牛白藤飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

吉林芳 楊德泉▲ 佘永紅 丁 野

1.湖南省湘西土家族苗族自治州食品藥品檢驗(yàn)所中藥室，湖南吉首 416000；2.湖南省藥品檢驗(yàn)檢測(cè)研究院標(biāo)準(zhǔn)研究所，湖南長(zhǎng)沙 410001

牛白藤，又名膿見消、百藤草、金不換、廣花耳草[1]，為茜草科植物牛白藤Hedyotis hedyotidea（DC.）Meer.的干燥藤莖。分布于廣東、廣西、云南、福建、臺(tái)灣等地。味微甘，性涼，歸脾、肝經(jīng)。具有清熱解暑、祛風(fēng)活絡(luò)、消腫止痛的功效，主治感冒發(fā)熱、風(fēng)濕痹痛、跌打損傷[2]。本品又是瑤族常用藥，瑤藥名為結(jié)崗崩，功能為清熱解毒、祛風(fēng)消腫，治療中暑高熱、肺炎、感冒咳嗽、乳腺炎、濕熱泄瀉、痔瘡出血、癰瘡腫毒、皮膚濕疹、帶狀皰疹等[3]。藥理研究表明，牛白藤具有明顯的抗炎鎮(zhèn)痛活性[4]其所含成分白樺醇、烏蘇酸、7β-羥基谷甾醇均有較強(qiáng)的免疫抑制活性[5]，白樺醇和熊果酸可有效減輕ConA 誘導(dǎo)的急性肝損傷，具有抗炎和護(hù)肝作用[6]，牛白藤與白花蛇舌草兩種水煎液具有等效體外抗白血病效應(yīng)[7]。臨床方面，牛白藤作為抗炎鎮(zhèn)痛和傷科用藥，用量較大，使用頻率較高，臨床療效顯著，特別在傷科中的應(yīng)用效果更佳，是臨床不可或缺的一味中藥。牛白藤飲片收載于《湖南省中藥飲片炮制規(guī)范》2010年版[8]，飲片標(biāo)準(zhǔn)包括性狀、薄層色譜鑒別、浸出物（醇溶性浸出測(cè)定法）等項(xiàng)目。為完善牛白藤飲片標(biāo)準(zhǔn)，本研究對(duì)牛白藤飲片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了研究，新增了水分、總灰分檢查項(xiàng)目，修訂了完善了性狀、薄層鑒別和浸出物項(xiàng)目，使飲片標(biāo)準(zhǔn)能更加全面控制質(zhì)量。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 儀器與試劑

KM5200DE 型超聲波清洗器（昆山美美超聲儀器有限公司）；AUW220D 電子天平（日本島津公司）。Good-See-10 型薄層色譜成像儀（上?？普苌萍加邢薰荆９枘zG 薄層板（青島海浪干燥劑有限公司，批號(hào)：2017年3月2日，10 cm×20 cm）；硅膠G 薄層板（青島海洋化工廠分廠，批號(hào)：2018年5月15日，10 cm×20 cm）；硅膠G 高效薄層板（青島海洋化工廠分廠，批號(hào)：2021年5月28日，10 cm×20 cm）。試劑均為分析純，水為純化水。

1.2 對(duì)照品與樣品

1.2.1 對(duì)照品 牛白藤對(duì)照藥材（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)121217-200502）。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)樣品及來源 12 批牛白藤飲片來源見表1。

表1 牛白藤飲片來源表

2 方法與結(jié)果

2.1 成品性狀

成品為厚片。表面粗糙，灰白色或灰黃色，有突起較細(xì)的縱直筋脈紋，老莖可見灰白色縱長(zhǎng)突起相互連接的皮孔斑，刮去表層栓皮現(xiàn)灰綠色。質(zhì)堅(jiān)韌。切面皮部淺灰褐色，木部占大部分，黃白色或淡黃色，髓多中空。老莖呈菊花紋理（異型維管束），纖維性，髓小。氣微，味微甘（圖1，封三）。

圖1 牛白藤飲片圖

2.2 薄層色譜鑒別

2.2.1 方法：取本品粉末1 g，加乙醇10 ml，超聲處理15 分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)訜o水乙醇1 ml 使溶解，作為供試品溶液。另取牛白藤對(duì)照藥材1 g，同法制成對(duì)照藥材溶液。參照《中華人民共和國(guó)藥典》[9]（簡(jiǎn)稱《中國(guó)藥典》）通則0502 試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5 μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G 薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯-甲酸（20∶4∶0.5）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置紫外光燈（365 nm）下檢視。

實(shí)驗(yàn)用硅膠G 高效薄層板（青島海洋化工廠分廠，批號(hào)：2021年5月28日），溫度：24.8℃，濕度：52%。結(jié)果供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)（圖2，封三）。

圖2 青島海洋化工廠分廠薄層硅膠G 高效板展開結(jié)果

2.2.2 耐用性考察 采用兩個(gè)不同生產(chǎn)廠家的薄層硅膠G 板，分別在不同的溫度條件下，按2.2.1 方法實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)條件見表2。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見圖3～4（封三）。耐用性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本方法色譜斑點(diǎn)清晰，分離度較好。

表2 耐用性考察條件表

圖3 青島海浪干燥劑有限公司的的薄層硅膠G 板展開結(jié)果

圖4 青島海洋化工廠分廠薄層硅膠G 板展開結(jié)果

2.3 檢查

2.3.1 水分按照《中國(guó)藥典》[9]2020年四部通則0832第二法，測(cè)定12 批牛白藤樣品的水分（表3）。水分最低值為11.43%，最高值為13.48%，平均值為12.67%。按平均值的120%計(jì)算為15.20%，建議牛白藤的水分限度定為“不得過15.0%”。

2.3.2 總灰分按照《中國(guó)藥典》[9]2020年版四部通則2302，測(cè)定12 批牛白藤飲片樣品的總灰分（表3）?？偦曳肿畹椭禐?.88%，最高值為10.35%，平均值為8.71%；按平均值8.71%的120%計(jì)算為10.45%，建議牛白藤的總灰分限度定為“不得過11.0%”。

2.4 浸出物

按照《中國(guó)藥典》[9]2020年版四部通則2201 水溶性浸出物測(cè)定法項(xiàng)下的熱浸法，測(cè)定12 批牛白藤飲片的浸出物（表3）。12 批牛白藤浸出物中最低值為13.07%，最高值為18.76%，平均值為16.04%。按12 批樣品浸出物的平均的80%計(jì)算為12.83%，建議牛白藤的浸出物限度定為“不得少于13.0%”。

表3 牛白藤飲片水分、總灰分、浸出物（%）

3 討論

3.1 牛白藤飲片標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)項(xiàng)目的完善

本研究在牛白藤現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)基礎(chǔ)上，新增加了牛白藤片的水分、總灰分控制項(xiàng)目，使牛白藤飲片質(zhì)量控制項(xiàng)目更完善。

3.2 薄層色譜供試液和對(duì)照藥材溶液制備方法的完善

牛白藤為《中藥大辭典》[10]、《全國(guó)中草藥匯編》[11]均收載的品種，主要含[12-13]熊果酸、齊墩果酸、咖啡酸、樺木酮酸、白樺脂酸、表白樺脂酸、β-谷甾醇、吐葉醇、白樺醇、羽扇豆醇、Δ5，22 豆甾醇、巴戟醚萜、莨菪亭等成分?！逗鲜≈兴庯嬈谥埔?guī)范》2010年版收載牛白藤飲片薄層色譜鑒別方法，供試品溶液制備采用樣品加乙醇回流30 min 方法，展開劑為石油醚（30～60℃）-甲酸甲酯-甲醇（10∶4∶1）。本研究參考文獻(xiàn)資料[14]方法，供試品溶液制備采用超聲波處理15 min，用牛白藤對(duì)照藥材作為對(duì)照，展開劑為正己烷-乙酸乙酯-甲酸（20∶4∶0.5），經(jīng)用三種不同品牌的硅膠G薄層板，在不同的溫度、濕度條件下的展開，結(jié)果顯示，本方法具有供試品和對(duì)照藥材提取制備簡(jiǎn)便，色譜斑點(diǎn)清晰，分離度較好而且穩(wěn)定的優(yōu)點(diǎn)，可以作為牛白藤飲片的鑒別方法。

3.3 浸出物檢測(cè)方法的完善

黃健軍等[15]以齊墩果酸含量、熊果酸含量和干膏率的綜合評(píng)分為評(píng)價(jià)指標(biāo)，對(duì)牛白藤煎煮法、浸漬法（70%乙醇）、回流提取法（70%乙醇）進(jìn)行篩選，其中煎煮法得干膏中齊墩果酸含量0.0323 mg/g、熊果酸含量0.6114 mg/g，干膏率5.27%；浸漬法得干浸膏中含齊墩果酸0.0263 mg/g、熊果酸0.3218 mg/g，干浸膏率3.11%，表明煎煮法提取所得成分和干浸膏量均高于浸漬法。在中醫(yī)臨床上，牛白藤飲片多入湯劑治病，如韋人鑒[16]報(bào)道，用復(fù)方牛白藤湯治療急性傳染性肝炎取得滿意效果；赫軍等[17]報(bào)道，牛白藤合四妙湯用于急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎獲得顯著效果。因此，本研究按照《中國(guó)藥典》[9]2020年版四部通則2201 水溶性浸出物測(cè)定法項(xiàng)下的熱浸法，測(cè)定牛白藤飲片的浸出物，結(jié)果12 批樣品的浸出物平均為16.0%。相對(duì)于牛白藤飲片浸出物采用70%乙醇作溶劑測(cè)定浸出物的方法，水溶性浸出物法更能表現(xiàn)牛白藤飲片成分在湯劑中的綜合煎出率情況，檢驗(yàn)溶劑成本更低，故以水溶性浸出物作為牛白藤飲片質(zhì)量控制指標(biāo)，更符合牛白藤飲片的質(zhì)量控制。

綜上所述，本研究在原標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上，新增了水分、

總灰分檢查項(xiàng)目；將原標(biāo)準(zhǔn)薄層鑒別方法中的供試品溶液制備方法由回流30 min 修訂為超聲提取15 mi n，提高了檢驗(yàn)效率；將原標(biāo)準(zhǔn)采用測(cè)定醇溶性浸出物修訂為測(cè)定水溶性浸出物，使牛白藤飲片的標(biāo)準(zhǔn)指標(biāo)更加符合臨床應(yīng)用實(shí)際。本研究使牛白藤飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)更加完善，能夠達(dá)到全面地控制牛白藤飲片質(zhì)量的目的，為牛白藤飲片的質(zhì)量控制提供了可靠有效的手段。