超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定雞肉中磺胺甲基嘧啶殘留量方法優(yōu)化

李啟卉 孫鈺瑩 錢琪

摘 要：本文通過超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法，采用電噴霧電離及質(zhì)譜多反應(yīng)監(jiān)測模式，在不同碰撞能量下測定雞肉中磺胺甲基嘧啶殘留量。結(jié)果表明，雞肉中磺胺甲基嘧啶殘留量在碰撞能量為15 V下，具有良好的線性關(guān)系，定量限為1.0 μg·kg-1，加標(biāo)回收率在93.3%～99.1%。

關(guān)鍵詞：碰撞能量；磺胺甲基嘧啶；超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

Optimization of the Method for the Determination of Sulfamethazine Residues in Chicken by UHPLC-MS/MS

LI Qihui， SUN Yuying， QIAN Qi

（National Light Industry Food Quality Supervision and Testing Nanjing Station， Nanjing 211816， China）

Abstract： In this paper， the residues of sulfamethazine in chicken were determined by ultra high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry in ESI+ and MRM modes at different collision energies. The results showed that the residues of sulfamethazine in chicken had a good linear relationship under the collision energy of 15 V， the limit of quantification was 1.0 μg·kg-1， and the recovery rate of standard addition was?93.3%～99.1%.

Keywords： collision energy; sulfamethazine; ultra high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry

磺胺類藥物是目前被廣泛應(yīng)用于畜禽抗感染治療的重要藥物之一，具有高效、毒性低、便于使用等特點(diǎn)，可預(yù)防和治療一些動(dòng)物疾病，以促進(jìn)動(dòng)物的生長。但若在飼養(yǎng)畜禽過程中不合理使用磺胺類藥物，會(huì)導(dǎo)致藥物在畜禽體內(nèi)殘留，進(jìn)而對(duì)人體產(chǎn)生一定的危害[1-2]。

超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法具有高特異性、良好的檢測靈敏度和分析速度快的特點(diǎn)[3]。碰撞反應(yīng)池的工作原理是產(chǎn)物離子通過向移動(dòng)的母離子施加額外能量，使母離子與反應(yīng)池中的惰性氣體分子發(fā)生碰撞，導(dǎo)致母離子碎裂。因此，形成的產(chǎn)物離子數(shù)與碰撞能量大小密切相關(guān)。碰撞能量越小，碎片越多，離子越少，形成的產(chǎn)物離子越少；碰撞能量越大，更多的母離子被碎片化，但并非所有的子離子都會(huì)更多。由于碰撞能量不同，母離子會(huì)碎裂成不同的子離子，碰撞能量越高，碎片離子越多，使其分裂成其他質(zhì)量數(shù)較低的產(chǎn)物離子。設(shè)置MRM使用模式獲取方法時(shí)，需要設(shè)置一個(gè)最優(yōu)的碰撞能量，使碰撞池中質(zhì)量數(shù)為265的母離子在裂解后形成質(zhì)量數(shù)為156和172的子離子數(shù)量最多。本文通過改變碰撞能量，采用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法對(duì)雞肉中磺胺甲基嘧啶殘留量進(jìn)行快速測定。

1 材料與方法

1.1 試劑與材料

乙腈（色譜級(jí)）；甲酸（色譜級(jí)）；乙腈（默克）；超純水（北京普析-GWA-UN1-F40）；磺胺甲基嘧啶標(biāo)準(zhǔn)品（壇墨公司）。

1.2 儀器

Waters Xevo TQ-S cronos超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀（沃特世公司）；離心機(jī)（上海安亭-GL-20G-Ⅱ）；BSA124S-CW 電子天平[賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司]；渦旋儀（其林貝爾儀器-Vortex QL-861）；BFAA-DC24-RT加熱氮吹儀（上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司）；移液器（艾本德中國有限公司）。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液制備

準(zhǔn)確吸取100 μL磺胺甲基嘧啶標(biāo)準(zhǔn)品溶液于10 mL容量瓶中，用甲醇配制成濃度為1 μg·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)中間液。準(zhǔn)確吸取標(biāo)準(zhǔn)中間液10 μL、50 μL、100 μL、200 μL、500 μL、1 000 μL和2 000 μL于10 mL容量瓶中，用含0.1%甲酸的乙腈溶液稀釋至刻度，配制成濃度為1 ng·mL-1、5 ng·mL-1、10 ng·mL-1、20 ng·mL-1、50 ng·mL-1、100 ng·mL-1和200 ng·mL-1的系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

1.4 樣品前處理

稱取5 g搗碎的樣品于50 mL離心管中，加入10 mL乙腈，渦旋3 min，10 000 r·min-1離心3 min。取全部上清液至25 mL容量瓶中，加入10 mL乙腈，重復(fù)提取，合并上清液，用乙腈定容至刻度。取5 mL上清液，氮吹近干，用2 mL 0.1%酸化乙腈復(fù)溶，過0.22 μm濾膜。

1.5 儀器條件

液相條件：ACQUITY UPLC? HSS T3色譜柱；柱溫40 ℃；梯度洗脫程序如表1所示。

質(zhì)譜條件：電噴霧正電離、多反應(yīng)監(jiān)測模式；毛細(xì)管電壓0.5 kV；脫溶劑溫度500 ℃；脫溶劑氣流量800 L·h-1；錐孔氣流量150 L·h-1；錐孔電壓30 V。

2 結(jié)果與分析

2.1 色譜柱的確定

HSS T3色譜柱為親水性化合物保留專用柱，不僅可增強(qiáng)待測物的保留能力，還可與LC-MS兼容，可耐受100%水相流動(dòng)相，分離重現(xiàn)性較好。T3是采用三官能團(tuán)鍵合技術(shù)，低配基密度C18烷基鏈鍵合和專利的封端技術(shù)，T3對(duì)C18色譜柱的穩(wěn)定性有了更好的提升。

2.2 液相條件的確定

乙腈為非質(zhì)子溶劑、強(qiáng)洗脫劑，低粘度，截止波長為190 nm。在正離子電噴霧液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用分析流動(dòng)相中添加甲酸，可使溶液中的分析物質(zhì)離子化，產(chǎn)生更強(qiáng)的電噴霧信號(hào)。流動(dòng)相使用梯度洗脫能增加峰容量，可增強(qiáng)待測物的分離效果，且能縮小峰型，增強(qiáng)分離能力，更有效地縮短分析時(shí)間。

2.3 質(zhì)譜條件的確定

電噴霧電離是液體從導(dǎo)電毛細(xì)管噴出，毛細(xì)管加高電壓，從而產(chǎn)生帶電液滴的噴霧，液滴蒸發(fā)、分裂直至離子蒸發(fā)稱氣相離子。正離子噴霧是電噴霧液滴從毛細(xì)管出來時(shí)帶正電荷，為了平衡正電流，毛細(xì)管也生成了電子，由靠近毛細(xì)管壁表面的負(fù)離子發(fā)生電化學(xué)氧化，產(chǎn)生電子，電噴霧可被理解成電化學(xué)過程。由圖1可知，碰撞能量在15 V下，磺胺甲基嘧啶物質(zhì)的響應(yīng)最高，峰面積最大。

2.4 方法線性范圍及定量限

當(dāng)雞肉樣品量為5 g、最終定容體積為10 mL時(shí)，根據(jù)定量限為10倍信噪比，從而確定本方法中磺胺甲基嘧啶的定量限為1.0 μg·kg-1。制作好系列標(biāo)準(zhǔn)曲線后，按此方法進(jìn)行測定，以濃度為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，線性圖譜如圖2所示。結(jié)果表明，磺胺甲基嘧啶在濃度1～200 ng·mL-1，與峰面積有較好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)R2＞0.99。

2.5 方法加標(biāo)回收率

選擇3個(gè)陰性雞肉樣品，添加70 μg·kg-1的磺胺甲基嘧啶標(biāo)準(zhǔn)物，按照本實(shí)驗(yàn)前處理方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。通過改變碰撞能量測定樣品中磺胺甲基嘧啶的含量。磺胺類藥物的回收率如表2所示。

當(dāng)碰撞能量為5 V時(shí)，回收率為70.5%～75.0%；當(dāng)碰撞能量為15 V時(shí)，回收率為93.3%～99.1%；當(dāng)碰撞能量為40 V時(shí)，回收率為77.9%～79.2%；當(dāng)碰撞能量為50 V時(shí)，回收率為81.7%～84.9%。由此可得出，在其他條件不變時(shí)，不同碰撞能量下，樣品回收率也不同，在碰撞能量為15 V時(shí)，回收率最好。

3 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)通過改變質(zhì)譜條件，運(yùn)用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法分析雞肉中磺胺甲基嘧啶殘留量。結(jié)果表明，雞肉中磺胺甲基嘧啶在1～200 ng·mL-1線性良好，定量限為1.0 μg·kg-1。通過改變碰撞能量，得出雞肉樣品在碰撞能量為15 V時(shí)，回收率最好，為93.3%～99.1%。由此可得出，在其他條件不變時(shí)，當(dāng)碰撞能量為15 V時(shí)，雞肉中磺胺甲基嘧啶響應(yīng)最好。本方法前處理較為簡單，定量限較低，適用于雞肉中磺胺甲基嘧啶殘留量的快速測定[4-5]。

參考文獻(xiàn)

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