血清標(biāo)志物水平、HPV-DNA分型對(duì)早期宮頸癌的診斷價(jià)值

王小杰 張 夢(mèng)

宮頸癌為女性生殖系統(tǒng)中一種常見(jiàn)的惡性腫瘤，早期多無(wú)典型表現(xiàn)，且陰道異常出血、分泌物異常等癥狀易與其他婦科疾病混淆，因此其早期診斷難度較大。宮頸癌的誘因十分復(fù)雜，目前尚未能完全清晰，但已知其形成與人類乳頭狀瘤病毒(HPV)感染相關(guān)[1-2]。HPV具有復(fù)雜的DNA分型，高危DNA亞型易誘發(fā)宮頸癌，而低危DNA亞型多數(shù)僅誘發(fā)宮頸良性病變，其中HPV-DNA 16、58及52亞型位居HPV感染的前三位[3]。血清腫瘤標(biāo)志物：SCC-Ag、CA125、CEA均為宮頸癌臨床診斷中的常用標(biāo)志物，其臨床檢測(cè)具有操作便捷、檢測(cè)結(jié)果量化、重復(fù)性好的優(yōu)勢(shì)，但部分宮頸癌早期患者的血清腫瘤標(biāo)志物水平尚未見(jiàn)顯著升高，因此單純檢測(cè)患者血清腫瘤標(biāo)志物水平來(lái)診斷的準(zhǔn)確率欠佳。本研究對(duì)血清標(biāo)志物水平與HPV-DNA分型聯(lián)合應(yīng)用于早期宮頸癌的診斷價(jià)值進(jìn)行客觀評(píng)估，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取本院2019年1月至2020年6月收治的早期宮頸癌患者102例納入惡性組，選取同期本院收治的102例HPV感染的良性宮頸病變患者納入良性組。診斷分期標(biāo)準(zhǔn)：依據(jù)《宮頸癌及癌前病變規(guī)范化診療指南(試行)》診斷[4]。臨床分期依據(jù)國(guó)際腫瘤學(xué)會(huì)和國(guó)際婦產(chǎn)協(xié)會(huì)(FIGO)制定的宮頸癌分期標(biāo)準(zhǔn)[5]。納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)本院病理化驗(yàn)、醫(yī)學(xué)影像學(xué)檢查、宮頸分泌物HPV化驗(yàn)、實(shí)驗(yàn)室化驗(yàn)，結(jié)合患者臨床表現(xiàn)由本院主治及以上年資?？漆t(yī)師確診的宮頸癌或有HPV感染的良性病變患者；②宮頸癌Ⅰ期患者；③在本院接受治療的宮頸疾病患者；④相關(guān)資料完整的患者；⑤患者自愿參與并簽署知情書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①其他臨床分期的宮頸癌患者；②合并其他惡性腫瘤的患者；③病理化驗(yàn)未能定性的患者。④入組前接受過(guò)相關(guān)治療或有激素類藥物應(yīng)用史的患者。良性組患者年齡為35～65歲，平均(49.65±5.89)歲；體重指數(shù)(BMI)為(22.89±3.74)kg/m2。惡性組患者年齡為36～66歲，平均(49.73±6.02)歲；BMI為(22.47±3.69)kg/m2。2組患者的一般資料無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。

1.2 方法

1.2.1 血清腫瘤標(biāo)志物檢測(cè) 全部患者均于治療前采集空腹肘靜脈血樣3 ml，于無(wú)菌22～26 ℃環(huán)境下避光靜置至少30 min，送入離心機(jī)按3000 r/min速度離心10 min，取得血清，按電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)SCC-Ag、CA125、CEA水平。陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)：CA125>35.00 U/ml，CEA>5.00 ng/L、SCC-Ag>1.5 ng/L。

1.2.2 HPV-DNA分型 采集全部患者治療前的宮頸分泌物，以膜雜交芯片技術(shù)行HPV-DNA分型檢測(cè)，使用HPV-DNA分型試劑盒，包括21種基因分型，其中HR-HPV共15種，LR-HPV共6種，按感染病例數(shù)統(tǒng)計(jì)前三位HPV-DNA分型，第4位及以后統(tǒng)計(jì)合計(jì)病例數(shù)。制備樣本DNA，取樣本保存液0.5 ml，于14000 rpm速度離心1 min后取得DNA，將1 μL的DNA樣本以聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)擴(kuò)增，剩余的DNA樣本于-20℃條件下儲(chǔ)存；PCR擴(kuò)增，將PCR反應(yīng)液與DNA聚合酶、DNA模板充分混勻，行體系25 μL擴(kuò)增反應(yīng)；PCR產(chǎn)物雜交，將20 μL的PCR產(chǎn)物于95℃條件下加熱5 min，之后即刻冰水浴2 min以上，于45℃條件下行雜交實(shí)驗(yàn)，45℃條件下預(yù)熱雜交液，取0.5 ml置入雜交孔內(nèi)，溫育至少2 min雜交。HPV感染以可見(jiàn)清晰的藍(lán)紫色圓點(diǎn)為陽(yáng)性；比對(duì)HPV亞型圖譜，明確HPV亞型，以HPV-DNA分型感染率第1位的亞型為宮頸癌診斷標(biāo)準(zhǔn)。

1.3 研究方法

對(duì)比2組患者的血清腫瘤標(biāo)志物：SCC-Ag、CA125、CEA的表達(dá)水平及HPV-DNA分型結(jié)果，評(píng)估血清SCC-Ag、CA125、CEA表達(dá)水平、HPV-DNA分型及二者聯(lián)合對(duì)早期宮頸癌的診斷價(jià)值，以病理化驗(yàn)結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)分析診斷結(jié)果的一致性，并計(jì)算診斷效能。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 血清腫瘤標(biāo)志物對(duì)比

惡性組患者血清SCC-Ag、CEA、CA125表達(dá)水平均高于良性組(P<0.05)；見(jiàn)表1。

表1 2組血清腫瘤標(biāo)志物對(duì)比

2.2 HPV-DNA分型

惡性組患者HPV檢測(cè)均呈陽(yáng)性，其中HPV-DNA分型16亞型感染率最高為50.98%，良性組患者HPV-DNA分型其他亞型感染率最高為37.25%。惡性組16亞型感染率高于良性組，其他亞型低于良性組(P<0.05)；見(jiàn)表2。

表2 2組患者HPV-DNA分型對(duì)比(例，%)

2.3 一致性分析

與金標(biāo)準(zhǔn)對(duì)比，血清腫瘤標(biāo)志物對(duì)早期宮頸癌的診斷結(jié)果一致性為良(Kappa=0.696)，HPV-DNA分型一致性為差(Kappa=0.343)，二者聯(lián)合一致性為優(yōu)(Kappa=0.804)；見(jiàn)表3。

表3 診斷結(jié)果一致性分析/例

2.4 診斷效能

血清腫瘤標(biāo)志物與HPV-DNA分型聯(lián)合診斷的敏感度、特異性與準(zhǔn)確率均最高，依次為89.22%、91.18%、90.20%；見(jiàn)表4。

表4 診斷效能/%

2.5 診斷價(jià)值

以HPV-DNA分型16型為標(biāo)準(zhǔn)對(duì)早期宮頸癌具有較低診斷價(jià)值(AUC=0.672)，血清腫瘤標(biāo)志物對(duì)早期宮頸癌具有中等診斷價(jià)值(AUC=0.848)，二者聯(lián)合對(duì)早期宮頸癌具有較高診斷價(jià)值(AUC=0.902)；見(jiàn)表5。ROC曲線圖見(jiàn)圖1。

表5 ROC曲線分析統(tǒng)計(jì)值

圖1 診斷價(jià)值ROC曲線分析

3 討論

宮頸癌是指發(fā)生于女性子宮頸及宮頸管處的惡性腫瘤，主要包括：鱗癌、腺癌、腺鱗癌，鱗癌的臨床發(fā)生率可占宮頸癌總數(shù)的90%左右[6-7]。早期宮頸癌通常尚未出現(xiàn)顯著、典型的表現(xiàn)，常規(guī)臨床檢查時(shí)宮頸的外觀、光滑度等均易與宮頸柱狀上皮移位發(fā)生混淆。由于近年來(lái)諸多研究已經(jīng)證實(shí)HPV感染為宮頸癌的一項(xiàng)重要誘因，因此HPV篩查、薄層液基細(xì)胞學(xué)(TCT)等檢查方法已經(jīng)成為了早期宮頸癌篩查的重要方法，但其臨床價(jià)值有限。血清腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)為早期宮頸癌診斷的重要參考指標(biāo)。現(xiàn)階段應(yīng)用于各分期宮頸癌診斷與療效評(píng)估中的血清腫瘤標(biāo)志物約有十余種之多，其能夠量化性反映出惡性腫瘤細(xì)胞的數(shù)量、繁殖、遷移、凋亡等過(guò)程，且具有取材方便，重復(fù)性良好，操作簡(jiǎn)捷、技術(shù)難度低等優(yōu)點(diǎn)。

SCC-Ag是一種對(duì)鱗狀上皮細(xì)胞癌敏感度較高的血清腫瘤標(biāo)志物，由于鱗癌在宮頸癌中占比最高，因此多數(shù)宮頸癌患者血清中SCC-Ag均可見(jiàn)異常升高表達(dá)[8-9]。且SCC-Ag表達(dá)水平與宮頸癌分期、惡性程度等情況均具有相關(guān)性，因此其具有較為廣泛的應(yīng)用領(lǐng)域。CA125在75%左右的宮頸癌患者的血清中可見(jiàn)異常升高表達(dá)[10-11]。CA125對(duì)于腺癌敏感度較高，而腺癌在宮頸癌的占比較低，因此單純CA125檢測(cè)對(duì)宮頸癌的診斷具有一定局限性。但CA125在宮頸癌形成前的3～6個(gè)月時(shí)即在血清中檢測(cè)至異常升高表達(dá)，因此CA125用于早期宮頸癌診斷具有獨(dú)特優(yōu)勢(shì)。CEA的表達(dá)水平與惡性腫瘤的數(shù)量具有明確相關(guān)性，其對(duì)惡性腫瘤的敏感度較高，但其對(duì)于宮頸癌診斷的特異性欠佳[12]。本次研究結(jié)果表明，惡性組患者血清SCC-Ag、CEA、CA125表達(dá)水平均高于良性組；這為血清腫瘤標(biāo)志物診斷早期宮頸癌提供了理論支持。但部分早期宮頸癌患者中血清腫瘤標(biāo)志物尚未見(jiàn)明顯升高，因此其在臨床診斷應(yīng)用中應(yīng)注意結(jié)合其他檢測(cè)方法以提高臨床診斷的準(zhǔn)確率。

HPV感染是宮頸癌病變的一項(xiàng)誘因，但HPV感染后不同DNA分型對(duì)于宮頸癌的誘導(dǎo)作用不盡相同，HPV-DNA 16亞型是其中感染率較高的亞型[13]。不同HPV-DNA分型對(duì)早期宮頸癌的診斷價(jià)值不同，HPV-DNA分型52亞型、58型與16型均為致癌程度較高的亞型。本組資料顯示，早期宮頸癌患者中HPV-DNA分型16亞型感染率最高，而良性疾病患者中其他亞型感染率最高，因此本次研究將16亞型作為早期宮頸癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)果表明，單純HPV-DNA分型與金標(biāo)準(zhǔn)間一致性為差；提示單純HPV-DNA分型不能作為早期宮頸癌的獨(dú)立診斷標(biāo)準(zhǔn)。血清腫瘤標(biāo)志物對(duì)早期宮頸癌的診斷結(jié)果與金標(biāo)準(zhǔn)間一致性為良，而聯(lián)合了HPV-DNA后一致性為優(yōu)；提示血清標(biāo)志物聯(lián)合HPV-DNA分型對(duì)于早期宮頸癌的診斷效果較單純應(yīng)用理想。經(jīng)計(jì)算聯(lián)合診斷的敏感度、特異性與準(zhǔn)確率均高于二者單純應(yīng)用。經(jīng)ROC曲線分析，以HPV-DNA分型16亞型為標(biāo)準(zhǔn)對(duì)早期宮頸癌具有較低診斷價(jià)值，血清腫瘤標(biāo)志物對(duì)早期宮頸癌具有中等診斷價(jià)值，而二者聯(lián)合的診斷價(jià)值為較高；提示血清標(biāo)志物聯(lián)合HPV-DNA分型對(duì)于早期宮頸癌的診斷具有較高的應(yīng)用價(jià)值。

綜上，血清標(biāo)志物水平檢測(cè)與HPV-DNA分型應(yīng)用于早期宮頸癌診斷中，具有取材便捷、重復(fù)性好等優(yōu)勢(shì)。HPV-DNA可作為輔助手段，聯(lián)合血清腫瘤標(biāo)志物水平檢測(cè)應(yīng)用時(shí)可提高早期宮頸癌診斷的準(zhǔn)確率。