胞的增殖、活化，繼而引起細(xì)胞免疫功能缺陷。RANTES屬于趨化性細(xì)胞因子CC亞族成員之一，對(duì)單核細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞及自然殺傷細(xì)胞等多種細(xì)胞均有趨化或刺激作用[11-13]。由此推測(cè)，NGF、sPD-1、RANTES可能在OLP的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用。

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，糜爛型組和非糜爛型組的血清NGF、sPD-1、RANTES水平均高于對(duì)照組，而糜爛型組上述3項(xiàng)血清學(xué)指標(biāo)水平均高于非糜爛型組，提示血清NGF、sPD-1、RANTES均可能參與OLP的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程。分析原因，OLP患者普遍存在多種炎癥細(xì)胞因子的異常升高，加之口腔黏膜組織不同程度受損，繼而可能誘導(dǎo)局部組織及外周血NGF的合成、分泌，而外周血NGF可通過(guò)血液循環(huán)的途徑直接作用在局部組織，對(duì)神經(jīng)纖維分布及神經(jīng)元活性產(chǎn)生影響，并會(huì)誘導(dǎo)具備免疫調(diào)節(jié)功能的P物質(zhì)合成及釋放，二者協(xié)同刺激炎癥的進(jìn)展，進(jìn)一步參與OLP發(fā)生、發(fā)展[14]。sPD-1水平升高可能是機(jī)體對(duì)自身免疫的保護(hù)反應(yīng)所致，其中sPD-1可通過(guò)和細(xì)胞膜上的PD-L1相結(jié)合，從而對(duì)PD-1/PD-L1通路所傳遞的負(fù)性調(diào)控起到阻斷作用，進(jìn)一步減輕了PD-1對(duì)T細(xì)胞功能造成的抑制，最終防止負(fù)性信號(hào)過(guò)強(qiáng)而導(dǎo)致的機(jī)體免疫損傷[15]。RANTES作為趨化性細(xì)胞因子CC亞族的重要成員之一，會(huì)對(duì)多種白細(xì)胞產(chǎn)生趨化或刺激作用，進(jìn)一步促使T淋巴細(xì)胞向口腔黏膜固有層浸潤(rùn)，從而促進(jìn)了OLP的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程。劉健等[16]的研究指出，RANTES可能在T淋巴細(xì)胞聚集至OLP病變部位的過(guò)程中發(fā)揮著重要作用。相較于非糜爛型OLP患者，糜爛型OLP患者病情明顯更加嚴(yán)重，因此上述血清指標(biāo)水平異常表達(dá)更明顯。此外，糜爛型組和非糜爛型組的CD3+、CD4+均低于對(duì)照組，且糜爛型組低于非糜爛型組，而糜爛型組和非糜爛型組的CD8+、IgM水平均高于對(duì)照組，且糜爛型組高于非糜爛型組，提示細(xì)胞免疫及體液免疫均參與了OLP的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程，且以細(xì)胞免疫為主。究其原因，OLP的發(fā)病機(jī)制主要包括抗原特異性、非特異性兩種，且無(wú)論哪種發(fā)病機(jī)制均伴隨機(jī)體免疫功能的異常改變[17]。另外，經(jīng)Pearson相關(guān)分析可得，OLP患者血清NGF、sPD-1、RANTES水平與CD3+、CD4+水平均呈負(fù)相關(guān)，而與CD8+、IgM水平均呈正相關(guān)，這說(shuō)明血清NGF、sPD-1、RANTES在OLP發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中的可能作用機(jī)制與細(xì)胞免疫、體液免疫的異常改變有關(guān)。分析原因，NGF可通過(guò)和位于感覺(jué)神經(jīng)末梢中的TrkA受體相結(jié)合，繼而激活影響SP的合成及翻譯的特異性信號(hào)通路，進(jìn)一步導(dǎo)致SP的表達(dá)異常升高，對(duì)免疫應(yīng)答產(chǎn)生間接影響[18]。sPD-1的高表達(dá)使其與細(xì)胞膜表面的PD-1結(jié)合概率增加，從而導(dǎo)致PD-1傳遞的負(fù)性信號(hào)增強(qiáng)，抑制了T細(xì)胞的功能，導(dǎo)致免疫功能出現(xiàn)異常[19]。RANTES作為趨化因子之一，可能通過(guò)促進(jìn)T淋巴細(xì)胞增殖分化成為CD4+輔助性T細(xì)胞1(Th1細(xì)胞)，繼而參與免疫應(yīng)答[20]。

綜上所述，OLP血清NGF、sPD-1、RANTES水平均異常高表達(dá)，且與患者細(xì)胞免疫及體液免疫密切相關(guān)，可能成為OLP診治的新靶點(diǎn)。