田 琦 高鳳仙 馬現(xiàn)永 余 苗*
(1.廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院動物科學(xué)研究所,農(nóng)業(yè)農(nóng)村部華南動物營養(yǎng)與飼料重點實驗室,畜禽育種國家重點實驗室,廣東省畜禽育種與營養(yǎng)研究重點實驗室,廣東省畜禽肉品質(zhì)量安全控制與評定工程技術(shù)研究中心,廣州 510640;2.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院,長沙 410023)
畜禽生產(chǎn)中,抗生素被用于促進動物生長和防治疾病,但其具有易殘留和致病菌產(chǎn)生耐藥性等缺點,危害了人類及畜禽的健康,造成環(huán)境污染?;谏鲜鰡栴},應(yīng)用無公害、綠色飼料添加劑已成為畜牧業(yè)發(fā)展的趨勢。厚樸酚是從中藥厚樸的莖皮中分離出的一種植物多酚類物質(zhì),是植物產(chǎn)生的次生代謝物,具有抗炎[1]、抗氧化[2]、改善腸道微生物區(qū)系[3]、預(yù)防癌癥及慢性疾病[4]等功能。在提高家禽生產(chǎn)性能、維護機體健康和改善肉品質(zhì)及蛋品質(zhì)方面展現(xiàn)出良好的應(yīng)用效果,在畜牧養(yǎng)殖業(yè)中具有廣泛的應(yīng)用和發(fā)展前景。本文通過綜述近年來國內(nèi)外學(xué)者對厚樸酚的研究,總結(jié)其理化性質(zhì)、生理功能、作用機制及其在家禽生產(chǎn)中應(yīng)用,旨在為厚樸酚作為綠色飼料添加劑在畜禽養(yǎng)殖業(yè)中的開發(fā)和應(yīng)用提供參考。
厚樸酚(5′,5-二烯丙基-2,2′-聯(lián)苯二酚)是從中藥厚樸的莖皮中分離出的一種聯(lián)苯酚類化合物,與和厚樸酚互為同分異構(gòu)體,是厚樸發(fā)揮藥理作用的主要成分,相對分子質(zhì)量為266.32,分子式為C18H18O2,結(jié)構(gòu)式如圖1所示。厚樸酚的單體為無色針狀晶體,較難溶于水,而易溶于有機溶劑,如氯仿、乙醚和丙酮等,酚羥基與烯丙基是其發(fā)揮生理功能的主要活性基團[5]。厚樸酚性質(zhì)較穩(wěn)定,在25 ℃環(huán)境中可貯存1 125.6 h,80 ℃及以下發(fā)生較慢降解,100 ℃時半衰期為69.6 h,具有較好的熱穩(wěn)定性[6]。根據(jù)酚環(huán)的數(shù)量和酚環(huán)間相連的結(jié)構(gòu)元素,植物多酚分為黃酮類化合物和類黃酮類化合物,其中類黃酮類化合物可分為酚酸、木脂素、二苯乙烯等。厚樸酚屬于木脂素類植物多酚,具有抗炎、抗氧化、抗癌、抗分裂和神經(jīng)保護等作用[7]。
圖1 厚樸酚的分子結(jié)構(gòu)式
氧化應(yīng)激是指自由基的生成和抗氧化系統(tǒng)之間的動態(tài)平衡發(fā)生失衡,對細胞成分(包括脂質(zhì)、核酸、蛋白質(zhì)和碳水化合物)造成損害,從而導(dǎo)致組織損傷[8]。厚樸酚可通過激活機體的抗氧化系統(tǒng)減少自由基的產(chǎn)生并清除自由基來防止氧化應(yīng)激,主要由抗氧化酶發(fā)揮作用,如超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)和過氧化氫酶(catalase,CAT)等。諸多研究發(fā)現(xiàn),厚樸酚具有直接清除自由基、提高抗氧化酶活性等多種抗氧化功能[5]。
2.1.1 清除自由基
自由基是指具有不配對電子的原子、分子或離子,極易向周圍離子提供或奪取電子而發(fā)生反應(yīng),產(chǎn)生新的不配對電子從而產(chǎn)生新的自由基,這種鏈式反應(yīng)是自由基的重要特點[9]。
2.1.2 增強抗氧化酶活性
厚樸酚可通過調(diào)控多種信號通路的激活,增強機體內(nèi)抗氧化酶基因的表達并提高其活性,從而緩解機體的氧化損傷。Saito等[15]在苯并(a)芘誘導(dǎo)突變的小鼠模型研究中發(fā)現(xiàn),灌服厚樸酚可以提高小鼠肝臟中CAT和SOD的活性,從而減輕X射線所致的氧化損傷。Deng等[16]在小鼠產(chǎn)腸毒素大腸桿菌(ETEC)誘導(dǎo)氧化應(yīng)激的模型中發(fā)現(xiàn),連續(xù)灌胃100 mg/kg厚樸酚7 d后,顯著上調(diào)肝臟中CAT和GSH-Px等抗氧化酶基因的表達水平并提高總超氧化物歧化酶(T-SOD)和CAT活性,進而導(dǎo)致氧化應(yīng)激標志物——丙二醛(malondialdehyde,MDA)和一氧化氮(NO)含量顯著下降,最終減少機體氧化應(yīng)激。龐月蘭[17]通過對小鼠灌胃厚樸酚的體內(nèi)試驗研究發(fā)現(xiàn),厚樸酚可顯著提高肝臟中胞外超氧化物歧化酶(ECSOD)以及CAT的基因表達量,進而顯著增強小鼠機體內(nèi)T-SOD和CAT的活性,從而發(fā)揮抗氧化作用。
當(dāng)機體受到氧化應(yīng)激時,核因子E2相關(guān)因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)能迅速與胞質(zhì)接頭蛋白(Keap1)解離活化,并進入到細胞核內(nèi)結(jié)合抗氧化元件(antioxidant response element,ARE)序列,激活各類抗氧化基因的表達[18]。而厚樸酚可通過促進Nrf2進入細胞核并激活,從而提高醌還原型輔酶Ⅰ(nicotinamide adenine dinucleotide,NADH)脫氫酶、硫氧還蛋白還原酶以及血紅素氧化酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)的基因表達水平,提高抗氧化酶SOD以及GSH-Px的活性,發(fā)揮抗氧化作用[19-20]。此外,厚樸酚還可通過抑制c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinases,JNK)的mRNA表達水平,同時激活胞內(nèi)磷脂酰肌醇激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)通路基因表達,從而抑制丙烯醛誘導(dǎo)的還原型輔酶Ⅱ(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate,NADPH)氧化酶基因過表達造成的ROS產(chǎn)生,并提高谷胱甘肽(GSH)等抗氧化基因表達水平,緩解蛋白質(zhì)氧化及脂質(zhì)過氧化造成的細胞凋亡[19,21]。
厚樸酚通過激活或抑制多種信號分子發(fā)揮其抗炎功能。有研究表明,厚樸酚可通過調(diào)節(jié)多種細胞外信號,抑制核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)及絲裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)等炎癥相關(guān)信號通路活化,進而調(diào)節(jié)炎癥相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄水平,發(fā)揮抗炎功能[5]。當(dāng)機體受到多種因素(脂多糖、細菌、病毒以及氧化應(yīng)激等)刺激時,NF-κB及MAPK等信號通路會被激活,從而介導(dǎo)多種炎癥基因表達,促進促炎因子的產(chǎn)生,激發(fā)炎癥反應(yīng)[22]。Toll樣受體(Toll-like receptor,TLR)是NF-κB及MAPK信號通路的重要激活劑,可促進炎性因子的釋放,加劇炎癥反應(yīng)[23]。有研究證實,厚樸酚可通過抑制TLRs/MAPK/NF-κB信號通路的活化,刺激白細胞介素-10(interleukin-10,IL-10)的分泌,來抑制白細胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白細胞介素-8(interleukin-8,IL-8)、白細胞介素-6(interleukin-6,IL-6)等促炎細胞因子的生成,進而發(fā)揮抗炎功效[23-25]。同時,Wang等[26]發(fā)現(xiàn),厚樸酚通過抑制c-fos/激活蛋白1(activating protein1,AP1)的基因表達,顯著抑制IL-1β刺激的IL-6、環(huán)氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)、基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)等炎癥相關(guān)基因的表達。此外,過氧化物酶體增殖劑激活受體(peroxisome proliferator-activated receptors,PPAR)是一種配體激活轉(zhuǎn)錄因子,當(dāng)PPAR被激活時,可調(diào)節(jié)下游基因的轉(zhuǎn)錄,從而改善細胞炎癥[27-28]。大量研究證實,厚樸酚可提高過氧化物酶體增殖物激活受體-γ(PPAR-γ)的mRNA表達水平并增強其活性,進而抑制NF-κB以及MAPK通路的激活,最終顯著下調(diào)腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、IL-1β等促炎細胞因子以及中性粒細胞趨化因子-3(cytokine-induced neutrophil chemoattractants,CINC-3)等趨化因子的mRNA表達水平,同時抑制一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)以及COX-2 mRNA的表達水平,最終緩解機體炎癥損傷[29-31]。另有研究表明,厚樸酚還通過抑制磷脂酰肌醇激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/NF-κB信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑,進而下調(diào)iNOS和COX-2的基因轉(zhuǎn)錄,減少炎癥因子的生成,最終發(fā)揮抗炎作用[32-33]。此外,厚樸酚還可能通過激活PI3K/Nrf2/HO-1信號通路,同時抑制NLRP3的活化,進而降低TNF-α和IL-1β的mRNA表達水平,減少炎性因子的產(chǎn)生和釋放,從而緩解急性肝損傷和改善細胞炎癥[19]。在體內(nèi)外研究中證實,厚樸酚可使SIRT1基因過表達,從而增強腺苷酸激活蛋白激酶[adenosine 5’-monophosphate(AMP)-activated protein kinase,AMPK]的活性并對NF-κB的p65亞基去乙酰化,進而抑制其對下游通路的轉(zhuǎn)錄調(diào)控,限制炎性因子的產(chǎn)生,最終緩解細胞炎癥反應(yīng)[34-35]。除上述通路外,厚樸酚還可抑制TNF-α誘導(dǎo)的細胞間黏附因子-1(intercellular cell adhesion molecule-1,ICAM-1)分泌,進而抑制人肺上皮A549細胞和巨噬細胞U937細胞的黏附,減少炎癥細胞的浸潤,從而起到抗炎功效[36]。
綜上所述,厚樸酚主要通過激活PPAR及Nrf2等信號通路,同時抑制NF-κB和AP1信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等途徑,來促進抗炎相關(guān)基因活化和下調(diào)炎癥因子的轉(zhuǎn)錄,進而發(fā)揮其抗炎功能。厚樸酚的抗炎途徑如圖2所示。
magnolol:厚樸酚;cell membrane:細胞膜;nucleus:細胞核;TNFR:腫瘤壞死因子受體 tumor necrosis factor receptor;TNF-α:腫瘤壞死因子-α tumor necrosis factor-α;IL-1β:白細胞介素-1β interleukin-1β;IL-1βR:細胞白介素-1β受體 interleukin-1β receptor;TLRs:Toll樣受體 Toll-like receptors;LPS:脂多糖 lipopolysaccharide;PI3K:磷酯酰肌醇-3-激酶 phosphoinositide 3-kinase;NLRP3:含NLR家族Pyrin域蛋白3;MAPK:絲裂原活化蛋白激酶 mitogen-activated protein kinase;NF-κB:核因子-κB nuclear factor kappa-B;IκBs:IκB激酶IκB kinase;SIRT1:沉默信息調(diào)節(jié)因子1 silent information regulator 1;AMPK:腺苷酸激活蛋白激酶 adenosine 5’-monophosphate(AMP)-activated protein kinase;Keap1:Kelch樣ECH關(guān)聯(lián)蛋白1 Kelch-like ECH-associated protein 1;Nrf2:核因子E2相關(guān)因子2 nuclear factor erythroid 2-related factor 2;ARE:抗氧化元件 antioxidant response element;ERK1/2:細胞外調(diào)節(jié)激酶1/2 extracellular regulated protein kinase 1/2;JNK:c-Jun氨基末端激酶 c-Jun N-terminal kinases;AP1:激活蛋白1 activating protein1;AP1 complex:激活蛋白1復(fù)合物 activating protein1 complex;PGC-1α:過氧化物酶體增殖物激活受體γ輔激活因子1α peroxlsome proliferator-activated receptor-γ coactlvator-1α;PPAR-γ:過氧化物酶體增殖物激活受體-γ peroxisome proliferator-activated receptors-γ;iNOS:誘導(dǎo)性一氧化氮合酶 inducible nitric oxide synthase;COX-2:環(huán)氧合酶-2 cyclooxygenase-2;CINC-3:中性粒細胞趨化因子-3 cytokine-induced neutrophil chemoattractants;HO-1:血紅素氧合酶-1 heme Oxygenase-1;ICAM-1:細胞間黏附因子-1 intercellular cell adhesion molecule-1;IL-6:白細胞介素-6 interleukin-6;IL-8:白細胞介素-8 interleukin-8。
近年來,厚樸酚等植物多酚在癌癥研究中表現(xiàn)出預(yù)防和抑制各種惡性腫瘤的功能,可通過促進癌細胞凋亡途徑,抑制其細胞增殖、遷徙、入侵而起到抗癌功效。體外研究表明,厚樸酚對膠質(zhì)母細胞瘤、結(jié)腸癌、宮頸癌、膽囊癌等多種癌細胞都具有抑制作用[37-38]。一方面,厚樸酚可通過增強抑癌基因p53和p21的表達,提高促凋亡蛋白酶-3(cysteinyl aspartate specific proteinase-3,caspase-3)和促凋亡蛋白酶-9(cysteinyl aspartate specific proteinase-9,caspase-9)的活性來促進膽囊癌細胞和宮頸癌細胞自噬性凋亡[39-40]。另一方面,厚樸酚可通過下調(diào)細胞周期蛋白A和D1的表達量,將癌細胞阻滯在G0/G1期,從而抑制膠質(zhì)瘤母細胞的增殖[41]。另有研究表明,厚樸酚還可通過抑制血管內(nèi)皮生長因子活性,來抑制癌細胞的增殖[42]。此外,厚樸酚還可通過調(diào)控NF-κB信號通路的活化,來下調(diào)基質(zhì)金屬蛋白酶-9(matrix metallopeptidase-9,MMP-9)的基因轉(zhuǎn)錄,同時降低MMP-9活性,最終抑制癌細胞的侵襲和遷移[43]。
厚樸酚作為一種植物源殺菌劑,具有廣譜的抗菌活性,在體內(nèi)外都具有較強的抑菌功能,可抑制細菌增殖和感染。
有研究發(fā)現(xiàn),厚樸酚可通過改變念珠菌的細胞形態(tài),破壞細胞質(zhì)膜結(jié)構(gòu)和抑制其生物膜形成,進而發(fā)揮抗菌作用[44]。Hu等[45]通過藥敏試驗證實,厚樸酚對鼠傷寒沙門氏菌、大腸桿菌、糞鏈球菌、李斯特桿菌以及炭疽桿菌均有明顯的抑制作用,并且經(jīng)4%厚樸酚處理的冷凍羊肉中腸桿菌科假單胞菌的數(shù)量明顯下降。向華[46]研究發(fā)現(xiàn),厚樸酚能夠顯著抑制金黃色葡萄球菌分泌α-溶血素,從而抑制金黃色葡萄球菌導(dǎo)致的化膿性感染,厚樸酚對其最低抑菌濃度為20 μg/mL。厚樸酚還被證明,通過抑制氣容素編碼基因aerA的轉(zhuǎn)錄,顯著抑制嗜水氣單胞菌的溶血活性,并且動物試驗表明,厚樸酚能顯著降低魚類感染嗜水氣單胞菌后的死亡率,具有較強的抗致病菌感染功能[47]。此外,一項人類醫(yī)學(xué)研究發(fā)現(xiàn),厚樸酚可通過穿透生物膜并殺滅變形鏈球菌,最低抑菌濃度為10 μg/mL,且其對牙齦上皮細胞系表現(xiàn)為無毒性,說明厚樸酚發(fā)揮抗菌作用的同時對細胞無毒副作用[48]。
厚樸酚具有來源天然、無毒副作用、無殘留等優(yōu)點,在家禽生產(chǎn)應(yīng)用中表現(xiàn)出較強的促生長、抗氧化應(yīng)激、改善肉品質(zhì)及蛋品質(zhì)等作用效果,是一種應(yīng)用潛力較高的綠色飼料添加劑。
Lin等[49]在49~70日齡臨武肉鴨的研究中發(fā)現(xiàn),與對照組相比,飼糧中添加200 mg/kg厚樸酚,可顯著提高肉鴨的平均日增重(average daily gain,ADG)。在肉仔雞上的研究表明,添加200 mg/kg厚樸總酚飼喂42 d后,與對照組相比,可顯著提高其生長性能和成活率,其中平均日采食量(average daily feed intake,ADFI)提高5.20%,ADG提高1.41%,料重比下降2.88%[50]。曹蓉[51]報道稱,黃羽肉雞飼糧中添加150 mg/kg厚樸總酚后,其ADG、ADFI和飼料轉(zhuǎn)化率均優(yōu)于基礎(chǔ)飼糧組和抗生素組,并且隨添加水平的提高,飼料轉(zhuǎn)化率呈二次曲線顯著提高。另有研究發(fā)現(xiàn),在飼糧中添加200 mg/kg厚樸酚可提高蛋雞產(chǎn)蛋率7.75%[52]。Chen等[53]研究表明,肉雞感染雞白痢沙門菌(Salmonellapullorum),其在21 d后的體重(body weight,BW)與1~21 d的ADG相比對照組分別降低8.33%和8.84%,在飼糧中補充300 mg/kg厚樸酚之后發(fā)現(xiàn),受感染肉雞的生長性能可得到一定程度改善。由此可見,雖然目前厚樸酚在家禽生產(chǎn)中的應(yīng)用還相對缺乏,但總體研究均表明厚樸酚具有提高家禽生產(chǎn)性能的作用。
厚樸酚具有改善家禽腸道發(fā)育、調(diào)節(jié)腸道菌群等作用,進而維系其腸道健康。研究發(fā)現(xiàn),給肉鴨飼喂含有200 mg/kg厚樸酚的飼糧,可顯著提高十二指腸和回腸的絨毛高度以及絨毛高度與隱窩深度比值[49]。Chen等[52]報道,飼糧中添加200 mg/kg厚樸酚可顯著上調(diào)蛋雞回腸中閉合蛋白的相對表達量,同時提高其空腸及回腸的絨毛長度,從而改善腸絨毛發(fā)育和維護腸黏膜屏障功能。曹蓉[51]對黃羽肉雞的研究中發(fā)現(xiàn),與抗生素組相比,150 mg/kg厚樸酚組回腸絨毛高度顯著提高,十二指腸的隱窩深度顯著降低,同時,回腸中厚壁菌門等菌群豐度提高,進而改善腸道健康。此外,給感染Salmonellapullorum的肉雞飼喂含有300 mg/kg厚樸酚的飼糧還可降低回腸中免疫相關(guān)基因,如JCHAIN、血清趨化因子配體19(CCL19)及其受體(CCR7)表達、改善空腸、回腸絨毛高度及其絨隱比、提高回腸營養(yǎng)代謝相關(guān)基因(SAT1與ENPP7)和緊密連接蛋白-5(Claudin-5)表達、增加回腸微生物的多樣性并提升有益微生物乳酸桿菌(Lactobacillus)的豐度,從而改善腸道免疫反應(yīng)、促進腸黏膜細胞發(fā)育、維護腸黏膜結(jié)構(gòu)及其屏障功能,進而維持腸道內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài),最終維系宿主腸道健康[53]。
隨著人們生活水平的不斷提高,消費者對家禽產(chǎn)品的質(zhì)量安全也越來越重視,如何改善家禽產(chǎn)品的營養(yǎng)價值、感官品質(zhì)、加工品質(zhì)和衛(wèi)生質(zhì)量等已成為科研工作者研究的重點。
目前,科研工作者在厚樸酚調(diào)控家禽產(chǎn)品品質(zhì)方面也開展了部分研究。Lin等[54]的研究證實,在臨武鴨飼糧中添加200和300 mg/kg厚樸酚可顯著降低屠宰后24和48 h的胸肌滴水損失,降低45 min后的胸肌和腿肌蒸煮損失,同時增加45 min后腿肌紅度和腿肌pH,其中300 mg/kg組腿肌失水率降低。有研究表明,在1日齡黃羽肉雞飼糧中添加厚樸酚飼喂56 d后發(fā)現(xiàn),添加50和150 mg/kg厚樸酚可顯著提高宰后胸肌pH45 min和pH48 h,降低胸肌、腿肌滴水損失,150 mg/kg厚樸酚還可提高胸肌和腿肌紅度(a*)值,改善其肉品質(zhì)[51]。Chen等[52]的研究證實,蛋雞飼糧中添加厚樸酚(100~300 mg/kg)可線性提高鮮蛋的蛋白高度和哈夫單位,線性緩解貯藏14 d的雞蛋蛋白高度和哈市單位的下降。由此可見,飼糧中添加一定比例的厚樸酚均具有改善家禽產(chǎn)品品質(zhì)的作用,但其應(yīng)用還相對有限,且具體作用機制還有待進一步挖掘。
厚樸酚除具有改善家禽生產(chǎn)性能、產(chǎn)品品質(zhì)和腸道健康外,還具有調(diào)節(jié)機體代謝、提高抗氧化能力、改善機體免疫等功能。
有研究發(fā)現(xiàn),在臨武鴨飼糧中添加200和300 mg/kg厚樸酚可提高血清中SOD、總抗氧化能力(T-AOC)以及肝臟中CAT的活性,降低血清中甘油三酯、總膽固醇含量和谷草轉(zhuǎn)氨酶活性[54]。同時,飼糧中添加100 mg/kg的厚樸酚還可增加蛋雞卵巢中T-SOD活性[52]。此外,程迪等[50]發(fā)現(xiàn),肉雞采食含有50、100和200 mg/kg厚樸酚的飼糧,可促進其免疫器官發(fā)育,進而提高機體抗病力。綜上所述,厚樸酚在家禽生產(chǎn)上可有效調(diào)節(jié)其機體代謝、改善機體免疫和提高抗氧化能力等。但其應(yīng)用還相對缺乏,今后可加強其在家禽養(yǎng)殖業(yè)中的應(yīng)用強度,以此促進其生態(tài)健康養(yǎng)殖的良性循環(huán)發(fā)展。
隨著消費者對家禽產(chǎn)品品質(zhì)的要求不斷提高和對食品安全意識的日益增強,尋找適宜的非抗生素飼料添加劑是家禽生態(tài)健康養(yǎng)殖研究的重點。本文綜述了厚樸酚的抗氧化、抗炎、抗菌、抗腫瘤等生理功能及其作用機制,及其在家禽生產(chǎn)研究中展現(xiàn)的提高生產(chǎn)性能、改善腸道健康以及改善肉蛋品質(zhì)等功能,表現(xiàn)出較強的應(yīng)用潛力。目前,厚樸酚的研究多集中在人醫(yī)領(lǐng)域,在家禽生產(chǎn)中的應(yīng)用還相對有限,在豬以及反芻動物生產(chǎn)中研究稀少,不同物種的最宜添加量尚未明確,且其在畜禽體內(nèi)的作用機制也需進一步研究。今后的研究可進一步加大其在畜禽生產(chǎn)中的應(yīng)用力度,探究其作用機制,為厚樸酚成為一種綠色安全的飼料添加劑提供更多理論依據(jù),對于實現(xiàn)家禽生態(tài)健康養(yǎng)殖具有重要的意義。