苜蓿和小麥秸稈組合對(duì)斷奶羔羊生長(zhǎng)性能、肝臟糖、脂代謝相關(guān)基因表達(dá)和瘤胃黏膜形態(tài)的影響

張劍霞 趙子鑫* 杜瑞平 宋利文 胡紅蓮 趙 濛 賀志雄 高 民**

(1.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，呼和浩特 010018；2.內(nèi)蒙古自治區(qū)農(nóng)牧業(yè)科學(xué)院動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)與飼料研究所，呼和浩特 010031；3.中國(guó)科學(xué)院亞熱帶農(nóng)業(yè)生態(tài)研究所，中國(guó)科學(xué)院亞熱帶農(nóng)業(yè)生態(tài)過(guò)程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，長(zhǎng)沙 410125)

近年來(lái)，由于國(guó)外產(chǎn)品的沖擊和國(guó)內(nèi)生產(chǎn)管理技術(shù)的提高，在國(guó)家相關(guān)政策的推動(dòng)下，越來(lái)越多的人選擇調(diào)整種植結(jié)構(gòu)，優(yōu)先種植一些除糧食外的經(jīng)濟(jì)作物和牧草。紫花苜蓿作為一種重要的植物蛋白質(zhì)受到重視，因紫花苜蓿是家畜都喜食的優(yōu)質(zhì)牧草，不管是青貯、放牧或制成青干草，都符合家畜的適口性，營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高，故有“牧草之王”的美名。但我國(guó)北方牧場(chǎng)面積退化等產(chǎn)生的一系列問(wèn)題，缺乏優(yōu)質(zhì)苜蓿的種植，且飼喂種類(lèi)單一。而我國(guó)的農(nóng)作物秸稈主要有小麥秸稈、玉米秸稈和稻草秸稈等，產(chǎn)量巨大，秸稈所含的粗纖維可刺激反芻動(dòng)物唾液分泌，進(jìn)行正常反芻及咀嚼，維持瘤胃正常pH和功能。因此將小麥秸稈與苜蓿草進(jìn)行組合飼喂，既解決了優(yōu)質(zhì)苜蓿草的缺乏，也為呼倫貝爾地區(qū)低質(zhì)粗飼料的開(kāi)發(fā)利用奠定了基礎(chǔ)。

粗飼料的不同組合效應(yīng)可以起相互促進(jìn)的作用，發(fā)揮優(yōu)質(zhì)和低質(zhì)粗飼料的正組合效應(yīng)[1]，抑制粗飼料負(fù)組合效應(yīng)，有利于在控制生產(chǎn)成本的基礎(chǔ)上提高家畜的生產(chǎn)性能，低成本的劣質(zhì)飼料與部分的優(yōu)質(zhì)粗飼料的組合一直以來(lái)都是研究的熱點(diǎn)。Hadjigeorgiou等[2]研究發(fā)現(xiàn)，飼喂羔羊苜蓿干草比飼喂大麥秸稈的生長(zhǎng)速度快。Obeidat等[3]通過(guò)飼喂小麥秸稈和苜蓿組合飼糧，發(fā)現(xiàn)可提高母羊和羔羊的生產(chǎn)性能。Kong等[4]研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，苜蓿干草和小黑麥秸稈這2種粗飼料組合飼喂可以豐富奶牛瘤胃產(chǎn)甲烷群落的生物多樣性。Haddad等[5]通過(guò)研究大麥秸稈與苜蓿干草組合飼喂對(duì)綿羊瘤胃環(huán)境、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)采食量和消化率的聯(lián)合效應(yīng)時(shí)，發(fā)現(xiàn)在飼糧中添加150 g的苜蓿干草，可提高大麥秸稈的采食量。呂明等[6]研究在秸稈與精料組合飼糧基礎(chǔ)上對(duì)羔羊補(bǔ)飼苜蓿干草后發(fā)現(xiàn)，添加苜蓿干草組羔羊的干物質(zhì)平均日采食量顯著高于對(duì)照組。謝小來(lái)等[7]在研究粗飼料的不同組合效果時(shí)發(fā)現(xiàn)，飼喂苜蓿干草與玉米秸稈組合的斷奶羔羊平均日增重顯著高于單獨(dú)飼喂玉米秸稈的斷奶羔羊。Ben-Ghedalia等[8]研究發(fā)現(xiàn)，新鮮苜蓿與小麥秸稈組合青貯時(shí)，可提高綿羊的采食量。由前人研究可知，秸稈與苜蓿的組合飼喂可提高反芻動(dòng)物的生長(zhǎng)性能，但關(guān)于小麥秸稈與苜蓿組合影響反芻動(dòng)物的瘤胃乳頭發(fā)育、肝臟糖、脂代謝基因情況詳細(xì)研究鮮見(jiàn)報(bào)道。因此，本研究立足于我國(guó)北方呼倫貝爾地區(qū)小麥秸稈資源現(xiàn)狀，以呼倫貝爾羔羊?yàn)樵囼?yàn)動(dòng)物。通過(guò)比較分析50%和100%苜蓿與小麥秸稈組合對(duì)呼倫貝爾羔羊的生長(zhǎng)性能、血清生化指標(biāo)、肝臟糖、脂代謝相關(guān)基因表達(dá)與瘤胃黏膜形態(tài)的影響，探究小麥秸稈與苜蓿1∶1組合的飼喂效果，為呼倫貝爾地區(qū)羔羊生產(chǎn)提供科學(xué)依據(jù)，供生產(chǎn)者參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

選取72只健康、體重相近、3月齡左右的呼倫貝爾斷奶羔羊，隨機(jī)將其分為3組，每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)8只羔羊。分別為小麥秸稈組(WS組)、50%小麥秸稈+50%苜蓿干草組(AHWS組)、苜蓿干草組(AH組)。

1.2 飼糧與飼養(yǎng)管理

預(yù)試期開(kāi)始后對(duì)試驗(yàn)羊的采食量進(jìn)行記錄，正試期開(kāi)始以預(yù)試期采食量為基礎(chǔ)，飼糧按照精粗比7∶3制成全混合日糧(TMR)，于每日06:00、11:00、17:00進(jìn)行飼喂，自由飲水，定期清掃羊舍、消毒，保持衛(wèi)生。預(yù)試期6 d,正試期90 d。試驗(yàn)飼糧營(yíng)養(yǎng)水平需求均滿足《肉羊飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)》(2004)[9]。飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。

表1 飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平(干物質(zhì)基礎(chǔ))

1.3 樣品采集

飼養(yǎng)結(jié)束時(shí)采集飼糧裝入密封袋中4 ℃保存，用于飼糧營(yíng)養(yǎng)成分的測(cè)定。

瘤胃樣品采集：飼養(yǎng)結(jié)束后于晨飼前屠宰，從瘤胃腹囊中間剪取2 cm×2 cm的瘤胃組織，保存在濃度為10%的福爾馬林溶液的瓶中，用于后續(xù)瘤胃黏膜形態(tài)檢測(cè)。

血液樣品采集：采用頸靜脈收集的方式采集血液樣本，所有采集的血液放入含有抗凝血?jiǎng)┑牟裳苤小２杉难獦屿o置30 min后，然后在4 000 r/min下離心15 min吸取上部血清放入1.5 mL離心管中，再將樣品放入-20 ℃冰箱保存，用于后續(xù)血清生化指標(biāo)的分析。

飼養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)束后，每組隨機(jī)選取7只進(jìn)行屠宰試驗(yàn)。取下試驗(yàn)動(dòng)物肝臟的一部分，將試驗(yàn)動(dòng)物的肝臟用生理鹽水進(jìn)行沖洗，將其放入采樣袋中，然后迅速投入液氮中進(jìn)行冷凍保存，最后將其余樣品放入-80 ℃冰箱保存，用于后期肝臟糖、脂代謝相關(guān)基因表達(dá)的分析。

1.4 指標(biāo)檢測(cè)與方法

1.4.1 生長(zhǎng)性能的測(cè)定

每天飼喂前準(zhǔn)確記錄投放飼糧重量和收集的剩料量。試驗(yàn)正式開(kāi)始前對(duì)羊只空腹進(jìn)行稱(chēng)重，記錄為初始體重，之后每隔15 d記錄階段重量，試驗(yàn)結(jié)束后再對(duì)羊只空腹稱(chēng)重，記錄為結(jié)束體重。最后根據(jù)以上數(shù)據(jù)計(jì)算每只羊的平均日采食量(ADFI)、平均日增重(ADG)和料重比(F/G)。

1.4.2 血清生化指標(biāo)的測(cè)定

血清樣品檢測(cè)指標(biāo)：葡萄糖(GLU)、總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、尿素氮(UN)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、膽固醇(CHOL)、甘油三酯(TG)含量及谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、乳酸脫氫酶(LDHI)、堿性磷酸酶(ALP)、淀粉酶(AMS)活性。將收集好的血清樣品解凍后，吸取500 μL于上樣瓶中，使用CobasC311全自動(dòng)生化分析儀進(jìn)行血清生化指標(biāo)的測(cè)定。

1.4.3 肝臟糖、脂代謝相關(guān)基因檢測(cè)指標(biāo)的測(cè)定

試驗(yàn)測(cè)定肝臟脂肪酸合成酶(FASN)、脂肪醛脫氫酶(ALDH3A2)、葡萄糖-6-磷酸酶(G6PC)、磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶1(PCK1)、丙酮酸羧化酶(PC)基因相對(duì)表達(dá)量。具體步驟參照艾科瑞生物反轉(zhuǎn)錄試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，所有引物由北京擎科生物科技有限公司合成提供。使用Primer primer 5軟件，根據(jù)NCBI提供的綿羊參考序列設(shè)計(jì)引物，參與基因的引物序列如表2所示。熒光定量PCR使用SYBR?Premix Ex TaqTMⅡ在熒光定量PCR儀上測(cè)定，20 μL反應(yīng)體系包括: 10 μL SYBR Premix Ex Taq Ⅱ(2×)、10 μmol/L上游和下游引物各0.8 μL、1.0 μL cDNA和7.4 μL dH2O。以磷酸苷油酸脫氫酶(GADPH)為內(nèi)參基因。

表2 熒光定量PCR引物序列

1.4.4 瘤胃黏膜形態(tài)的測(cè)定

瘤胃黏膜形態(tài)根據(jù)祁敏麗[11]觀察切片的方法觀察瘤胃乳頭發(fā)育情況，瘤胃黏膜切片由長(zhǎng)沙志凡生物科技有限公司制作。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)用Excel 2019進(jìn)行初步整理計(jì)算，采用SPSS 23.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析(one-way ANOVA)，并用Duncan氏法進(jìn)行多重比較，結(jié)果用平均值和均值標(biāo)準(zhǔn)誤表示。最終采用GraphPad Prism軟件制作圖表。P<0.05作為差異顯著判斷的標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 苜蓿與小麥秸稈組合對(duì)呼倫貝爾斷奶羔羊生長(zhǎng)性能的影響

由表3可知，在飼糧精粗比7∶3情況下，WS組、AHWS組和AH組間初始體重、結(jié)束體重及平均日采食量均差異不顯著(P>0.05)。就試驗(yàn)增重及平均日增重來(lái)看，AHWS組顯著高于AH組(P<0.05)，平均日采食量WS組與AHWS組和AH組均差異不顯著(P>0.05)。料重比AH組顯著高于WS組和AHWS組(P<0.05)，AHWS組與WS組間無(wú)顯著差異(P>0.05)。

表3 苜蓿與小麥秸稈組合對(duì)斷奶羔羊生長(zhǎng)性能的影響

2.2 苜蓿與小麥秸稈組合對(duì)呼倫貝爾斷奶羔羊血清生化指標(biāo)的影響

由表4可知，血清TP、ALB、UN、GLU、CHO、AMS、LDL、HDL含量及ALT、AST、ALP、LDH活性3組間均差異不顯著(P>0.05)，WS組的血清TG含量顯著高于AH組(P<0.05)，與AHWS組差異不顯著(P>0.05)。

表4 苜蓿與小麥秸稈組合對(duì)斷奶羔羊血清生化指標(biāo)的影響

2.3 苜蓿與小麥秸稈組合對(duì)呼倫貝爾斷奶羔羊肝臟糖、脂代謝基因表達(dá)的影響

由圖1和圖2可知，肝臟糖代謝中G6PC、PC、PCK1基因相對(duì)表達(dá)量3組間差異不顯著(P>0.05)，脂代謝中ALDH3A2基因相對(duì)表達(dá)量3組間差異不顯著(P>0.05)，F(xiàn)ASN基因相對(duì)表達(dá)量AH組顯著高于WS組和AHWS組(P<0.05)。

PC: 丙酮酸羧化酶 pyruvic carboxylase;G6PC:葡萄糖-6-磷酸酶 glucose-6-phosphatase; PCK1: 磷酸烯酮酸羧激酶1 phosphoenketonate carboxykinase 1。

FASN：脂肪酸合成酶 fatty acid synthase；ALDH3A2：脂肪醛脫氫酶 fatty aldehyde dehydrogenase。

2.4 苜蓿與小麥秸稈組合對(duì)呼倫貝爾斷奶羔羊瘤胃黏膜形態(tài)的影響

由表5可知，AHWS組的瘤胃乳頭長(zhǎng)度顯著高于WS組(P<0.05)，與AH組差異不顯著(P>0.05)。瘤胃乳頭寬度及肌層厚度3組間均差異不顯著(P>0.05)，但AHWS組肌層厚度數(shù)值最高。瘤胃組織形態(tài)如圖3所示。

圖3 苜蓿與小麥秸稈組合對(duì)斷奶羔羊瘤胃黏膜形態(tài)的影響

表5 苜蓿與小麥秸稈組合對(duì)斷奶羔羊瘤胃組織形態(tài)的影響

3 討 論

3.1 苜蓿與小麥秸稈組合對(duì)呼倫貝爾斷奶羔羊生長(zhǎng)性能的影響

關(guān)于苜蓿與秸稈的組合效應(yīng)，前人也進(jìn)行了一系列的研究在牛羊生長(zhǎng)和代謝方面。呂小康[12]研究在20～60日齡的山羊羔羊飼糧精料中添加苜蓿顆?？商岣吒嵫蛄鑫敢褐幸宜帷⒈岷投∷岬暮?，乙酸、丙酸和丁酸促進(jìn)了羔羊瘤胃腹囊上皮生酮基因的表達(dá)，從而提高了瘤胃生酮能力。王富偉等[13]通過(guò)研究?jī)?yōu)質(zhì)苜蓿替代部分羊草與玉米青貯組合飼喂，結(jié)果發(fā)現(xiàn)可提高奶牛的生產(chǎn)性能。樊文娜等[14]探究在基礎(chǔ)飼糧上分別添加10%、20%、30%、40%的苜蓿草粉等量替代花生秧，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在波爾山羊飼糧中添加40%的苜蓿草粉與花生秧組合飼喂，可顯著提高波爾×山羊的平均日增重，降低料重比，且生長(zhǎng)效果較好。姜碧薇等[15-16]研究用酶菌混合處理稻秸和苜蓿干草組合飼喂灘羊，結(jié)果提高灘羊的平均日增重，降低料重比，提高生長(zhǎng)性能。莊濤等[17]研究發(fā)現(xiàn)，玉米青貯和苜蓿2∶2組合時(shí)，可顯著提高波爾徐淮山羊的平均日增重。靳光等[18]的試驗(yàn)通過(guò)研究不同粗飼料與玉米青貯的組合效應(yīng)時(shí)，提高了晉南牛的生長(zhǎng)性能。張丹丹等[19]的研究發(fā)現(xiàn)全株玉米、小麥秸稈和苜蓿青貯以7∶2∶1的比例組合有利于瘤胃的發(fā)酵，同時(shí)也可提高飼料秸稈的利用率。Theurer等[20]研究發(fā)現(xiàn)，與只在飼糧中添加苜蓿干草相比，苜蓿干草與小麥秸稈組合飼喂，可以有效地提高飼料消化率。本試驗(yàn)的研究結(jié)果是AHWS組平均日增重顯著高于AH組和WS組，AHWS組料重比顯著低于AH組。可能是秸稈類(lèi)低質(zhì)粗飼料與優(yōu)質(zhì)苜蓿草具有優(yōu)勢(shì)互補(bǔ)作用，兩者組合配制飼糧時(shí)組合效應(yīng)顯著，這與劉麗英[21]的研究結(jié)果一致。在探究2種粗飼料的組合效應(yīng)時(shí)，低質(zhì)飼料小麥秸稈中可溶性碳水化合物含量較低，反芻動(dòng)物瘤胃對(duì)其消化利用率也較低[22]，而優(yōu)質(zhì)的苜蓿草可為基礎(chǔ)飼糧補(bǔ)充理想的氮源，提高小麥秸稈在瘤胃中的消化率，協(xié)同維持能氮平衡。結(jié)果表明，與其他2組單一飼糧相比，苜蓿與小麥秸稈1∶1組合，可顯著提高羔羊的平均日增重。其原因可能是不同粗飼料以適宜的比例組合后，營(yíng)養(yǎng)成分之間互補(bǔ)，促進(jìn)了微生物的生長(zhǎng)及其營(yíng)養(yǎng)成分的消化，改善了低質(zhì)飼料小麥秸稈的消化率。這與韓肖敏[23]研究結(jié)果相一致。

3.2 苜蓿與小麥秸稈組合對(duì)呼倫貝爾斷奶羔羊血清生化指標(biāo)的影響

動(dòng)物血清生化成分是反映其機(jī)體生命活動(dòng)的物質(zhì)基礎(chǔ)，其含量和變化規(guī)律體現(xiàn)了動(dòng)物體重要的生物學(xué)特征。TP具有維持血液正常膠體滲透壓和pH，其主要有ALB和GLB這2類(lèi)物質(zhì)，可反映動(dòng)物體內(nèi)的蛋白質(zhì)合成情況。GLB又稱(chēng)免疫球蛋白，而血清中免疫球蛋白含量變化可評(píng)價(jià)動(dòng)物機(jī)體免疫機(jī)能的重要標(biāo)準(zhǔn)[24]。姜婉茹等[25]試驗(yàn)結(jié)果表明通過(guò)飼喂2種飼草，相比麥秸組，血清TP、ALB含量高于苜蓿組，但血清GLB含量低于苜蓿組，說(shuō)明飼喂粗飼料小麥秸稈能夠促進(jìn)瘤胃微生物蛋白質(zhì)的合成，有利于促進(jìn)反芻動(dòng)物生長(zhǎng)，并提高粗飼料的轉(zhuǎn)化率。劉旭蕾等[26]發(fā)現(xiàn)25%及以上的紫花苜蓿替代玉米秸稈并與之組合飼喂，發(fā)現(xiàn)飼糧中的粗蛋白質(zhì)水平會(huì)增高，用40%的紫花苜蓿替代玉米秸稈對(duì)斷奶絨山羊的平均日增重明顯提高。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，WS組的血清TP含量高于AHWS組和AH組，AHWS組血清ALB和GLB含量高于其他2組，差異不顯著。但數(shù)值都在正常范圍內(nèi)，說(shuō)明苜蓿草與小麥秸稈1∶1組合不會(huì)對(duì)呼倫貝爾羔羊的蛋白質(zhì)代謝有顯著影響，且可提高斷奶羔羊的生長(zhǎng)發(fā)育。

ALT是由丙氨酸及α-酮戊二酸組成的基質(zhì)，大多存在于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，而肝細(xì)胞內(nèi)的AST有相當(dāng)部分存在于線粒體內(nèi)，ALT和AST是體現(xiàn)動(dòng)物機(jī)體蛋白質(zhì)代謝的一個(gè)重要過(guò)程[27]，其上升幅度在一定程度上可反映肝細(xì)胞損害的輕重。ALP是一組在pH 9.0～10.5的堿性環(huán)境中催化有機(jī)磷酸酯水解的酶，血清中的ALP主要來(lái)源于肝臟、骨骼等，腎臟也有極少量。AMS是可以催化乳酸脫氫生成丙酮酸的酶，AMS活性的高低情況可反映肝功能的異常情況。陳希等[28]通過(guò)研究苜蓿干草和稻秸組合效應(yīng)的飼喂效果，發(fā)現(xiàn)苜蓿干草組湖羊血清中的AST、ALP活性高于湖羊稻秸組。Minuti等[29]研究發(fā)現(xiàn)，產(chǎn)后奶牛血清中ALP活性隨平均日增重的增加而升高。本試驗(yàn)中，AHWS組的血清ALT和ALP活性高于WS組、AH組，但差異不顯著，AH組的血清AMS和AST活性高于其他2組，但都處于正常范圍內(nèi)，說(shuō)明在高精粗比情況下，用苜蓿替代小麥秸稈沒(méi)有引起肝功能的異常，且苜蓿與小麥秸稈1∶1組合時(shí)可提高呼倫貝爾斷奶羔羊的平均日增重。GLU是人體能量的主要來(lái)源，可反映動(dòng)物機(jī)體內(nèi)的營(yíng)養(yǎng)狀況，GLU含量降低，說(shuō)明動(dòng)物飼糧中能量水平不足或機(jī)體消化不良[30]。UN是動(dòng)物體蛋白質(zhì)代謝的主要終末產(chǎn)物，可反映瘤胃氮利用狀況。若UN含量升高時(shí)，可意味著體內(nèi)蛋白質(zhì)代謝增強(qiáng)，而氮沉積減少或腎功能不正常[31]。張穎等[32]研究發(fā)現(xiàn)，1年生黑麥草與苜蓿干草組合飼喂效果較好，可降低血液中UN的含量。血脂包括CHOL、TG、HDL、LDL。CHOL是組成細(xì)胞膜的重要成分，CHOL不足會(huì)導(dǎo)致TG代謝率降低，而TG含量越低，說(shuō)明對(duì)脂肪的利用率越高。楊芳[33]試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)在飼糧中添加不同濃度苜蓿皂甙可在一定程度上降低血清CHOL及LDL含量。本試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，血清TG含量隨著苜蓿添加量的比例增加呈現(xiàn)下降的趨勢(shì)，且AH組低于WS組，說(shuō)明苜蓿可以提高脂肪利用率。通過(guò)脂肪利用率和脂肪代謝情況發(fā)現(xiàn)AHWS組的效果更明顯，并且與上述的平均日增重表現(xiàn)結(jié)果一致。這結(jié)果說(shuō)明苜蓿與小麥秸稈1∶1組合可以促進(jìn)機(jī)體脂肪沉積，符合呼倫貝爾斷奶羔羊的生長(zhǎng)規(guī)律并且提高了斷奶羔羊的育肥效果。

3.3 苜蓿與小麥秸稈組合對(duì)呼倫貝爾斷奶羔羊肝臟糖、脂代謝相關(guān)基因表達(dá)的影響

肝臟是反芻動(dòng)物糖異生和脂質(zhì)代謝的主要場(chǎng)所。在正常生理?xiàng)l件下，糖代謝和脂類(lèi)代謝處于平衡狀態(tài)，但是如果機(jī)體處于長(zhǎng)期因饑餓嚴(yán)重缺糖或患嚴(yán)重糖尿病，糖不能被利用時(shí)，肝臟將動(dòng)用脂肪產(chǎn)生大量的乙酰輔酶A(CoA)。糖原的降解方式采用磷酸解，產(chǎn)物為1-磷酸葡萄糖(G-1-P)。但糖原磷酸解并不妨礙肝糖原用于維持血糖水平，因?yàn)楦渭?xì)胞含有G6PC，可以將6-磷酸葡萄糖(G-6-P)水解為GLU；PC催化丙酮酸生成草酰乙酸為PCK1提供原料，所以G6PC、PC及PCK1成為參與肝臟糖異生活動(dòng)的關(guān)鍵酶，其表達(dá)量說(shuō)明了糖異生代謝強(qiáng)弱。PCK1編碼622個(gè)氨基酸殘基，能與GTP催化草酰乙酸(OAA)生成磷酸烯醇式丙酮酸(PEP)并釋放GDP和CO2[34]，這個(gè)過(guò)程是糖異生和甘油生成過(guò)程所共有的。對(duì)反芻動(dòng)物來(lái)講,糖異生活動(dòng)受到阻礙將導(dǎo)致機(jī)體陷入能量負(fù)平衡狀態(tài)，使其身體抵抗力下降，降低動(dòng)物的生產(chǎn)性能，引起相關(guān)健康疾病。因此，高燕等[35]研究發(fā)現(xiàn)，在飼糧中添加杜仲葉可提高糖酵解關(guān)鍵酶磷酸果糖激酶(PFKL)基因表達(dá)，抑制糖異生相關(guān)酶G6PC基因的表達(dá)，并降低血糖含量作用。Wang等[36]通過(guò)飼喂奶牛稻草，發(fā)現(xiàn)瘤胃丙酸濃度不足與肝臟糖異生降低有關(guān)，從而導(dǎo)致供乳腺利用的GLU不足。本試驗(yàn)結(jié)果表明，AHWS組相比其他2組肝臟PC及PCK1基因相對(duì)表達(dá)較高，但差異不顯著，苜蓿與小麥秸稈1∶1組合沒(méi)有對(duì)斷奶羔羊機(jī)體糖異生活動(dòng)產(chǎn)生顯著影響。其原因可能是血糖含量隨著苜蓿草的添加比例升高而升高，與苜蓿中的可溶性碳水化合物含量有關(guān)[37]，但發(fā)現(xiàn)這種升高并不是線性的，說(shuō)明原因并不只有苜蓿一種，除了動(dòng)物自身的神經(jīng)-激素調(diào)節(jié)血糖含量處于相對(duì)穩(wěn)定外，也可能與苜蓿與小麥秸稈的組合效應(yīng)有關(guān)[37]。

FASN、ALDH3A2參與機(jī)體的脂肪合成過(guò)程。FASN基因編碼的蛋白是一個(gè)不穩(wěn)定且具有親水性的蛋白[38]。綿羊FASN基因位于CHR11、84cM上[39]，F(xiàn)ASN用于合成乙酰輔酶A和丙二酰輔酶A的通路中合成16個(gè)碳飽和脂肪酸棕櫚酸酯[40]，它的活性直接決定肝臟合成脂肪酸的能力，對(duì)動(dòng)物體脂肪的沉積性狀起到重要的調(diào)節(jié)作用[41]。相關(guān)研究報(bào)道，F(xiàn)ASN的活性可被胰島素、糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)[42-43]，但會(huì)被生長(zhǎng)激素抑制[44]。田衛(wèi)華等[45]通過(guò)在飼糧中添加8%的大豆油可顯著提高雞的乙酰輔酶A羧化酶A(ACACA)與FASN基因的表達(dá)。ALDH3A2是乙醛脫氫酶3家族成員的A2蛋白，它在脂質(zhì)中間體代謝中起核心作用，可以將飽和和不飽和的脂肪醛氧化成相應(yīng)的脂肪酸[46]，進(jìn)而促進(jìn)脂肪酸合成脂肪。張雄等[47]通過(guò)驗(yàn)證FASN基因調(diào)控豬脂質(zhì)代謝，發(fā)現(xiàn)FASN基因可顯著影響豬脂肪沉積和脂肪酸合成。在本試驗(yàn)中，ALDH3A2基因作為合成FASN的前體物，其相對(duì)表達(dá)量并未出現(xiàn)顯著變化，但FASN基因在AH組中的相對(duì)表達(dá)量顯著高于AHWS組和WS組，說(shuō)明脂肪酸合成底物充足，并且根據(jù)上述血清中TG的含量說(shuō)明羔羊脂代謝功能增強(qiáng)，導(dǎo)致肝臟FASN基因上調(diào)，因此在以飼糧精粗比7∶3結(jié)構(gòu)條件下，苜蓿與小麥秸稈1∶1可以促進(jìn)呼倫貝爾斷奶羔羊脂肪的合成和積累。

3.4 苜蓿與小麥秸稈組合對(duì)呼倫貝爾斷奶羔羊瘤胃黏膜形態(tài)的影響

飼糧是影響羔羊瘤胃乳頭形態(tài)的最主要因素，包括飼糧的組成、形態(tài)和營(yíng)養(yǎng)水平等[48]。粗飼料降解產(chǎn)生的小分子物質(zhì)主要通過(guò)瘤胃壁尿素循環(huán)進(jìn)入血液，為動(dòng)物機(jī)體提供所需的營(yíng)養(yǎng)，瘤胃上皮為復(fù)層扁平細(xì)胞，上皮突起形成瘤胃乳頭可增加揮發(fā)性脂肪酸、礦物質(zhì)等的吸收面積[49]。Suárez等[50]通過(guò)在飼糧中添加粗飼料是可以促進(jìn)瘤胃乳頭的發(fā)育，但不同粗飼料對(duì)瘤胃上皮厚度無(wú)顯著影響。孫若琳等[51]試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，飼喂麥秸可降低了湖羊瘤胃乳頭的高度和面積。Hadjigeorgiou等[52]研究發(fā)現(xiàn)，顆粒飼料的長(zhǎng)度的比例縮短會(huì)降低干物質(zhì)和纖維的消化率。而Krause等[53]發(fā)現(xiàn)苜蓿和玉米秸稈青貯組合進(jìn)行飼喂，可提高干物質(zhì)的消化率。王嬌等[54]通過(guò)研究甜高粱與苜蓿組合比例為40∶60時(shí)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)可顯著提高卡拉庫(kù)爾羊消化道內(nèi)的消化酶活性。李俊等[55]研究發(fā)現(xiàn)，在羔羊開(kāi)食料中添加苜蓿干草的比例為10%時(shí)，可提高羔羊瘤胃壁的角質(zhì)化程度，增加瘤胃壁肌層厚度，進(jìn)而提高了羔羊后續(xù)消化粗纖維的能力。而本試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，AHWS組的瘤胃乳頭長(zhǎng)度顯著高于WS組，與AH組差異不顯著。瘤胃乳頭寬度及肌層厚度均差異不顯著，但AHWS組最厚,其原因可能是小麥秸稈中的粗纖維含量高，在瘤胃內(nèi)降解釋放小分子營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的速度緩慢[32]，較小的乳頭面積就可滿足營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收。而苜蓿由于粗纖維含量低，粗蛋白質(zhì)含量高，在瘤胃中易于降解成小分子，需要較大的乳頭面積吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)[56]。因此將這2種粗飼料進(jìn)行1∶1組合可以起到正組合協(xié)同效應(yīng)的結(jié)果,提高羔羊瘤胃乳頭長(zhǎng)度。

4 結(jié) 論

在呼倫貝爾斷奶羔羊精粗比7∶3的飼糧中，粗料為苜蓿和小麥秸稈1∶1時(shí)：

① 與粗料全部為小麥秸稈的飼糧相比，提高了羔羊的生長(zhǎng)性能，并促進(jìn)了羔羊肝臟糖、脂代謝及羔羊瘤胃乳頭發(fā)育。

② 與粗料全部為苜蓿草的飼糧相比，顯著提高了羔羊的平均日增重。