艾比湖濕地黏細(xì)菌的分離鑒定及其抗菌活性

王月娥 牛艷慧 鐘鎮(zhèn)濤 胡文革 李楊

摘要：為了探究艾比湖濕地可培養(yǎng)黏細(xì)菌多樣性及該地區(qū)黏細(xì)菌菌株對(duì)病原微生物的拮抗作用。通過傳統(tǒng)的黏細(xì)菌分離方法對(duì)采自艾比湖濕地15份樣品中的黏細(xì)菌進(jìn)行分離，結(jié)合形態(tài)學(xué)觀察、生理生化特征和16S rDNA序列分析，確定菌株的分類地位，并通過平板對(duì)峙法分析其抗菌活性。試驗(yàn)結(jié)果表明，從采集的15份樣品中共分離純化出22株疑似菌株，經(jīng)鑒定將其歸類為黏球菌屬，其中6株為橙色黏球菌（Myxococcus fulvus），14株為變綠黏球菌（M. virescens），2株只鑒定到屬（Myxococcus sp.）?？咕钚苑治鲲@示，22株黏細(xì)菌表現(xiàn)出不同的抗菌活性，其中14株可以抑制金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）的生長，14株黏細(xì)菌均可抑制沙門氏菌（Salmonella typhimurium）和大腸桿菌（Escherichia coli）的生長，15株對(duì)枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）的生長表現(xiàn)出抑制作用，17株可以抑制釀酒酵母菌（Saccharomyces cerevisiae）的生長，11株能夠抑制鏈格孢菌（Alternaria alternata）的生長。艾比湖濕地可培養(yǎng)黏細(xì)菌多樣性不高，且黏球菌屬為該地區(qū)可培養(yǎng)黏細(xì)菌的優(yōu)勢種屬。初步篩選出的2株黏細(xì)菌菌株WCX_LG-5和TF_YJC-1，具有廣譜的抗菌活性，是一類極具開發(fā)潛力的微生物資源。

關(guān)鍵詞：艾比湖濕地;黏細(xì)菌;病原微生物;抗菌活性

中圖分類號(hào)：S182 ??文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A

文章編號(hào)：1002-1302（2022）08-0234-09

植物病害是影響國家糧食安全和作物生產(chǎn)力的主要因素之一，對(duì)作物的生長發(fā)育和產(chǎn)量有較大的影響，造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失[1]，其中70%～80%的病害由病原真菌所致[2-3]，其生物防治的研究具有很大的現(xiàn)實(shí)意義。研究表明，芽孢桿菌（Bacillus）、假單胞菌屬（Pseudomonas）、溶桿菌屬（Lysobacter）、木霉屬（Trichoderma）和腐霉屬（Pythium）等病菌產(chǎn)生的毒素、抗生素及蛋白質(zhì)類物質(zhì)等代謝產(chǎn)物能夠抑制植物病原菌的生長，其中枯草芽孢桿菌等已被開發(fā)為微生物菌劑，應(yīng)用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中病害的控制[4-6]。然而，次級(jí)代謝產(chǎn)物的產(chǎn)生受到環(huán)境因素的影響，這使得拮抗菌株在田間的防治效果較差[7]。目前，大量研究表明在動(dòng)物病害及蟲害的防治過程中，利用其天敵和捕食關(guān)系進(jìn)行病害防治，可達(dá)到較好的防治效果[8-9]。然而，微生物中也存在大量的捕食者，如蛭弧菌屬（Bdellovibrio）、擬桿菌門（Bacteroidetes）、溶桿菌屬（Lysobacter）和黏細(xì)菌目（Myxococcales）等[10-12]。其中，黏細(xì)菌對(duì)病原微生物的捕食特性使其在植物病害防治方面具有較大的潛力，被視為新型的生防微生物類群[13]。

黏細(xì)菌是一類能夠滑行運(yùn)動(dòng)、具有復(fù)雜多細(xì)胞行為的革蘭氏陰性菌[14]，主要分布于中性或偏堿性土壤中[15]。然而，在海洋、沙漠、鹽堿地和濕地等特殊生境中也發(fā)現(xiàn)了大量的黏細(xì)菌資源[16-19]，在這些生境中黏細(xì)菌具有良好的穩(wěn)定性和抗逆性[20]。目前，對(duì)于黏細(xì)菌生物活性產(chǎn)物及其在生物防治應(yīng)用領(lǐng)域的研究日漸突出[21]。迄今為止，從黏細(xì)菌中分離獲得的活性代謝產(chǎn)物達(dá)到600多種[22]，這些產(chǎn)物種類多樣、結(jié)構(gòu)新穎[23]，具有抗真菌、抗細(xì)菌和抗腫瘤等生物活性[24]。研究表明，黏細(xì)菌產(chǎn)生的活性產(chǎn)物對(duì)植物病原菌生長具有較強(qiáng)的抑制作用，且其在土壤中的定殖效果較好[25]。因此，黏細(xì)菌是一類極具開發(fā)潛力的生物防治因子[26]。然而，獲得大量的黏細(xì)菌種質(zhì)資源是其被開發(fā)和利用的關(guān)鍵。

新疆艾比湖濕地地處阿拉山口大風(fēng)通道處，位于準(zhǔn)噶爾盆地西南邊緣（82°36′～83°50′E，44°30′～45°09′N），是我國溫帶干旱區(qū)內(nèi)陸湖泊的典型代表[27]，總面積2 670.85 km2。艾比湖濕地內(nèi)分布有沼澤、湖泊、沙漠和鹽漠等不同地理區(qū)域，區(qū)域內(nèi)土壤鹽堿化嚴(yán)重（土壤電導(dǎo)率為1～12 mS/cm;pH值范圍為8.0～9.0）。鹽角草、檉柳、鹽節(jié)木、梭梭、花花柴、蘆葦和胡楊等植物是艾比湖濕地鹽堿環(huán)境中的建群植物，具有較強(qiáng)的耐鹽能力，對(duì)艾比湖濕地生態(tài)環(huán)境的恢復(fù)具有重要作用。目前，有關(guān)濕地鹽堿環(huán)境中耐鹽植物群落區(qū)黏細(xì)菌的分布、多樣性及其活性產(chǎn)物的研究較少。因此，對(duì)新疆艾比湖濕地鹽堿地中建群植物根際土壤中可培養(yǎng)黏細(xì)菌菌株的分離及其抗菌特性的研究很有必要。

基于傳統(tǒng)的黏細(xì)菌分離純化方法，以艾比湖濕地建群植物根際土壤作為主要研究對(duì)象，對(duì)該地區(qū)可培養(yǎng)黏細(xì)菌多樣性及其抗菌特性進(jìn)行研究，這對(duì)認(rèn)識(shí)艾比湖濕地可培養(yǎng)黏細(xì)菌的種屬分類，以及探究該地區(qū)黏細(xì)菌的代謝產(chǎn)物提供了科學(xué)基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 研究區(qū)概況

艾比湖濕地位于準(zhǔn)噶爾盆地西南邊緣（82°36′～83°50′E，44°30′～45°09′N），地處新疆阿拉山口大風(fēng)通道下，為典型的大陸性氣候，平均降水量為105.17 mm，蒸發(fā)量為1 315 mm。由于艾比湖濕地特殊的地理位置，形成了獨(dú)特的濕地生態(tài)環(huán)境，生長有多種不同鹽生、水生和旱生類植被群落，如鹽角草（Salicornia europaea）、蘆葦（Phragmites australis）和胡楊（Populus euphratica）等，濕地內(nèi)土壤多為沙質(zhì)土壤和黏質(zhì)土壤，且土壤鹽堿化較為嚴(yán)重。

1.2 樣品采集與處理

于2018年7月至新疆艾比湖濕地國家自然保護(hù)區(qū)進(jìn)行采樣。本試驗(yàn)共采集新疆艾比湖濕地15份土壤樣品（14份植物根際土壤和1份朽木樣品）。采集土壤樣品時(shí)，去除土壤表面的雜質(zhì)和表層土后進(jìn)行取樣。利用無菌刷子輕輕將附著在植物根系的土壤刷落，作為該植物群落區(qū)根際土壤。將樣品迅速帶回實(shí)驗(yàn)室，立即自然風(fēng)干、過篩，置于4 ℃冰箱保存?zhèn)溆茫?018年9月進(jìn)行試驗(yàn)。采樣地具體信息見表1。

1.2.1 培養(yǎng)基[17] WCX培養(yǎng)基：CaCl2·2H2O 0.1%，4-羥乙基哌嗪乙磺酸（HEPES）0.48%，瓊脂1.5%，pH值7.2。培養(yǎng)基滅菌后，加入終濃度為25 μg/mL的放線菌酮溶液;培養(yǎng)基凝固后用活的大腸桿菌在其表面畫線。

ST21CX培養(yǎng)基：A液，K2HPO4 0.1%，酵母抽提物0.002%，瓊脂1.5%，蒸餾水670 mL;B液，KNO3 0.1%，MgSO4·7H2O 0.1%，MnSO4·7H2O 0.01%，CaCl2·2H2O 0.1%，F(xiàn)eCl3·6H2O 0.02%，蒸餾水330 mL。高壓蒸汽滅菌后將A、B等2個(gè)溶液混合，加入放線菌酮溶液（終濃度為25 μg/mL）。為分離嗜纖維素黏細(xì)菌，可在培養(yǎng)基表面放置滅過菌的濾紙。

VY/2培養(yǎng)基：安琪酵母0.5%，CaCl2·2H2O 0.1%，MgSO4·7H2O 0.05%，瓊脂1.5%，pH值7.6。高壓蒸汽滅菌后加入VB12溶液（終濃度為 0.5 μg/mL）和放線菌酮溶液（終濃度為25 μg/mL）。

CAS液體培養(yǎng)基：酪蛋白胨0.3%，MgSO4·7H2O 0.1%，pH值7.2。

VY/4培養(yǎng)基：安琪酵母0.25%，CaCl2·2H2O 0.1%，瓊脂1.5%，pH值7.2。

1.2.2 試驗(yàn)菌株 大腸桿菌（Escherichia coli）、枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）、釀酒酵母菌（Saccharomyces cerevisiae）均由筆者所在實(shí)驗(yàn)室提供;金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、沙門氏菌（Salmonella typhimurium）和鏈格孢菌（Alternaria alternata）分別由石河子大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院和農(nóng)學(xué)院提供。以上菌株用于測定黏細(xì)菌的抗菌活性。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 黏細(xì)菌菌株的分離 利用兔糞誘導(dǎo)法[28]、大腸桿菌劃線誘導(dǎo)法和濾紙誘導(dǎo)法[29]對(duì)艾比湖濕地可培養(yǎng)黏細(xì)菌進(jìn)行分離。取適量樣品置于已滅菌的培養(yǎng)皿內(nèi)，于58 ℃烘箱內(nèi)處理1～2 h，以除去樣品中不耐熱的雜菌及變形蟲[30]。用100 μg/mL的放線菌酮溶液浸泡樣品過夜。次日，倒掉廢液，取黃豆粒大小的樣品接種于WCX大腸桿菌劃線培養(yǎng)基、ST21CX濾紙誘導(dǎo)培養(yǎng)基及ST21CX兔糞誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，封口。30 ℃恒溫培養(yǎng)7 d，持續(xù)觀察子實(shí)體的形成情況。每組試驗(yàn)設(shè)置3個(gè)重復(fù)。

1.3.2 黏細(xì)菌的純化和驗(yàn)純 用無菌竹簽挑取兔糞表面及大腸桿菌周圍的子實(shí)體，采用直接純化法、反復(fù)轉(zhuǎn)接純化法、加熱純化法（58 ℃）和冷凍純化法（-80 ℃）進(jìn)行純化。挑取純化后的菌株接種于CAS液體培養(yǎng)基中，搖床過夜培養(yǎng)。若培養(yǎng)基澄清則說明該菌株已純;若培養(yǎng)基渾濁，則在VY/2固體培養(yǎng)基上繼續(xù)純化。將已純菌株用25%的甘油于-80 ℃進(jìn)行長期保存。

1.3.3 黏細(xì)菌的形態(tài)學(xué)分類 利用熒光顯微鏡對(duì)菌株的菌落形態(tài)、子實(shí)體形態(tài)、營養(yǎng)細(xì)胞及黏孢子形態(tài)進(jìn)行觀察[16-17，31]并拍照。參考《Bergeys manual of systematic bacteriology》[31]和《The prokaryotes》（第2版）[32]的分類標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)獲得的純菌株進(jìn)行初步鑒定。

1.3.4 菌株生理生化測定 根據(jù)《伯杰細(xì)菌鑒定手冊(cè)》（第8版）中對(duì)黏細(xì)菌理化特征的描述，對(duì)菌株進(jìn)行LB液體培養(yǎng)、明膠液化、吐溫-80利用、脲酶利用、硝酸鹽還原、剛果紅試驗(yàn)、纖維素降解、過氧化氫反應(yīng)、淀粉水解與牛奶胨化等試驗(yàn)。

1.3.5 黏細(xì)菌16S rDNA系統(tǒng)發(fā)育分析 采用十六烷基三甲基溴化銨（CTAB）法提取菌株的基因組DNA，利用細(xì)菌16S rDNA通用引物27F[33]和1495R[34]對(duì)黏細(xì)菌16S rDNA序列進(jìn)行擴(kuò)增。擴(kuò)增產(chǎn)物送至北京華大基因研究中心有限公司進(jìn)行測序。將測序所得的序列在NCBI網(wǎng)站上進(jìn)行BLAST序列比對(duì)，再用MEGA 5.0軟件（Neighbor-Joining法）構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，對(duì)艾比湖濕地可培養(yǎng)黏細(xì)菌多樣性進(jìn)行分析。本研究的測序序列已提交至GeneBank數(shù)據(jù)庫。

1.3.6 黏細(xì)菌抗菌活性分析 將黏細(xì)菌菌株接種在VY/2固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)7 d，待其長滿平板后，用滅過菌的打孔器打孔，制備黏細(xì)菌菌餅若干。

黏細(xì)菌抗細(xì)菌及抗釀酒酵母菌活性分析將試驗(yàn)菌株：大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、沙門氏菌和枯草芽孢桿菌分別接種至牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基內(nèi)，將釀酒酵母菌接種至馬鈴薯葡萄糖瓊脂（PDA）液體培養(yǎng)基內(nèi)，37 ℃、180 r/min振蕩培養(yǎng)至菌液吸光度（D600 nm）為0.5。各取一定量的菌液，分別均勻涂布至牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基和PDA固體培養(yǎng)基上，晾干。用滅過菌的竹簽扎取黏細(xì)菌菌餅倒扣在涂有試驗(yàn)菌株的培養(yǎng)基的一側(cè)，另一側(cè)放置同樣大小的無菌的VY/2瓊脂塊作為空白對(duì)照，封口。37 ℃恒溫培養(yǎng)7 d，觀察抑菌圈大小。每組試驗(yàn)設(shè)置3個(gè)重復(fù)。

黏細(xì)菌抗鏈格孢菌活性分析：用滅過菌的竹簽扎取2～3塊黏細(xì)菌菌餅，將其倒扣在VY/4固體培養(yǎng)基上[35]，在超凈臺(tái)內(nèi)放置1夜。次日，在離黏細(xì)菌菌餅約1 cm處的位置放置1塊相同大小的鏈格孢菌菌餅，另一側(cè)放置同樣大小的無菌的VY/2瓊脂塊作為空白對(duì)照，封口。30 ℃恒溫培養(yǎng)7 d，觀察抑菌圈大小。每組試驗(yàn)設(shè)置3個(gè)重復(fù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同樣品中黏細(xì)菌的分離與純化

試驗(yàn)分析了不同樣品中黏細(xì)菌的分離情況。利用傳統(tǒng)的黏細(xì)菌分離方法，從新疆艾比湖濕地采集的15份樣品中共分離出60株疑似黏細(xì)菌菌株，經(jīng)純化得到22株純菌株，純菌率為36.7% （表2）。研究結(jié)果表明，胡楊、蘆葦和鹽角草樣品中均能誘導(dǎo)出球形（或卵球形）、肉粉色（或橘紅色）的子實(shí)體，且從胡楊根際土壤中分離到的黏細(xì)菌菌株數(shù)最多;朽木、鹽角草和蘆葦樣品中均能誘導(dǎo)出黃色（或黃綠色）、橢圓形或形狀不規(guī)則的子實(shí)體，且鹽角草根際土壤中誘導(dǎo)出的該類黏細(xì)菌是最多的;花花柴根際土壤中僅誘導(dǎo)出單個(gè)分布的圓形或近圓形的黃色子實(shí)體。然而，其余土壤樣品中未誘導(dǎo)純化出黏細(xì)菌菌株，這可能與各群落區(qū)的土壤類型、根系分泌物及土壤理化因子等有關(guān)。

2.2 黏細(xì)菌菌株的鑒定

2.2.1 菌株的形態(tài)特征 根據(jù)菌株的子實(shí)體形態(tài)、菌落形態(tài)、營養(yǎng)細(xì)胞及黏孢子形態(tài)，將22株疑似黏細(xì)菌菌株分為3類，結(jié)果如表3所示。這些菌株形態(tài)各異，種類多樣，在VY/2固體培養(yǎng)上可形成不同形狀的菌落，呈圓形（或同心圓）擴(kuò)展或呈放射狀波紋，同時(shí)在菌落邊緣可形成薄而半透明的膜;子實(shí)體肉眼可見，以粉紅色、黃色和金黃色為主，形狀主要為球形或卵圓形，能產(chǎn)生大量的黏液;其營養(yǎng)細(xì)胞為細(xì)長桿狀、兩端稍尖、可彎曲，大小一般為（0.6～1.0） μm×（2～10） μm，為Ⅰ型營養(yǎng)細(xì)胞;黏孢子主要為橢圓形、卵圓形或圓形。部分菌株形態(tài)特征如圖1所示。

2.2.2 菌株的生理生化特征 對(duì)22株菌株進(jìn)行理化性質(zhì)檢測，發(fā)現(xiàn)所有菌株均不能在LB液體培養(yǎng)基中生長，且能夠利用吐溫-80、吸附剛果紅、可使硝酸鹽還原、淀粉水解、牛奶胨化;菌株WCX_LG-5對(duì)濾紙有輕微地降解作用，其余菌株均不能使濾紙降解。所有菌株理化特征與《伯杰氏細(xì)菌手冊(cè)》中對(duì)黏球菌屬特征的描述相符，進(jìn)一步結(jié)合形態(tài)特征，初步認(rèn)定22株純菌株為黏球菌屬菌株。

2.2.3 菌株16S rDNA系統(tǒng)發(fā)育分析 通過形態(tài)鑒定并結(jié)合菌株理化性質(zhì)，初步認(rèn)定22株菌株為黏球菌屬菌株。為進(jìn)一步確定其分類，通過CTAB法提取了22株菌株的基因組DNA，利用細(xì)菌通用引物對(duì)菌株的16S rDNA序列進(jìn)行PCR擴(kuò)增，并將擴(kuò)增產(chǎn)物送至華大基因公司進(jìn)行測序。將測序后所得序列在NCBI上進(jìn)行BLAST序列比對(duì)，利用MEGA 5.0軟件中的Neighbor-Joining 法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，對(duì)其進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育分析。由圖2可看出，以脫硫弧菌（Desulfovibrio desulfuricans）作為外群菌株，22株菌株分為3個(gè)分支。Ⅰ類菌株的分支屬于黏球菌屬（Myxococcus sp.，2株）;Ⅱ類菌株的分支屬于黏球菌屬中的變綠黏球菌（Myxococcus virescens，14株）;Ⅲ類菌株的分支屬于黏球菌屬中的橙色黏球菌（Myxococcus fulvus，6株）。然而，這3類菌株均屬于黏球菌屬（Myxococcus），這與菌株的形態(tài)鑒定結(jié)果相一致。由此可以看出，黏球菌屬為艾比湖濕地可培養(yǎng)黏細(xì)菌的優(yōu)勢種屬，且該地區(qū)可培養(yǎng)黏細(xì)菌多樣性不高，這可能與該地區(qū)特殊的土壤環(huán)境、植被類型和氣候等因素有很大關(guān)系。

2.3 黏細(xì)菌菌株的抗菌特性分析

利用平板對(duì)峙法，初步探究了22株黏細(xì)菌對(duì)6種指示菌株的抗菌活性。將指示菌株與黏細(xì)菌分別在牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基、PDA培養(yǎng)基及VY/4固體培養(yǎng)基上共同培養(yǎng)一定時(shí)間后，觀察黏細(xì)菌抑菌情況并記錄抑菌圈的大小。黏細(xì)菌抗菌活性檢測結(jié)果顯示，22株黏細(xì)菌均表現(xiàn)出對(duì)1種或多種指示菌株產(chǎn)生抗性，如圖3所示。其中，有14株黏細(xì)菌均可抑制大腸桿菌和沙門氏菌的生長，15株對(duì)枯草芽孢桿菌的生長表現(xiàn)出抑制作用，14株對(duì)金黃色葡萄球菌的生長表現(xiàn)出抑制作用，17株可以抑制釀酒酵母菌的生長，11株黏細(xì)菌能夠抑制鏈格孢菌的生長。然而，菌株WCX_LG-5和TF_YJC-1對(duì)6種指示菌株均具有抑制作用，具有廣譜的抗菌活性。此外，筆者所在課題組還發(fā)現(xiàn)歸屬于同一個(gè)種的黏細(xì)菌菌株對(duì)6種指示菌株的抗性具有一定的差異，結(jié)果如表4所示。從表5中可以看出，黏球菌屬菌株和橙色黏球菌能夠抑制釀酒酵母菌和鏈格孢菌的生長，而變綠黏球菌對(duì)大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、釀酒酵母菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌和鏈格孢菌均有抑制作用，這說明變綠黏球菌具有廣譜的抗菌活性。

3 討論

3.1 影響艾比湖濕地可培養(yǎng)黏細(xì)菌多樣性的因素

利用傳統(tǒng)的黏細(xì)菌分離方法，從新疆艾比湖濕地14份土壤樣品及1份朽木樣品中分離純化到14株變綠黏球菌、6株橙色黏球菌和2株黏球菌屬菌株，提示艾比湖濕地黏細(xì)菌多樣性不高，這與張鮮姣等對(duì)新疆鹽堿化土壤中黏細(xì)菌多樣性研究結(jié)果[18]一致。分析其原因主要有：（1）土壤理化因子（鹽堿度）。鹽堿地土壤顯著的特點(diǎn)是土壤的pH值、含鹽量較高，土壤肥力缺乏[36]，土壤pH值、含鹽量及土壤中的營養(yǎng)物質(zhì)含量與根系微生物多樣性呈顯著負(fù)相關(guān)[37]。通常，黏細(xì)菌在中性或偏堿性及有機(jī)質(zhì)豐富的土壤中較為常見[15，38]。而艾比湖濕地土壤鹽堿化嚴(yán)重，土壤養(yǎng)分及營養(yǎng)物質(zhì)均處于較低水平[39]，因此該地區(qū)的鹽堿環(huán)境不利于黏細(xì)菌的生長。此外，在這種特殊的極端鹽堿環(huán)境中，可能有一些新種未被發(fā)現(xiàn)。（2）土壤性質(zhì)。黏細(xì)菌為土壤中常見的腐生菌，通常一小撮土壤就可分離出較多的黏細(xì)菌[31]，但在不同的土壤環(huán)境中黏細(xì)菌的分布是不均勻的[40]。黏細(xì)菌在營養(yǎng)豐富的土壤樣品中較為豐富，而在含沙土壤中黏細(xì)菌含量較少[41]。艾比湖濕地的土壤多為沙性鹽堿土且土壤腐殖質(zhì)含量較低，這可能是影響?zhàn)ぜ?xì)菌分布及其多樣性的重要因素之一。（3）植被類型。從14種植物根際土壤樣品中分離篩選黏細(xì)菌菌株，其中在鹽角草、蘆葦、胡楊和花花柴根際土壤樣品中分離獲得了黏細(xì)菌菌株，其余植物根際土壤樣品中未分離純化出黏細(xì)菌。此外，從朽木、鹽角草和蘆葦樣品中都分離到了變綠黏球菌，然而從鹽角草樣品中分離到最多;從胡楊樣品中分離到的橙色黏球菌最多，而從花花柴樣品中只分離到2株黏球菌屬的菌株，而其他樣品中均未分離出黏細(xì)菌菌株，這說明不同的植被類型及根系分泌物可能會(huì)影響?zhàn)ぜ?xì)菌的分布及其多樣性特點(diǎn)。（4）黏細(xì)菌分離方法。蟻爍星等通過改進(jìn)分離方法，大大提高了誘導(dǎo)出的黏細(xì)菌的種類和數(shù)目[42]。而傳統(tǒng)的黏細(xì)菌分離方法本身具有一定的局限性[43]，兔糞誘導(dǎo)法和大腸桿菌誘導(dǎo)法主要針對(duì)嗜細(xì)菌、黏細(xì)菌的分離，而濾紙誘導(dǎo)法主要分離嗜纖維素黏細(xì)菌菌株[44]，所以每種方法并不適用于樣品中所有黏細(xì)菌菌株的分離。此外，有的黏細(xì)菌在純化過程中，其子實(shí)體會(huì)隨著純化傳代次數(shù)的增加而出現(xiàn)不生長、甚至出現(xiàn)死亡等情況[45]。因此在黏細(xì)菌分離純化過程中可能會(huì)丟失一些種屬，所以分離方法在一定程度上也會(huì)影響?zhàn)ぜ?xì)菌的多樣性。

3.2 黏細(xì)菌抗菌活性分析

黏細(xì)菌作為第三大類藥源微生物類群，其次級(jí)代謝產(chǎn)物的抗菌活性在其捕食細(xì)菌的過程中發(fā)揮著重要作用[20]，而β-1，6-葡聚糖酶是目前報(bào)道的唯一的具有糖苷水解酶活性的外膜蛋白，是黏細(xì)菌捕食真菌的關(guān)鍵因子[35]。由于黏細(xì)菌不同種屬之間的特性差異較大，導(dǎo)致其捕食研究較為緩慢。試驗(yàn)初步探究了22株黏細(xì)菌對(duì)指示細(xì)菌和植物病原真菌的抗菌特性。結(jié)果表明，22株黏細(xì)菌菌株均對(duì)一種或多種指示菌株產(chǎn)生抗性，這可能與黏細(xì)菌的捕食作用及其產(chǎn)生的次級(jí)代謝產(chǎn)物有關(guān)。

大腸桿菌是腸道桿菌中的一種，可以引起人或動(dòng)物的腸道感染，此外還會(huì)引起尿道和膀胱等感染[46]。金黃色葡萄球菌是常見的食源性致病菌，在適當(dāng)?shù)臈l件下，金黃色葡萄球菌能夠產(chǎn)生腸毒素，引起食物中毒，它是僅次于沙門氏菌和副溶血桿菌的第三大微生物致病菌。分離得到的22株黏細(xì)菌中，14株變綠黏球菌不僅能夠抑制大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的生長，而且對(duì)枯草芽孢桿菌和沙門氏菌具有抑制作用，具有廣譜的抗菌活性，這可能是由于變綠黏球菌通過分泌蛋白酶、溶菌酶等裂解酶對(duì)指示菌株進(jìn)行消化和捕食的結(jié)果。試驗(yàn)中分離得到的6株橙色黏球菌對(duì)大腸桿菌、枯草芽孢桿菌及金黃色葡萄球菌均無抑制作用，這與惠明等對(duì)橙色黏球菌抗菌活性分析結(jié)果[47]不一致，這可能與分離黏細(xì)菌的樣地及產(chǎn)生代謝產(chǎn)物菌株的特異性有很大關(guān)系。此外，試驗(yàn)結(jié)果顯示同一種屬的黏細(xì)菌對(duì)指示菌株的抗性具有一定的差異性，這可能與黏細(xì)菌產(chǎn)生的活性代謝產(chǎn)物的種類有關(guān)。

我國大面積種植梨樹，其果肉營養(yǎng)豐富。其果實(shí)和葉片等往往會(huì)被鏈格孢菌侵染，引發(fā)梨黑斑病，這嚴(yán)重影響梨的產(chǎn)量和品質(zhì)[48]。因此，對(duì)梨黑斑病病原微生物的生物防治是一件刻不容緩的事情。抗菌結(jié)果顯示，分離得到的14株黏細(xì)菌能夠抑制鏈格孢菌的生長，這為梨黑斑病病原微生物的防治及微生物農(nóng)藥的開發(fā)提供了新方案，同時(shí)也為黏細(xì)菌菌株代謝產(chǎn)物的深入研究提供了理論數(shù)據(jù)，具有較好的現(xiàn)實(shí)意義。此外，通過對(duì)黏細(xì)菌抗菌活性的初步探究，發(fā)現(xiàn)菌株WCX_LG-5和TF_YJC-1對(duì)6種指示菌株的生長均具有抑制作用，具有廣譜的抗菌活性，是一類具有開發(fā)為菌劑潛力的微生物資源，在今后的研究中有望對(duì)其代謝產(chǎn)物進(jìn)行更深入的研究。

4 結(jié)論

利用黏細(xì)菌傳統(tǒng)分離方法，從新疆艾比湖鹽堿濕地中分離出22株黏細(xì)菌菌株。所有菌株最終被鑒定為橙色黏球菌、變綠黏球菌和黏球菌屬菌株。由此可知，艾比湖濕地可培養(yǎng)黏細(xì)菌多樣性不高，黏球菌屬為該地區(qū)可培養(yǎng)黏細(xì)菌的優(yōu)勢種屬。

黏細(xì)菌能夠抑制病原微生物的生長。22株黏細(xì)菌對(duì)一種或多種指示細(xì)菌和植物病原真菌的生長具有抑制作用，且同一種屬的黏細(xì)菌對(duì)指示菌株的抗性具有一定的差異性。

有的黏細(xì)菌已被開發(fā)為微生物菌劑用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)。菌株WCX_LG-5和TF_YJC-1具有廣譜的抗菌活性，是一類具有開發(fā)為微生物農(nóng)藥前景的微生物資源，為其代謝產(chǎn)物的進(jìn)一步研究提供了基礎(chǔ)。

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