高效液相色譜法同時測定腌漬蔬菜中5種食品添加劑的含量

◎ 牛 芳

（盤錦檢驗檢測中心，遼寧 盤錦 124000）

近年來層出不窮的食品安全事件提高了人們對食品安全問題的關(guān)注度，食品添加劑的安全性成為熱點話題，對于常用的食品添加劑更是人們關(guān)注的重點。

苯甲酸易穿透細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞體內(nèi)，干擾細(xì)胞的通透性，抑制細(xì)胞膜對氨基酸的吸收，并抑制細(xì)胞的呼吸酶活性，從而達(dá)到防腐目的，最佳防腐pH為2.5～4.0。過量食用苯甲酸會引起流口水、腹瀉、腹痛和心跳加快等，長期食用會導(dǎo)致過敏及累積中毒。山梨酸為酸性防腐劑，具有較高的抗菌性能，抑制霉菌的生長繁殖，主要是通過抑制微生物體內(nèi)的脫氫酶系統(tǒng)，從而達(dá)到抑制微生物生長的作用，對細(xì)菌、霉菌、酵母菌均有抑制作用，是一種相對安全的食品防腐劑。脫氫乙酸利用離子破壁原理，離子有效滲透到細(xì)胞體內(nèi)，抑制微生物呼吸，在酸性或堿性條件下有效，對光和熱比較穩(wěn)定，在水中煮沸、加熱烘烤食品時不破壞、不變質(zhì)、不揮發(fā)，在水溶液中逐漸降解為醋酸，對人體無毒，為廣譜防腐劑，對酵母菌、霉菌和細(xì)菌發(fā)育有很強(qiáng)的抑制作用，尤其是對常易引起食品腐敗的酵母菌、霉菌的抑制作用最強(qiáng)。糖精鈉作為食品甜味劑，對人體健康有害無益，在食品中的應(yīng)用有明顯的超范圍、超量添加現(xiàn)象。安賽蜜作為食品甜味劑，經(jīng)常食用安賽蜜添加超標(biāo)的食品會對人體的肝臟和神經(jīng)系統(tǒng)造成危害，特別是對老人、孕婦、小孩危害更為嚴(yán)重，如果短時間內(nèi)大量食用，會引起血小板減少導(dǎo)致急性大出血[1]。因此，必須按限值控制用量。

腌漬蔬菜可以調(diào)節(jié)胃口、增強(qiáng)食欲、補(bǔ)充膳食纖維。食品腌漬方法有提高酸度腌漬法、糖腌漬法和鹽腌漬法3種。酸腌漬法有兩種，利用食用酸腌漬，常用于蔬菜類，如酸黃瓜、糖醋蒜；以及酸發(fā)酵腌漬法，主要有泡菜、酸菜。鹽腌漬法常用于魚、肉、蝦、蛋和蔬菜。糖腌漬法是用高濃度的糖腌漬食品，可以看出腌漬蔬菜涉及各種口味蔬菜食品，廣泛存在于人們的餐桌。食品添加劑具有增強(qiáng)食品貯存和轉(zhuǎn)運效果、改良和增進(jìn)食品多種感官指標(biāo)、保持且增強(qiáng)食品的營養(yǎng)功能、增強(qiáng)經(jīng)濟(jì)和社會效益等多種功能。同時也帶來違法使用非食品添加劑，超限量、超范圍使用食品添加劑等現(xiàn)象[2]。生產(chǎn)廠家為達(dá)到更好的效果，往往會加入多種食品添加劑，現(xiàn)行國家標(biāo)準(zhǔn)中采用多個方法檢測，如果可以同時檢測多種食品添加劑，則可以提高工作效率，節(jié)約成本。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器

苯甲酸、山梨酸、脫氫乙酸、糖精鈉和安賽蜜質(zhì)量濃度均為1.00 g·L-1（純度均≥99.0%），配制成濃度為0 mg·L-1、5 mg·L-1、10 mg·L-1、50 mg·L-1、100 mg·L-1和200 mg·L-1的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液；甲醇、乙酸銨，色譜級；冰乙酸、氨水、亞鐵氰化鉀、乙酸鋅和無水乙醇，優(yōu)級純；實驗室用水。

Agilent 1260高效液相色譜儀（配二極管陣列檢測器、柱溫箱）；pH計；電子天平；離心機(jī)和超聲機(jī)；色譜柱為Agilent Ecilpse XDB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）。

1.2 實驗方法

1.2.1 樣品制備樣品為東北酸菜，購于盤錦本地市場，將整份試樣用勻漿機(jī)打碎，再攪拌均勻。

1.2.2 樣品前處理方法

準(zhǔn)確稱取約2.00 g試樣于50 mL具塞離心管中，加亞鐵氰化鉀溶液2 mL和乙酸鋅溶液2 mL，混勻，于8 000 r·min-1離心10 min，水相轉(zhuǎn)移至50 mL容量瓶中，殘渣樣品再提取1次后定容[3]。取適量上清液過0.22 μm濾膜，待液相色譜上機(jī)測定[4]。

1.2.3 儀器條件

色 譜 柱 為Agilent Ecilpse XDB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：A-甲醇，B-0.02 mol·L-1乙酸銨-冰乙酸溶液（pH=5.3），梯度洗脫（見表1）；流速：1.0 mL·min-1；檢測波長：230 nm（苯甲酸、山梨酸、糖精鈉）、293 nm（脫氫乙酸）、214 nm（安賽蜜）；柱溫：35 ℃。

表1 梯度洗脫條件表

2 結(jié)果與分析

2.1 線性關(guān)系、相關(guān)系數(shù)、檢出限和定量限測定結(jié)果

安賽蜜、糖精鈉、苯甲酸、山梨酸和脫氫乙酸依次出峰，出峰時間依次為3.55 min、5.46 min、8.17 min、10.89 min和13.55 min。測定一系列不同質(zhì)量濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，以各化合物的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，以相對應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，以信噪比為3倍（3S/N）相對應(yīng)的質(zhì)量濃度為檢出限，以信噪比為10倍（10S/N）相對應(yīng)的質(zhì)量濃度為定量限，得到各化合物的線性關(guān)系、相關(guān)系數(shù)、檢出限和定量限，見表2。苯甲酸、山梨酸、脫氫乙酸、糖精鈉和安賽蜜的線性關(guān)系、相關(guān)系數(shù)、檢出限和定量限均滿足檢測要求。

表2 線性關(guān)系、相關(guān)系數(shù)、檢出限和定量限表

2.2 精密度和準(zhǔn)確度考察結(jié)果

取一定量的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液做低、中、高3個水平加標(biāo)回收試驗，每個樣品平行測定7次，計算5種化合物的回收率和精密度，結(jié)果見表3。苯甲酸、山梨酸、脫氫乙酸、糖精鈉和安賽蜜的回收率分別在93.78%～99.75%、94.29%～100.06%、91.26%～99.72%、96.61%～99.97%和90.78%～99.74%，精密度分別在0.26%～1.82%、0.31%～1.64%、0.42%～2.62%、0.56%～2.09%和0.52%～3.13%，這表明所建立的分析方法的精密度和準(zhǔn)確度均滿足檢測要求[5]。

表3 回收率和精密度表

3 結(jié)論

本文采用二極管陣列檢測器高效液相色譜法，同時測定腌漬蔬菜中的3種防腐劑和2種甜味劑，試驗得知本方法操作簡單，色譜分離效果和穩(wěn)定性好，并可獲得較高的精密度和準(zhǔn)確度，大大節(jié)約了試劑的消耗和縮短了分析時間，適合大批量樣品的快速測定，同時為其他醬腌菜樣品的快速測定提供了參考[6]。

快速檢測一直是食品檢測行業(yè)不斷探索的領(lǐng)域，既簡化了實驗準(zhǔn)備過程，減少了試劑使用，又節(jié)省了樣品，縮短了檢測時間。復(fù)合防腐劑和復(fù)合甜味劑的使用是食品行業(yè)的現(xiàn)狀，不但提高了食品添加劑的使用效果，也降低了單一劑量的用量，但也為檢測行業(yè)帶來了新的挑戰(zhàn)。用一種簡單的處理方法同時處理幾個常用參數(shù)在實際工作中越來越受到歡迎。同時，檢測行業(yè)也希望出臺相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)適應(yīng)時下檢測需求，給檢測工作帶來更多的便利條件[7]。