青貯玉米汁與林可霉素對小鼠生長和生理生化指標的影響

李川皓 趙紅波 申小冉 張相倫 劉曉牧 張文娟 盛清凱

摘要：本試驗研究飲用青貯玉米汁對小鼠生長、腸道及血液等指標的影響，旨在促進減抗替抗及玉米資源的利用。144只小鼠隨機均分為4組，分別飲用蒸餾水（對照）、5%和10%的玉米汁及60mg/L的抗生素（林可霉素）水溶液，測定其生長性能、排便指標、小腸推進指標、血清指標等。結果顯示，和對照組相比，5%玉米汁處理組和抗生素組小鼠平均日增重顯著升高（P<0.05），血清瘦素、雌激素含量顯著降低（P<0.05）;5%玉米汁處理組小腸重量與小腸長度的比值顯著高于對照組和其他處理組（P<0.05），6h內排糞粒數、絨毛長度與隱窩深度比值均高于其他組。這表明飼喂5%的玉米汁可替代林可霉素。

關鍵詞：青貯玉米汁;林可霉素;小鼠;腸道;血液

農業(yè)農村部194號公告要求自2020年起飼料中禁止添加促生長類抗生素。如何減抗、替抗成為關注的熱點。玉米作為糧飼兼用作物，青貯后廣泛用于牛、羊等反芻動物，最近幾年開始大量用于生豬[1]。青貯過程中粉碎的全株青綠玉米需要壓實密封，因此常有5%～10%的玉米汁液流失。玉米汁液含有大量的益生菌、淀粉降解產生的有機酸[2]、水溶性維生素等物質。益生菌、酸化劑等為目前常用的單一替抗飼料添加劑[3，4]。將青貯后的玉米汁液作為復合替抗飼料添加劑用于養(yǎng)殖，不但有助于全株青綠玉米資源的利用，還可能減抗替抗。本試驗以林可霉素為對照，研究全株青綠玉米青貯后的玉米汁對小鼠生長、腸道及血液等指標的影響，為減抗替抗及玉米資源開發(fā)利用提供參考。

1材料與方法

1.1試驗材料

體重（17±0.1）g的雌性無特定病原體（SPF）級昆明雌鼠，購買于濟南朋悅實驗動物繁育有限公司;SPF小鼠顆粒飼料，北京華阜康生物科技股份有限公司生產;林可霉素，山東明發(fā)獸藥股份有限公司提供;青貯玉米汁液，為乳熟期全株青綠玉米添加枯草芽孢桿菌青貯1個月后產生的汁液，pH=3.50，乳酸菌含量為2.5×106cfu/mL;墨汁由阿拉伯樹膠、蒸餾水及活性碳配制而成，現用現配。

1.2試驗設計與飼養(yǎng)管理

采用單因素試驗設計，將144只小鼠隨機均分為4組：對照組、5%處理組、10%處理組、抗生素組。每組4個重復，每重復9只，每籠飼養(yǎng)1個重復的小鼠。對照組飲用蒸餾水，3個試驗組分別飲用5%、10%玉米汁水溶液和60mg/L林可霉素水溶液。每2d更換一次蒸餾水、玉米汁和林可霉素。試驗期20d。小鼠自由飲食，環(huán)境溫度控制在（25±1）℃，每周更換2次墊料。小鼠飼養(yǎng)過程按照國家《實驗動物管理條例》執(zhí)行。

1.3測定指標及方法

1.3.1生長性能指標 于試驗第1、6、11、16、21d（結束后1d）8∶00全部小鼠進行空腹稱重，記錄采食量，分別計算小鼠的始重、末重、平均日增重、平均日采食量和料肉比。

1.3.2小鼠排便指標 第16d每組每重復隨機選取禁食12h的3只小鼠，進行墨汁灌胃，然后立即投喂飼料，統(tǒng)計小鼠首粒黑便排出時間和6h內的排糞粒數。

1.3.3小腸推進指標 第21d每組每重復隨機選取禁食12h的3只小鼠，進行墨汁灌胃，30min后脫頸致死，立即解剖，測量幽門到回盲部小腸距離（小腸長度）和幽門到墨水前沿的距離（墨汁長度），同時稱重小腸重量。推進率（%）=墨汁長度/小腸長度×100。

1.3.4血清指標 第21d將剩余小鼠全部脫頸致死，眼緣靜脈采血，3000r/min離心10min，將血清于0～4℃冰箱保存?zhèn)溆?。采用酶聯免疫吸附試驗法（ELISA）測定血清胃動素、瘦素、神經營養(yǎng)因子3、酪酪肽等指標。ELISA試劑盒為武漢基因美生物科技有限公司生產。

1.3.5組織切片 每組每重復隨機選3只處死小鼠，取回盲部上端的回腸1cm左右腸管，用生理鹽水沖洗后迅速放入4%甲醛固定液中搖勻，采用蘇木精-伊紅染色法制取組織切片，測定回腸絨毛長度及隱窩深度，計算絨毛長度與隱窩深度的比值。

1.4數據處理

采用SASv9.2軟件對數據進行處理，OnewayANOVA進行方差分析，Student-Newmnan-Keuls法進行多重比較，P<0.05為差異顯著。

2結果與分析

2.1玉米汁與抗生素對小鼠生長的影響

由表1看出，5%處理組和抗生素組小鼠的末重、平均日增重皆顯著高于對照組（P<0.05），兩組間差異不顯著。5%處理組小鼠末重高于10%處理組（P<0.05），說明玉米汁對小鼠生長的影響與劑量有關。

2.2玉米汁與抗生素對小鼠腸道的影響

表2顯示，各組小鼠首粒黑糞時長、6h內排糞粒數、墨汁長度以及小腸推進率均差異不顯著（P>0.05）。5%處理組小鼠6h內排糞粒數明顯高于其他組，說明5%玉米汁可促進腸道蠕動。

由表3看出，5%處理組小腸重量與小腸長度的比值顯著高于其他組（P<0.05），顯示5%處理組小鼠腸道可能變粗。5%和10%處理組小鼠絨毛長度與隱窩深度的比值高于抗生素組和對照組（表4），表明玉米汁可促進小腸黏膜吸收營養(yǎng)物質。

2.3玉米汁與抗生素對小鼠血液指標的影響

由表5看出，5%處理組、10%處理組和抗生素組小鼠的雌激素、瘦素含量皆顯著低于對照組（P<0.05），催乳素、酪酪肽等指標與對照組無差異（P>0.05），顯示玉米汁與抗生素的作用效果有相似之處。

3討論與結論

目前國內外未見用青貯玉米汁替代飼用抗生素的報道。青貯玉米汁替代抗生素一般應著重考慮其安全性和有效性。全株青綠玉米青貯時，乳酸菌快速擴繁，抑制有害菌的生長，一般蠟熟后期的全株青綠玉米青貯30～40d后可以飼喂牛羊[5]，乳熟期全株玉米青貯7d后可以飼喂生豬[2]。本試驗未見小鼠其他異常情況，表明飲用青貯玉米汁比較安全。青貯成功的全株玉米常含有乳酸、乙酸、丙酸[6]、乳酸菌[2，7]等，乙酸、丙酸及乳酸菌等皆為良好的替抗添加劑[8]，由此推測青貯玉米汁可以作為一種替抗劑。

不同劑量的青貯玉米汁對小鼠的作用效果存在差別，10%處理組的作用效果和抗生素相似，5%處理組的作用效果優(yōu)于抗生素，推測玉米汁的作用效果可能與飼喂劑量有關。任錦帥等[9]報道全株青綠玉米在配合飼料中的添加比例影響豬的日增重。青貯玉米汁作為一種發(fā)酵產品，其中的有效成分除有機酸、益生菌外還可能含有水溶性纖維[10]、丁醇等其他物質[11]，對小鼠的影響有待進一步研究。

青貯玉米汁與林可霉素作用于小鼠腸道的通路存在差異。腸道變化及黏膜屏障受5-羥色胺、胃動素、酪酪肽[12]、神經營養(yǎng)因子[13]、瘦素[14]等多種神經遞質或激素綜合影響。本試驗結果揭示玉米汁、林可霉素可能通過瘦素影響腸道的變化及黏膜屏障。瘦素為脂肪組織表達的一種調節(jié)能量代謝的激素，其受體廣泛分布，可以通過多種通路影響生理代謝[14]。盡管玉米汁、林可霉素皆影響瘦素，但5%處理組小鼠小腸重量與長度比值、6h內排糞粒數、絨毛長度與隱窩深度比值皆高于抗生素組，表明玉米汁與林可霉素通過瘦素影響腸道的通路不同。玉米汁中的有機酸[15]、益生菌[16]或纖維[17]等不同物質通過瘦素影響腸道的具體通路有待深入研究。