線(xiàn)粒體相關(guān)細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)因子3通過(guò)調(diào)控STAT3信號(hào)通路影響結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖與遷移

梁煒杰 張耀偉 王永佳 翁佳雯 鄭奕琳 丁軼

南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院放療科（廣州 510515）

結(jié)直腸癌是消化系統(tǒng)最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一。2020年全球結(jié)直腸癌新發(fā)病例為193.16萬(wàn)，死亡病例為93.52 萬(wàn)，分別位于所有惡性腫瘤的第三位和第二位［1］。新增病例多發(fā)生于西方國(guó)家。然而在我國(guó)，結(jié)直腸癌發(fā)病人數(shù)也呈現(xiàn)逐年增加的趨勢(shì)，2020年中國(guó)癌癥數(shù)據(jù)顯示結(jié)直腸癌的發(fā)病率和病死率分別位居我國(guó)第二位和第五位，嚴(yán)重威脅著人民的健康［2］。因此，提高結(jié)直腸癌的治療有效率成為了一個(gè)迫切的問(wèn)題。為了實(shí)現(xiàn)結(jié)直腸癌的早期診斷和精準(zhǔn)治療，必須全面了解結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展中的分子機(jī)制。雖然結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展是一個(gè)復(fù)雜多級(jí)的過(guò)程，但其實(shí)有跡可循，從正常腸組織發(fā)展到腺瘤再發(fā)展為癌組織，其中涉及到基因突變的累積，內(nèi)環(huán)境的變化以及多條信號(hào)通路的異常激活或者抑制［3-5］。通過(guò)了解結(jié)直腸癌的分子機(jī)制，可以尋找適合的生物靶點(diǎn)，開(kāi)發(fā)對(duì)應(yīng)靶向藥物。在結(jié)直腸癌的生長(zhǎng)過(guò)程中，會(huì)發(fā)生細(xì)胞的代謝重編程，為其旺盛的增殖速度與細(xì)胞遷移行為提供充足的能量，而這一過(guò)程的中樞則是線(xiàn)粒體［6-7］。線(xiàn)粒體掌控著腫瘤細(xì)胞的能量和代謝，而線(xiàn)粒體相關(guān)蛋白往往在腫瘤的增殖、遷移、凋亡等過(guò)程發(fā)揮著重要作用［8-9］。

線(xiàn)粒體相關(guān)細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)因子3（apoptosis inducing factor mitochondria associated 3，AIFM3）是線(xiàn)粒體中依賴(lài)Caspase 凋亡途徑的關(guān)鍵因子，可介導(dǎo)細(xì)胞色素C 從線(xiàn)粒體釋放入胞質(zhì)［10］。既往研究發(fā)現(xiàn)AIFM3 參與了肝細(xì)胞癌的增殖和凋亡過(guò)程［11］，但AIFM3 與結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展是否存在關(guān)聯(lián)，目前國(guó)內(nèi)外還鮮有報(bào)道。通過(guò)前期研究以及數(shù)據(jù)分析，筆者發(fā)現(xiàn)AIFM3 在結(jié)直腸癌中表達(dá)異常，同時(shí)與患者預(yù)后存在相關(guān)性。本研究擬分析AIFM3 的表達(dá)與結(jié)直腸癌組織類(lèi)型和預(yù)后的關(guān)系，以及觀(guān)察AIFM3 對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖和遷移等行為的影響，探討其可能的分子機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 測(cè)序數(shù)據(jù) 生物信息學(xué)分析所用的測(cè)序數(shù)據(jù)和臨床數(shù)據(jù)來(lái)源于The Cancer Genome Atlas（TCGA）數(shù) 據(jù) 庫(kù)（https：∕∕portal.gdc.cancer.gov∕）和GENE EXPRESSION OMNIBUS（GEO）數(shù)據(jù)庫(kù)（https：∕∕www.ncbi.nlm.nih.gov∕geo∕）。

1.1.2 細(xì)胞與組織 結(jié)腸癌細(xì)胞系HCT116和SW620均購(gòu)自（American Type Culture Collection）ATCC 細(xì)胞庫(kù)，由我系液氮凍存。沉默AIFM3基因的慢病毒及其相應(yīng)的對(duì)照載體購(gòu)于吉?jiǎng)P公司（上海，中國(guó)）。shRNA 序列如下：shAIFM3：5'-CCAAGACTCTGAGCTGCAA-3'。轉(zhuǎn)染后，利用嘌呤霉素（Sigma，美國(guó)）進(jìn)行篩選獲得穩(wěn)定細(xì)胞株。收集南方醫(yī)院2017-2019年17 例結(jié)直腸癌患者石蠟標(biāo)本，每一例標(biāo)本均包含癌組織與正常腸黏膜組織（即距離癌組織10 cm 以外的正常腸黏膜組織）。

1.1.3 試劑與儀器 CCK-8 試劑來(lái)自日本同仁公司，F(xiàn)alcon Transwell 小室來(lái)自美國(guó)BD 公司。qRTPCR 檢測(cè)所用引物是利用Primerbank 網(wǎng)頁(yè)和NCBI網(wǎng)頁(yè)設(shè)計(jì)，由銳博生物公司代為合成。引物序列如下：AIFM3-F：5'-CCAGGAGGGAAAGCTGAAGG-3'；AIFM3-R：5'-CCTGGGACATTGGTCTGCAT-3'；GAPDH-F：5'-GGAGCGAGATCCCTCCAAAAT-3'；GAPDH-R：5'-GGCTGTTGTCATACTTCTCATGG-3'；TRIzol、RNA 逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、熒光定量PCR 試劑盒均來(lái)自TAKARA 公司。全蛋白提取試劑盒來(lái)自南京凱基生物有限公司。GAPDH、β-actin 抗體購(gòu)自Abcam 公司；AIFM3、STAT3、p-STAT3、JAK1、JAK2抗體購(gòu)自美國(guó)Cell Signaling Technology 公司。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)及轉(zhuǎn)染 所有細(xì)胞均用含有10%胎牛血清、100 U∕mL 青霉素和100 μg∕mL 鏈霉素的DMEM 培養(yǎng)基，置于37 ℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。利用Lipo2000，將重組慢病毒干擾載體及其對(duì)照載體轉(zhuǎn)染進(jìn)HCT116 及SW620 細(xì)胞，48 h 后利用熒光顯微鏡觀(guān)察轉(zhuǎn)染效率，再使用1 μg∕mL 的嘌呤霉素篩選，獲得穩(wěn)定傳染細(xì)胞株。利用Western blot法檢測(cè)細(xì)胞AIFM3 蛋白的敲低效率。實(shí)驗(yàn)分為干擾組和陰性對(duì)照組兩組，干擾組：轉(zhuǎn)染沉默AIFM3的慢病毒的HCT116∕SW620 細(xì)胞；陰性對(duì)照組：轉(zhuǎn)染對(duì)照載體的HCT116∕SW620 細(xì)胞。

1.2.2 免疫組化實(shí)驗(yàn) 按照免疫組化步驟，分別將腫瘤組織及癌旁對(duì)照孵育相應(yīng)抗體，并以DAB顯色。選取5 個(gè)高倍視野進(jìn)行結(jié)果評(píng)估，分別計(jì)數(shù)細(xì)胞的著色強(qiáng)弱（無(wú)著色為0 分，淡黃色為1 分，棕黃色為2 分，棕褐色為3 分）及陽(yáng)性細(xì)胞百分率為陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)占總細(xì)胞數(shù)的比例（1 分：0%～25%，2 分：26%～50%，3 分：51%～75%，4 分：＞75%），兩者相乘的結(jié)果為該片評(píng)分結(jié)果：0 分為陰性，1～4 分為弱陽(yáng)性，5～8 分為陽(yáng)性，9～12 分為強(qiáng)陽(yáng)性。

1.2.3 qRT-PCR 法檢測(cè)細(xì)胞中的基因表達(dá) 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞進(jìn)行胰酶消化，離心后收集細(xì)胞，用TRIzol 從結(jié)直腸癌細(xì)胞系中提取總RNA，cDNA 逆轉(zhuǎn)錄試劑盒逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，Nanodrop 2000 光譜儀（Thermo Fisher Scientific）測(cè)定DNA濃度。qRT-PCR用1 μg cDNA 與SYBR Green 試劑，應(yīng)用Biosystem 7500qPCR 系統(tǒng)（Applied Biosystems）進(jìn)行擴(kuò)增。以GAPDH 為內(nèi)參基因，用2-ΔΔCT方法比較相對(duì)表達(dá)。

1.2.4 CCK8 法檢測(cè)細(xì)胞增殖能力 收集細(xì)胞，以200 個(gè)∕孔的濃度接種到96 孔板，每組5 個(gè)復(fù)孔，培養(yǎng)24、48、72、96、120 h 后加入100 μL 5 mg∕mL CCK8 溶液，37 ℃孵育2 h 后，檢測(cè)450 nm 波長(zhǎng)下吸光度（OD）值。

1.2.5 平板克隆法檢測(cè)細(xì)胞增殖能力 收集細(xì)胞，以500 個(gè)∕孔的濃度接種到6 孔板，每組3 個(gè)復(fù)孔，培養(yǎng)2 周后取出倒掉培養(yǎng)基，利用PBS 清洗3 遍，多聚甲醛固定20 min，1%結(jié)晶紫染色15 min，PBS再度清洗后置于顯微鏡下觀(guān)察，選4 個(gè)高倍視野進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，取平均值。

1.2.6 Transwell 法檢測(cè)細(xì)胞遷移能力 收集細(xì)胞，用無(wú)血清培養(yǎng)基稀釋后以50 000 個(gè)∕孔接種于Transwell上室，每孔200 μL，下室加入600 μL DMEM完全培養(yǎng)基，培養(yǎng)36 h 后取出上室，甲醇固定20 min，擦掉上室殘余細(xì)胞，1%結(jié)晶紫染色15 min，PBS 清洗后置于顯微鏡下觀(guān)察，選取4 個(gè)高倍視野進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，取平均值。

1.2.7 Gene set enrichment analysis（GSEA）通路富集分析 從通路數(shù)據(jù)庫(kù)網(wǎng)站MsigDB（https：∕∕www.gsea-msigdb.org∕gsea∕msigdb∕）下 載7.0 版 的HALLMARK 注釋基 因 集，并 將TCGA 中的567 份結(jié)直腸癌樣品的按AIFM3 的中位表達(dá)量分為高表達(dá)組和低表達(dá)組，利用R 包“clusterProfiler”進(jìn)行GSEA 分析［12］。富集結(jié)果篩選標(biāo)準(zhǔn)為P＜0.05 和假陽(yáng)性率FDR ＜0.25。

1.2.8 Western blot 法檢測(cè)細(xì)胞相關(guān)蛋白表達(dá)情況 收集細(xì)胞提取蛋白，測(cè)定蛋白濃度，在10%的十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDSPAGE）上分離蛋白質(zhì)，然后將其轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上。在4 ℃過(guò)夜孵育一抗，次日于室溫下孵育1 h 二抗，進(jìn)行化學(xué)發(fā)光顯影。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用GarphPad Prism8.0 和R 語(yǔ)言進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；免疫組化結(jié)果和測(cè)序數(shù)據(jù)組間比較采取wliconx 秩和檢驗(yàn)；采用Kapalan-Meier 曲線(xiàn)和Log-rank 檢驗(yàn)方法比較AIFM3 高表達(dá)組和低表達(dá)組的生存差異，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 AIFM3 在結(jié)直腸癌中的差異表達(dá) 為了研究AIFM3 在結(jié)直腸癌中的表達(dá)情況，分析四個(gè)結(jié)直腸癌的測(cè)序數(shù)據(jù)集：TCGA、GSE117606、GSE100179、GSE71187，比較數(shù)據(jù)集提供的腫瘤組織和癌旁組織的RNA 測(cè)序數(shù)據(jù)，發(fā)現(xiàn)在結(jié)直腸癌組織中AIFM3 表達(dá)量顯著低于癌旁組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，圖1A）。同時(shí)利用在南方醫(yī)院病理科保存的17 對(duì)配對(duì)的腫瘤組織和癌旁組織，進(jìn)行免疫組化染色并且評(píng)分，發(fā)現(xiàn)AIFM3 在癌旁組織的表達(dá)量明顯高于腫瘤組織（P＜0.05，圖1B）。分析AIFM3 表達(dá)量與結(jié)直腸癌預(yù)后的關(guān)系發(fā)現(xiàn)：無(wú)論是總生存率OS 還是無(wú)病生存率DFS，AIFM3 高表達(dá)組都顯著高于低表達(dá)組（P＜0.05，圖2）。

圖1 結(jié)直腸癌組織和癌旁組織中AIFM3 的差異表達(dá)Fig.1 Differential expression of AIFM3 in colorectal cancer and adjacent tissues

圖2 AIFM3 的表達(dá)量與結(jié)直腸癌患者預(yù)后情況的聯(lián)系Fig.2 Relationship between the expression of AIFM3 and the prognosis of patients with colorectal cancer

2.2 AIFM3 基因表達(dá)沉默的HCT116/SW620 細(xì)胞系的鑒定 提取8 種結(jié)腸癌細(xì)胞系的RNA，通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄及qRT-PCR，選擇表達(dá)量最高的細(xì)胞系SW620 和另一株表達(dá)量處于中間水平的HCT116進(jìn)行后續(xù)的功能實(shí)驗(yàn)（圖3A）。建立穩(wěn)定干擾AIFM3 表達(dá)的細(xì)胞株HCT116∕SW620 后，采用qRTPCR 方法和Western blot 方法進(jìn)行鑒定，結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染重組載體后，HCT116∕SW620 細(xì)胞中AIFM3 的蛋白表達(dá)水平明顯低于HCT116∕SW620-NC 細(xì)胞（圖3B、3C），說(shuō)明AIFM3 基因表達(dá)沉默的HCT116∕SW620 細(xì)胞系構(gòu)建成功。

圖3 AIFM3 基因表達(dá)沉默細(xì)胞系的構(gòu)建Fig.3 Construction of AIFM3 gene expression silencing cell line

2.3 CCK8 法結(jié)果分析 從第2 天起，敲低AIFM3后，HCT116 細(xì)胞和SW620 細(xì)胞增殖速度顯著增加，從第4 天開(kāi)始，兩組之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，圖4A）。

2.4 細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析 Transwell 遷移實(shí)驗(yàn)也表明隨著AIFM3 的表達(dá)降低，其遷移能力明顯增強(qiáng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，圖4B）。

2.5 平板克隆結(jié)果分析 敲低AIFM3 后，HCT116細(xì)胞和SW620 細(xì)胞形成克隆團(tuán)的數(shù)量顯著增多（P＜0.05，圖4C）。

圖4 AIFM3 的敲低促進(jìn)了結(jié)直腸癌細(xì)胞的增殖與遷移Fig.4 Knockdown of AIFM3 promotes the proliferation and migration of colorectal cancer cells

2.6 通路富集結(jié)果分析 經(jīng)過(guò)對(duì)GSEA 的富集結(jié)果進(jìn)行篩選，發(fā)現(xiàn)與AIFM3 關(guān)系密切的信號(hào)通路有10 條，包括血管生成、移植排斥反應(yīng)、干擾素反應(yīng)、STAT3 信號(hào)通路等（圖5A）。基于現(xiàn)有文獻(xiàn)，JAK∕STAT3 信號(hào)通路的激活與結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖、遷移等行為關(guān)系密切［13］。且STAT3 蛋白本身存在于細(xì)胞線(xiàn)粒體內(nèi)，參與調(diào)控電子傳遞鏈的活性，影響著線(xiàn)粒體呼吸和細(xì)胞代謝過(guò)程［14-15］。GSEA 分析結(jié)果還顯示IL6∕JAK∕STAT3 信號(hào)通路基因集富集于AIFM3 低表達(dá)組（圖5B）。相關(guān)性分析則提示AIFM3 與STAT3 信號(hào)通路中的關(guān)鍵分子STAT3 的RNA 表達(dá)量呈負(fù)相關(guān)（r=-0.15，P＜0.001，圖5C）。

2.7 Western blot 實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析 Western blot 結(jié)果顯示敲低在腫瘤細(xì)胞中敲低AIFM3 后，STAT3信號(hào)通路中的關(guān)鍵分子STAT3 蛋白以及磷酸化狀態(tài)的STAT3 蛋白的表達(dá)顯著增加，提示該通路被激活（圖5D）。而STAT3 上游蛋白JAK1，JAK2 蛋白的表達(dá)則無(wú)顯著變化。

圖5 敲低AIFM3 激活了STAT3 信號(hào)通路Fig.5 Knocking down AIFM3 activates the STAT3 signaling pathway

3 討論

結(jié)直腸癌（CRC）是全球發(fā)病率和病死率最高的惡性腫瘤之一。而且近年來(lái)，中國(guó)的CRC 發(fā)病率的持續(xù)上升，發(fā)病人群也趨向于年輕化［2］。其中，CRC 的轉(zhuǎn)移依然是導(dǎo)致患者死亡的主要原因，而腫瘤轉(zhuǎn)移是一個(gè)步驟繁多的復(fù)雜過(guò)程，其中局部遷移是腫瘤細(xì)胞進(jìn)入血液循環(huán)的前提。目前，CRC 的遷移機(jī)制尚未明確，現(xiàn)有的抗轉(zhuǎn)移治療主要針對(duì)已形成轉(zhuǎn)移的病灶，但對(duì)于如何預(yù)防腫瘤的早期遷移與播散尚無(wú)有效策略。因此，深入了解CRC 的增殖、遷移侵襲等關(guān)鍵步驟的分子機(jī)制，可為CRC 的轉(zhuǎn)移提供更有效的防治策略。

線(xiàn)粒體蛋白在多種癌癥的致癌作用中起著關(guān)鍵作用，其表達(dá)水平與癌癥的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)［8-9，16］。AIFM 蛋白家族是一種線(xiàn)粒體內(nèi)部的氧化還原酶，參與線(xiàn)粒體內(nèi)呼吸鏈的組裝以及調(diào)控細(xì)胞的生長(zhǎng)與凋亡［17］。該蛋白家族包括了三個(gè)蛋白結(jié)構(gòu)相似的成員AIFM1、AIFM2 和AIFM3，其在腫瘤相關(guān)研究中也屢有報(bào)道。AIFM1 在肝癌與宮頸癌中能通過(guò)誘導(dǎo)凋亡抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)［18］。AIFM2 則在肺癌中參與了化療藥物誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡過(guò)程［19］，而且近年來(lái)被報(bào)道參與了多種腫瘤的鐵死亡過(guò)程［20-21］。目前關(guān)于AIFM3 在腫瘤中的研究較少。有研究表明AIFM3 在肝癌中作為miR-210 的直接靶點(diǎn)，參與肝癌細(xì)胞的細(xì)胞周期調(diào)控。在缺氧環(huán)境中，miR-210 通過(guò)下調(diào)AIFM3 來(lái)抑制肝癌細(xì)胞的凋亡［11］。此外也有研究表明AIFM3 與乳腺癌、膽管癌的進(jìn)展相關(guān)［22-23］，但缺乏細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的驗(yàn)證以及機(jī)制上的探索。而迄今為止，關(guān)于AIFM3在結(jié)直腸癌中的作用鮮有報(bào)道。因此，探索AIFM3的作用和機(jī)制對(duì)于全面了解結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展的過(guò)程具有重要意義。

本研究通過(guò)生物信息學(xué)和臨床樣品的免疫組化分析，發(fā)現(xiàn)AIFM3 在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)明顯低于鄰近正常組織。通過(guò)慢病毒轉(zhuǎn)染的方式在兩種人源性結(jié)直腸癌的細(xì)胞株中敲低目的蛋白AIFM3，探索其對(duì)細(xì)胞功能的影響，結(jié)果表明AIFM3 的敲低顯著增強(qiáng)了結(jié)直腸癌細(xì)胞的增殖與遷移能力。在機(jī)制上，通過(guò)GSEA 算法以及MisgDb數(shù)據(jù)庫(kù)中提供的HALLMARK 通路相關(guān)基因集分析，發(fā)現(xiàn)AIFM3 與STAT3 信號(hào)通路關(guān)聯(lián)密切。STAT3 信號(hào)通路是一條在腫瘤生長(zhǎng)過(guò)程中發(fā)揮重要作用的經(jīng)典信號(hào)通路，介導(dǎo)著腫瘤的增殖、侵襲、分化、遷移等過(guò)程［13］，與本研究細(xì)胞表型實(shí)驗(yàn)結(jié)果相符合。STAT3 蛋白通常被認(rèn)為穿梭于細(xì)胞質(zhì)與細(xì)胞核之間，作為轉(zhuǎn)錄因子介導(dǎo)相關(guān)核基因表達(dá)。但也有研究表明STAT3 蛋白廣泛存在于線(xiàn)粒體膜間隙、內(nèi)膜和基質(zhì)中，與AIFM3 定位重合，參與調(diào)控氧化還原呼吸過(guò)程中的電子鏈傳遞（ETC），發(fā)揮著細(xì)胞呼吸調(diào)節(jié)劑的作用［14-15］。因此，筆者認(rèn)為AIFM3 在結(jié)直腸癌細(xì)胞中的作用與STAT3 信號(hào)通路存在關(guān)聯(lián)。相關(guān)性分析則提示AIFM3 的RNA 表達(dá)量與STAT3 呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)關(guān)系。而進(jìn)一步的WB 實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了AIFM3 的敲低會(huì)上調(diào)STAT3 與磷酸化狀態(tài)的STAT3 的蛋白表達(dá)量，證明AIFM3 在結(jié)直腸癌細(xì)胞株中被敲低以后，通過(guò)激活STAT3 信號(hào)通路，促進(jìn)了結(jié)直腸癌細(xì)胞的增殖和遷移。而STAT3 的兩個(gè)經(jīng)典上游分子JAK1和JAK2 的蛋白表達(dá)量則未觀(guān)察到明顯變化，筆者猜測(cè)它們與AIFM3 和STAT3 在線(xiàn)粒體內(nèi)的作用無(wú)直接關(guān)聯(lián)。

與癌旁組織相比，AIFM3 在結(jié)直腸癌組織中被顯著下調(diào)，其下調(diào)可能是結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展的重要原因之一。本研究還利用TCGA 以及來(lái)自于GEO 數(shù)據(jù)庫(kù)的三個(gè)不同的結(jié)直腸癌臨床數(shù)據(jù)集探索了AIFM3 表達(dá)量與預(yù)后的關(guān)系。這四個(gè)數(shù)據(jù)集的結(jié)果一致表明，AIFM3 表達(dá)量較高的患者擁有更為良好的總生存率（OS）與無(wú)病生存率（DFS），提示AIFM3 作為預(yù)后標(biāo)志物的潛在價(jià)值。

綜上所述，本研究探索了AIFM3 在結(jié)直腸癌中的作用與機(jī)制，證實(shí)了AIFM3 在結(jié)直腸癌中表達(dá)下調(diào)，而細(xì)胞功能實(shí)驗(yàn)提示敲低AIFM3 可通過(guò)激活STAT3 信號(hào)通路進(jìn)而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖與遷移。此外，AIFM3 的表達(dá)與結(jié)直腸癌患者的預(yù)后存在關(guān)聯(lián)。這些結(jié)果表明AIFM3 有望成為結(jié)直腸癌的分子治療靶點(diǎn)，以及可作為判斷患者預(yù)后情況的指標(biāo)。