屎腸球菌對(duì)感染柔嫩艾美耳球蟲肉雞生長(zhǎng)性能和腸道屏障的影響

焦宇洲，楊歡歡，盧 垚，史聰聰，徐曉娟，蔡旭旺*

(1.華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院 農(nóng)業(yè)微生物學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，武漢 430070；2.武漢科緣生物發(fā)展有限責(zé)任公司，武漢 430206)

球蟲病是由艾美耳球蟲感染引起的雞腸道重要寄生蟲病，目前公認(rèn)有7種艾美耳球蟲可以引起雞球蟲病，其中柔嫩艾美耳球蟲(Eimeriatenella)寄生于盲腸，是危害最為嚴(yán)重的一種[1]。E.tenella感染會(huì)降低肉雞生長(zhǎng)性能、引起出血性腹瀉、降低機(jī)體對(duì)其他病原體的抵抗力[2]，發(fā)病率高達(dá)70%，死亡率為30%，嚴(yán)重時(shí)可達(dá)80%，給世界養(yǎng)禽業(yè)造成巨大經(jīng)濟(jì)損失[3]。隨著化學(xué)藥物的不斷使用，耐藥性問題愈發(fā)嚴(yán)重，人們對(duì)綠色健康食品的迫切需求使球蟲病的防控面臨新的挑戰(zhàn)，因此，家禽養(yǎng)殖業(yè)亟需一種安全有效的新型抗球蟲方法。

屎腸球菌是從健康動(dòng)物和人體發(fā)現(xiàn)的一種產(chǎn)乳酸的革蘭陽(yáng)性菌，屬于乳酸菌，是一種對(duì)動(dòng)物健康有益的益生菌，于1989年被美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局(FDA)批準(zhǔn)為可直接進(jìn)行飼喂的益生菌，我國(guó)于1999年確定屎腸球菌可以添加于動(dòng)物飼料中[4]。作為益生菌，屎腸球菌可以促進(jìn)肉雞生長(zhǎng)性能、改善腸道形態(tài)、調(diào)節(jié)腸道微生物組成[5]。近年來的研究顯示，屎腸球菌可以通過調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)、維持腸道完整性來促進(jìn)感染大腸桿菌肉雞的生長(zhǎng)并降低死亡率[6]，還有研究表明，屎腸球菌、動(dòng)物雙歧桿菌和唾液乳桿菌的混合添加可以產(chǎn)生與拉沙里菌素相似的抗混合球蟲的效果[7]。但是目前缺乏關(guān)于屎腸球菌單獨(dú)添加在球蟲病感染中的研究，因此，本研究在飼糧中添加不同水平的屎腸球菌，通過分析雞的日增重、球蟲卵囊排出量、腸道損傷和病理變化、盲腸腸道iNOS和屏障蛋白相關(guān)基因的表達(dá)量來探究屎腸球菌對(duì)感染E.tenella肉雞的有益作用，以期為雞球蟲病的防治提供思路。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物和菌種制備

1日齡羅斯308白羽肉雞，購(gòu)自河南省豐園禽業(yè)有限公司。飼養(yǎng)于甲醛熏蒸消毒的無球蟲房間(籠養(yǎng))，雞籠經(jīng)火焰灼燒滅菌。試驗(yàn)用屎腸球菌(EF1)由武漢科緣生物發(fā)展有限責(zé)任公司保存；鹽霉素購(gòu)自大連榮海生物科技有限公司。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

采用單因素試驗(yàn)設(shè)計(jì)，選取體重相近、健康狀況良好的1日齡白羽肉雞180羽，隨機(jī)分為5組，包括空白對(duì)照組(NC組)、陽(yáng)性對(duì)照組(PC組)、抗生素組(SAL組)和兩個(gè)試驗(yàn)組(EA、EB組)，每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)12羽?？瞻讓?duì)照和陽(yáng)性對(duì)照組均飼喂基礎(chǔ)飼糧，其組成及營(yíng)養(yǎng)水平見表1；抗生素組飼喂在基礎(chǔ)飼糧中添加70 mg·kg-1鹽霉素的試驗(yàn)飼糧；兩個(gè)試驗(yàn)組(EA、EB組)分別飼喂在飼糧中添加1.0×108、2.5×109CFU·kg-1屎腸球菌的試驗(yàn)飼糧。飼喂14 d后，除空白對(duì)照組，其余各組雞經(jīng)口人工感染E.tenella孢子化卵囊(經(jīng)口灌入200 μL，含1.0×105個(gè)孢子化卵囊)。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))

1.3 飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)使用4層的層疊式雞籠進(jìn)行籠養(yǎng)，每籠(70 cm×70 cm×35 cm)12羽，試驗(yàn)重復(fù)均勻分布，雞舍溫度第1周為33～35 ℃，之后每周下降2 ℃。肉雞自由采食和飲水。

1.4 樣品采集

22日齡時(shí)每組隨機(jī)取5羽，斷頸處死后剖開腹腔，剪取約2 cm的盲腸腸段，用預(yù)冷至4 ℃的滅菌PBS將腸內(nèi)容物沖洗干凈，液氮速凍后保存于-80 ℃用于RNA的提取，另取2 cm固定于10%福爾馬林中，用于盲腸組織病理學(xué)檢測(cè)。

1.5 測(cè)定指標(biāo)及方法

1.5.1 生長(zhǎng)性能 1日齡時(shí)稱雛雞體重，將體重相近的雛雞隨機(jī)分組，分組后NC和PC組飼喂基礎(chǔ)飼糧，SAL、EA和EB組分別飼喂含鹽霉素和屎腸球菌的飼糧，分別于第14(感染前)、22(感染第8天)天稱重記錄，計(jì)算平均日增重(ADG)。

1.5.2 球蟲卵囊排出數(shù) 麥克馬斯特法[8](McMaster’s method)：計(jì)數(shù)時(shí)，每份糞便充分混勻后，稱取5 g用燒杯盛裝糞便樣本，先加入30 mL飽和食鹽水，充分?jǐn)噭颍贿^80目鋼篩去除糞便雜質(zhì)，剩余沉淀再加入10 mL飽和食鹽水重復(fù)過篩；將糞液混勻后立即吸取加入到計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)室內(nèi)，靜置5 min；在100倍(10×目鏡，10×物鏡)視野下鏡檢，計(jì)數(shù)兩個(gè)計(jì)數(shù)室的卵囊數(shù)，然后取平均值。計(jì)數(shù)室可容納0.15 mL溶液。計(jì)算公式：克糞便卵囊數(shù)(OPG)=(A×稀釋倍數(shù)×溶液體積)/(0.15×糞便重量)，A=1個(gè)計(jì)數(shù)池中的所有球蟲卵囊數(shù)。卵囊值根據(jù)OPG進(jìn)行評(píng)價(jià)，OPG(×106)在0～0.10、0.11～1.00、1.10～1.90、2.00～5.90、6.0～10.90之間和>11.00時(shí)，分別記為0、5、10、20、30、40分。在感染后第5天開始采集糞便，收集感染后第5、6、7天的糞便分別進(jìn)行卵囊計(jì)數(shù)，最終以其總數(shù)計(jì)算OPG。

1.5.3 盲腸病變?cè)u(píng)分 感染第8天對(duì)各組所有存活雞進(jìn)行安樂死，對(duì)盲腸進(jìn)行病變記分，并將其換算成病變值。盲腸病變記分標(biāo)準(zhǔn)[9]：0分，盲腸壁厚度正常，無肉眼可見病變；1分，盲腸黏膜有點(diǎn)狀出血，盲腸壁不增厚；2分，盲腸內(nèi)容物為黏液，有少許血絲，盲腸壁略增厚，黏膜散在出血點(diǎn)；3分，盲腸內(nèi)有大量血液或有腸芯(血凝塊或灰白色干酪樣的香蕉型塊狀物)，盲腸壁肥厚明顯，盲腸變形；4分，盲腸壁極度增厚，形成干酪樣腸芯，黏膜布滿出血點(diǎn)、出血斑。死亡雞病變也記為4分。記錄各組評(píng)分(Grade)，然后計(jì)算病變值(Lesion score)。Lesion score=各試驗(yàn)組內(nèi)的平均病變記分(Grade)×10。

1.5.4 組織病理學(xué)檢測(cè) 10%福爾馬林中固定的盲腸組織用于蘇木精和伊紅染色(hematoxylin-eosin staining, HE)、阿利新藍(lán)(alcian blue, AB)和過碘酸雪夫染色(periodic acid schiff, PAS)染色。組織塊脫水75%、85%、95%、95%、100%、100%的乙醇各1 h，二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ、二甲苯Ⅲ各20 min，之后再進(jìn)入石蠟Ⅰ、石蠟Ⅱ、石蠟Ⅲ各1 h，將包埋好的蠟塊進(jìn)行切片。HE染色如下：切片依次放入二甲苯Ⅰ 10 min、Ⅱ 10 min、100%、95%、75%的乙醇中各5 min，自來水沖洗5 min，蘇木精染色5 min、流水沖洗5 min，1%的鹽酸酒精分化數(shù)秒、自來水沖洗、0.6%氨水返藍(lán)、流水沖洗、伊紅染色5 min、再75%、95%、100%的乙醇各5 min脫水后置二甲苯Ⅰ、Ⅱ各5 min，滴上中性樹膠封片。使用正置顯微鏡(奧林巴斯BX53，目鏡10×，物鏡40×)進(jìn)行觀察，通過HE染色觀察盲腸結(jié)構(gòu)，AB-PAS染色觀察腸道酸性蛋白和杯狀細(xì)胞。

1.5.5 腸道細(xì)胞因子和蛋白的表達(dá) 用TRIzol法提取總RNA，取100 mg盲腸組織于1.5 mL離心管中，并加入大小鋼珠各1個(gè)，再加入1 mL TRIzol，用組織破碎儀進(jìn)行勻漿，靜置5 min后加入200 μL氯仿，震蕩混勻后靜置3 min，12 000×g4 ℃離心15 min，取500 μL上清液于新的離心管中，加入等體積的異丙醇，渦旋后靜置10 min，12 000×g4 ℃離心10 min，沉淀RNA，棄上清，加入1 mL 75%的乙醇渦旋，7 500×g4 ℃離心5 min，棄上清，置超凈臺(tái)風(fēng)干，加適量DEPC水溶解沉淀，用Nanodrop one測(cè)定RNA濃度，將提取的RNA進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，得到的cDNA保存于-20 ℃。將cDNA用于腸道iNOS，黏蛋白MUC2，緊密連接蛋白Occludin、JAM2和ZO-1基因表達(dá)量的檢測(cè)，參照文獻(xiàn)設(shè)計(jì)所需引物(表2)，并由擎科生物科技有限公司合成。用2-ΔΔCt法計(jì)算目的基因mRNA的相對(duì)表達(dá)量。

表2 qRT-PCR引物

1.5.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析 試驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS 22軟件進(jìn)行分析(SPSS Inc., Chicago, IL, USA)。對(duì)平均體重、增重、病變?cè)u(píng)分和腸道iNOS和MUC2、Occludin、JAM2、ZO-1的表達(dá)量進(jìn)行單因素方差分析，Dunnett’s事后多重比較來分析組間的差異性水平，結(jié)果用“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

2 結(jié) 果

2.1 屎腸球菌對(duì)E. tenella感染肉雞生長(zhǎng)性能的影響

由表3可知，在E.tenella感染前(1～15日齡)，與PC組相比，SAL組肉雞平均日增重沒有明顯變化(P>0.05)，EA和EB組雛雞平均日增重顯著增加(P<0.05)。在15～22日齡(E.tenella感染期間)，PC組肉雞增重顯著低于NC組(P<0.05)，但是相比于PC組，SAL、EB組均能顯著改善E.tenella感染引起的增重減少(P<0.05)，并且屎腸球菌添加組與抗生素添加組ADG無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。除此之外，分析整個(gè)試驗(yàn)期間(1～22日齡)肉雞平均日增重發(fā)現(xiàn)，EB組平均日增顯著高于其他感染組(P<0.05)，日增重達(dá)到NC組日增重的水平。

表3 屎腸球菌對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能的影響

2.2 屎腸球菌對(duì)E. tenella感染肉雞OPG、盲腸病變?cè)u(píng)分和死亡率的影響

E.tenella感染后第3天可以觀察到感染組肉雞精神沉郁，并于感染后第4天發(fā)現(xiàn)有血便排出，第5天血便更加嚴(yán)重。E.tenella感染引起盲腸損傷，甚至死亡(表4)。對(duì)盲腸進(jìn)行剖檢發(fā)現(xiàn)，添加鹽霉素和屎腸球菌雖然能夠降低腸道損傷分?jǐn)?shù)，但是并沒有明顯改善E.tenella感染引起的盲腸損傷(P>0.05)；收集肉雞糞便，進(jìn)行卵囊計(jì)數(shù)發(fā)現(xiàn)，添加鹽霉素和屎腸球菌均可以明顯減少糞便中卵囊數(shù)(P<0.05)，其中EB組OPG最小。除此之外，E.tenella感染導(dǎo)致PC組肉雞平均死亡5羽，相比于PC組，EA組也是平均死亡5羽,SAL組平均死亡僅2羽,EB組僅平均死亡3羽。

表4 屎腸球菌對(duì)E. tenella感染肉雞的OPG、盲腸病變?cè)u(píng)分和死亡數(shù)的影響

2.3 屎腸球菌對(duì)E. tenella感染肉雞盲腸病理?yè)p傷的影響

通過HE染色對(duì)盲腸組織病理學(xué)切片觀察發(fā)現(xiàn)，PC組腸絨毛斷裂、無法觀察到正常的腺體結(jié)構(gòu)、存在明顯的炎性浸潤(rùn)，并且發(fā)現(xiàn)大量寄生蟲寄生(圖1 C和D)。相比于PC組，SAL和EA、EB組腸絨毛結(jié)構(gòu)相對(duì)完整，并且僅發(fā)現(xiàn)少量炎性細(xì)胞和球蟲卵囊。AB-PAS染色在PC組僅可以看到大量卵囊寄生，但NC和SAL、EA、EB組可以觀察到腸道分泌較多的酸性蛋白，并且有較多的杯狀細(xì)胞。

2.4 屎腸球菌對(duì)E. tenella感染肉雞腸道iNOS表達(dá)的影響

誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)在腸道的表達(dá)水平高，則表明腸道中NO水平較高。如圖2所示，E.tenella感染使腸道iNOS表達(dá)水平顯著下降(P<0.05)；但是相比于PC組，SAL、EA和EB組可以顯著提高腸道iNOS的表達(dá)量(P<0.05)，并且屎腸球菌添加呈現(xiàn)出劑量依賴性。

2.5 屎腸球菌對(duì)E. tenella感染肉雞腸道屏障蛋白表達(dá)的影響

由圖3可知，E.tenella感染可以導(dǎo)致腸道黏蛋白MUC2、緊密連接蛋白Occludin、JAM2和ZO-1的表達(dá)量顯著降低(P<0.05)。相比于PC組，SAL組顯著增加MUC2、JAM2和ZO-1的表達(dá)量(P<0.05)，同樣地，屎腸球菌添加組EA和EB也顯著增加黏蛋白MUC2和JAM2的表達(dá)量(P<0.05),但ZO-1與陽(yáng)性對(duì)照組并無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)；如圖3B所示，僅有EB組能顯著增加腸道Occludin的表達(dá)(P<0.05)。

圖3 盲腸中屏障蛋白基因表達(dá)水平

3 討 論

養(yǎng)雞業(yè)是世界上最重要的食物供應(yīng)產(chǎn)業(yè)之一，據(jù)估計(jì)，世界上每年大約生產(chǎn)雞肉900億kg，占人類攝入動(dòng)物蛋白質(zhì)和脂肪來源的1/3以上[10-11]。雞球蟲病是嚴(yán)重危害養(yǎng)殖業(yè)的重要疾病之一，由幾種不同種類的艾美耳球蟲寄生于腸道上皮細(xì)胞引起，E.tenella主要在盲腸上皮細(xì)胞定殖引起腸道損傷，導(dǎo)致排血便、生長(zhǎng)性能降低、腸道微生物失調(diào)、免疫功能遭到破壞等，且極易引起繼發(fā)感染。益生菌指通過攝取適當(dāng)?shù)牧繉?duì)食用者的身體健康能發(fā)揮有益作用的活菌，在宿主體內(nèi)通過調(diào)控腸道微生態(tài)平衡、改善腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)、促進(jìn)飼料攝入和消化、增強(qiáng)宿主免疫功能等方式促進(jìn)宿主的健康[12]，因此推測(cè)，益生菌可能具有一定的抗球蟲效果。生產(chǎn)性能被普遍認(rèn)為是評(píng)價(jià)肉雞特定經(jīng)濟(jì)價(jià)值的方法，已有研究發(fā)現(xiàn)，飼喂含有羅伊乳酸桿菌、屎腸球菌、動(dòng)物雙歧桿菌、乳酸球菌和唾液乳酸桿菌等益生菌添加的飼料會(huì)提高肉雞的生長(zhǎng)性能[13]；張利環(huán)等[14]證明，將干酪乳桿菌、嗜酸乳桿菌和雙歧桿菌以2∶1∶1的比例混合對(duì)肉雞進(jìn)行飼喂，可以顯著提高肉雞平均日增重。當(dāng)肉雞受到E.tenella感染后增重會(huì)顯著降低，飼喂屎腸球菌有利于腸道健康、促進(jìn)腸道消化吸收、改善肉雞生長(zhǎng)性能，減少E.tenella感染引起的損失。在本研究中，屎腸球菌能夠改善肉雞早期生長(zhǎng)性能，顯著提高雛雞1～15 d的平均日增重，并且在整個(gè)試驗(yàn)期間2.5×109CFU·kg-1添加組可以預(yù)防E.tenella感染引起的增重減少，顯著提高肉雞的增重；曹廣添等[15]也發(fā)現(xiàn)，相比于陰性和陽(yáng)性對(duì)照組，肉雞飼喂屎腸球菌可以顯著提高大腸桿菌感染肉雞的生長(zhǎng)性能，這些均表明屎腸球菌對(duì)肉雞具有較好的促生長(zhǎng)作用。根據(jù)上述結(jié)果認(rèn)為，屎腸球菌可以通過改善肉雞生長(zhǎng)性能減少E.tenella感染引起的損失，可分為兩個(gè)階段：一是在感染前促進(jìn)雛雞生長(zhǎng)發(fā)育，促進(jìn)免疫系統(tǒng)的成熟，從而預(yù)防E.tenella感染；其次，還可能在肉雞感染后通過促進(jìn)腸道對(duì)營(yíng)養(yǎng)的消化吸收進(jìn)而減少E.tenella感染導(dǎo)致的損失。

本研究對(duì)感染E.tenella后OPG、死亡率和盲腸損傷進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，屎腸球菌可以顯著減少感染后糞便中的卵囊排出數(shù)、降低死亡率，雖然盲腸病變?cè)u(píng)分沒有明顯降低，但是通過對(duì)組織病理學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)，屎腸球菌添加可以在一定程度上抑制E.tenella感染對(duì)腸道絨毛和腺體的破壞，維持了腸道結(jié)構(gòu)的完整性。已有研究也表明，屎腸球菌可以顯著減少糞便中卵囊數(shù)，減少感染肉雞的死亡率(3.33%～10.00%)[16]，Giannenas等[17]研究也發(fā)現(xiàn)，屎腸球菌可以顯著減少糞便中卵囊數(shù)(P<0.05)，并且具有劑量依賴性，結(jié)論與本試驗(yàn)結(jié)果相同：屎腸球菌添加組的盲腸損傷評(píng)分與感染組沒有顯著性差異，但是可以顯著減少糞便中卵囊數(shù)。iNOS可以誘導(dǎo)精氨酸氧化為NO，協(xié)助巨噬細(xì)胞產(chǎn)生免疫應(yīng)答。飼料添加枯草芽孢桿菌可誘導(dǎo)NO產(chǎn)生，調(diào)控巨噬細(xì)胞的免疫功能[18]，添加鼠李糖乳桿菌可使巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的NO增加，增強(qiáng)宿主免疫功能[19]，充分顯示益生菌可以通過增加NO的產(chǎn)生來增強(qiáng)機(jī)體先天性免疫。本試驗(yàn)則通過檢測(cè)腸道iNOS的表達(dá)水平間接反映出屎腸球菌可以促進(jìn)腸道NO的產(chǎn)生，結(jié)果顯示，E.tenella感染使PC組腸道iNOS表達(dá)水平顯著低于NC組(P<0.05)；EA和EB組同SAL組可以顯著提高腸道iNOS的表達(dá)(P<0.05)，表明在屎腸球菌可以誘導(dǎo)iNOS的高表達(dá)來促進(jìn)腸道NO的產(chǎn)生，從而促進(jìn)宿主免疫反應(yīng)。推測(cè)屎腸球菌可能通過其某種代謝產(chǎn)物直接抑制卵囊的增殖或者是刺激機(jī)體免疫反應(yīng)來阻止卵囊增殖、甚至消滅入侵的卵囊。

腸道屏障和緊密連接是防止病原侵害、維持上皮完整性的主要防御機(jī)制。MUC2是主要的分泌性黏蛋白，在維持腸道表面黏液層結(jié)構(gòu)和防止病原入侵內(nèi)部黏液層中起重要作用[20]。炎癥會(huì)減少腸道分泌MUC2蛋白的杯狀細(xì)胞數(shù)量，導(dǎo)致黏液層得不到補(bǔ)充，增加了進(jìn)一步感染、細(xì)菌移位和炎癥的機(jī)會(huì)。艾美耳球蟲感染可以顯著降低空腸杯狀細(xì)胞的數(shù)量，下調(diào)MUC2基因的表達(dá)[21]，但是乳酸菌可以增加杯狀細(xì)胞數(shù)量，枯草芽孢桿菌可以提高M(jìn)UC2的表達(dá)水平[22]，本研究也得出相同的結(jié)論。腸上皮細(xì)胞在保護(hù)腸道免受病原侵害中扮演重要角色，緊密連接可以調(diào)節(jié)腸道對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收、調(diào)節(jié)內(nèi)穩(wěn)態(tài)、抵御腸道病原體入侵，并且是腸道上皮細(xì)胞健康的重要指標(biāo)。Occludin和JAM蛋白是重要的跨膜蛋白，是緊密連接的主要結(jié)構(gòu)，ZO-1蛋白是連接三者和上皮細(xì)胞肌動(dòng)蛋白的樞紐[23]。混合艾美耳球蟲和產(chǎn)氣莢膜梭菌感染導(dǎo)致空腸中緊密連接蛋白Occludin、JAM2、ZO-1的表達(dá)明顯下調(diào)[24]，而枯草芽孢桿菌添加可以顯著增加腸道JAM2和ZO-1的表達(dá)[25]；壞死性腸炎病例的腸道MUC2、Occludin的表達(dá)明顯減少，但添加解淀粉芽孢桿菌可以顯著增加其表達(dá)量[26]，地衣芽孢桿菌也可以顯著增加球蟲感染后JAM2和Occludin在盲腸的表達(dá)[27]等。這些研究結(jié)果均表明，益生菌可以通過調(diào)節(jié)腸道黏蛋白和緊密連接蛋白的表達(dá)進(jìn)而增強(qiáng)宿主腸道屏障功能，減少病原引起的腸道損傷。與已有研究相似，本研究也發(fā)現(xiàn)屎腸球菌可以顯著提高Occludin和JAM2的表達(dá)量。結(jié)合本研究證實(shí)，屎腸球菌可以通過調(diào)節(jié)腸道屏障蛋白的表達(dá)來維持腸道屏障的正常功能，在一定程度上抵御球蟲入侵，對(duì)腸道組織造成損傷。

4 結(jié) 論

綜上所述，飼糧中添加E.faecium能夠改善肉雞的生長(zhǎng)性能，維持E.tenella感染后盲腸的完整性，通過調(diào)節(jié)腸道iNOS、黏蛋白MUC2、緊密連接蛋白Occludin、JAM2和ZO-1的基因表達(dá)水平增強(qiáng)肉雞腸道屏障功能，減少E.tenella感染引起的死亡和卵囊排出，對(duì)雞球蟲病具有一定的防治作用，可以減少球蟲病帶來的經(jīng)濟(jì)損失，在肉雞生產(chǎn)中具有較大應(yīng)用前景。