免疫組織化學(xué)檢測(cè)p63、α-SMA對(duì)乳腺癌的臨床診斷價(jià)值

邸 靜，王 力

商洛國(guó)際醫(yī)學(xué)中心醫(yī)院病理科，陜西商洛 726000

乳腺癌是女性常見(jiàn)的婦科腫瘤之一，在過(guò)去的50年乳腺癌的發(fā)病率逐年升高，已占據(jù)女性惡性腫瘤發(fā)病率的31%，死亡率排列第三，僅次于胃癌及肺癌，已經(jīng)嚴(yán)重威脅患者生命安全[1]。在乳腺癌的早期診斷中，病理學(xué)證據(jù)具有關(guān)鍵作用。乳腺導(dǎo)管是乳房重要組織成分之一，肌上皮細(xì)胞主要分布在乳腺導(dǎo)管外層，與肌細(xì)胞作用相似，具有收縮潛能。α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA)由377個(gè)氨基酸殘基組成，是細(xì)胞中6種肌動(dòng)蛋白之一，也是肌上皮細(xì)胞中表達(dá)的一種細(xì)胞骨架蛋白。肌上皮細(xì)胞在乳腺良性病變中可以被檢測(cè)到，但是當(dāng)發(fā)生乳腺惡性上皮病變時(shí)幾乎找不到肌上皮細(xì)胞，因此肌上皮細(xì)胞是否存在是區(qū)別乳腺良性病變和惡性病變的重要依據(jù)[2]。a-SMA屬于肌纖維母細(xì)胞的標(biāo)志蛋白，能夠參與細(xì)胞增殖、遷移等運(yùn)動(dòng)。肌纖維母細(xì)胞是腫瘤間質(zhì)的重要組成部分，可參與乳腺癌疾病的發(fā)生、發(fā)展。p63基因是1997年被發(fā)現(xiàn)的一種新基因，因與p53具有較強(qiáng)的同源性而被認(rèn)為是p53家族的新成員。p63蛋白可激活p53相關(guān)基因而誘發(fā)細(xì)胞凋亡，故被稱為腫瘤抑制基因[3]。相關(guān)研究顯示，病理學(xué)標(biāo)志物能夠明顯提高乳腺癌疾病診斷效能，其表達(dá)水平在一定程度上對(duì)患者預(yù)后有較高的預(yù)測(cè)價(jià)值[4]。本研究收集2017年1月至2019年5月在本院行乳腺癌根治術(shù)的80例患者腫瘤組織及癌旁組織，觀察p63、SMA表達(dá)對(duì)乳腺癌診斷及預(yù)后的影響，以期為乳腺癌病理診斷提供新的指標(biāo)。

1 資料與方法

1.1一般資料 80例乳腺癌組織及癌旁組織標(biāo)本均來(lái)自2017年1月至2019年5月在本院行乳腺癌根治術(shù)的患者。所有組織標(biāo)本經(jīng)10%的甲醛固定包埋處理。所有患者均為女性，術(shù)前均未進(jìn)行化療，平均年齡(56.42±11.23)歲，均為單側(cè)癌。組織病理學(xué)檢查顯示：浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌68例，黏液腺癌7例，乳腺導(dǎo)管原位癌(DCIS) 3例，實(shí)性乳頭狀癌2例；組織學(xué)分級(jí)Ⅰ級(jí)36例，Ⅱ級(jí)44例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移28例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移52例。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)接受手術(shù)治療的原發(fā)性乳腺癌；(2)非雙側(cè)病灶；(3)初次手術(shù)；(4)可進(jìn)行隨訪。排出標(biāo)準(zhǔn)：(1)繼發(fā)性乳腺癌患者；(2)非單側(cè)病灶患者；(3)放化療及免疫治療者；(5)無(wú)法進(jìn)行隨訪者；(6)臨床資料不齊全者；(7)參與其他臨床項(xiàng)目研究者。本研究已經(jīng)獲得患者同意，簽署知情同意書，并經(jīng)本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)同意。

1.2主要試劑 小鼠抗人p63單克隆抗體購(gòu)自美國(guó)Santa Cruz公司，α-SMA抗體購(gòu)自圣克魯斯生物技術(shù)(上海)有限公司，SP9002免疫組織化學(xué)(免疫組化)試劑購(gòu)自中國(guó)上海鼎杰生物技術(shù)有限公司。

1.3方法

1.3.1免疫組化檢測(cè) 將乳腺癌組織及癌旁組織剪切成小塊，脫水、包埋后，采用10%甲醛固定，水化后，37.5 ℃靜置0.5 h后，加入1%的乙二胺四乙酸(EDTA)溶液，山羊血清封閉。加入1抗(1∶500)，加入α-SMA及p63抗體，加入二抗0.5 h后，復(fù)染，封閉。選擇不交叉的10個(gè)視野，以淡黃色至棕褐色為陽(yáng)性，計(jì)算陽(yáng)性率。判斷標(biāo)準(zhǔn)：蘇木精-伊紅(HE)染色，染色結(jié)果經(jīng)過(guò)本科室2位高年資醫(yī)師復(fù)診，參考世界衛(wèi)生組織(WHO)乳腺癌分類形態(tài)學(xué)(2019年第5版)[5]判定。免疫組化結(jié)果判斷參考表1。

表1 免疫組化判斷標(biāo)準(zhǔn)

1.3.2隨訪 對(duì)80例患者進(jìn)行2年時(shí)間的隨訪，隨訪方式為電話隨訪及門診復(fù)查，隨訪截止日期為2021年5月31日，觀察患者2年生存率。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS23.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料以n(%)表示，采用χ2檢驗(yàn)或Fisher確切概率法，采用Log-rank檢驗(yàn)比較生存率，采用受試者工作特征(ROC)曲線分析診斷價(jià)值。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1兩組患者乳腺癌組織及癌旁組織p63、α-SMA陽(yáng)性表達(dá)情況 免疫組化結(jié)果顯示，p63、α-SMA陽(yáng)性表達(dá)呈棕黃色顆粒，乳腺癌組織p63陽(yáng)性表達(dá)率低于癌旁組織，α-SMA陽(yáng)性表達(dá)率高于癌旁組織，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表2及圖1。

表2 乳腺癌組織及癌旁組織p63及α-SMA陽(yáng)性表達(dá)率比較[n(%)]

圖1 乳腺癌組織及癌旁組織中p63及α-SMA陽(yáng)性表達(dá)情況(×200)

2.2不同臨床特征乳腺癌患者p63及α-SMA陽(yáng)性情況比較 不同年齡、腫瘤大小、TNM分期及組織學(xué)類型乳腺癌患者p63及α-SMA陽(yáng)性表達(dá)率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移乳腺癌患者p63及α-SMA陽(yáng)性表達(dá)率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表3 不同臨床特征乳腺癌患者p63及α-SMA陽(yáng)性情況比較[n(%)]

2.3乳腺癌患者預(yù)后分析 80例乳腺癌患者2年生存率為59例(73.75%)，p63陽(yáng)性患者2年生存人數(shù)為13例，存活率為92.85%(13/14)，p63陰性患者2年生存人數(shù)為46例，生存率為69.70%(46/66)，Log-rank檢驗(yàn)顯示，p63陽(yáng)性與陰性患者生存率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；α-SMA陽(yáng)性患者2年生存人數(shù)為54例，生存率為72.97%(54/74)，α-SMA陰性患者生存人數(shù)為5例，生存率為83.33%(5/6)，Log-rank檢驗(yàn)α-SMA陽(yáng)性與陰性患者生存率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)圖2。

圖2 預(yù)后分析

2.4p63及α-SMA對(duì)乳腺癌的診斷價(jià)值 p63檢測(cè)乳腺癌的AUC為0.778(95%CI：0.683～0.871)，靈敏度為78.54%，特異度為75.16%；α-SMA檢測(cè)AUC為0.731(95%CI：0.622～0.838)，靈敏度為76.30%，特異度為70.82%；p63聯(lián)合α-SMA檢測(cè)AUC為0.872(95%CI：0.794～0.951)，靈敏度為82.46%，特異度為78.17%。p63、α-SMA及二者聯(lián)合檢測(cè)對(duì)乳腺癌診斷均有一定價(jià)值。見(jiàn)圖3。

圖3 p63、α-SMA及聯(lián)合檢測(cè)對(duì)乳腺癌的診斷價(jià)值

3 討 論

因乳腺癌早期無(wú)明顯癥狀，故多數(shù)患者確診時(shí)已經(jīng)為中晚期，嚴(yán)重影響患者生存預(yù)后，因此早期診斷對(duì)提高乳腺癌患者預(yù)后具有重要意義[5]。本研究結(jié)果顯示，p63在乳腺癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)低于癌旁組織，α-SMA在乳腺癌組織中陽(yáng)性表達(dá)高于癌旁組織，p63及α-SMA表達(dá)陽(yáng)性水平與患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，與患者年齡、腫瘤大小、TNM分期及病理組織類型均無(wú)相關(guān)性，說(shuō)明p63及α-SMA表達(dá)水平參與乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展。

p63屬于p53家族成員之一，主要在正常乳腺肌上皮細(xì)胞核中特異性表達(dá)。近年研究發(fā)現(xiàn)，p63能夠應(yīng)用于乳腺癌的診斷，效果較理想[6]。侍朋舉等[7]研究顯示，p63在正常肌組織及乳腺良性疾病中的肌上皮細(xì)胞中呈陽(yáng)性表達(dá)，而p63在乳腺癌中呈陰性表達(dá)，提示肌上皮細(xì)胞較少甚至消失。苗洋洋等[8]研究發(fā)現(xiàn)，在乳腺癌患者中p63幾乎無(wú)表達(dá)，但是在無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌患者癌組織中p63的陽(yáng)性表達(dá)率高于有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移乳腺癌患者，說(shuō)明p63缺失與乳腺癌發(fā)展及轉(zhuǎn)移有關(guān)。α-SMA是肌上皮細(xì)胞中表達(dá)的一種細(xì)胞骨架蛋白，具有較高的平滑肌特異性，可作為良性腫瘤與惡性腫瘤鑒別的指標(biāo)。有研究顯示，正常乳腺細(xì)胞α-SMA表達(dá)較少甚至無(wú)表達(dá)，在乳腺癌組織中α-SMA呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，說(shuō)明其活性升高能夠促進(jìn)乳腺癌發(fā)生、發(fā)展[9]。張哲珺等[10]研究顯示，肌成纖維細(xì)胞能夠分泌大量胰島素生長(zhǎng)因子及α-SMA，從而加快乳腺癌細(xì)胞淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，增加乳腺癌患者復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)，預(yù)后較差。

p63及α-SMA均對(duì)肌上皮細(xì)胞檢測(cè)具有較高的靈敏度，可以用于乳腺癌臨床診斷。但是相關(guān)研究證實(shí)，乳腺癌患者采用單一p63或單一α-SMA進(jìn)行檢測(cè)的檢出率一般，尤其是對(duì)乳腺癌上皮細(xì)胞增生活躍時(shí)，診斷難度加大，在同一標(biāo)本組織采用免疫組化檢測(cè)p63及α-SMA，能夠更好鑒別乳腺良惡性疾病，避免誤診或漏診[11-12]。

本研究結(jié)果顯示，p63陽(yáng)性與陰性患者生存率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而α-SMA陽(yáng)性與陰性患者生存率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，p63、α-SMA及二者聯(lián)合檢測(cè)對(duì)乳腺癌診斷均有一定價(jià)值。α-SMA水平與患者預(yù)后相關(guān)性較小的原因可能與樣本量較小及隨訪時(shí)間較短等因素有關(guān)，在后期研究中考慮將增加樣本量、延長(zhǎng)隨訪時(shí)間。

綜上所述，免疫組化檢測(cè)p63、α-SMA表達(dá)與乳腺癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，p63表達(dá)與患者2年預(yù)后存在相關(guān)性，p63、α-SMA及二者聯(lián)合檢測(cè)均對(duì)乳腺癌有一定診斷價(jià)值。