鬼針草總黃酮對HepG2細胞胰島素抵抗的影響

龐曉軍 盧琳琳 黎東旺 趙一宇 劉國勇

中圖分類號 R965 文獻標志碼 A 文章編號 1001-0408（2022）08-0968-07

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2022.08.11

摘 要 目的 探究鬼針草總黃酮（TFB）對人肝癌HepG2細胞胰島素抵抗（IR）的影響。方法 取鬼針草，用80%乙醇回流提取，制得TFB。利用棕櫚酸體外誘導HepG2細胞復制IR模型，考察低、中、高質量濃度（20、40、80 mg/L）TFB對細胞葡萄糖消耗量的影響;以二甲雙胍為陽性對照，考察低、中、高質量濃度（20、40、80 mg/L）TFB對細胞中胰島素受體底物1（IRS-1）、c-Jun氨基端激酶（JNK）和蛋白激酶C（PKC）表達的影響。采用分子對接技術探討槲皮素、槲皮苷等8個TFB主要活性成分與IRS-1、JNK、PKC蛋白的相互作用。結果 TFB低、中、高質量濃度組細胞的葡萄糖消耗量均較模型組顯著升高（P<0.05或P<0.01）。與正常組比較，模型組細胞中的IRS-1、JNK蛋白的表達量均顯著降低，PKC蛋白的表達量顯著升高（P<0.01）;與模型組比較，TFB低、中、高質量濃度組和二甲雙胍陽性對照組能上調IRS-1、JNK蛋白的表達并下調PKC蛋白的表達（P<0.05或P<0.01）。TFB中的海生菊苷與IRS-1蛋白的分子對接能量打分值為-7.9 kcal/mol（1 kcal=4.816 kJ），海生菊苷、蘆丁與JNK蛋白的分子對接能量打分值均為-9.3 kcal/mol，槲皮苷與PKC蛋白的分子對接能量打分值為-4.9 kcal/mol，成分與蛋白間的相互作用包括形成氫鍵、疏水鍵等。結論 TFB對HepG2細胞IR有顯著的改善作用，其機制可能與調節(jié)IRS、JNK、PKC蛋白的表達有關;海生菊苷、蘆丁和槲皮苷可能是改善IR的潛在活性成分。

關鍵詞 鬼針草總黃酮;人肝癌HepG2細胞;胰島素抵抗;胰島素受體底物1、c-Jun氨基端激酶;蛋白激酶C;分子對接

Effects of total flavonoids of Bidens pilosa on insulin resistance in HepG2 cells

PANG Xiaojun1，2，LU Linlin2，LI Dongwang1，2，ZHAO Yiyu3，LIU Guoyong4（1. Dept. of Pharmacy， the Second People’s Hospital of Qinzhou， Guangxi Qinzhou 535000， China; 2. College of Pharmacy， Guangxi Medical University， Nanning 530021， China; 3. Dept. of Rehabilitation，the Second People’s Hospital of Qinzhou， Guangxi Qinzhou 535000， China; 4. Dept. of Radiology， the Second People’s Hospital of Qinzhou， Guangxi Qinzhou 535000， China）

ABSTRACT ? OBJECTIVE To explore the effects of total flavonoids of Bidens polisa L. （TFB） on insulin resistance （IR） of HepG2 cells. METHODS B. polisa L. was refluxed and extracted with 80% ethanol to obtain TFB. Palmitic acid was used to induce IR mode of HepG2 cells in vitro. The effects of low-concentration， medium-concentration and high-concentration （20， 40， 80 mg/L） of TFB on the consumption of glucose were investigated. Using metformin as positive control， the effects of low-concentration， medium-concentration and high-concentration （20， 40， 80 mg/L） of TFB on the protein expression of insulin receptor substrate-1 （IRS-1）， c-Jun N-terminal kinase （JNK） and protein kinase C （PKC） were investigated. Molecular docking technology was used to explore the interaction between eight main active components of TFB such as quercetin， quercitrin and IRS-1， JNK and PKC proteins. RESULTS The glucose consumption of TFB low-concentration， medium-concentration and high-concentration groups were increased significantly （P<0.05 or P<0.01）. Compared with normal group， the expression of IRS-1 and JNK protein in the model group decreased significantly， and the expression of PKC protein increased significantly （P<0.01）. Compared with model group， the protein expression of IRS-1 and JNK could up-regulated while the protein expression of PKC down-regulated in TFB low-concentration， medium-concentration and high-concentration groups and metformin positive control group （P<0.05 or P<0.01）. The score of molecular docking energy between maritimetin in TFB and IRS-1 protein was ? -7.9 kcal/mol （1 kcal=4.816 kJ）. The scores of molecular docking energy of maritimetin， rutin and JNK protein were -9.3 kcal/mol. The score of molecular docking energy between quercitrin and PKC protein was -4.9 kcal/mol. Interactions between components and proteins included forming hydrogen bonds， hydrophobic bonds and so on. CONCLUSIONS TFB can significantly improve IR of HepG2 cells， the mechanism of which may be related to the regulation of protein expression of IRS， JNK and PKC. Maritimetin， rutin and quercitrin may be potential active ingredients for improving IR.

KEYWORDS ? total flavones of Bidens polisa L.; human hepatoma HepG2 cells; insulin resistance; insulin receptor substrate-1; c-Jun N-terminal kinase; protein kinase C; molecular docking

胰島素抵抗（insulin resistance，IR）是指機體對胰島素生物反應性降低的一種現(xiàn)象，表現(xiàn)為胰島素促進葡萄糖攝取和利用的效率下降，機體代償性分泌過多胰島素而產生高胰島素血癥[1]。IR是代謝綜合征、2型糖尿病、高血壓、心腦血管疾病等多種疾病的發(fā)病基礎，嚴重威脅人類的健康[2]。IR的患病率正在增加，尤其是在發(fā)展中國家的年輕人口中，患病率達20%～40%[3]。中醫(yī)藥在改善IR方面具有效果顯著、成本低、不良反應少等優(yōu)勢，探究中藥對IR的作用是當前研究的熱點之一[4]。據(jù)最新報道顯示，近5年來發(fā)現(xiàn)的具有IR改善作用的中藥活性成分有35種，其中黃酮類成分有11種，約占三分之一。鬼針草總黃酮（total flavonoids of Bidens polisa L.，以下簡稱“TFB”）是其中的主要代表成分[4]。TFB具有抗炎、抗氧化、抗肝纖維化等多種藥理作用[5]。有研究指出，c-Jun氨基端激酶（c-Jun N-terminal kinase，JNK）信號通路在IR的發(fā)生發(fā)展中具有重要作用[6]。黃酮類化合物在改善IR方面具有明顯的作用，且這種作用可能與調控JNK信號通路有關[7]。雖然已有報道指出，TFB可以通過調控磷脂酰肌醇3激酶/絲氨酸-蘇氨酸蛋白激酶1/葡萄糖轉運蛋白4（phosphoinositide 3-kinase/serine-threonine protein kinase 1/glucose transporter protein 4，PI3K/AKT1/GLUT4）信號通路中轉錄因子編碼基因及蛋白的表達來改善HepG2細胞的IR狀態(tài)[8]，但有關TFB對IR及JNK相關信號通路的作用尚待進一步的探究。為此，本研究擬復制HepG2細胞IR模型并結合分子對接實驗，探討TFB改善IR的可能作用機制，為研發(fā)改善IR作用的潛在活性藥物提供依據(jù)。

1 材料

1.1 主要儀器

本研究所用主要儀器有SpectraMax Plus 384型酶標儀（香港分子儀器公司），ZF-2型三用紫外分析儀（上海市安亭電子儀器廠），Odyssey型紅外熒光掃描成像系統(tǒng)（美國LI-COR公司），PowerPac Basic電泳系統(tǒng)（美國Bio-Rad公司），3111型二氧化碳（CO2）細胞培養(yǎng)箱（美國Thermo Fisher Scientific 公司），SHA-CA型恒溫水浴鍋（常州易晨儀器制造有限公司），1334型無菌操作臺（長沙米淇儀器設備有限公司）等。

1.2 主要藥品與試劑

鬼針草藥材（批號20190604）購自欽州醫(yī)藥有限責任公司，經欽州市第二人民醫(yī)院趙一宇副主任中醫(yī)師鑒定為菊科鬼針草屬植物鬼針草B. polisa L.的地上部分。

蘆丁對照品（批號100080-201711，純度≥98%）購自中國食品藥品檢定研究院;HPD-100大孔吸附樹脂（粒度16～60目，批號20180424）購自天津市海光化工有限公司;棕櫚酸（palmic acid，PA）對照品（批號P104234，純度≥99%）購自阿拉丁試劑（上海）有限公司;DMEM高糖培養(yǎng)基、胎牛血清（批號分別為20181112、20181121）均購自美國Gibco公司;鹽酸二甲雙胍腸溶片（批號20181114，規(guī)格0.5 g）購自貴州圣濟堂制藥有限公司;磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered saline，PBS）、0.25%胰蛋白酶-乙二胺四乙酸（ethylenediamine tetraacetic acid，EDTA）消化液、青鏈霉素混合液、四甲基偶氮唑鹽（methyl thiazolyl tetrazolium，MTT）、二甲基亞砜（dimethyl sulfoxide，DMSO）、10×TBST緩沖液（批號分別為20181129、20181212、20181030、20181025、20181220、20181201）均購自北京索萊寶科技有限公司;BCA蛋白濃度測定試劑盒、SDS-PAGE凝膠配制試劑盒、Western一抗稀釋液、Western二抗稀釋液（批號分別為20181127、20181124、P0256、P0258）均購自上海碧云天生物技術有限公司;葡萄糖測定試劑盒（批號20180205）購自上海榮盛生物藥業(yè)股份有限公司;兔源JNK單克隆抗體、兔源胰島素受體底物1（insulin receptor substrate-1，IRS-1）單克隆抗體（批號分別為9252、2382）均購自美國Cell Signaling Tchnology公司;兔源蛋白激酶C（protein kinase C，PKC）多克隆抗體（批號ab182126）購自英國Abcam公司;小鼠源β-肌動蛋白（β-actin）單克隆抗體（批號10021293）購自武漢三鷹生物技術有限公司;辣根過氧化物酶（horseradish peroxidase，HRP）標記的山羊抗兔免疫球蛋白G（immunoglo- bulin G，IgG）二抗（批號BST16K26C16L54）購自武漢博士德生物工程有限公司;其余試劑均為分析純，水為去離子水。

1.3 細胞株

人肝癌HepG2細胞購自中國科學院上海細胞生物研究所。

2 方法

2.1 TFB的制備及純度測定

參考杜利月等[9]、瞿慧等[10]的研究方法并進行改良：取鬼針草藥材適量，用10倍量的80%乙醇加熱回流提取2次，每次2 h，合并提取液;將提取液過濾、合并、濃縮至無醇味，加適量熱水，超聲促溶，冷卻后抽濾，得濾液。濾液經預處理好的HPD-100大孔吸附樹脂吸附24 h后，先以2倍柱體積的水洗去雜質，再用3倍柱體積的70%乙醇進行洗脫并收集洗脫液，濃縮至無乙醇味，冷凍干燥后即得TFB樣品（每1 kg鬼針草藥材得TFB樣品54 g），采用紫外分析儀于510 nm波長處測得其純度為52.72%（以蘆丁計）。

2.2 TFB和PA對HepG2細胞增殖影響的檢測

將對數(shù)生長期的HepG2細胞，按5×104個/mL接種于96孔培養(yǎng)板中，每孔100 μL，設置實驗組、對照組、空白組。實驗組加入不同質量濃度的TFB[5、10、20、40、80、160 mg/L，以含10%胎牛血清和1%青鏈霉素混合液的完全培養(yǎng)基（后同）配制，濃度參考預實驗結果設置]，對照組加入含0.5%DMSO的完全培養(yǎng)基，空白組加入不含細胞、不含藥物的完全培養(yǎng)基，每孔加入量均為100 μL，每組設置6個復孔。于37 ℃、5%CO2條件（后同）下培養(yǎng)24 h后，每孔加入5 mg/L的MTT溶液10 μL，繼續(xù)培養(yǎng)2～4 h后，吸棄上層液，每孔加入DMSO 150 μL，振蕩脫色10 min，用酶標儀在570 nm波長處測定各孔的光密度（optical density，OD）并計算各組細胞存活率：細胞存活率（%）=（OD實驗組-OD空白組）/（OD對照組-OD空白組）×100%。上述步驟均需避光操作。

取對數(shù)生長期的HepG2細胞，檢測PA對HepG2細胞增殖的影響，PA濃度分別為50、75、100、125、150、175、200 μmol/L（以完全培養(yǎng)基為溶劑，濃度參考預實驗結果設置），每組設置3個復孔，作用時間設為24 h和48 h，其余設置與操作同前。

2.3 HepG2細胞IR模型的建立

取對數(shù)生長期的HepG2細胞，按1×105個/mL接種于96孔培養(yǎng)板中，每孔100 μL，分為對照組和模型組，每組設置3個復孔。待細胞貼壁后，對照組加入完全培養(yǎng)基，模型組加入新配制的含PA 50、75、100、125、150、175、200 μmol/L的完全培養(yǎng)基（濃度參考預實驗結果設置），培養(yǎng)24 h或48 h后，吸棄原有培養(yǎng)基，PBS清洗2次后，換上無酚紅的DMEM高糖培養(yǎng)基，培養(yǎng)24 h后，以酶標儀檢測培養(yǎng)基上清液中的葡萄糖含量并計算葡萄糖消耗量，選擇最優(yōu)的PA濃度和作用時間，以復制PA誘導的HepG2細胞IR模型。嚴格按照試劑盒說明書操作。

2.4 TFB對HepG2細胞IR模型葡萄糖消耗量影響的檢測

實驗設正常組，模型組，TFB低、中、高質量濃度組（20、40、80 mg/L，濃度參考“2.2”項下結果設置），每組設置3個復孔。培養(yǎng)24 h，除正常組外，其余各組參照“2.3”項下最優(yōu)實驗方法，使用PA誘導HepG2細胞復制IR模型。繼續(xù)培養(yǎng)24 h后，以酶標儀檢測葡萄糖含量并計算葡萄糖消耗量。嚴格按照試劑盒說明書操作。

2.5 TFB對HepG2細胞IR模型中IRS-1、PKC、JNK蛋白表達影響的檢測

采用Western blot法檢測。實驗設正常組，模型組，TFB低、中、高質量濃度組（20、40、80 mg/L，濃度參考“2.2”項下結果設置）以及二甲雙胍陽性對照組（1 mmol/L，濃度參考文獻[8]設置），每組設置3個復孔。培養(yǎng)24 h后，除正常組外，其余各組參照“2.3”項下最優(yōu)實驗方法，使用PA誘導HepG2細胞復制IR模型。繼續(xù)培養(yǎng)24 h，吸棄各組培養(yǎng)液，細胞用PBS清洗1次，加入RIPA裂解液150～250 μL，于冰上裂解20～30 min，于4 ℃下以12 000 r/min離心20 min，吸取上清液，用BCA蛋白濃度測定試劑盒進行蛋白含量測定。將各組樣本的蛋白與上樣緩沖液按體積比1 ∶ 3混合后，放入沸水中煮5 min使變性。取變性蛋白100 μg，上樣到10%SDS-PAGE凝膠上進行電泳，電泳后轉移至PVDF膜，用TBST緩沖液封閉，在4 ℃下與IRS-1、PKC、JNK、β-actin一抗（稀釋比例均為1 ∶ 1 000）孵育過夜，用TBST緩沖液洗滌3次，滴加HRP標記的IgG二抗（稀釋比例為1 ∶ 1 000）避光孵育1 h，再次用TBST緩沖液洗滌后，使用紅外熒光掃描成像系統(tǒng)顯影，通過Image J v1.8.0軟件分析，以目標蛋白與內參蛋白（β-actin）灰度值的比值來表示其表達量。

2.6 分子對接實驗

根據(jù)朱冬春等[11]的研究以及TCMSP數(shù)據(jù)庫（https：//tcmspw.com），檢索到槲皮素（quercetin）、槲皮苷（quercitrin）、異槲皮苷（isoquercitrin）、金絲桃苷（hyperoside）、蘆?。╮utin）、木犀草素（luteolin）、奧卡寧（okanin）、海生菊苷（maritimetin）共8個TFB的主要活性成分，利用PubChem數(shù)據(jù)庫（https：//pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/）下載上述成分的三維結構，基于OpenBabel 2.4.1軟件，在MMFF94力場下對成分結構進行優(yōu)化。從RCSB Protein Data Bank數(shù)據(jù)庫（http：//www.rcsb.org/）下載IRS-1（PDB ID：1K3A）、JNK（PDB ID：3V6R）、PKC（PDB ID：2UZP）蛋白晶體的三維結構，使用AutoDockTools 1.5.6軟件進行可旋轉鍵的搜尋與定義，并對蛋白結構進行除去水分子、添加氫原子、添加電荷等處理，以PDBQT格式保存。利用AutoDock Vina 1.1.2分子對接軟件，根據(jù)蛋白配體的位置，確定蛋白活性位點的坐標，其余參數(shù)均采用默認值，選取對接結合能量最低的構象用于分子對接結合模式分析，獲取每個成分的分子對接能量打分值（其絕對值越高，表明對接結構越緊密且穩(wěn)定）[12]，并使用Discovery Studio 2016分子模擬軟件的“可視化功能”對分子對接結構進行可視化展示。

2.7 統(tǒng)計學分析

采用SPSS 22.0軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。計量資料以x±s表示，多組間比較采用方差分析，進一步兩兩比較采用LSD-t檢驗。檢驗水準α=0.05。

3 結果

3.1 TFB對HepG2細胞增殖的影響

與對照組比較，5～80 mg/L的TFB對HepG2細胞的存活率沒有顯著影響（P>0.05），但160 mg/L的TFB可顯著降低細胞的存活率（P<0.05），如圖1所示。因此，以20、40、80 mg/L作為TFB的低、中、高質量濃度進行后續(xù)研究。

3.2 PA對HepG2細胞增殖的影響

與對照組比較，經50、75、100 μmol/L的PA作用24 h后，細胞的存活率均無明顯變化（P>0.05）;經125、150、175、200 μmol/L的PA作用24 h后，細胞的存活率均顯著降低（P<0.01）。經50～200 μmol/L的PA作用48 h后，細胞的存活率均顯著降低（P<0.01）。結果見圖2。

3.3 PA對HepG2細胞葡萄糖消耗量的影響

與對照組比較，經75～200 μmol/L的PA作用24 h后，細胞的葡萄糖消耗量均顯著降低（P<0.05或P<0.01）;經50～200 μmol/L的PA作用48 h后，細胞的葡萄糖消耗量均顯著降低（P<0.01），結果見表1。結合“3.2”項下結果，以75 μmol/L的PA作用24 h誘導HepG2細胞建立IR模型。

3.4 TFB對HepG2細胞IR模型葡萄糖消耗量的影響

與正常組比較，經PA刺激后，模型組細胞的葡萄糖消耗量顯著下降（P<0.05），提示造模成功;與模型組比較，經不同質量濃度的TFB處理后，各組細胞的葡萄糖消耗量均顯著增加（P<0.05或P<0.01），說明TFB改善了IR。結果見圖3。

3.5 TFB對HepG2細胞IR模型中IRS-1、JNK、PKC蛋白表達的影響

與正常組比較，模型組細胞中IRS-1、JNK蛋白的表達量均顯著降低，PKC蛋白的表達量顯著升高（P<0.01）;與模型組比較，TFB低、中、高質量濃度組和二甲雙胍陽性對照組細胞中IRS-1、JNK蛋白的表達量均顯著升高，PKC蛋白的表達量均顯著降低（P<0.05或P<0.01），結果見圖4～圖5。

3.6 8個TFB主要活性成分與IRS-1、JNK、PKC蛋白的分子對接結果

槲皮素、槲皮苷等8個TFB主要活性成分均作用于IRS-1、JNK、PKC蛋白的活性口袋位置，且對接良好，其分子對接能量打分值如表2所示。其中，與IRS-1蛋白分子對接能量打分值絕對值最高的成分為海生菊苷（分子對接能量打分值為-7.9 kcal/mol，1 kcal=4.186 kJ），該成分能夠與IRS-1蛋白的SER979、ASN1110、MET1052、GLU1050氨基酸殘基形成氫鍵，與MET1112、ALA1001、VAL983形成疏水鍵，與TYR8、ARG1109、ASP1056等具有范德華力，其苯環(huán)與MET1112間存在硫-π鍵作用（圖6A）。與JNK蛋白分子對接能量打分值絕對值最高的成分為海生菊苷和蘆?。ǚ肿訉幽芰看蚍种稻鶠?9.3 kcal/mol），海生菊苷能夠與JNK蛋白的ASP207、LYS93氨基酸殘基形成氫鍵，與ILE70、VAL196、LEU206、VAL78形成疏水鍵，與ASN152、ALA151、ASP150等具有范德華力，其苯環(huán)與MET146間存在硫-π鍵作用（圖6B）;蘆丁能夠與JNK蛋白的ASN194、MET149、ASN152氨基酸殘基形成氫鍵，與ILE70、CYS154形成疏水鍵，與LYS93、LEU206、VAL78等具有范德華力（圖6C）。與PKC蛋白分子對接能量打分值絕對值最高的成分為槲皮苷（分子對接能量打分值為-4.9 kcal/mol），該成分能夠與PKC蛋白的ALA291、ASP292、THR155氨基酸殘基形成氫鍵，與HIS154形成疏水鍵，與DSN-1、ALA293、GLU156等具有范德華力（圖6D）。

4 討論

IR是很多疾病的發(fā)病基礎，并與肥胖癥、高血壓、心血管及動脈粥樣硬化等代謝性疾病的發(fā)生和發(fā)展有關[3]。肝臟作為胰島素作用的主要靶器官，是IR發(fā)生的主要部位[13]。在相關研究中，因表面具有高親和力的胰島素受體，HepG2細胞常被用以誘導建立IR模型[14]。在模型誘導方面，高糖、高胰島素、高脂（軟脂酸）單獨使用或聯(lián)合使用是常用的誘導方法[14-15]。本研究采用PA誘導HepG2細胞復制IR模型，在實驗過程中發(fā)現(xiàn)，50、75、100 μmol/L的PA對細胞增殖雖有一定的抑制作用，但這種作用在24 h內并不明顯;同時，PA可顯著降低細胞的葡萄糖消耗量，表明使用PA誘導HepG2細胞可成功復制IR模型。

JNK是絲裂原激活蛋白激酶家族成員，其編碼基因有3種形式，即JNK1、JNK2和JNK3[16]。JNK蛋白是重要的信號分子，在IRS和PI3K信號通路中具有重要的作用，且上述通路及其相關蛋白在葡萄糖轉運中有關鍵作用[17]。研究表明，很多激酶可使IRS的絲氨酸磷酸化，其中就包括JNK和PKC[18]。JNK的作用機制是通過提高IRS-1和IRS-2的水平來抑制JNK活性，從而改善胰島素信號轉導和胰島素敏感性，進而發(fā)揮IR抑制作用[19]。本研究結果顯示，與正常組比較，模型組細胞中IRS-1、JNK蛋白的表達量均顯著降低;與模型組比較，TFB低、中、高質量濃度組以及二甲雙胍陽性對照組細胞中IRS-1、JNK蛋白的表達量均顯著升高。與正常組比較，模型組細胞中PKC蛋白的表達量顯著升高;與模型組比較，TFB低、中、高質量濃度組以及二甲雙胍陽性對照組細胞中PKC蛋白的表達量均顯著降低。本研究發(fā)現(xiàn)，PA誘導HepG2細胞IR模型經不同濃度的TFB干預后，隨TFB濃度的升高，其對細胞中IRS-1、JNK、PKC蛋白表達的調控作用并無明顯的量效關系，筆者推測這可能與TFB對模型細胞作用的敏感性以及細胞的反饋調節(jié)有關。

分子對接是研究小分子配體與靶蛋白大分子之間相互結合作用及性能的手段之一，在藥物研發(fā)中具有重要的價值[20]。為了進一步探究TFB的主要活性成分與IRS-1、JNK、PKC蛋白之間的相互作用，本研究利用了分子對接技術進行分析。結果顯示，海生菊苷、蘆丁和槲皮苷與上述蛋白的對接結合性能較好。組織氧化應激損傷和炎癥反應是機體IR發(fā)生的重要機制之一，可通過調控氧化應激和炎癥反應來改善IR[21]。有研究指出，海生菊苷作為黃酮類化合物，具有抗氧化活性和抗炎作用[22-23]。因此，海生菊苷在改善IR方面具有潛在價值。有研究表明，蘆丁同樣可增強肝臟組織中過氧化氫酶、谷胱甘肽過氧化物酶和超氧化物歧化酶的活性，降低丙二醛的含量，降低糖尿病模型小鼠血清中白細胞介素6、白細胞介素1和腫瘤壞死因子α的水平，減輕其抗氧化應激損傷和炎癥反應，進而發(fā)揮降血糖和改善IR的作用[24]。槲皮苷具有一定的降血糖作用，據(jù)湯小平等[25]的報道，槲皮苷可促進糖尿病模型大鼠的胰島素分泌，并改善其IR。

綜上所述，TFB對HepG2細胞IR有顯著的改善作用，其機制可能與調節(jié)IRS、JNK、PKC蛋白的表達有關;海生菊苷、蘆丁和槲皮苷可能是改善IR的潛在活性成分。

參考文獻

[ 1 ] MATULEWICZ N，KARCZEWSKA-KUPCZEWSKA M. Insulin resistance and chronic inflammation[J]. Postepy Hig Med Dosw（Online），2016，70（0）：1245-1258.

[ 2 ] K?í?KOVá K，CHRUDINOVá M，POVALOVá A，et al. Insulin-insulin-like growth factors hybrids as molecular probes of hormone：receptor binding specificity[J]. Biochemistry，2016，55（21）：2903-2913.

[ 3 ] ARTUNC F，SCHLEICHER E，WEIGERT C，et al. The impact of insulin resistance on the kidney and vasculature[J]. Nat Rev Nephrol，2016，12（12）：721-737.

[ 4 ] 鄭書臣，趙啟韜，桑曉宇，等.改善胰島素抵抗的中藥活性成分及作用機制研究進展[J].山東中醫(yī)雜志，2021，40（1）：94-99.

[ 5 ] 徐俊，潘開瑞，劉方洲.鬼針草總黃酮藥效學研究進展[J].中醫(yī)學報，2017，32（4）：610-612.

[ 6 ] LIU P L，SHI L，CANG X M，et al. CtBP2 ameliorates palmitate-induced insulin resistance in HepG2 cells through ROS mediated JNK pathway[J]. Gen Comp Endocrinol，2017，247：66-73.

[ 7 ] 劉少彬.大葉紫薇總黃酮對脂肪細胞炎癥反應與胰島素抵抗的影響及作用機理[D].湛江：廣東海洋大學，2013.

[ 8 ] 黃桂紅，劉天旭，朱釗銘，等.鬼針草黃酮對HepG2胰島素抵抗細胞PI3K/AKT1/GLUT4信號通路的調控作用[J].實用醫(yī)學雜志，2016，32（24）：3994-3998.

[ 9 ] 杜利月，郭留城.鬼針草總黃酮超聲提取工藝優(yōu)選[J].中國藥業(yè)，2013，22（23）：41-42.

[10] 瞿慧，曹園，方祝元，等.大孔吸附樹脂純化鬼針草總黃酮的工藝優(yōu)選[J].中國醫(yī)藥指南，2013，11（34）：67-69.

[11] 朱冬春，孫旭群.鬼針草中黃酮類化學成分的藥代動力學研究進展[J].安徽醫(yī)藥，2015，19（1）：14-17.

[12] 劉暢，孫磊，聶晶，等.基于網(wǎng)絡藥理學和分子對接法的化濕敗毒方對抗新型冠狀病毒肺炎（COVID-19）分子機制初步研究[J].遼寧中醫(yī)藥大學學報，2021，23（11）：56-63.

[13] SHULMAN G I. Ectopic fat in insulin resistance，dyslipi- demia，and cardiometabolic disease[J]. N Engl J Med，2014，371（12）：1131-1141.

[14] JIANG H W，MA Y J，YAN J Q，et al. Geniposide promotes autophagy to inhibit insulin resistance in HepG2 cells via P62/NF?κB/GLUT?4[J]. Mol Med Rep，2017，16（5）：7237-7244.

[15] MAO Z J，LIN M，ZHANG X，et al. Combined use of Astragalus polysaccharide and berberine attenuates insulin resistance in IR-HepG2 cells via regulation of the gluconeogenesis signaling pathway[J]. Front Pharmacol，2019，10：1508.

[16] GUPTA S，BARRETT T，WHITMARSH A J，et al. Selective interaction of JNK protein kinase isoforms with transcription factors[J]. EMBO J，1996，15（11）：2760-2770.

[17] ZHANG J，OU J，BASHMAKOV Y，et al. Insulin inhibits transcription of IRS-2 gene in rat liver through an insulin response element（IRE）that resembles IREs of other insulin-repressed genes[J]. Proc Natl Acad Sci USA，2001，98（7）：3756-3761.

[18] ZEKE A，MISHEVA M，REMéNYI A，et al. JNK signa- ling：regulation and functions based on complex protein-protein partnerships[J]. Microbiol Mol Biol Rev，2016，80（3）：793-835.

[19] TANG Z Q，ZHANG W L，WAN C H，et al. TRAM1 protect HepG2 cells from palmitate induced insulin resistance through ER stress-JNK pathway[J]. Biochem Biophys Res Commun，2015，457（4）：578-584.

[20] 劉景陶，劉映雪.分子對接在藥物研發(fā)中的應用[J].科技創(chuàng)新與應用，2018（1）：167-168.

[21] VEERAMANI C，ALSAIF M A，AL-NUMAIR K S. Lavatera critica controls systemic insulin resistance by ameliorating adipose tissue inflammation and oxidative stress using bioactive compounds identified by GC-MS[J]. Biomed Pharmacother，2018，106：183-191.

[22] 陳月紅.金盞銀盤化學成分與抗氧化活性的研究[D].濟南：山東中醫(yī)藥大學，2008.

[23] 王曉宇.鬼針草總黃酮第Ⅲ部分化學成分分離、純化、鑒定及其活性研究[D].合肥：安徽醫(yī)科大學，2014.

[24] 潘敬芳，劉云濤，簡磊.蘆丁對糖尿病小鼠降血糖作用研究[J].解放軍藥學學報，2016，32（3）：243-245，268.

[25] 湯小平，施寧川，丁志山，等.槲皮苷對原發(fā)性糖尿病大鼠血糖的作用研究[J].中國藥師，2016，19（8）：1449-1451，1454.

（收稿日期：2021-12-03 修回日期：2022-02-18）

（編輯：曾海蓉）