血液乙醇濃度檢測(cè)中丙酮干擾2例

文迪，于峰，董玫，秦曉欣，向平，馬春玲

（1.河北醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院法醫(yī)學(xué)系河北省法醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室河北醫(yī)科大學(xué)法醫(yī)鑒定中心，河北石家莊 050017；2.石家莊市公安局物證鑒定所，河北石家莊 050000；3.司法部司法鑒定科學(xué)技術(shù)研究所上海市法醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室上海市司法鑒定專業(yè)技術(shù)服務(wù)平臺(tái)，上海 200063）

血液乙醇濃度檢測(cè)中丙酮干擾2例

文迪1，于峰1，董玫1，秦曉欣2，向平3，馬春玲1

（1.河北醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院法醫(yī)學(xué)系河北省法醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室河北醫(yī)科大學(xué)法醫(yī)鑒定中心，河北石家莊 050017；2.石家莊市公安局物證鑒定所，河北石家莊 050000；3.司法部司法鑒定科學(xué)技術(shù)研究所上海市法醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室上海市司法鑒定專業(yè)技術(shù)服務(wù)平臺(tái)，上海 200063）

法醫(yī)毒理學(xué)；色譜法，氣相；血液；乙醇；丙酮

1 案例

1.1 簡(jiǎn)要案情

案例1：2016年2月某日零時(shí)許，楊某駕車在某地與趙某發(fā)生交通事故，抽取楊某靜脈血，對(duì)乙醇含量進(jìn)行檢測(cè)。

案例2：2016年2月某日7時(shí)許，某村發(fā)現(xiàn)一具男性尸體，提取死者心血進(jìn)行乙醇含量檢測(cè)。

兩個(gè)案例中血液均保存于抗凝管中，無血凝塊，未腐敗。

1.2 檢測(cè)方法

參照GA/T 1073—2013行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)[1]，采用頂空氣相色譜法對(duì)血液中乙醇濃度進(jìn)行檢測(cè)。7694E頂空進(jìn)樣器（美國Agilent公司）；加熱箱爐溫：65℃；定量環(huán)溫度：105℃；傳輸線溫度：110℃；樣品瓶加熱平衡時(shí)間：10min。7890A氣相色譜儀（美國Agilent公司）；氣相色譜柱1：DB-ALC1石英毛細(xì)管柱（30m×0.32mm，1.8μm）；氣相色譜柱2：DB-ALC2石英毛細(xì)管柱（30m× 0.32mm，1.2μm）；檢測(cè)器：火焰離子化檢測(cè)器；柱溫：40℃；檢測(cè)器溫度：250℃；進(jìn)樣口溫度：150℃；載氣流速：8mL/min；燃?xì)猓℉2）：30mL/min；空氣：400mL/min；尾吹（N2）：25mL/min。

氣相色譜質(zhì)譜（GC-MS）條件[2，3]：Clarus 680氣相色譜儀（美國PerkinElmer公司），色譜柱為Elite-WAX ETR柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm），載氣為氦氣（1 mL/min），進(jìn)樣口溫度150℃，不分流進(jìn)樣，柱溫40℃，保持5min；PE Clarus SQ8 S質(zhì)譜，離子源溫度250℃，電子轟擊源（EI），電離能量70eV，傳輸線溫度250℃，掃描模式為全掃描，掃描范圍m/z 30～150amu。血樣加入頂空瓶后，65℃水浴加熱，然后用氣密針抽取1mL液上氣體直接進(jìn)樣。

1.3 檢測(cè)結(jié)果

乙醇和內(nèi)標(biāo)（叔丁醇）在頂空氣相色譜柱1及柱2分析條件下的保留時(shí)間分別為1.202、1.608 min和1.040、1.506min。

案例1中，柱1及柱2色譜條件下均未檢出乙醇成分，但在柱1條件下檢出一未知峰（1.335min，圖1A），且在柱2條件下的保留時(shí)間與叔丁醇一致（圖1B）。經(jīng)質(zhì)譜定性，該未知峰保留時(shí)間為2.95 min，特征離子質(zhì)荷比（m/z）為43、58，確認(rèn)其為丙酮，分子離子峰[M-H]的m/z為58，斷裂脫去CH3后產(chǎn)生m/z 43的碎片離子。

圖1 案例1中靜脈血頂空氣相色譜圖

案例2中，柱1及柱2色譜條件下均檢出乙醇成分（圖2），柱1條件下的定量平均值為0.09 mg/mL，柱2條件下的定量平均值為0.06mg/mL。但是，在柱1條件下檢出與案例1相同保留時(shí)間的未知峰，經(jīng)質(zhì)譜定性為丙酮成分。由于該血樣同時(shí)檢出丙酮成分，在柱2條件下丙酮與內(nèi)標(biāo)峰不能分離，內(nèi)標(biāo)受到干擾，因此柱2條件下的定量結(jié)果無效。鑒定意見為送檢心血中乙醇質(zhì)量濃度為0.09mg/mL。

圖2 案例2中心血頂空氣相色譜圖

2 討論

酮體是在肝中脂肪酸氧化分解的中間產(chǎn)物，是肝輸出能源的一種方式，包括乙酰乙酸、β-羥基丁酸及丙酮三種成分，因此，丙酮是體內(nèi)代謝物酮體的主要成分之一。正常情況下，血中含少量酮體，約0.03～0.5mmol/L[4]。在病理?xiàng)l件下，糖類物質(zhì)利用受阻或長(zhǎng)期不能進(jìn)食，脂肪動(dòng)員加強(qiáng)，肝內(nèi)酮體生成過多，超過肝外利用酮體的能力，從而引起血中酮體增多，稱酮血癥[5]。另外，職業(yè)暴露等因素也可以造成血液中丙酮含量的升高，引起急性丙酮中毒[6]。

人體血液乙醇濃度的測(cè)定值是認(rèn)定車輛駕駛?cè)藛T是否酒后或醉酒駕駛的重要執(zhí)法證據(jù)。本例采用頂空氣相色譜雙柱確認(rèn)法對(duì)兩例案件進(jìn)行血液乙醇濃度檢測(cè)。案例1檢材中未檢出乙醇成分，但檢出另一未知物質(zhì)，且該物質(zhì)在柱2條件下與內(nèi)標(biāo)叔丁醇的保留時(shí)間重疊，無法分離；通過氣相色譜-質(zhì)譜法進(jìn)行分析，確證該物質(zhì)為丙酮。案例2檢材中同時(shí)檢出乙醇和丙酮成分，由于在柱2中丙酮與叔丁醇的保留時(shí)間重合，內(nèi)標(biāo)峰面積增加，從而使乙醇測(cè)定值降低，對(duì)乙醇的定量結(jié)果發(fā)生了干擾，因此，在本案的檢測(cè)體系中柱2條件下對(duì)乙醇的定量結(jié)果無效，以柱1條件下兩次測(cè)定的平均值為最終結(jié)果。通過上述兩例案件，筆者認(rèn)為：（1）由于體內(nèi)可產(chǎn)生丙酮，故丙酮不能作為內(nèi)標(biāo)物質(zhì)使用；（2）僅采用頂空氣相色譜單柱法進(jìn)行乙醇濃度檢測(cè)存在一定的風(fēng)險(xiǎn)，雙柱確認(rèn)法可有效降低誤判的可能性；（3）如果發(fā)現(xiàn)雙柱定量結(jié)果之間的差異較大，要考慮乙醇或內(nèi)標(biāo)叔丁醇的色譜峰存在未知物的干擾；（4）在建立檢測(cè)體系時(shí)，應(yīng)對(duì)與乙醇色譜行為相似的物質(zhì)，如丙酮、乙醛、甲醇、異丙醇及苯系物的保留時(shí)間進(jìn)行考察；（5）出現(xiàn)未知色譜峰干擾時(shí)，可考慮采用質(zhì)譜儀對(duì)其進(jìn)行定性分析，排除干擾后再進(jìn)行乙醇濃度定量分析。

總之，血液中乙醇濃度檢測(cè)過程中，除要對(duì)檢材采集、保存、檢測(cè)方法等進(jìn)行規(guī)范化管理，還應(yīng)注意在檢測(cè)過程中出現(xiàn)假陽性，或其他未知物對(duì)檢測(cè)體系干擾的可能。

[1]中華人民共和國公安部.生物樣品血液、尿液中乙醇、甲醇、正丙醇、乙醛、丙酮、異丙醇和正丁醇的頂空-氣相色譜檢驗(yàn)方法：GA/T 1073—2013[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2013.

[2]沈敏.法醫(yī)毒物司法鑒定實(shí)務(wù)[M].北京：法律出版社，2011.

[3]李韻譜，董小艷，吳亞西.氣相色譜-質(zhì)譜法分析環(huán)境空氣中甲醇和丙酮[J].環(huán)境衛(wèi)生學(xué)雜志，2013，3（5）：445-448.

[4]賈弘褆，馮作化.生物化學(xué)與分子生物學(xué)[M].第2版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2010.

[5]陳灝珠，鐘南山，陸再英.內(nèi)科學(xué)[M].第8版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2013.

[6]吳從容.急性丙酮中毒兩例報(bào)告[J].中國工業(yè)醫(yī)學(xué)雜志，1995，8（4）：248.

DF795.4

B

10.3969/j.issn.1004-5619.2017.03.036

1004-5619（2017）03-0337-02

2016-04-01）

（本文編輯：嚴(yán)慧）

國家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目（2016YFC0800704-3）

文迪（1982—），男，副教授，副主任法醫(yī)師，主要從事法醫(yī)毒理及毒物分析研究；E-mail：wendi01125＠126.com

馬春玲，女，教授，主任法醫(yī)師，主要從事法醫(yī)毒物學(xué)研究；E-mail：chunlingma＠126.com