7種殺菌劑對(duì)小粒材小蠹3種伴生鐮刀菌的室內(nèi)毒力測(cè)定

章宇 梁甜 巨云為 朱海軍 吳天昊 周潔璐

摘要：為了篩選出能有效抑制小粒材小蠹伴生鐮刀菌的殺菌劑，在實(shí)驗(yàn)室條件下，采用菌絲生長(zhǎng)速率法，選用25%吡唑醚菌酯懸浮劑、450 g/L咪鮮胺水乳劑、40%百菌清懸浮液、25%氰烯菌酯懸浮劑、430 g/L戊唑醇懸浮劑、30%丙硫菌唑懸浮劑、42.4%唑醚·氟酰胺懸浮劑對(duì)小粒材小蠹3種伴生致病菌腐皮鐮刀菌（Fusarium solani）、層出鐮刀菌（F. proliferatum）和藤倉(cāng)鐮刀菌（F. fujikura）進(jìn)行室內(nèi)毒力測(cè)定。結(jié)果表明，7種殺菌劑對(duì)3種致病鐮刀菌表現(xiàn)出不同程度的抑制作用，其中450 g/L咪鮮胺對(duì)腐皮鐮刀菌和層出鐮刀菌的毒力最強(qiáng)，EC50分別為10.75、11.47 μg/mL;450 g/L咪鮮胺和25%氰烯菌酯對(duì)藤倉(cāng)鐮刀菌的毒力較強(qiáng)，EC50分別為1.63、3.85 μg/mL。綜上所述，450 g/L咪鮮胺的毒力最強(qiáng)，且在濃度為225～450 μg/mL時(shí)對(duì)3種鐮刀菌的抑制率也最高，表現(xiàn)出較強(qiáng)的抑制作用。

關(guān)鍵詞：小粒材小蠹;鐮刀菌;殺菌劑;毒力測(cè)定;菌絲生長(zhǎng)速率法

中圖分類號(hào)： S763.38? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A

文章編號(hào)：1002-1302（2022）08-0128-05

小粒材小蠹（Xyleborus saxeseni）主要危害華山松（Pinus armandii Franch.）、楊樹（Populus L.）、蘋果（Malus pumila Mill.）、山核桃（Carya cathayensis Sarg.）等林木，是一種食菌小蠹。食菌小蠹在蛀入樹干后，會(huì)將自身攜帶的真菌釋放到坑道內(nèi)。這些蟲道真菌不僅能供小蠹蟲及其后代取食，還能借助食菌小蠹的危害進(jìn)行傳播，破壞植物的抗性機(jī)制，削弱樹勢(shì)，對(duì)林木造成嚴(yán)重危害[1-3]。因此國(guó)內(nèi)外越來越多的學(xué)者開始致力于研究食菌小蠹及其伴生致病真菌。本研究前期從小粒材小蠹上分離出多種伴生菌，其中有3種鐮刀菌分離率高，致病性強(qiáng)，分別為腐皮鐮刀菌（Fusarium solani）、層出鐮刀菌（F. proliferatum）和藤倉(cāng)鐮刀菌（F. fujikura）。

鐮刀菌主要通過侵染植株的維管束系統(tǒng)致使植株表現(xiàn)出萎蔫、腐爛、根腐等一系列病癥，危害嚴(yán)重時(shí)甚至導(dǎo)致寄主植株整株死亡，對(duì)作物的產(chǎn)量和品質(zhì)造成嚴(yán)重的威脅，而目前見效快、成本低、使用方便的化學(xué)防治法仍是降低鐮刀菌危害的主要防治手段[4-5]。寧楠楠等利用5種殺菌劑對(duì)馬鈴薯干腐病菌三線鐮刀菌（F. tricinctum）、尖孢鐮刀菌（F. oxysporum）和木賊鐮刀菌（F. equiseti）進(jìn)行毒力測(cè)定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)60 g/L戊唑醇的毒力較強(qiáng)，甚至在稀釋500～1 000倍時(shí)對(duì)3種病原菌也能表現(xiàn)出較強(qiáng)的抑制作用[6]。張健采用菌絲生長(zhǎng)抑制法和孢子萌發(fā)抑制法，分析了5種殺菌劑對(duì)受害苗上分離出的尖孢鐮刀菌的毒力效果，發(fā)現(xiàn)異菌脲和咯菌腈這2種藥劑均能很好地抑制尖孢鐮刀菌的菌絲生長(zhǎng)和孢子萌發(fā)[7]。

本研究通過前期多次預(yù)試驗(yàn)的藥劑篩選，最后決定采用吡唑醚菌酯、咪鮮胺、百菌清、氰烯菌酯、戊唑醇、丙硫菌唑和唑醚·氟酰胺這7種藥劑對(duì)小粒材小蠹的3種伴生鐮刀菌進(jìn)行室內(nèi)毒力測(cè)定，旨在為高效防治小粒材小蠹及其伴生鐮刀菌提供新思路。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)時(shí)間與地點(diǎn)

于2021年3月4—28日在南京林業(yè)大學(xué)昆蟲分子毒理實(shí)驗(yàn)室開展本試驗(yàn)。

1.2 試驗(yàn)材料

1.2.1 供試菌株 實(shí)驗(yàn)室前期從小粒材小蠹蟲體上分離出的伴生致病菌腐皮鐮刀菌、層出鐮刀菌和藤倉(cāng)鐮刀菌。

1.2.2 培養(yǎng)基 馬鈴薯葡萄糖瓊脂（PDA）培養(yǎng)基。

1.2.3 供試藥劑 本試驗(yàn)所用的藥劑種類、生產(chǎn)廠家、農(nóng)藥濃度見表1。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 制備含藥培養(yǎng)基 將上述7種藥劑母液依次稀釋至一定濃度（表1），在無菌操作臺(tái)內(nèi)分別把500 μL不同濃度的藥劑加入50 mL培養(yǎng)基中，混勻后制成含藥培養(yǎng)基，以加無菌水的PDA平板作對(duì)照（CK），每個(gè)處理重復(fù)3次，并在培養(yǎng)基內(nèi)加入少量的卡那霉素和氨芐西林以避免細(xì)菌污染[8]。

1.3.2 毒力測(cè)定 采用菌絲生長(zhǎng)抑制率法進(jìn)行毒力測(cè)定[9-10]。用內(nèi)徑為0.582 cm的打孔器沿試驗(yàn)菌株邊緣打孔獲得菌餅，將菌餅接種在不同種類的含藥培養(yǎng)基中間。菌絲面朝下置于25 ℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。當(dāng)對(duì)照組菌落菌絲長(zhǎng)到4/5時(shí)，即可測(cè)量所有培養(yǎng)基的菌落直徑（十字交叉法，用游標(biāo)卡尺進(jìn)行測(cè)量），計(jì)算菌絲生長(zhǎng)抑制率，抑菌率計(jì)算公式如下：

抑菌率=（對(duì)照菌落直徑-處理菌落直徑）/（對(duì)照菌落直徑-菌餅直徑）×100%。

將7種藥劑5個(gè)濃度梯度下菌落生長(zhǎng)的抑菌率換算成抑制概率值，作為因變量（y），藥劑濃度的自然對(duì)數(shù)值作為自變量（x），利用最小二乘法建立“濃度對(duì)數(shù)-概率值”直線方程[11]。用Excel 2019和DPS 7.05軟件求出相關(guān)系數(shù)（r）、抑制中濃度（EC50）及毒力回歸方程（y=ax+b），以比較不同藥劑對(duì)病原菌的毒力效果。

2 結(jié)果與分析

2.1 7種殺菌劑對(duì)腐皮鐮刀菌的抑菌效果

由表2可知，對(duì)腐皮鐮刀菌來說，450 g/L咪鮮胺濃度為4.5～450 μg/mL時(shí)，抑菌率為45.43%～100%;30%丙硫菌唑濃度為30～30 000 μg/mL時(shí)，抑菌率為39.39%～80.82%;430 g/L戊唑醇濃度為43～430 μg/mL時(shí)，抑菌率為32.03%～68.44%;25%氰烯菌酯濃度為250～25 000 μg/mL時(shí)，抑菌率為2.43%～61.61%;40%百菌清濃度為400～40 000 μg/mL時(shí)，抑菌率為27.48%～50.50%;25%吡唑醚菌酯濃度為25 000～250 000 μg/mL時(shí)，抑菌率為20.14%～41.65%;42.4%唑醚·氟酰胺濃度為42 400～424 000 μg/mL時(shí)，抑菌率為28.19%～49.07%。

2.2 7種殺菌劑對(duì)層出鐮刀菌的抑菌效果

由表3可知，對(duì)層出鐮刀菌來說，450 g/L咪鮮胺濃度為4.5～450 μg/mL時(shí)，抑菌率為30.29%～97.60%;30%丙硫菌唑濃度為300～300 000 μg/mL時(shí)，抑菌率為51.44%～75.56%;430 g/L戊唑醇濃度為43～430 μg/mL時(shí)，抑菌率為27.26%～70.42%;40%百菌清濃度為400～40 000 μg/mL時(shí)，抑菌率為19.96%～61.56%;25%氰烯菌酯濃度為25～25 000 μg/mL時(shí)，抑菌率為1.54%～52.62%;25%吡唑醚菌酯濃度為25 000～250 000 μg/mL 時(shí)，抑菌率為5.76%～24.20%;42.4%唑醚·氟酰胺濃度為42 400～424 000 μg/mL時(shí)，抑菌率為16.54%～34.09%。

2.3 7種殺菌劑對(duì)藤倉(cāng)鐮刀菌的抑菌效果

由表4可知，對(duì)藤倉(cāng)鐮刀菌來說，450 g/L咪鮮胺濃度為4.5～450 μg/mL時(shí)，抑菌率為91.62%～100%;25%氰烯菌酯濃度為2.5～250 μg/mL時(shí)，抑菌率為50.36%～84.95%;430 g/L戊唑醇濃度為4.3～430 μg/mL時(shí)，抑菌率為25.15%～80.03%;30%丙硫菌唑濃度為3～3 000 μg/mL時(shí)，抑菌率為16.16%～85.52%;40%百菌清濃度為400～40 000 μg/mL時(shí)，抑菌率為56.24%～76.59%;25%吡唑醚菌酯濃度為2 500～250 000 μg/mL時(shí)，抑菌率為53.84%～65.51%;42.4%唑醚·氟酰胺濃度為424～42 400 μg/mL時(shí)，抑菌率為45.55%～60.08%。

2.4 7種殺菌劑對(duì)腐皮鐮刀菌的毒力測(cè)定

由表5可知，7種殺菌劑對(duì)腐皮鐮刀菌的EC50值由小到大依次為450g/L咪鮮胺（10.75μg/mL）、30%丙硫菌唑（85.12 μg/mL）、430 g/L戊唑醇（113.27 μg/mL）、25%氰烯菌酯（10 636.57 μg/mL）、40%百菌清（24 543.86 μg/mL）、25%吡唑醚菌酯（454 757.34 μg/mL）、42.4%唑醚·氟酰胺（578 930.14 μg/mL）。因此，450 g/L咪鮮胺對(duì)腐皮鐮刀菌室內(nèi)毒力最強(qiáng)，30%丙硫菌唑、430 g/L戊唑醇次之，42.4%唑醚·氟酰胺最弱。

2.5 7種殺菌劑對(duì)層出鐮刀菌的毒力測(cè)定

由表6可知，7種殺菌劑對(duì)層出鐮刀菌的EC50值由小到大依次為450 g/L咪鮮胺（11.47 μg/mL）、30%丙硫菌唑（64.58 μg/mL）、430 g/L戊唑醇（179.32 μg/mL）、40%百菌清（5 410.75 μg/mL）、25%氰烯菌酯（67 112.66 μg/mL）、25%吡唑醚菌酯（1 827 947.33 μg/mL）、42.4%唑醚·氟酰胺（3 678 352.65 μg/mL）。因此，450 g/L咪鮮胺對(duì)層出鐮刀菌室內(nèi)毒力最強(qiáng)，30%丙硫菌唑、430 g/L戊唑醇次之，42.4%唑醚·氟酰胺最弱。

2.6 7種殺菌劑對(duì)藤倉(cāng)鐮刀菌的毒力測(cè)定

由表7可知，7種殺菌劑對(duì)藤倉(cāng)鐮刀菌的EC50值由小到大依次為450 g/L咪鮮胺（1.63 μg/mL）、25%氰烯菌酯（3.85 μg/mL）、430 g/L戊唑醇（37.00 μg/mL）、30%丙硫菌唑（93.53 μg/mL）、40%百菌清（198.36 μg/mL）、25%吡唑醚菌酯（858.30 μg/mL）、42.4%唑醚·氟酰胺（1 567.21 μg/mL）。因此，對(duì)于藤倉(cāng)鐮刀菌來說，450 g/L咪鮮胺、25%氰烯菌酯對(duì)其室內(nèi)毒力最強(qiáng)，430 g/L戊唑醇、30%丙硫菌唑次之，42.4%唑醚·氟酰胺最弱。

3 討論與結(jié)論

本研究選取7種廣譜殺菌劑分別對(duì)小粒材小蠹3種伴生鐮刀菌做抑菌試驗(yàn)和室內(nèi)毒力測(cè)定。研究表明，450 g/L咪鮮胺對(duì)3種鐮刀菌的抑菌效果和毒力作用都遠(yuǎn)好于其他藥劑，30%丙硫菌唑、40%百菌清、25%氰烯菌酯和430 g/L戊唑醇對(duì)3種鐮刀菌的抑菌效果和毒力作用次之，而25%吡唑醚菌酯、42.4%唑醚·氟酰胺對(duì)3種鐮刀菌的毒力作用弱，抑菌效果也較差。

本研究中450 g/L咪鮮胺表現(xiàn)最好，咪鮮胺作為一種高效低毒的廣譜殺菌劑，作用機(jī)制是抑制麥角甾醇生物合成，同時(shí)具有保護(hù)、鏟除的雙重作用，這類藥劑還具有內(nèi)吸、傳導(dǎo)性的特點(diǎn)，常被應(yīng)用于防治由子囊菌和半知菌引起的多種作物病害[12]。周鑫鈺等選用7種殺菌劑對(duì)從藍(lán)莓根腐病病樣上分離鑒定出的尖孢鐮刀菌進(jìn)行室內(nèi)毒力測(cè)定，結(jié)果表明，咪鮮胺對(duì)其抑制效果顯著，EC50為0.071 59 mg/L[13]。孟珂等在測(cè)定咪鮮胺、戊唑醇、咯菌腈等8種殺菌劑對(duì)9種薄殼山核桃炭疽菌的室內(nèi)毒力試驗(yàn)中，發(fā)現(xiàn)咪鮮胺對(duì)9種病原菌菌絲抑制作用最強(qiáng)，平均EC50為0.14 mg/L[14]。此外，咪鮮胺和其他化學(xué)藥劑混配在病害防治中也表現(xiàn)出一定的增效作用，馬雪莉等在對(duì)咪鮮胺與嘧菌酯及其混劑對(duì)禾谷鐮孢菌的毒力測(cè)定中發(fā)現(xiàn)，咪鮮胺與嘧菌酯配比為4 ∶2時(shí)增效作用最強(qiáng)，EC50僅為0.044 mg/L[15]。

本研究中的室內(nèi)毒力測(cè)定內(nèi)容僅針對(duì)7種單一藥劑進(jìn)行，關(guān)于化學(xué)藥劑與其他化學(xué)藥劑的復(fù)配劑、化學(xué)藥劑與植物源藥劑復(fù)配劑是否能夠起到增效的作用還需進(jìn)一步研究。此外，本試驗(yàn)僅對(duì)病原菌在室內(nèi)離體條件下進(jìn)行了毒力測(cè)定，還需在林間被害株上進(jìn)一步驗(yàn)證。

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