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    五味子乙素提取及其復(fù)合保鮮劑的研究

    2022-05-11 02:13:38陳月星徐愉聰張曉虎
    商洛學(xué)院學(xué)報(bào) 2022年2期
    關(guān)鍵詞:哈夫乙素保鮮劑

    陳月星,徐愉聰,張曉虎

    (商洛學(xué)院生物醫(yī)藥與食品工程學(xué)院/陜西秦嶺特色生物資源產(chǎn)業(yè)技術(shù)研究院,陜西商洛 726000)

    南五味子(Kadsura longepedunculata)[1],是南五味子屬,系陜南山區(qū)商洛市主產(chǎn)的量大質(zhì)優(yōu)的“五大商藥”之一[2-3]。南五味子的成熟果實(shí)性溫且兼具甘、酸、辛、苦、咸五味,不僅作為傳統(tǒng)大宗道地中藥材得到廣泛應(yīng)用,而且提取分離其功能性成分并探索在食品中的應(yīng)用成為食品科學(xué)領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)[4-6]。南五味子中的五味子乙素(Schisandrin B)對中樞神經(jīng)系統(tǒng)、肝臟具有保護(hù)作用[7],能降低動物體內(nèi)谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性,減輕四氯化碳中毒對肝臟的損害,同時具有一定的抗氧化抑菌和降低自由基影響的作用[8],可使機(jī)體抗氧化能力增強(qiáng),使脂質(zhì)過氧化損傷降低[9]。已有研究表明五味子乙素除諸多藥用價值外,極具成為天然食品防腐保鮮劑的潛力[1,4-6]。本研究選取商洛南五味子為材料,采用乙醇浸提法提取其果實(shí)中的五味子乙素,在單因素的基礎(chǔ)上,采用響應(yīng)面法優(yōu)化提取工藝。設(shè)計(jì)由五味子乙素溶液、維生素C、檸檬酸及黃原膠為主要成分的復(fù)配保鮮劑的優(yōu)化組合方案,并將制備的復(fù)合保鮮劑用于雞蛋貯藏保鮮,以期為商洛南五味子在食品防腐保鮮中的應(yīng)用提供技術(shù)參考。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    南五味子果實(shí),2021年8月在陜西省商洛市山陽縣高壩鎮(zhèn)采摘;當(dāng)天所產(chǎn)新鮮雞蛋,購于商洛市商州區(qū)沙河子鎮(zhèn)養(yǎng)雞場;一次性泡沫包裝盒,購于商洛市商州區(qū)客都超市。

    1.2 供試菌種

    大腸桿菌(Esherichiacoli)、沙門氏菌(Salmonella)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus),均購自西安市長安區(qū)瑞昇化玻儀器供應(yīng)站。

    1.3 方法

    1.3.1 五味子乙素的提取與測定

    1)材料預(yù)處理

    將南五味子新鮮果實(shí)置于60℃電熱恒溫箱中烘干至恒重,粉碎后過40目篩,密封備用[10]。

    2)五味子乙素的標(biāo)準(zhǔn)曲線

    準(zhǔn)確稱取五味子乙素標(biāo)準(zhǔn)品10 mg,甲醇定容至50 mL容量瓶內(nèi),所得五味子乙素標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為0.2 mg/mL。分別精密吸取0.2 mg/mL的五味子乙素標(biāo)準(zhǔn)品溶液 2.0,4.0,6.0,8.0,10.0 mL于10 mL容量瓶中,以甲醇定容。

    高效液相色譜法檢測不同濃度五味子乙素標(biāo)準(zhǔn)溶液[11]。條件為:波長254 nm、流動相為甲醇:水(90:10)、進(jìn)樣量 20 μL、柱溫 25 ℃、流速1.0 mL/min。標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為:Y=153118x-86537,R2=0.9995,線性關(guān)系良好。

    3)五味子乙素的提取

    精確稱取5 g南五味子果實(shí)粉末,按料液比1:8加入85%乙醇溶液,在70℃水浴條件下浸提2 h,提取完成后用抽濾機(jī)抽濾,濾液即南五味子中五味子乙素待測液。

    4)五味子乙素的測定

    精密吸取五味子乙素待測液30 mL,甲醇定容至100 mL,用0.45 μm微孔濾膜過濾,作為供試品溶液,然后吸取1.0 mL于進(jìn)樣瓶中,檢測其在254 nm處的峰面積,外標(biāo)法計(jì)算得到五味子乙素提取率[12]。

    5)五味子乙素提取的單因素試驗(yàn)

    分別探討乙醇體積分?jǐn)?shù)(75%,80%,85%,90%,95%)、料液比(1:4,1:6,1:8,1:10,1:12(g:mL))、提取溫度(50℃,60℃,70℃,80℃,90℃)及提取時間(1.0,1.5,2.0,2.5,3.0 h),4 個因素對南五味子中五味子乙素提取率的影響。

    6)五味子乙素提取的響應(yīng)面試驗(yàn)

    選取單因素試驗(yàn)中對五味子乙素提取率影響顯著的三個因素,以單因素試驗(yàn)中各因素的最適合條件為中心點(diǎn),實(shí)施三因素三水平設(shè)計(jì),利用Design-Expert8.0.6軟件對提取工藝進(jìn)行數(shù)學(xué)建模,得到最優(yōu)工藝參數(shù),見表1。

    表1 五味子乙素提取的因素水平表

    7)五味子乙素提取的驗(yàn)證試驗(yàn)

    按6)優(yōu)化工藝條件,取平行試驗(yàn)中五味子乙素提取率的平均值與預(yù)測值比較,評價模型與試驗(yàn)的擬合程度[13-14]。

    1.3.2 五味子乙素的抑菌性

    采用胥春霞等[15]的方法對五味子乙素提取液進(jìn)行分離純化,制備成五味子乙素母液10mg/mL,并配置系列濃度溶液(2.000 0,1.000 0,0.500 0,0.250 0,0.125 0,0.062 5,0.031 3,0 mg/mL) 進(jìn)行五味子乙素抑菌效果試驗(yàn)。應(yīng)用牛津杯法,測定不同濃度五味子乙素溶液對大腸桿菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌三種供試菌種的抑菌效果,將能產(chǎn)生抑菌圈的最低濃度確定為五味子乙素對該菌的最低抑菌濃度(MIC)[16]。

    1.3.3 復(fù)合保鮮劑配方優(yōu)化

    1)復(fù)合保鮮劑配方制備的單因素試驗(yàn)

    分別探討Vc含量(0.15,0.18,0.21,0.24,0.27 g)、檸檬酸含量(0.36,0.39,0.42,0.45,0.48 g)、黃原膠含量(0.09,0.12,0.15,0.18、0.21 g)及 2 mg/mL五味子乙素溶液的體積(9,10,11,12,13 mL)四個因素對復(fù)合保鮮劑保鮮效果的影響。

    2)復(fù)合保鮮劑配方的正交試驗(yàn)

    采用 L9(34)正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)表對復(fù)合保鮮劑配方進(jìn)行優(yōu)化,見表2。待配制的復(fù)合保鮮劑完全溶解后,將清洗干凈的新鮮雞蛋放入其中浸泡30 s后撈出,晾干形成完整的涂膜,置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中加速貯藏,將未涂膜設(shè)為對照組,每隔5 d檢測雞蛋的失重率和哈夫單位[17]。

    表2 復(fù)合保鮮劑配方的正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)表

    1.3.4 復(fù)合保鮮劑的應(yīng)用試驗(yàn)

    雞蛋新鮮度的數(shù)據(jù)處理參照田玥等[18]的方法,以雞蛋的失重率、哈夫單位值為試驗(yàn)指標(biāo)。鮮雞蛋的品質(zhì)分級參照中華人民共和國國內(nèi)貿(mào)易行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)SB/T 10638-2011《鮮雞蛋、鮮鴨蛋分級》[19],見表3。一般情況下,市場上雞蛋的哈夫單位值不低于60,本研究中對哈夫單位值低于40的雞蛋認(rèn)定為不可食用,其數(shù)據(jù)不進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。

    表3 鮮雞蛋的品質(zhì)分級標(biāo)準(zhǔn)

    哈夫單位計(jì)算公式:

    式中,h為蛋白高度,mm;w為全蛋蛋重,g;HU為哈夫單位,Ha。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 南五味子中五味子乙素提取工藝優(yōu)化

    2.1.1 南五味子中五味子乙素提取的單因素試驗(yàn)

    1)乙醇體積分?jǐn)?shù)對五味子乙素提取率的影響

    乙醇體積分?jǐn)?shù)對南五味子中五味子乙素提取率的影響如圖1所示。

    由圖1可知,乙醇體積分?jǐn)?shù)由75%提高到90%時,五味子乙素提取率逐漸增大,乙醇體積分?jǐn)?shù)為90%時,提取率達(dá)到最高為1.73 mg/g;而后隨著乙醇體積分?jǐn)?shù)的增加提取率逐漸降低。故90%為較佳的乙醇體積分?jǐn)?shù)。

    圖1 乙醇體積分?jǐn)?shù)對南五味子中五味子乙素提取率的影響

    2)料液比對五味子乙素提取率的影響

    料液比對南五味子中五味子乙素提取率的影響如圖2所示。由圖2可知,五味子乙素提取率隨著料液比的增加其變化趨勢為先增加后減少。料液比為1:8時,五味子乙素提取率最高為1.75 mg/g??赡苁怯捎陔S著溶劑量的增大,在較短時間內(nèi)與大量溶劑充分反應(yīng),當(dāng)達(dá)到一定程度后大量的溶劑存在影響了整個體系的傳質(zhì)和傳熱,不利于提取的進(jìn)行。故1:8為較佳的料液比。

    圖2 料液比對南五味子中五味子乙素提取率的影響

    3)提取溫度對五味子乙素提取率的影響

    提取溫度對南五味子中五味子乙素提取率的影響如圖3所示。由圖3可知,隨著溫度增高分子運(yùn)動速度加快,五味子乙素更易溶出,提取率增大;溫度為70℃時,提取率最高為1.69 mg/g;當(dāng)提取溫度持續(xù)增高,五味子乙素內(nèi)部結(jié)構(gòu)被破壞,導(dǎo)致提取率降低,故最佳提取溫度確定為70℃。

    圖3 提取溫度對南五味子中五味子乙素提取率的影響

    4)提取時間對五味子乙素提取率的影響

    提取時間對南五味子中五味子乙素提取率的影響如圖4所示。由圖4可知,提取時間逐漸增加,五味子乙素提取率也逐漸增加。提取時間為2.5 h時,五味子乙素提取率達(dá)到最大值1.74 mg/g;之后時間延續(xù),五味子乙素提取率反而降低,可能是由于細(xì)胞內(nèi)溫度升高及在空氣中暴露時間延長發(fā)生降解或縮合等反應(yīng)引起的。故2.5 h為較佳的提取時間。

    圖4 提取時間對南五味子中五味子乙素提取率的影響

    2.1.2 南五味子中五味子乙素提取的響應(yīng)面試驗(yàn)

    1)南五味子中五味子乙素提取的響應(yīng)面試驗(yàn)方案與結(jié)果

    基于單因素試驗(yàn)結(jié)果,以A(乙醇體積分?jǐn)?shù))、B(料液比)、C(提取時間)為響應(yīng)面自變量,以五味子乙素提取率為響應(yīng)值,結(jié)果如表4所示。

    表4 南五味子中五味子乙素提取的響應(yīng)面試驗(yàn)方案與結(jié)果

    對表4中17組試驗(yàn)所得五味子乙素提取率進(jìn)行響應(yīng)面分析,可得兩兩因素相互交匯的三維曲面圖,見圖5。由圖5(a)可見,乙醇體積分?jǐn)?shù)一定時,隨著料液比逐漸增加,五味子乙素提取率先升高后降低,料液比為1:7~1:9時,五味子乙素提取率最大;料液比一定時,隨著乙醇體積分?jǐn)?shù)的增加,五味子乙素提取率先升高后降低,乙醇體積分?jǐn)?shù)為89%~91%時,五味子乙素提取率最高。結(jié)果表明,料液比、乙醇體積分?jǐn)?shù)二者的交互影響對五味子乙素提取率的影響較大。由圖5(b)可見,當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)一定時,隨著提取時間的增加,南五味子中五味子乙素提取率先升高后降低,提取時間為2.4~2.6 h時,五味子乙素提取率最大,隨著時間延長,五味子乙素提取率逐漸降低;提取時間一定時,隨乙醇體積分?jǐn)?shù)的增加,五味子乙素提取率先升高后降低,乙醇體積分?jǐn)?shù)為89%~91%時五味子乙素提取率最高。結(jié)果表明,乙醇體積、提取時間二者的交互影響對五味子乙素提取率的影響較小。

    圖5 兩兩因素對五味子乙素提取率的交互影響

    由圖5(c)可見,當(dāng)料液比一定時,隨著提取時間的增加,五味子乙素提取率先增加后降低,提取時間為2.4~2.6 h時,五味子乙素提取率最大,隨著時間延長,五味子乙素提取率逐漸降低;提取時間一定時,隨著料液比的增加,五味子乙素提取率先升高后降低,料液比為1:7~1:9時五味子乙素提取率最大。結(jié)果表明,料液比、提取時間二者的交互影響對五味子乙素提取率的影響較為重要。

    經(jīng)響應(yīng)面優(yōu)化后,南五味子中五味子乙素最佳提取工藝為:料液比1:8.04、乙醇體積分?jǐn)?shù)90.16%、提取時間2.51 h,模型預(yù)測提取率為1.782 mg/g。為了便于操作,將優(yōu)化后提取工藝修正為:料液比1:8、乙醇體積分?jǐn)?shù)90%、提取時間2.5 h。

    利用Design-Expert8.0.6軟件對表4中的數(shù)據(jù)進(jìn)行多元回歸擬合,得到二次多元回歸方程模型為:R=0.18-2.5×10-4A+2.25×10-3B-1.0×10-3C-2.5×10-4AB+2.25×10-3AC-7.5×10-4BC-5.375×10-3A2-0.012B2-8.875×10-3C2,比較該方程的一次項(xiàng)系數(shù)的絕對值,可以看出考察的三個因素對五味子乙素提取率的影響為:料液比>提取時間>乙醇體積分?jǐn)?shù);方程二次項(xiàng)系數(shù)均為負(fù)值,推測方程具有極大值點(diǎn),能夠?qū)μ崛」に囘M(jìn)行優(yōu)化[20]。

    回歸模型系數(shù)的顯著性檢驗(yàn)結(jié)果見表5,方程的模型極顯著(P<0.000 1),模型有意義。方程中 A、B、C、A2、B2、C2、AB、AC 與 BC 對五味子乙素提取率均具有顯著的影響。模型的失擬項(xiàng)不顯著,相關(guān)系數(shù)R2=0.999 6>0.9,R2Adj=0.999 1,表明擬合的回歸方程符合實(shí)際情況,能較好地反映真實(shí)的試驗(yàn)值,此模型可用于對南五味子果實(shí)中五味子乙素提取率的分析和預(yù)測。

    表5 南五味子中五味子乙素提取的回歸模型系數(shù)的方差分析

    2)南五味子中五味子乙素提取的驗(yàn)證試驗(yàn)

    響應(yīng)面試驗(yàn)結(jié)果表明:優(yōu)化工藝條件為料液比1:8、乙醇體積分?jǐn)?shù)90%、提取時間2.5 h。據(jù)此最優(yōu)方案進(jìn)行五味子乙素提取,提取率為1.77 mg/g,與預(yù)期值吻合,可以作為最優(yōu)方案。

    2.2 南五味子中五味子乙素的抑菌性

    由表6可知,南五味子中五味子乙素對三種供試菌種均有一定的抑制效果,其中大腸桿菌<沙門氏菌<金黃色葡萄球菌。大腸桿菌的MIC為1.00 mg/mL,沙門氏菌的MIC為0.50 mg/mL,金黃色葡萄球菌的MIC為0.125 mg/mL,說明五味子乙素對金黃色葡萄球菌的抑菌效果最好。

    表6 南五味子中五味子乙素的最低抑菌濃度

    2.3 復(fù)合保鮮劑配方制備及優(yōu)化

    2.3.1 復(fù)合保鮮劑配方的單因素試驗(yàn)

    1)Vc含量對雞蛋保鮮效果的影響

    根據(jù)圖6、圖7,隨著貯藏時間延長,雞蛋均有一定的失重,其中使用0.27 g Vc的復(fù)合保鮮劑的雞蛋重量減輕較緩,失重率最高為4.8%,比對照低了3.3%;使用0.21 g Vc的復(fù)合保鮮劑的雞蛋哈夫單位變化較小,在同組試驗(yàn)中較高,為67 Ha。

    圖6 不同Vc含量的復(fù)合保鮮劑對雞蛋失重率的影響

    圖7 不同Vc含量的復(fù)合保鮮劑對雞蛋哈夫單位的影響

    2)檸檬酸含量對雞蛋保鮮效果的影響

    根據(jù)圖8、圖9,其中使用0.48 g檸檬酸的復(fù)合保鮮劑的雞蛋重量減輕較緩,失重率最高為3.1%,比對照低5.6%;使用0.45 g檸檬酸的復(fù)合保鮮劑的雞蛋哈夫單位變化較小,在同組試驗(yàn)中較高,為67 Ha。

    圖8 不同檸檬酸含量的復(fù)合保鮮劑對雞蛋失重率的影響

    圖9 不同檸檬酸含量的復(fù)合保鮮劑對雞蛋哈夫單位的影響

    3)黃原膠含量對雞蛋保鮮效果的影響

    根據(jù)圖10、圖11,其中使用0.21 g黃原膠的復(fù)合保鮮劑的雞蛋重量減輕較緩,失重率最高為4.8%,比對照低5.1%;使用0.21 g黃原膠的復(fù)合保鮮劑的雞蛋哈夫單位值變化較小,在同組試驗(yàn)中較高,為66 Ha??赡苁怯捎诟邼舛鹊狞S原膠黏度及穩(wěn)定性較好,能更好地成膜保護(hù)雞蛋。

    圖10 不同黃原膠含量的復(fù)合保鮮劑對雞蛋失重率的影響

    圖11 不同黃原膠含量的復(fù)合保鮮劑對雞蛋哈夫單位的影響

    4)五味子乙素溶液對雞蛋保鮮效果的影響

    根據(jù)圖12、圖13,使用11 mL五味子乙素溶液的雞蛋重量減輕較緩,失重率最高為3.8%,比對照低4.2%;使用9 mL五味子乙素溶液的雞蛋哈夫單位變化較小,在同組試驗(yàn)中較高,為80 Ha。

    圖12 不同體積的五味子乙素溶液的復(fù)合保鮮劑對雞蛋失重率的影響

    圖13 不同體積的五味子乙素溶液的復(fù)合保鮮劑對雞蛋哈夫單位的影響

    2.3.2 復(fù)合保鮮劑配方的正交試驗(yàn)

    根據(jù)單因素試驗(yàn)結(jié)果,測定試驗(yàn)指標(biāo)后選出一部分有代表性的水平組合進(jìn)行正交試驗(yàn),結(jié)果及直觀分析見表7和表8。

    表7 復(fù)合保鮮劑配方的正交試驗(yàn)結(jié)果及直觀分析

    表8 復(fù)合保鮮劑配方的正交試驗(yàn)的失重率和哈夫單位的極差分析

    由表7和表8可知,正交試驗(yàn)獲得的優(yōu)化復(fù)合保鮮劑配方為E3F2G1H3,即在試驗(yàn)貯藏期(25 d)內(nèi)經(jīng)11 mL,2 mg/mL五味子乙素溶液+0.21 gVc+0.42 g檸檬酸+0.21 g黃原膠用水定容至100 mL處理過的雞蛋保藏較好。

    2.4 復(fù)合保鮮劑的應(yīng)用效果

    將制備的復(fù)合保鮮劑應(yīng)用于雞蛋在37℃恒溫加速貯藏25 d,以未處理組為對照,檢測評定感官品質(zhì),結(jié)果見表9。試驗(yàn)組E3F2G3H3(2 mg/mL五味子乙素溶液11 mL、Vc 0.21 g、檸檬酸0.48 g、黃原膠0.21 g)失重率和蛋白pH顯著低于對照,哈夫單位為對照的2.1倍,且蛋殼、蛋黃和蛋白感官質(zhì)量均保持較好,未出現(xiàn)明顯血斑。由此可見,該組合處理在37℃雞蛋加速貯藏中保鮮效果顯著。

    表9 37℃加速貯藏后雞蛋感官評定

    3 結(jié)論與討論

    基于單因素試驗(yàn)及響應(yīng)面法優(yōu)化,得出商洛南五味子中五味子乙素的提取工藝為:提取溫度70 ℃條件下,料液比 1:8(g:mL)、90%的乙醇體積分?jǐn)?shù)提取2.5 h,五味子乙素提取率為1.77 mg/g。李樹聲等[10]采用響應(yīng)面法優(yōu)化乙醇浸提五味子乙素,用高效液相色譜儀測定其提取率,與微波輔助、乙醇回流、超臨界萃取等方法相比操作簡便、省時省力,適于批量提取,可明顯節(jié)約成本。此研究結(jié)果比本研究結(jié)果的五味子乙素提取率稍低一點(diǎn),而本研究結(jié)果的五味子乙素提取率比陰冠秀等[21]的研究結(jié)果高得多??赡茉颍阂皇怯捎诓烧衔逦蹲右宜毓麑?shí)不適期,錯過了南五味子中五味子乙素含量最高的時期,導(dǎo)致部分五味子乙素分解。二是由于粉碎程度不夠小,未能將有效成分全部提取。三是提取時水浴鍋的溫度控制可能會有變化,不能保證恒定,造成誤差。

    五味子乙素對供試菌種均有一定的抑菌效果,順序?yàn)椋捍竽c桿菌<沙門氏菌<金黃色葡萄球菌,金黃色葡萄球菌的MIC為0.125 mg/mL。制備的復(fù)合保鮮劑最優(yōu)配方為:100 mL水溶液中含2 mg/mL五味子乙素溶液11 mL、0.21 g Vc、0.48 g檸檬酸、0.21g黃原膠,將其應(yīng)用于新鮮雞蛋37℃加速貯藏,與空白對照對比,失重率明顯降低、哈夫單位變化較小,能延長貯藏期15 d。試驗(yàn)?zāi)M雞蛋最易受微生物影響腐敗變質(zhì)的溫度,日常貯藏條件會優(yōu)于試驗(yàn)條件,保藏效果會更好。

    五味子乙素溶液能有效抑制腐敗菌的繁殖,從而延長食品保質(zhì)期和貨架期,故可作為天然保鮮成分,與其它天然安全的材料復(fù)配生產(chǎn)新型食品保鮮劑。本研究結(jié)果可為商洛南五味子在食品防腐保鮮方面的應(yīng)用提供參考依據(jù)。

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