血痕試紙?jiān)谘垲A(yù)試驗(yàn)中的效能評(píng)價(jià)

巫家盛 趙榮昌 黎增強(qiáng)

（廣州市公安局荔灣區(qū)分局刑事警察大隊(duì)，廣東 廣州510140）

血跡是兇殺、傷害等重大刑事案件中最常見(jiàn)的生物物證，通過(guò)血痕預(yù)試驗(yàn)可以從大量的可疑斑跡中初步篩選出可能是血的物證。在現(xiàn)場(chǎng)勘查環(huán)境中，由于條件所限，操作相對(duì)簡(jiǎn)便的血痕預(yù)試驗(yàn)較人血痕確證試驗(yàn)更適合可疑血斑的快速初篩，為案情分析和物證提取提供參考意見(jiàn)。好的血痕預(yù)試驗(yàn)試劑應(yīng)該具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)單、使用安全、結(jié)果可重現(xiàn)、且不損害檢材中的DNA成分等特點(diǎn)。［1］

目前血痕預(yù)實(shí)驗(yàn)常見(jiàn)的方法有聯(lián)苯胺試驗(yàn)、匹拉米洞實(shí)驗(yàn)、魯米諾等。其中聯(lián)苯胺試驗(yàn)是法醫(yī)物證檢驗(yàn)中血痕預(yù)試驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)方法［2］，匹拉米洞是臨床上用于隱血篩選實(shí)驗(yàn)的常規(guī)方法之一［3］。魯米諾實(shí)驗(yàn)的試劑具有強(qiáng)氧化性，實(shí)驗(yàn)具有操作復(fù)雜、易爆炸等缺點(diǎn)，需要暗室觀察，使用受限。血痕試紙是一種以聯(lián)苯胺衍生物為主要成分的血痕預(yù)試驗(yàn)試劑條，相比以上三種實(shí)驗(yàn)，使用方法更為簡(jiǎn)便快捷。本文擬對(duì)血痕試紙的性能進(jìn)行評(píng)價(jià)，包括實(shí)驗(yàn)室環(huán)境和模擬現(xiàn)場(chǎng)使用環(huán)境的靈敏度、特異性，為現(xiàn)場(chǎng)勘查與物證檢驗(yàn)選擇合適的血痕預(yù)試驗(yàn)試劑提供參考。

1 材料與方法

1.1 主要試劑及樣本

血痕試紙（長(zhǎng)春博坤生物科技有限公司），四甲基聯(lián)苯胺（北京布蘭特警用裝備有限公司），匹拉米洞試劑盒（珠海貝索生物技術(shù)有限公司），用于參考對(duì)照的FOB金標(biāo)試劑條（用于實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)，為血痕確證檢驗(yàn)方法）（長(zhǎng)春博坤生物科技有限公司），已知血紅蛋白濃度（130g/L）的健康人的全血樣本。

1.2 實(shí)驗(yàn)室環(huán)境的靈敏度檢測(cè)

用無(wú)菌蒸餾水，將全血樣本分別稀釋成20、50、100、200、500、1000、2000、5000、10000、20000、50000、100000、200000、500000 倍。取上述各稀釋液10μL分別加入凹玻板凹槽內(nèi)或試紙條中。四甲基聯(lián)苯胺組依次滴入冰醋酸、四甲基聯(lián)苯胺無(wú)水乙醇飽和液、3%過(guò)氧化氫溶液，立即出現(xiàn)翠藍(lán)色為陽(yáng)性，1min 內(nèi)完成判讀。匹拉米洞試劑組依次滴入A、B液，產(chǎn)生深紫藍(lán)色至紫紅色為陽(yáng)性，2min 內(nèi)完成判讀。血痕試紙組立即出現(xiàn)翠藍(lán)色為陽(yáng)性，1min 內(nèi)完成判讀。FOB 金標(biāo)試劑條，加樣5min 后進(jìn)行判讀，10min內(nèi)完成判讀。

1.3 模擬現(xiàn)場(chǎng)使用環(huán)境的靈敏度檢測(cè)

用生理鹽水，將全血樣本稀釋成10、20、50、100、200、500、1000、2000、5000 倍，取各濃度稀釋液200μL分別加至玻片（非滲透性載體）、紗布（滲透性載體）中，晾干。使用定性濾紙折角、對(duì)折的血痕試紙?jiān)诒砻婀尾?次，按照四甲基聯(lián)苯胺、匹拉米洞操作方法，血痕試紙直接在試紙上滴入1滴純水，分別進(jìn)行檢測(cè)。

1.4 特異性實(shí)驗(yàn)

收集現(xiàn)場(chǎng)常見(jiàn)標(biāo)本：雞血痕、魚(yú)血痕、鐵銹、醬油、陳醋、漂白水、紅酒、火龍果汁、含碘消毒液、高錳酸鉀、靛藍(lán)染料、紅色染料，分別用三種預(yù)試驗(yàn)試劑與FOB 金標(biāo)試劑條進(jìn)行檢測(cè)。

2 結(jié)果

2.1 實(shí)驗(yàn)室環(huán)境的靈敏度比較

血痕試紙、四甲基聯(lián)苯胺、匹拉米洞均能對(duì)稀釋10 萬(wàn)倍血液產(chǎn)生陽(yáng)性反應(yīng)。當(dāng)血液稀釋大于2 萬(wàn)倍，匹拉米洞的顯色較淺，判讀為弱陽(yáng)性；當(dāng)血液稀釋大于10 萬(wàn)倍，血痕試紙和四甲基聯(lián)苯胺的顯色較淺，判讀為弱陽(yáng)性。FOB金標(biāo)試劑條能對(duì)稀釋50 萬(wàn)倍血液產(chǎn)生陽(yáng)性反應(yīng)，但稀釋100 倍以下的血液，由于血紅蛋白濃度過(guò)高產(chǎn)生鉤狀效應(yīng)，導(dǎo)致假陰性的結(jié)果（見(jiàn)表1）。

表1 實(shí)驗(yàn)室環(huán)境的靈敏度比較

2.2 模擬現(xiàn)場(chǎng)使用環(huán)境的靈敏度比較

匹拉米洞對(duì)紗布上血斑的檢測(cè)下限是稀釋100 倍，對(duì)玻片上血斑是稀釋1000 倍。四甲基聯(lián)苯胺對(duì)紗布上血斑的檢測(cè)下限是稀釋200 倍，對(duì)玻片上血斑是稀釋2000 倍。血痕試紙對(duì)紗布上血斑的檢測(cè)下限是稀釋500 倍，對(duì)玻片上血斑是稀釋5000倍（見(jiàn)表2、表3）。

表2 模擬現(xiàn)場(chǎng)使用環(huán)境的靈敏度比較（滲透性載體）

表3 模擬現(xiàn)場(chǎng)使用環(huán)境的靈敏度比較（非滲透性載體）

2.3 特異性實(shí)驗(yàn)（見(jiàn)表4）

表4 特異性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3 討論

稀釋血液的靈敏度試驗(yàn)結(jié)果顯示，基于聯(lián)苯胺或匹拉米洞的三種血痕預(yù)試驗(yàn)試劑，均能對(duì)稀釋10 萬(wàn)倍的血液產(chǎn)生陽(yáng)性反應(yīng)，靈敏度高，略低于FOB 金標(biāo)試劑條，當(dāng)血液稀釋2 萬(wàn)倍至10 萬(wàn)倍時(shí)，血痕試紙和四甲基聯(lián)苯胺的顯色較匹拉米洞更明顯，更容易判讀，與王清山［4］報(bào)道的聯(lián)苯胺、匹拉米洞對(duì)血紅蛋白可檢測(cè)的最低濃度基本一致。

紗布、玻片上稀釋血斑的試驗(yàn)結(jié)果顯示，血痕試紙、四甲基聯(lián)苯胺、匹拉米洞均能對(duì)紗布上稀釋100 倍以下的血斑、玻片上稀釋1000倍以下的血斑的刮蹭物產(chǎn)生陽(yáng)性反應(yīng)。玻片載體的檢測(cè)下限高于紗布載體，分析原因是非滲透性載體上的微量血斑比滲透性載體更容易刮蹭下來(lái)。血痕試紙的檢測(cè)下限高于四甲基聯(lián)苯胺和匹拉米洞，對(duì)紗布上稀釋200 倍、玻片上稀釋2000 倍的血斑的刮蹭物產(chǎn)生陽(yáng)性反應(yīng)，分析原因是對(duì)折試紙的接觸面更大，比定性濾紙折角的刮蹭效果更好。

特異性檢測(cè)結(jié)果顯示，三種基于化學(xué)法的血痕預(yù)試驗(yàn)試劑的特異性與FOB 金標(biāo)試劑條相比較差，動(dòng)物血、強(qiáng)氧化性［5］的物質(zhì)都可能使其產(chǎn)生假陽(yáng)性，血痕試紙、匹拉米洞在當(dāng)前測(cè)試標(biāo)本的表現(xiàn)略好于四甲基聯(lián)苯胺。值得注意的是，對(duì)含碘消毒液進(jìn)行特異性檢測(cè)時(shí)，四甲基聯(lián)苯胺顯色為深藍(lán)色，血痕試紙顯色為藍(lán)紫色，匹拉米洞試劑盒顯色為淺紫色，與陽(yáng)性對(duì)照顏色接近，有誤判的風(fēng)險(xiǎn)。

在兇殺、傷害等案件的現(xiàn)場(chǎng)勘查和物證檢驗(yàn)中，通過(guò)血痕預(yù)試驗(yàn)快速識(shí)別微量血痕，對(duì)大量疑似血斑進(jìn)行初步篩選，能為現(xiàn)場(chǎng)的分析判斷、物證的發(fā)現(xiàn)提取提供參考。血痕試紙?jiān)趯?shí)驗(yàn)室環(huán)境靈敏度、模擬現(xiàn)場(chǎng)使用環(huán)境靈敏度、特異性三個(gè)評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)的表現(xiàn)穩(wěn)定，靈敏度持平或略高于四甲基聯(lián)苯胺和匹拉米洞，特異性基本一致，其性能可滿足血痕預(yù)試驗(yàn)的要求。在使用便捷性上，血痕試紙優(yōu)點(diǎn)明顯：（1）與四甲基聯(lián)苯胺和匹拉米洞實(shí)驗(yàn)分別要加入3次和2次試劑相比，血痕試紙只需刮蹭可疑血斑邊緣后滴水或直接滴入血痕浸出液即可顯色，操作大大簡(jiǎn)化，便于現(xiàn)場(chǎng)進(jìn)行大量疑似血斑的初篩；（2）血痕試紙單獨(dú)封裝，保質(zhì)期長(zhǎng)達(dá)2 年，沒(méi)有揮發(fā)性試劑的保存問(wèn)題，無(wú)需臨時(shí)配制，可以直接放置物證工具箱中，攜帶更為方便。因此，可以將血痕試紙應(yīng)用于現(xiàn)場(chǎng)勘查與物證檢驗(yàn)，作為聯(lián)苯胺血痕預(yù)試驗(yàn)的替代品。