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    基于UHPLC-QTOF-MS/MS和TCMIP的牡丹皮治療慢性腎炎活性成分篩選及作用機制分析

    2022-05-06 07:20:12秦月雯趙能武
    中草藥 2022年9期
    關(guān)鍵詞:苯乙酮萜類牡丹皮

    張 瞳,秦月雯,王 萍*,趙能武

    基于UHPLC-QTOF-MS/MS和TCMIP的牡丹皮治療慢性腎炎活性成分篩選及作用機制分析

    張 瞳1, 2,秦月雯2,王 萍2*,趙能武1*

    1.貴州中醫(yī)藥大學(xué),貴州 貴陽 550025 2.中國中醫(yī)科學(xué)院中藥研究所,北京 100700

    基于超高效液相色譜-四極桿飛行時間質(zhì)譜(ultra-high performance liquid chromatography-quadrupole time of flight mass spectrometry,UHPLC-QTOF-MS/MS)技術(shù)和中醫(yī)藥整合藥理學(xué)研究平臺(Chinese Medicine Integrated Pharmacology Research Platform,TCMIP)v2.0篩選牡丹皮治療慢性腎炎的活性成分,并初步分析其作用機制。采用UHPLC-QTOF-MS/MS,分別在正、負(fù)離子掃描模式下對牡丹皮化學(xué)成分進行定性分析;基于TCMIP v2.0收集牡丹皮的候選靶標(biāo)譜和慢性腎炎的基因集;基于TCMIP v2.0平臺構(gòu)建上述靶標(biāo)間的蛋白間相互作用(protein-protein interaction,PPI)網(wǎng)絡(luò),根據(jù)網(wǎng)絡(luò)特征值確定核心靶標(biāo);通過DAVID v6.8軟件(http://david.abcc.ncifcrf.gov/)進行基因本體論(genetic ontology,GO)功能分析和京都基因與基因組百科全書(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)通路富集分析,篩選與慢性腎炎相關(guān)的通路作為核心通路;圈定核心通路對應(yīng)靶標(biāo)的化學(xué)成分,統(tǒng)計每個成分的靶點數(shù)量、靶點頻次、成分含量;根據(jù)統(tǒng)計結(jié)果確定牡丹皮治療慢性腎炎的核心成分;利用Cytoscape 3.8.0軟件構(gòu)建“成分-靶標(biāo)-通路”多維關(guān)聯(lián)網(wǎng)絡(luò)。在正、負(fù)離子模式下共鑒定了牡丹皮中73個化學(xué)成分;通過分析PPI相互作用網(wǎng)絡(luò)獲得123個核心節(jié)點;KEGG富集分析確定了17條慢性腎炎相關(guān)通路;通過靶點數(shù)量、頻次和響應(yīng)值綜合篩選得到13個核心成分。牡丹皮中的13個核心成分可能通過調(diào)控核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)通路、腎素分泌通路、磷脂酰肌醇-3-羥激酶(phosphatidylinositol-3-hydroxykinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)通路等17條通路治療慢性腎炎,為進一步研究牡丹皮治療慢性腎炎的作用機制奠定了數(shù)據(jù)基礎(chǔ)。

    牡丹皮;慢性腎炎;整合藥理學(xué);活性成分;作用機制;UHPLC-QTOF-MS/MS;沒食子酸;芍藥苷;丹皮酚

    慢性腎炎屬于炎性、免疫性疾病,具有起病形式多樣化、病理類型復(fù)雜、病情進展緩慢及病程遷延難愈等特點。臨床常用類固醇療法治療,但該法極有可能導(dǎo)致類固醇依賴[1]。中醫(yī)學(xué)者將慢性腎炎納入中醫(yī)學(xué)“腎風(fēng)”“尿濁”“水腫”“腎消”“腎勞”等范疇,在飲食不節(jié)、七情內(nèi)擾、勞累過度、外邪侵襲等內(nèi)外因共同作用下,導(dǎo)致氣陰兩虛伴血瘀兼濕熱。氣虛不能化生津液,陰虛則津液不足,氣陰兩虛而虛象亦重,久病難愈而耗傷氣陰,因而導(dǎo)致或加重氣陰兩虛證[2]。氣陰兩虛則致濕熱、瘀血、濁毒積聚阻于腎經(jīng),進一步加重腎臟的負(fù)擔(dān),從而導(dǎo)致腎小球及腎小管不同程度的損傷和萎縮,目前以補益脾腎、利水滲濕、滋陰清熱、活血化瘀為主要治則[3]。牡丹皮是毛茛科芍藥屬植物牡丹Andr.的干燥根皮,味苦、辛,性微寒,歸心、肝、腎經(jīng),具有清熱涼血、活血化瘀的功效,用于熱入營血、溫毒發(fā)斑、吐血衄血、夜熱早涼、無汗骨蒸、經(jīng)閉痛經(jīng)、跌撲傷痛、癰腫瘡毒[4]。牡丹皮是中醫(yī)臨床上治療慢性腎炎的常用藥[5]。臨床常用于治療慢性腎炎的復(fù)方有六味地黃丸、牡丹散、萆薢散等,這些復(fù)方都含有牡丹皮,起到清熱涼血、活血化瘀的作用,可治療慢性腎炎病程中濕熱、血瘀等證。而關(guān)于其治療慢性腎炎的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及其多成分、多靶點、多途徑的網(wǎng)絡(luò)調(diào)節(jié)機制尚未見報道。因此,本研究利用超高效液相色譜-四極桿飛行時間質(zhì)譜(ultra-high performance liquid chromatography-quadrupole time of flight mass spectrometry,UHPLC-QTOF-MS/MS)明確牡丹皮的成分組成,并基于中醫(yī)藥整合藥理學(xué)研究平臺(Chinese Medicine Integrated Pharmacology Research Platform,TCMIP)對牡丹皮治療慢性腎炎的主要藥效成分和作用機制進行分析,識別其可能的藥效成分群及作用靶點、通路,旨在為進一步深入研究牡丹皮治療慢性腎炎的機制和臨床用藥提供科學(xué)依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 儀器

    超高效液相色譜儀(UPLC-H-Class)、四極桿飛行時間質(zhì)譜儀(Xevo G2-S QTOF),美國Waters公司;JP-500C型高速多功能粉碎機,永康市久品工貿(mào)有限公司;CPA225D型電子天平,德國賽多利斯公司。

    1.2 試藥

    牡丹皮飲片(批號119110153)購自山東魯南制藥股份有限公司提供,由中國中醫(yī)科學(xué)院中藥研究所何希榮主管藥師鑒定為牡丹Andr.的干燥根皮(符合《中國藥典》2020年版的相關(guān)要求)。對照品沒食子酸(批號201221027)、芍藥苷(批號21051210)、丹皮酚(批號21031065)購自成都曼思特生物科技有限公司,質(zhì)量分?jǐn)?shù)均≥98%;質(zhì)譜級甲醇、乙腈、甲酸,F(xiàn)isher Scientific公司;蒸餾水,深圳屈臣氏蒸餾水有限公司

    1.3 化學(xué)成分確定

    1.3.1 供試品溶液的制備 精密稱取牡丹皮飲片粉碎(過4號篩),取粉末1.0 g,精密稱定,置于5 mL量瓶中,加入70%甲醇溶液至刻度,搖勻,超聲處理40 min(功率150 W、頻率40 kHz),離心(3000 r/min)10 min,取上清液,過0.22 μm微孔濾膜,取續(xù)濾液,即得。

    1.3.2 混合對照品溶液的制備

    分別取沒食子酸、芍藥苷、丹皮酚約2 mg,精密稱定,分別置于2 mL量瓶中,加70%甲醇分別制成1.095、1.265、0.975 mg/mL的母液。分別精密量取以上母液各0.2 mL至2 mL量瓶中,加70%甲醇稀釋并定容至刻度,即得混合對照品溶液。

    1.3.3 色譜條件 色譜柱為Waters UHPLC HSS T3(100 mm×2.1 mm,1.8 μm);流動相為0.1%甲酸-水(A)和0.1%甲酸-乙腈(B),梯度洗脫,洗脫程序:0~4 min,2.0%~5.0% B;4~6 min,5.0%~6.5% B;6~9 min,6.5%~10.0% B;9~13 min,10.0%~13.0% B;13~20 min,13.0%~20.0% B;20~21 min,20.0%~24.0% B;21~26 min,24.0%~28.0% B;26~26.5 min,28.0%~31.0% B;26.5~31 min,31.0%~36.0% B;31~33 min,36.0%~60.0% B;33~33.5 min,60.0%~98.0% B。體積流量0.5 mL/min,進樣量為2.0 μL,柱溫40 ℃。

    1.3.4 質(zhì)譜條件 質(zhì)譜分析采用了四極桿飛行時間質(zhì)譜,Xevo G2-S QTOF ESI離子源,電離方式為正負(fù)離子模式(ESI?和ESI+),正離子毛細(xì)管電壓0.5 kV,負(fù)離子毛細(xì)管電壓2.5 kV,樣品錐孔電壓40 V,離子源溫度100 ℃,脫溶劑溫度為450 ℃,霧化氣溫度450 ℃,錐孔氣體積流量為50 L/Hr,溶媒揮散體積流量為900 L/Hr,質(zhì)量掃描范圍/50~1500。碰撞能量正離子模式下低碰撞能量為40 eV,高碰撞能量為60 eV;負(fù)離子模式下低碰撞能量為60 eV,高碰撞能量為80 eV。液質(zhì)系統(tǒng)由Masslynx 4.1軟件控制,并進行數(shù)據(jù)采集和圖譜處理。

    1.3.5 數(shù)據(jù)分析 通過Waters UNIFI數(shù)據(jù)處理軟件對Continuum模式采集到的準(zhǔn)分子離子峰信息進行分析,將原始質(zhì)譜數(shù)據(jù)導(dǎo)入UNIFI軟件中,選擇誤差為?5×10?6~5×10?6的分子式與ETCM數(shù)據(jù)庫中牡丹皮化合物信息匹配,對化合物進行初步鑒定,選擇目標(biāo)化合物的二級碎片離子信息,與現(xiàn)有文獻報道提供的保留時間、裂解規(guī)律等信息進行比對,進一步確認(rèn)化合物的成分及結(jié)構(gòu)。將匯總結(jié)果在MassLynx V4.1軟件中通過提取離子及文獻信息的方法人工鑒定并進行成分歸屬。

    1.4 候選靶標(biāo)的收集

    1.4.1 化合物靶點的預(yù)測分析 基于鑒定所得的牡丹皮成分,通過查找數(shù)據(jù)庫(PubChem、Chemspider)或運用ChemDraw軟件下載或繪制結(jié)構(gòu)式[結(jié)構(gòu)式保存成UNIFI軟件匹配格式的摩文件(mol格式)],建立牡丹皮成分庫。

    TCMIP v2.0平臺的靶標(biāo)預(yù)測是運用未知藥物與已知藥物化學(xué)結(jié)構(gòu)相似原理,使用OpenBabel軟件進行成分化學(xué)指紋特征的提取,并采用Tanimoto系數(shù)定義的相似度計算方法進行相似性打分,其中Tanimoto score≥0.8則相似性強。在“中藥靶標(biāo)預(yù)測”界面中,導(dǎo)入牡丹皮化學(xué)成分的mol文件,為提高靶標(biāo)預(yù)測的可靠性,選取相似性分?jǐn)?shù)≥0.8的靶標(biāo)作為候選靶標(biāo),導(dǎo)出去重獲得牡丹皮的候選靶標(biāo)群。

    1.4.2 疾病候選靶標(biāo)的收集 基于TCMIP v2.0的疾病相關(guān)分子集及其功能挖掘模塊,根據(jù)慢性腎炎的臨床表型合集,以臨床表現(xiàn)的英文詞條為檢索詞(表1),建立慢性腎炎相關(guān)基因集。

    1.5 蛋白間相互作用(protein-protein interaction,PPI)網(wǎng)絡(luò)信息

    TCMIP v2.0平臺整合了Reactome(https:// reactome.org/,version 65)、HPRD(Human Protein Reference Database,http://www.hprd.org/,Release 9)、MINT(Molecular INTeractionDatabase,https://mint.bio.uniroma2.it/,updated in August 2011)、InAct(IntActMolecular Interaction Database,https://www.ebi.ac.uk/intact/,version: 4.2.12)、DIP(Database of Interacting Proteins,https://dip.doe-mbi.ucla.edu/ dip/,updated in Feb 13,2017)等數(shù)據(jù)庫的PPI數(shù)據(jù)[6],可對藥物與證候的PPI做全面的分析,利用該平臺,可獲得牡丹皮與慢性腎炎的PPI相互作用信息。

    表1 慢性腎炎的檢索詞

    Table 1 Search words of related chronic kidney disease

    疾病名稱表型疾病名稱表型 albuminuria蛋白尿kidney disease induced by mesangial系膜增生性腎病 chronic renal failurechronic tubulointerstitial nephritis慢性腎衰竭慢性腎小管間質(zhì)腎炎proliferationminimal change glomerulonephritis 微小病變腎小球腎炎 decreased numbers of nephrons腎單位數(shù)目減少nephritis, interstitial間質(zhì)性腎炎 diabetic nephropathy糖尿病腎病pyelonephritis腎盂腎炎 focal glomerulosclerosis局灶性腎小球硬化renal diseases腎臟疾病 glomerulonephritis腎小球腎炎renal failure腎衰竭 glomerulopathy腎小球疾病renal fibrosis腎纖維化 glomerulosclerosis腎小球硬化renal inflammation腎臟炎癥 glycosuria糖尿癥renal injury腎損傷 hyperplasia of the leydig cells間質(zhì)細(xì)胞增生renovascular hypertension腎血管性高血壓 increased blood urea nitrogen血尿素氮增加

    1.6 網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建與分析及可視化

    基于TCMIP v2.0平臺中醫(yī)藥關(guān)聯(lián)網(wǎng)絡(luò)挖掘模塊,選擇“證候-方劑”功能,上傳牡丹皮與慢性腎炎的候選靶標(biāo)群。基于二者潛在靶標(biāo)間的PPI相互作用計算網(wǎng)絡(luò)特征值,以“連接度(degree)”的2倍中位數(shù)為卡值,獲得核心節(jié)點(hubs)后,以核心節(jié)點的“連接度”“緊密度(closeness)”“介度(betweenness)”的中位數(shù)為卡值,選取同時滿足3個卡值的節(jié)點作為網(wǎng)絡(luò)的核心靶標(biāo)[6]。通過DAVID v6.8軟件(http://david.abcc.ncifcrf.gov/)進行基因本體論(genetic ontology,GO)功能分析和京都基因與基因組百科全書(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)通路富集分析,篩選與慢性腎炎相關(guān)的通路作為核心通路。將核心通路、篩選到的核心靶標(biāo)與化學(xué)成分對應(yīng)并統(tǒng)計每個成分的靶點數(shù)量、靶點頻次和成分頻次。根據(jù)頻次和UHPLC-QTOF-MS/MS響應(yīng)值篩選核心成分。將得到的核心成分所包含的靶標(biāo)作為潛在核心靶點。通過Cytoscape 3.8.0軟件對“成分-靶標(biāo)-通路”多維關(guān)聯(lián)網(wǎng)絡(luò)圖進行可視化。

    2 結(jié)果

    2.1 化學(xué)成分分析

    牡丹皮樣品正負(fù)離子模式基峰離子流圖見圖1。通過Waters UNIFI軟件匹配后,將UNIFI導(dǎo)出的結(jié)果進行初步篩選,響應(yīng)值大、誤差小、加合離子多的成分匹配度高,故保留誤差<5×10?6,響應(yīng)值大于5000的成分。根據(jù)UNIFI自動識別、文獻報道和在線及離線質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫的比對,對成分進行鑒定,結(jié)果見表2、3。

    單萜類是芍藥屬植物的主要活性成分。本研究中鑒定了29個單萜及其苷類成分,分別是8--脫苯甲酰芍藥苷(8--debenzoylpaeoniflorin)、4--丁基芍藥苷(4--butylpaeoniflorin)、4--甲基沒食子酰氧基芍藥苷(4--methylgalloyloxypaeoniflorin)、4--甲基芍藥苷(4--methylpaeoniflorin)、4--甲氧基芍藥苷(4--methyloxypaeoniflorin)、4-鄰甲基苯甲酰芍藥苷(4--methylbenzoyl-paeoniflorin)、9--丁基芍藥苷(9--butylpaeonidanin)、9--丁氧基芍藥苷(9--butyloxypaeonidanin)、苯甲酰芍藥苷(benzoylpaeoniflorin)、苯甲酰氧芍藥苷(benzoyloxypaeoniflorin)、沒食子酰芍藥苷(galloylpaeoniflorin)、沒食子酰氧基芍藥苷(galloyloxypaeoniflorin),牡丹皮苷(mudanpioside)A、B、C、D、E、H、I、J、G,芍藥苷(paeoniflorin)、芍藥苷A(paeonidanin A)、芍藥苷B(paeoniflorin B)、芍藥苷內(nèi)脂(albiflorin)、芍藥苷酮(paeoniflorigenone)、芍藥內(nèi)酯B(paeonilactone B)、氧化芍藥苷(oxypaeoniflorin)、氧化芍藥堿(oxypaeonidanin)。經(jīng)MassLynx軟件分析,正離子模式下,峰18、19、20鑒定的化合物分子式均確定為C23H28O11,其中峰18相對豐度最高并有明顯的/449 [M-H-CH2O]?環(huán)氧類結(jié)構(gòu)特征碎片峰,與對照品比對裂解規(guī)律和保留時間,結(jié)合文獻確定峰18、19、20分別為芍藥內(nèi)酯苷、牡丹皮苷I、芍藥苷[7]。

    芍藥屬植物中含有大量的沒食子酸和沒食子酸衍生物,本研究中鑒定了沒食子酸及其7個衍生物,分別是葡萄糖沒食子鞣苷(glucogallin)、沒食子酸甲酯(methyl gallate)、1,3,4-三沒食子酰葡萄糖(1,3,4-trigalloylglucose)、1,2,3,4-四沒食子酰葡萄糖(1,2,3,4-tetragalloylglucose)、1,2,3,4,6-五合金葡萄糖(1,2,3,4,6-pentagalloylglucose)、1,3,6-三鄰沒食子酰葡萄糖(1,3,6-tri--galloylglucose)、1,2,4,6-四沒食子酰葡萄糖(1,2,4,6-tetragalloylglucose)。正離子模式下,通過與對照品比對裂解規(guī)律和保留時間確定峰30為沒食子酸,10號峰具有相同的碎片/169 [M-H]?和125 [M-H-CO2]?,鑒定為沒食子酸甲酯(methyl gallate)。峰43準(zhǔn)分子離子峰為167.069 7 [M+H]+,分子式為C9H10O3,與對照品比對裂解規(guī)律和保留時間,鑒定為丹皮酚(paeonol)。根據(jù)丹皮酚的裂解規(guī)律,鑒定到7個丹皮酚衍生物,包括丹皮酚苷(paeonoside),芹菜皂苷(apiopaeonoside),牡丹苷(suffruticoside)A、C、D、E,2,5-二羥基-4-甲基苯乙酮(2,5-dihydroxy-4-methylacetophenone)。由于峰27、28觀測到的碎片信息有限,不能歸屬具體化合物,推測為methyl vanillate和牡丹苷A、C。鑒定到的化合物中大部分為沒食子酸和丹皮酚的衍生物,為驗證UNIFI匹配結(jié)果,相同條件下檢測沒食子酸和丹皮酚混合對照品,保留時間和裂解規(guī)律與UNIFI匹配結(jié)果一致。

    圖1 牡丹皮基峰離子流圖

    2.2 核心靶標(biāo)的PPI網(wǎng)絡(luò)分析

    依據(jù)“2.1”項中鑒定到的成分,在TCMIP v2.0平臺上共收集到牡丹皮候選靶標(biāo)1001個,慢性腎炎相關(guān)靶標(biāo)300個,PPI網(wǎng)絡(luò)核心節(jié)點123個。將牡丹皮治療慢性腎炎的123個核心靶點上傳至STRING v11.0數(shù)據(jù)庫,并運用Cytoscape 3.8.0軟件進行網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建和可視化,度值取大于2倍中位數(shù),得到核心靶點的PPI網(wǎng)絡(luò),見圖3。PPI網(wǎng)絡(luò)中有絲分裂原激活蛋白激酶3(mitogen-activated protein kinase 3,MAPK3)、核因子-κB抑制因子(nuclear factor-κB inhibitor,NF-κBIA)、白細(xì)胞介素6(interleukin 6,IL6)、白細(xì)胞介素1β(interleukin 1 beta,IL1B)等18個靶點出現(xiàn)在在網(wǎng)絡(luò)中,表明其在PPI網(wǎng)絡(luò)中發(fā)揮重要作用,可視為牡丹皮治療慢性腎炎的關(guān)鍵靶標(biāo)。

    2.3 多維關(guān)聯(lián)網(wǎng)絡(luò)可視化分析

    2.3.1 牡丹皮治療慢性腎炎靶點的GO功能分析和KEGG通路富集分析 將這123個靶點導(dǎo)入David,對相關(guān)靶點蛋白進行GO功能注釋分析,包含細(xì)胞組分、分子功能和生物過程3個方面,選取值最小的前10個進行做圖呈現(xiàn),如圖4所示,這些蛋白在細(xì)胞組分方面主要參與氧化還原酶復(fù)合物、線粒體內(nèi)膜、線粒體呼吸體等過程;在分子功能方面主要參與蛋白質(zhì)絲氨酸/蘇氨酸激酶活性、配體-活化、泛素蛋白連接酶結(jié)合等功能;在生物過程方面主要涉及細(xì)胞對肽類激素刺激的反應(yīng)、有機化合物氧化產(chǎn)生能量等過程;推測牡丹皮滋陰補腎、活血化瘀功效可能與以上功能過程相關(guān)。

    表2 正離子模式下牡丹皮的化學(xué)成分鑒定

    Table 2 Identification of chemical components of Moutan Cortex in ESI+

    峰號tR/minm/z誤差(×10?6)響應(yīng)值加和離子分子式化合物名稱分類與負(fù)離子模式對應(yīng)峰號實測值理論值 1 1.28394.170 6376.136 95?0.47630+NH4, +K, +NaC16H24O108-O-debenzoylpaeoniflorin單萜類 2 2 1.85344.169 7326.13655?2.04350+NH4C16H22O73-O-β-D-glucopyranosyl-4-methoxyaceto- phenone其他48 3 1.86268.103 7267.096 75?1.475 569+HC10H13N5O4adenosine核酸類 4 4 2.29240.123 0222.089 21?0.22114+NH4C12H14O4diethyl phthalate其他 5 2.66362.145 2344.110 73 1.74866+NH4C15H20O9mudanoside C苷類15 6 2.79355.063 8332.074 35 0.72785+NaC13H16O10glucogallin沒食子酸衍生物 6 7 3.11345.153 8344.147 12?1.77552+HC16H24O8mudanpioside G單萜類 8 8 3.64482.151 1464.116 61 1.46033+NH4, +K, +NaC18H24O14mudanoside B苷類 7 9 4.02183.101 5182.094 29?0.43550+HC10H14O3deoxypaeonisuffrone萜類 10 6.98185.044 5184.037 17 0.518 909+HC8H8O5methyl gallate有機酸 9 11 8.54291.086 4290.079 04 0.2143 880+HC15H14O6(?)-catechin/(+)-catechin黃酮類11 8.54139.038 4138.031 69?4.110 328+HC7H6O3p-hydroxybenzoic acid有機酸類21 12 8.98519.147 8496.158 08 0.924 009+Na, +K, +NH4C23H28O12oxypaeoniflorin單萜類12 1310.22549.157 4526.168 64?0.89041+Na, +K, +NH4C24H30O13mudanpioside E單萜類14 1411.06351.105 2328.115 82 0.411 755+Na, +KC15H20O8paeonoside苯乙酮 1511.59227.090 8226.084 12?2.72108+HC11H14O5butyl gallate酯類 1611.66483.147 2460.158 08?0.256 112+Na, +H, +KC20H28O12apiopaeonoside苯乙酮16 1711.73645.201 0622.210 90 1.419 000+Na, +KC26H38O17suffruticoside E苯乙酮17 1812.48498.197 3480.163 16 0.7194 509+NH4, +K, +NaC23H28O11albiflorin單萜類18 1912.62503.152 8480.163 16 0.870 317+Na, +KC23H28O11mudanpioside I單萜類 2013.31498.197 2480.163 16 0.346 951+NH4C23H28O11paeoniflorin*單萜類 2113.32512.212 6494.178 81?0.18380+NH4, +NaC24H30O114-O-methylpaeoniflorin單萜類38 2213.66666.203 6648.169 03 1.140 233+NH4, +K, +NaC30H32O16galloyloxypaeoniflorin單萜類19 2313.96183.065 7182.057 91 3.058 536+HC9H10O42,3-dihydroxy-4-methoxyacetophenone苯乙酮20 2414.29153.054 1152.047 34?3.67772+HC8H8O3resacetophenone苯乙酮22 2514.50654.130 3636.096 26 0.37489+NH4, +K, +NaC27H24O181,3,4-tri-galloylglucose沒食子酸衍生物23 2614.85533.162 7510.173 73?0.523 158+Na, +K, +NH4C24H30O124-O-methyloxypaeoniflorin單萜類35 14.85533.162 7510.173 73?0.523 158+Na, +K, +NH4C24H30O12oxypaeonidanin單萜類34 2715.18183.065 8182.057 91 3.615 532+HC9H10O4methyl vanillate沒食子酸衍生物 2815.57635.158 7612.169 03 0.7107 872+Na, +KC27H32O16suffruticoside A苯乙酮27 15.57635.158 7612.169 03 0.7107 872+Na, +KC27H32O16suffruticoside C苯乙酮27 2916.08806.142 4788.107 22 1.729 182+NH4, +H, +K, +NaC34H28O221,2,3,4-tetragalloylglucose沒食子酸衍生物26 3016.35171.028 4170.021 52?2.39783+HC7H6O5gallic acid*有機酸 5 3116.54635.158 6612.169 03 0.554 735+Na, +H, +KC27H32O16suffruticoside D苯乙酮28 3217.22650.207 9632.174 12?0.1124 145+NH4, +H, +K, +NaC30H32O15galloylpaeoniflorin單萜類29 3317.53319.117 4318.110 34?0.618 911+HC17H18O6paeoniflorigenone單萜類

    續(xù)表2

    峰號tR/minm/z誤差(×10?6)響應(yīng)值加和離子分子式化合物名稱分類與負(fù)離子模式對應(yīng)峰號 實測值理論值 3418.62528.207 6510.173 73 0.12320+NH4, +NaC24H30O12mudanpioside D單萜類25 3518.76680.219 8662.184 69 1.98255+NH4, +K, +NaC31H34O164-O-methylgalloyloxypaeoniflorin單萜類30 3619.22958.154 0940.118 18 2.129 746+NH4, +NaC41H32O261,2,3,4,6-pentagalloylglucose沒食子酸衍生物32 3719.29634.213 6616.179 21 0.952 945+NH4, +H, +K, +NaC30H32O14mudanpioside H單萜類33 3822.36648.229 4630.194 86 1.174 655+NH4, +H, +K, +NaC31H34O14mudanpioside J單萜類41 22.36169.049 4168.042 26?0.72874+HC8H8O4vanillate acid其他 3922.97618.217 8600.184 29?0.4192 185+NH4, +H, +K, +NaC30H32O13benzoyl oxypaeoniflorin單萜類37 22.97618.217 8600.184 29?0.4192 185+NH4, +H, +K, +NaC30H32O13mudanpioside C單萜類37 4023.29303.050 4302.042 65 1.433 659+HC15H10O7quercetin黃酮類39 4123.41764.276 6746.242 20 0.762 510+NH4, +K, +NaC36H42O17paeoniflorin B單萜類40 4223.56648.229 0630.194 86 0.560 439+NH4, +H, +K, +NaC31H34O14mudanpioside B單萜類43 4324.24167.070 6166.062 99 1.91 340 382+HC9H10O3paeonol*苯乙酮42 4425.36197.080 6196.073 56?1.315 874+HC10H12O4paeonilactone B單萜類44 4526.12616.238 8598.205 03?0.123 298+NH4C31H34O124-O-methylbenzoyl-paeoniflorin單萜類51 4626.15602.223 6584.189 38 0.6921 425+NH4, +HC30H32O12benzoyl paeoniflorin單萜類45 4726.53616.238 7598.205 03?0.38117+NH4, +NaC31H34O12paeonidanin A單萜類50 4826.59287.054 9286.047 74?0.514 932+HC15H10O6kaempferol黃酮類46 4926.89632.235 5614.199 94 2.896 229+NH4, +H, +K, +NaC31H34O13mudanpioside A單萜類47 5027.29317.065 4316.058 30?0.59453+HC16H12O7isorhamnetin黃酮類 5128.19559.215 8536.225 76 1.52362+Na, +NH4C27H36O119-O-butylpaeonidanin單萜類 5229.31554.259 1536.225 76?0.92340+NH4, +K, +NaC27H36O114-O-butylpaeoniflorin單萜類

    *表示與對照品對照

    >*contrast with reference

    表3 負(fù)離子模式下牡丹皮的化學(xué)成分鑒定

    Table 3 Identification of chemical components of Moutan Cortex in ESI?

    峰號tR/minm/z誤差(×10?6)響應(yīng)值加和離子分子式化合物名稱分類與正離子模式對應(yīng)峰號實測值理論值 1 1.01 129.019 5 130.026 61 1.0 3914?HC5H6O4mono-methyl maleate其他 2 1.27 421.135 6 376.136 95 1.1 78 315+HCOO, ?HC16H24O108-O-debenzoylpaeoniflorin單萜類 1 3 1.36 243.062 5 244.069 54 1.0 5689?HC9H12N2O6uridine苷類 4 1.78 312.094 9 267.096 75 ?0.1 4557+HCOO, ?HC10H13N5O4adenosine核酸類 3 5 2.07 169.014 5 170.021 52 1.4 368 271?HC7H6O5gallic acid*有機酸30 6 2.76 331.067 2 332.074 35 0.3 131 591?HC13H16O10glucogallin沒食子酸衍生物 6 7 3.70 463.109 6 464.116 61 0.6 359 064?HC18H24O14mudanoside B苷類 8 8 6.18 389.145 6 344.147 12 0.7 41 232+HCOO, ?HC16H24O8mudanpioside G單萜類 7 9 6.94 183.030 1 184.037 17 0.9 308 411?HC8H8O5methyl gallate有機酸10 10 7.47 407.098 6 408.105 65 0.7 6576?H, +HCOOC19H20O10iriflophenone 2-O-β-D-glucopyranoside其他 11 8.49 289.072 0 290.079 04 0.7 363 297?HC15H14O6(?)-catechin/(+)-catechin黃酮類11 12 8.94 495.151 6 496.158 08 1.6 817 506?H, +HCOOC23H28O12oxypaeoniflorin單萜類12 13 9.66 635.089 4 636.096 26 0.7 49 799?HC27H24O181,3,6-tri-o-galloylglucose沒食子酸衍生物 1410.20 525.161 4 526.168 64 0.1 156 684?H, +HCOOC24H30O13mudanpioside E單萜類13

    續(xù)表3

    峰號tR/minm/z誤差(×10?6)響應(yīng)值加和離子分子式化合物名稱分類與負(fù)離子模式對應(yīng)峰號 實測值理論值 1510.85 343.103 6 344.110 73 0.5 4690?H, +HCOOC15H20O9mudanoside C苷類 5 1611.64 505.156 7 460.158 08 0.9 82 120+HCOO, ?HC20H28O12apiopaeonoside苯乙酮16 1711.70 667.209 1 622.210 90 0.0 27 131+HCOO, ?HC26H38O17suffruticoside E苯乙酮17 1812.48 525.161 2 480.163 16 ?0.3 1 651 766+HCOO, ?HC23H28O11albiflorin單萜類18 1913.63 647.162 1 648.169 03 0.6 514 497?HC30H32O16galloyloxypaeoniflorin單萜類22 2013.93 181.050 2 182.057 91 ?2.3 1305?HC9H10O42,3-dihydroxy-4-methoxyacetophenone其他23 2114.01 137.024 3 138.031 69 ?0.8 1 0742?HC7H6O3p-hydroxybenzoic acid有機酸11 2214.24 151.040 2 152.047 34 1.0 31 191?HC8H8O3resacetophenone苯乙酮24 2314.47 635.088 6 636.096 26 ?0.6 244 630?HC27H24O181,3,4-tri-galloylglucose沒食子酸衍生物25 2414.64 525.162 1 480.163 16 1.3 56 959+HCOOC23H28O11paeoniflorin*單萜類 2514.82 555.172 7 510.173 73 1.5 146 011+HCOO, ?HC24H30O12mudanpioside D單萜類34 2616.06 787.099 7 788.107 22 ?0.3 640 440?HC34H28O221,2,3,4-tetragalloylglucose沒食子酸衍生物29 2716.33 611.161 6 612.169 03 ?0.2 515 478?HC27H32O16suffruticoside A苯乙酮28 16.33 611.161 6 612.169 03 ?0.2 515 478?HC27H32O16suffruticoside C苯乙酮28 2816.51 611.161 5 612.169 03 ?0.4 152 321?H, +HCOOC27H32O16suffruticoside D苯乙酮31 2917.20 631.166 8 632.174 12 ?0.1 752 109?HC30H32O15galloylpaeoniflorin單萜類32 3018.74 661.176 7 662.184 69 ?1.0 58 294?HC31H34O164-O-methylgalloyloxypaeoniflorin單萜類35 3119.03 787.097 3 788.107 22 ?3.4 11 271?HC34H28O221,2,4,6-tetragalloylglucose沒食子酸衍生物 3219.08 939.107 2 940.118 18 ?3.9 2 600 278?HC41H32O261,2,3,4,6-Pentagalloylglucose沒食子酸衍生物36 3319.28 615.170 4 616.179 21 ?2.4 283 752?HC30H32O14mudanpioside H單萜類37 3420.38 509.164 7 510.173 73 ?3.4 10 154?HC24H30O12oxypaeonidanin單萜類26 3521.12 509.166 7 510.173 73 0.6 16 351?HC24H30O124-O-methyloxypaeoniflorin單萜類26 3621.99 181.050 3 122.036 78 ?1.7 27 703+CH3COOC7H6O2benzoic acid有機酸 3722.96 599.176 8 600.184 29 ?0.3 622 339?H, +HCOOC30H32O13benzoyl oxypaeoniflorin單萜類39 22.96 599.176 8 600.184 29 ?0.3 622 339?H, +HCOOC30H32O13mudanpioside C單萜類39 3823.19 493.170 4 494.178 81 ?2.2 5037?HC24H30O114-O-methylpaeoniflorin單萜類21 3923.28 301.035 5 302.042 65 0.4 73 260?HC15H10O7quercetin黃酮類40 4023.41 791.239 0 746.242 20 ?1.7 116 065+HCOO, ?HC36H42O17paeoniflorin B單萜類41 4123.56 629.187 6 630.194 86 0.0 153 850?H, +HCOOC31H34O14mudanpioside J單萜類38 4224.27 165.056 0 166.062 99 1.8 45 160?HC9H10O32,5-dihydroxy-4-methylacetophenone苯乙酮43 24.27 165.056 0 166.062 99 1.8 45 160?HC9H10O33-hydroxy-4-methoxyacetophenone其他 4324.79 689.207 1 630.194 86 ?2.3 4204+CH3COOC31H34O14mudanpioside B單萜類42 4425.35 195.066 3 196.073 56 0.0 43 837?HC10H12O4paeonilactone B單萜類44 4526.16 629.187 4 584.189 38 ?0.3 1 548 784+HCOO, ?HC30H32O12benzoyl paeoniflorin單萜類46 26.16 629.187 4 630.194 86 ?0.3 1 548 784?HC31H34O14mudanpioside J單萜類 4626.59 285.040 5 286.047 74 0.3 34 905?HC15H10O6kaempferol黃酮類48 4726.89 659.197 3 614.199 94 ?1.2 104 800+HCOO, ?HC31H34O13mudanpioside A單萜類49 4827.19325.129 3326.136 55 0.12099?HC16H22O73-O-β-D-glucopyranosyl-4-methoxyacetophenone其他 2 4928.14 551.213 3 552.220 68 ?0.3 11 458?HC27H36O129-O-butyloxypaeonidanin單萜類 5028.86 657.217 3 598.205 03 ?2.4 3 276+CH3COOC31H34O12paeonidanin A單萜類47 5129.16 657.216 5 598.205 03 ?3.7 2 283+CH3COOC31H34O124-O-methylbenzoyl-paeoniflorin單萜類45 5229.38 611.233 7 552.220 68 ?1.3 6 278+CH3COOC27H36O124-O-butyloxypaeoniflorin苷類 5329.90 287.222 6 242.224 58 ?0.5 4 614+HCOOC15H30O2pentadecanoic acid其他 5434.73 455.353 0 456.360 35 ?0.1 102 657?H, +HCOOC30H48O3betulinicacid三萜類 5535.00 453.337 8 454.344 70 0.8 29 446?H, +HCOOC30H46O3mudanpinoic acid A三萜類 5636.40 431.317 7 432.323 96 2.4 513 757?HC27H44O4octadecyl caffeate其他 57 36.75 621.440 0 576.440 00 ?0.8 37 344+HCOOC35H60O6daucosterol三萜類

    *表示與對照品對照

    *contrast with reference

    圖3 牡丹皮治療慢性腎炎的PPI核心網(wǎng)絡(luò)

    以<0.05為篩選條件,共富集到87條通路,經(jīng)過進一步查詢文獻,從中篩選出19條與慢性腎炎可能相關(guān)的通路,包括Toll樣受體信號通路、T細(xì)胞受體信號通路等炎癥相關(guān)通路,也包括磷脂酰肌醇-3-羥激酶(phosphatidylinositol-3-hydroxykinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)信號通路、NF-κB信號通路等腎纖維化相關(guān)通路,提示牡丹皮可能主要通過這些通路起到抗炎、抗氧化、保護腎臟細(xì)胞的作用。見表4。

    圖4 核心靶點GO功能分析

    2.3.2 牡丹皮治療慢性腎炎的核心成分篩選 將篩選到的核心靶點與靶點所對應(yīng)的化學(xué)成分進行靶點數(shù)量統(tǒng)計,選取頻次大于頻次中位數(shù)的成分再除去響應(yīng)值<4000的成分,剩下的13個作為核心成分,分別是沒食子酸、腺苷、沒食子酸甲酯、2,3-二羥基-4-甲氧基苯乙酮、槲皮素、丹皮酚、乙酰香草酮、2,5-二羥基-4-甲基苯乙酮、兒茶素、白樺酸、芍藥苷、牡丹皮苷F、牡丹皮苷G。主要為苯乙酮類、單萜苷類和沒食子酸及其衍生物。“成分-靶標(biāo)-通路”多維關(guān)聯(lián)網(wǎng)絡(luò)圖見圖5。

    3 討論

    慢性腎臟疾病是一種慢性進行性發(fā)展的疾病,腎小管上皮細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞受損后引起促炎因子的釋放,這些因子會促進細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix,ECM)的分泌,受損的上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和活化的成纖維細(xì)胞釋放基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP),成纖維細(xì)胞的活化造成大量ECM沉積,導(dǎo)致持續(xù)的慢性炎癥,腎臟受到持續(xù)的損傷后,組織修復(fù)/再生異常導(dǎo)致其不能被完全修復(fù),致使正常組織被纖維組織替代、喪失功能,最終引起腎功能衰竭。

    表4 19條與慢性腎炎可能相關(guān)的通路

    Table 4 Information of 19 related pathways

    編號通路富集靶點數(shù)P值 hsa04024:cAMP signaling pathway182.35×10?8 hsa04062:chemokine signaling pathway176.17×10?8 hsa04620:Toll-like receptor signaling pathway131.57×10?7 hsa04020:calcium signaling pathway117.77×10?4 hsa04068:FoxO signaling pathway132.03×10?6 hsa04750:inflammatory mediator regulation of TRP channels114.69×10?6 hsa04022:cGMP-PKG signaling pathway131.14×10?5 hsa04151:PI3K-Akt signaling pathway191.42×10?5 hsa04066:HIF-1 signaling pathway102.86×10?5 hsa04621:NOD-like receptor signaling pathway 83.58×10?5 hsa04660:T cell receptor signaling pathway103.97×10?5 hsa04010:MAPK signaling pathway157.42×10?5 hsa04662:B cell receptor signaling pathway 81.39×10?4 hsa04630:Jak-STAT signaling pathway111.43×10?4 hsa04152:AMPK signaling pathway101.99×10?4 hsa04150:mTOR signaling pathway 73.82×10?4 hsa04064:NF-kappa B signaling pathway 85.89×10?4 hsa04540:gap junction 86.32×10?4 hsa04924:renin secretion 76.52×10?4

    圖5 “成分-靶標(biāo)-通路”多維關(guān)聯(lián)網(wǎng)絡(luò)圖

    本研究運用UHPLC-QTOF-MS/MS聯(lián)合UNIFI數(shù)據(jù)庫,以及根據(jù)已有文獻資料建立的牡丹皮化學(xué)成分庫,在正、負(fù)離子2種掃描模式下,比較全面地預(yù)測了牡丹皮中的主要活性成分。ETCM數(shù)據(jù)庫中牡丹皮化合物多數(shù)為沒食子酸、芍藥苷、丹皮酚衍生化合物,所以選用這3種對照品與UNIFI分析結(jié)果比對。明確活性成分后,進一步結(jié)合TCMIP平臺對牡丹皮治療慢性腎炎的分子機制進行了初步分析,得到了牡丹皮治療慢性腎炎可能的13個關(guān)鍵活性成分,34個核心靶點和17條核心通路。其中,多個成分均有文獻報道具有確切的抗炎、抗腎纖維化作用。

    牡丹皮中沒食子酸和沒食子酸甲酯在慢性腎病長期治療中具有腎臟保護作用,可調(diào)節(jié)NF-κB、環(huán)磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)等通路起到抗炎作用,在多柔比星誘導(dǎo)的大鼠慢性腎炎模型中通過抑制MMP-2,誘導(dǎo)超氧化物歧化酶升高,從而有效地抑制慢性腎炎中的炎癥反應(yīng),增加腎臟重量和腎小球體積[8]。

    牡丹皮中芍藥苷類化合物芍藥苷、牡丹皮苷F、牡丹皮苷G可降低促炎細(xì)胞因子腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、IL-1β和IL-6的表達。有研究報道芍藥苷可以治療系膜增生性腎小球腎炎(mesangial proliferative glomerulonephritis,MPGN)大鼠血脂異常,同時顯著降低24 h尿蛋白并促進腎功能,減輕系膜細(xì)胞增殖和炎癥[9]。

    黃酮類化合物兒茶素、槲皮素除了具有抗炎、抗氧化作用外,還可以通過激活腎上皮細(xì)胞中的Na?, K?-2Cl?協(xié)同轉(zhuǎn)運蛋白1提高Cl?含量,促進上皮細(xì)胞Na+通道對Na+的重吸收減少,降低了體積依賴性升高的血壓,有效緩解慢性腎炎過程中血瘀癥狀。腺苷參與了傳入和傳出動脈血管張力的調(diào)節(jié),以及與腎素-血管緊張素系統(tǒng)的相互作用,證明腺苷信號傳導(dǎo)也參與腎小球反饋機制、鈉重吸收和對急性損傷(如缺血)的適應(yīng)性反應(yīng)[10]。

    三萜類化合物白樺脂酸對腺嘌呤致慢性腎炎大鼠的轉(zhuǎn)化生長因子-β(transforming growth factor β,TGF-β)、結(jié)締組織生長因子、纖連蛋白、I型膠原蛋白和羥脯氨酸等腎纖維化指標(biāo)起到逆轉(zhuǎn)作用,白樺脂酸的腎保護和抗纖維化作用的生化機制可能是通過抑制促纖維化蛋白的產(chǎn)生,從而阻礙腎組織損傷并改善腎功能,具有腎保護潛力和抗纖維化活性[11]。

    牡丹皮中還含有大量的丹皮酚及丹皮酚衍生物2,5-二羥基-4-甲基苯乙酮、去甲丹皮酚乙酰香草酮、2,3-二羥基-4-甲氧基苯乙酮等。這類化合物可以可抑制IL-1β誘導(dǎo)的NF-κB活化及PI3K和Akt磷酸化,可能通過調(diào)控PI3K/Akt通路來治療慢性腎炎,且有研究報道抑制PI3K激活會減弱ECM積累,而抑制Akt會導(dǎo)致梗阻性腎病中肌成纖維細(xì)胞標(biāo)志物減少[12-13]。一些間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)調(diào)節(jié)劑,如Bmi1和膽綠素還原酶通過PI3K/Akt途徑參與缺氧誘導(dǎo)的腎小管間質(zhì)纖維化的治療[14]。

    PPI網(wǎng)絡(luò)中顯示,18個靶點在PPI網(wǎng)絡(luò)中發(fā)揮重要作用,可視為牡丹皮治療慢性腎炎的關(guān)鍵靶標(biāo)。其中NFKBIA是NF-κB通路中重要的抑制劑。NF-κB是一種重要獨特的核轉(zhuǎn)錄因子,有研究證明NF-κB可轉(zhuǎn)錄誘導(dǎo)黏附因子和單核細(xì)胞趨化因子,吸引單核細(xì)胞到炎癥部位,同時轉(zhuǎn)錄一些炎癥因子(IL-1β、TNF等)擴大炎癥反應(yīng),促進腎纖維化的發(fā)展[15]。MAPK3是絲裂原活化蛋白激酶,在MAPK信號通路中發(fā)揮重要作用,有研究證明抑制p38 MAPK的表達可以減輕腎損傷[16]。MAPK作為TGF-β的下游通路,過度激活可能促進梗阻腎臟和TGF-β1處理的腎小管上皮細(xì)胞中的EMT過程[17]。有研究證明靈芝酸可通過抑制TGF-β/Smad和MAPK信號通路治療單側(cè)輸尿管梗阻(unilateral uretera obstruction,UUO)誘導(dǎo)的腎纖維化[18]。本研究中MAPK3、NF-κBIA、IL6、IL1B等18個靶點在PPI網(wǎng)絡(luò)中處于關(guān)鍵位置,牡丹皮活性成分主要通過這18個核心靶點發(fā)揮治療慢性腎炎的作用。

    “成分-靶標(biāo)-通路”關(guān)聯(lián)網(wǎng)絡(luò)分析顯示,牡丹皮活性成分可能通過調(diào)節(jié)趨化因子信號通路、Toll樣受體信號通路、T細(xì)胞受體信號通路、B細(xì)胞受體信號通路、NF-κB信號通路、NOD樣受體信號通路這6條通路發(fā)揮抗炎和清熱作用。同時可能通過cAMP信號通路、PI3K/Akt信號通路等通路發(fā)揮抗纖維化和活血化瘀的作用。

    綜上所述,本研究運用UHPLC-QTOF-MS/MS技術(shù)結(jié)合中藥整合藥理學(xué)平臺信息,分析了牡丹皮治療慢性腎炎可能作用的靶點通路,初步闡述了牡丹皮滋陰補腎、活血化瘀的物質(zhì)基礎(chǔ),為后續(xù)相關(guān)的機制研究和臨床用藥提供參考,還需通過進一步的實驗研究加以驗證。

    利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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    Screening and mechanism analysis of active components ofin treatment of chronic nephritis based on UHPLC-QTOF-MS/MS and TCMIP

    ZHANG Tong1,2, QIN Yue-wen2, WANG Ping2, ZHAO Neng-wu1

    1.Guizhou University of Traditional Chinese Medicine, Guiyang 550025, China 2.Institute of Chinese Materia Medica, China Academy of Chinese Medical Sciences, Beijing 100700, China

    To screen the active components of Mudanpi () in the treatment of chronic nephritis based on ultra-high performance liquid chromatography-quadrupole time of flight mass spectrometry (UHPLC-QTOF-MS/MS) and Chinese Medicine Integrated Pharmacology Research Platform (TCMIP v2.0).The mechanism of action was analyzed.UHPLC-QTOF-MS/MS was used to qualitatively analyze the chemical components ofin positive and negative ion scanning mode, respectively; The candidate target spectrum ofand the gene set of chronic nephritis were collected based on TCMIP v2.0; The protein-protein interaction (PPI) network between the above targets was constructed based on TCMIP v2.0 platform, and the core targets of the network was determined according to the network eigenvalues.Gene ontology (GO) functional analysis and Kyoto encyclopedia of genes and genomes (KEGG) pathway enrichment analysis were carried out by DAVID v6.8 software (http://david.abcc.ncifcrf.gov/), the pathways associated with chronic nephritis was selected as the core pathway; The chemical components of the corresponding targets of the core pathways were delineated, and the number of targets, target frequency and component content of each component were counted; the core components ofin the treatment of chronic nephritis were determined according to the statistical results.Cytoscape 3.8.0 software was used to construct the “component-target-pathway” multi-dimensional association network.A total of 73 chemical constituents inwere identified in positive and negative ion modes; 123 core nodes were obtained by analyzing the PPI interaction network; 17 pathways associated with chronic nephritis were enriched by KEGG enrichment analysis; 13 key active ingredients were obtained through comprehensive screening of response values.The 13 key active components inmay treat chronic nephritis by regulating 17 pathways such as nuclear factor-κB (NF-κB) signaling pathway, phosphatidylinositol-3-hydroxykinase (PI3K)/protein kinase B (Akt) signaling pathway, etc.The results lay a certain foundation for further research on the mechanism ofin the treatment of chronic nephritis.

    ; chronic nephritis; integrative pharmacology; active ingredients; mechanism of action; UHPLC-QTOF-MS/MS; gallic acid; paeoniflorin; paeonol

    R284;R285

    A

    0253 - 2670(2022)09 - 2756 - 12

    10.7501/j.issn.0253-2670.2022.09.019

    2022-01-20

    中國中醫(yī)科學(xué)院科技創(chuàng)新工程(C12021A04904)

    張 瞳,在讀碩士研究生,從事中藥藥理學(xué)研究。Tel: (010)64014411 E-mail: T249454@163.com

    通信作者:王 萍,博士,研究員,從從事中藥血清藥物化學(xué)、中醫(yī)方證代謝組學(xué)及腦卒中的發(fā)病機制研究。E-mail: hudielanwp@sina.com

    趙能武,教授,主要從事民族醫(yī)藥及藥用植物研究工作。E-mail: zhaonw1001@163.com

    [責(zé)任編輯 潘明佳]

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