HER2、STRT1及PTEN在膀胱尿路上皮細(xì)胞癌中的表達及對預(yù)后的影響

蔣仕春，賀 凱，胡 登，王耀東

膀胱癌為泌尿系統(tǒng)中最常見的惡性腫瘤，具有多中心性、反復(fù)發(fā)作且復(fù)發(fā)率高的特點。臨床認(rèn)為膀胱癌發(fā)生發(fā)展是在多因素共同作用下導(dǎo)致的[1]。膀胱癌主要包括尿路上皮細(xì)胞癌、鱗狀細(xì)胞癌、腺細(xì)胞癌等，其中膀胱尿路上皮細(xì)胞癌最為常見，據(jù)統(tǒng)計其占膀胱癌的90%以上[2]。膀胱癌主要分為非肌層浸潤型膀胱癌和肌層浸潤型膀胱癌，治療方法以手術(shù)切除為主。非肌層浸潤性膀胱癌主要是通過經(jīng)尿道腫瘤電切術(shù)、藥物灌注化療等方法進行治療，而肌層浸潤性膀胱癌多呈結(jié)節(jié)狀生長，早期易發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，預(yù)后差，臨床認(rèn)為根治性膀胱切除術(shù)為有效治療方法[3]。但術(shù)后易出現(xiàn)復(fù)發(fā)，且復(fù)發(fā)后的尿路上皮細(xì)胞癌可能較原發(fā)腫瘤惡性程度更高。因此，若能找出與膀胱癌預(yù)后密切相關(guān)的基因及腫瘤標(biāo)志物等靶點，則可以通過靶向治療，為改善膀胱尿路上皮細(xì)胞癌的預(yù)后提供新的思路[4]。因此，本文對人表皮生長因子受體2(HER2)、沉默信息調(diào)節(jié)因子1(SIRT1)及人第10號染色體缺失的磷酸酶與張力蛋白同源物基因(PTEN)在膀胱尿路上皮細(xì)胞癌患者中的表達及對預(yù)后的影響進行研究，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2018年2月—2019年3月我院收治的124例膀胱尿路上皮細(xì)胞癌作為研究對象，將癌組織標(biāo)本設(shè)為研究組，并選取距癌組織3 cm處的正常組織作為對照組。124例中男76例，女48例；年齡35～79(57.42±6.78)歲。根據(jù)WHO病理分級標(biāo)準(zhǔn)分為Ⅰ級44例，Ⅱ級48例，Ⅲ級32例；根據(jù)UICC-TNM臨床分期標(biāo)準(zhǔn)分為Ta～T1期74例，T2～T4期50例。①納入標(biāo)準(zhǔn)：患者均符合膀胱尿路上皮細(xì)胞癌診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]，且經(jīng)組織病理學(xué)、CT等檢查證實；均在我院醫(yī)治且臨床資料齊全，無缺損或丟失；本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)，且患者及家屬均知情并簽署知情同意書。②排除標(biāo)準(zhǔn)：已發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者；患有其他惡性腫瘤者；患有精神障礙性疾病，無法配合治療者；存在心、肝、腎等嚴(yán)重病變者；中途失訪者。

1.2方法 所有患者行經(jīng)尿道膀胱腫瘤鈥激光剜除術(shù)。收集患者組織標(biāo)本，進行石蠟包埋和切片處理待檢。應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色檢查，組織切片使用二甲苯、乙醇進行脫蠟、脫水處理后，將切片浸于3%過氧化氫中20 min，封閉其內(nèi)源性過氧化物酶活性。高壓枸櫞酸鹽抗原修復(fù)，溫水清洗后使用PBS清洗3次，每次5 min，同時在其中滴加正常山羊血清用以阻斷非特異性的結(jié)合，置入37 ℃孵育箱30 min。添加一抗羊抗人SIRT1多克隆抗體(1∶400)、鼠抗人PTEN單克隆抗體(1∶400)、鼠抗人HER2/neu單克隆抗體(1∶400)，4 ℃條件下過夜，PBS再次清洗，滴加生物素標(biāo)記兔抗羊IgG及PTEN、HER2二抗，同樣置入37 ℃孵育箱10 min，在第3次PBS清洗后，滴加辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉素卵白素工作液孵育10 min，使用二氨基聯(lián)苯胺進行熒光顯色，蘇木精復(fù)染，脫水、干燥后使用中性樹脂封片，用PBS代替一抗作為陰性對照。

1.3觀察指標(biāo) ①觀察兩組HER2、SIRT1及PTEN表達情況。觀察染色情況，PTEN陽性表達于細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核內(nèi)呈橘黃色或棕黃色，SIRT1陽性表達于細(xì)胞核或細(xì)胞質(zhì)內(nèi)呈不均質(zhì)棕色顆粒，HER2陽性表達于細(xì)胞膜呈棕黃色或棕褐色顆粒。當(dāng)癌細(xì)胞出現(xiàn)染色，或其他染色明顯強于背景色時定義為陽性，選擇不同視野進行全面觀察，每個視野中細(xì)胞應(yīng)不低于200個，觀察完成后計算每個視野中陽性細(xì)胞率。陽性細(xì)胞率<5%為陰性，5%～50%為弱陽性，>50%為強陽性，其中弱陽性、強陽性均計為陽性[6]。②分析影響膀胱尿路上皮細(xì)胞癌患者預(yù)后的獨立危險因素。所有患者治療后以復(fù)查、上門、電話等方式對患者進行為期1年的隨訪，記錄是否發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)、死亡等情況。根據(jù)隨訪結(jié)果進行分組，發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)或死亡患者為預(yù)后不良，反之則為預(yù)后良好。

2 結(jié)果

2.1HER2、SIRT1及PTEN表達情況 研究組HER2、SIRT1的陽性表達率高于對照組，PTEN陽性表達率低于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 膀胱尿路上皮細(xì)胞癌組織和癌旁正常組織兩組HER2、SIRT1及PTEN表達情況比較[例(%)]

2.2影響膀胱尿路上皮細(xì)胞癌患者預(yù)后的單因素分析 通過整理患者隨訪資料可知，預(yù)后良好72例，預(yù)后不良52例。預(yù)后良好患者的年齡、性別、吸煙情況與預(yù)后不良患者比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；預(yù)后良好患者的家族史、WHO病理分級、UICC-TNM臨床分期、HER2、SIRT1及PTEN表達情況與預(yù)后不良患者比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05，P<0.01)。見表2。

表2 影響膀胱尿路上皮細(xì)胞癌患者預(yù)后的單因素分析(例)

2.3影響膀胱尿路上皮細(xì)胞癌患者預(yù)后的多因素分析 將上述單因素分析中差異有統(tǒng)計學(xué)意義的相關(guān)因素納入多因素Logistic回歸分析，結(jié)果顯示，有家族史、WHO病理分級Ⅱ～Ⅲ級、UICC-TNM臨床分期T2～T4期、HER2表達陽性、SIRT1表達陽性及PTEN表達陰性均為影響膀胱尿路上皮細(xì)胞癌患者預(yù)后的獨立危險因素(P<0.05，P<0.01)。見表3。

3 討論

膀胱癌的發(fā)病機制一直以來都是醫(yī)學(xué)上關(guān)注的重點，有相關(guān)研究認(rèn)為，膀胱癌是由癌基因活化、抑癌基因失活、細(xì)胞微環(huán)境變化、基因遺傳學(xué)突變等多因素共同作用引起的[7-8]。而膀胱癌作為泌尿系統(tǒng)中常見的惡性腫瘤，90%為尿路上皮細(xì)胞癌[9]。尿路上皮主要是指腎盂、輸尿管、膀胱、尿道表面附著的一層移行上皮，而發(fā)生于上皮相關(guān)的腫瘤便為尿路上皮細(xì)胞癌[10-12]。臨床對尿路上皮細(xì)胞癌的治療以手術(shù)為主，但手術(shù)對患者創(chuàng)傷較大，且并發(fā)癥多，不利于患者預(yù)后恢復(fù)[13-15]。隨著醫(yī)學(xué)上對腫瘤發(fā)病機制的不斷認(rèn)知，臨床認(rèn)為通過靶向藥物治療腫瘤，可有效調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖、凋亡，致使腫瘤細(xì)胞死亡，而不會波及正常組織細(xì)胞[16-18]。臨床上靶向藥物在某些腫瘤治療方面已取得一定的效果，但其在膀胱癌的治療方面進行臨床研究較為困難，主要是由于膀胱癌的發(fā)生、侵襲和轉(zhuǎn)移機制較為復(fù)雜，導(dǎo)致臨床仍無理想標(biāo)志物在膀胱癌的診斷、復(fù)發(fā)、預(yù)后等方面進行評估，因此臨床若能找到與膀胱癌密切相關(guān)的標(biāo)志物，或許可以為臨床治療尿路上皮細(xì)胞癌提供新的手段，以延長患者的生存時間[19-22]。

因此，本文對HER2、SIRT1及PTEN在膀胱尿路上皮細(xì)胞癌中的表達水平進行研究，發(fā)現(xiàn)尿路上皮細(xì)胞癌組織中HER2、SIRT1的陽性表達率高于癌旁正常組織，而PTEN陽性表達率低于癌旁正常組織，這與既往文獻的研究結(jié)果相似[23]。癌組織PTEN陽性表達率低，是由于PTEN屬于高度保守的抑癌基因，參與調(diào)節(jié)細(xì)胞的正常增殖和發(fā)育，可作用于細(xì)胞周期蛋白對細(xì)胞轉(zhuǎn)化進行抑制，并調(diào)控細(xì)胞周期，促進細(xì)胞凋亡，從而抑制腫瘤發(fā)生、發(fā)展、侵襲和轉(zhuǎn)移[24]。因此有臨床研究認(rèn)為，檢測PTEN蛋白的表達可作為評估膀胱癌發(fā)生及預(yù)后的客觀指標(biāo)之一[25]。而尿路上皮細(xì)胞癌組織中HER2、SIRT1陽性表達率高，是由于HER2為原癌基因，具有內(nèi)源性酪氨酸激酶活性，其自身活化后作用于特定的信號蛋白，可激活細(xì)胞信號傳導(dǎo)途徑，從而促進癌細(xì)胞增殖、分化，同時加速正常細(xì)胞轉(zhuǎn)化[26]。SIRT1蛋白通過調(diào)控組蛋白、非組蛋白以及修飾DNA等參與腫瘤的生長、增殖、侵襲、耐藥等多種病理過程；同時SIRT1蛋白能夠通過增高氮氧化合物水平，增加腫瘤血管數(shù)目，加強腫瘤細(xì)胞營養(yǎng)，促進腫瘤細(xì)胞增殖[27]。由此可看出HER2、SIRT1及PTEN均與膀胱尿路上皮癌的發(fā)生密切相關(guān)，可作為膀胱癌診斷和監(jiān)測的指標(biāo)。同時本研究還對影響膀胱尿路上皮細(xì)胞癌患者預(yù)后的危險因素進行分析，發(fā)現(xiàn)HER2、SIRT1及PTEN均為影響膀胱尿路上皮細(xì)胞癌預(yù)后的獨立危險因素。

綜上所述，HER2、SIRT1在膀胱尿路上皮細(xì)胞癌組織中的表達升高，PTEN表達降低，均為影響膀胱尿路上皮細(xì)胞癌預(yù)后的獨立危險因素，可為患者的預(yù)后評估及臨床治療提供新的參考。