非布司他片放大制備工藝及體外一致性評價

張 宇，李寶霞

（1. 遼寧中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院藥劑科，遼寧 沈陽 110032； 2. 山西藥科職業(yè)學院，山西 太原 030031）

非布司他為黃嘌呤氧化酶抑制劑，臨床用于治療高尿酸血癥伴痛風，在降低血尿酸的同時還能改善血脂代謝異常，安全性較好［1-2］。非布司他片由日本武田北美制藥公司研發(fā)，最早上市于美國［3］。體內(nèi)外相關性研究可預測仿制制劑與原研制劑相似的體內(nèi)藥代動力學行為，降低研發(fā)成本，縮短研發(fā)周期［4-5］。本研究中開發(fā)了非布司他片的放大制備工藝，并依據(jù)原國家食品藥品監(jiān)督管理總局發(fā)布的相關指導原則［6-7］，開展了與原研制劑的體外一致性評價?，F(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

708-DS型全自動溶出儀（美國安捷倫公司）；Waters e2695型高效液相色譜儀（美國Waters公司），配有Waters e2695 型四元梯度泵、Waters 2489 型紫外檢測器、自動進樣器；MSA225s-100-DA型分析天平（德國Sartrious公司，精度為0.01 mg）；WBF - 60 型多功能流化床（重慶英格造粒包衣技術有限公司）；ZLZ450型真空整粒機（武漢恒達昌機械設備有限公司）；HF300 型方錐混合機、GZPL40C型高速壓片機（南京邦斯特制藥設備有限公司）；BGB - 75C 型包衣機（宜春萬申制藥機械有限公司）。

1.2 試藥

非布司他對照品（批號為101278-202003，純度為100.0%），十二烷基硫酸鈉（分析純，批號為20197656），均購自中國食品藥品檢定研究院；非布司他片（商品名Feburic < 菲布力 > ，安斯泰來制藥 < 中國 > 有限公司，批號為8155，規(guī)格為每片40 mg）；非布司他自研制劑（批號分別為2012404，2012405，2012406，規(guī)格為每片40 mg）；非布司他原料藥［國內(nèi)某制藥廠，晶型A，粒徑（D90）<50 μm，批號為20198234］；乳糖（200 目，德國美劑樂公司，批號為6397269）；PC - 10 型預膠化淀粉（日本旭化成株式會社，批號為5RJ071）；羥丙基纖維素（日本曹達株式會社，批號為NCD-2993）；SD-711 型交聯(lián)羧甲基纖維素鈉（DuPont Nutrition USA Inc.，批號為3201092c34）；硬脂酸鎂（曲阜市天利藥用輔料有限公司，批號為20182324）；胃溶型薄膜包衣預混劑（上?？房蛋录夹g有限公司，批號02F690004 - CN）；乙腈（色譜純，德國Merck公司，批號為HBN0911）；冰醋酸（分析純，國藥集團化學試劑有限公司，批號為1000208）；水為純化水。

2 方法與結果

2.1 非布司他片放大制備工藝

原輔料過篩：將非布司他微粉化，測得合適的粒徑范圍，其他輔料過40目篩，按處方量稱取，備用。

物料混合：配制6%羥丙基纖維素溶液，依次將乳糖、非布司他、預膠化淀粉加入混合機中混合30 min，得預混料。

流化床制粒：將預混料加入流化床，參數(shù)設置為，進風溫度（80±10）℃，蠕動泵轉速80～120 r/min，風量750～1 200 m3/ h。制粒完畢后，待干燥失重不超過2.0%，停止干燥。干燥結束后繼續(xù)抖袋60 s，收料完畢后，采用固定真空整粒機整粒，篩網(wǎng)孔徑為2.0 mm。

總混：外加輔料交聯(lián)羧甲基纖維素鈉，混合10 min；加入硬脂酸鎂，混合5 min。

壓片：采用直徑為9.0 mm 的圓形雙弧淺凹沖對總混顆粒壓片。控制片芯硬度為40～70 N。

包衣：稱取處方量胃溶型薄膜包衣預混劑適量，緩慢加入純化水中，攪拌均勻（≥45 min），配制12%的包衣液。打開包衣機，包衣前將素片放入包衣鍋內(nèi)，調整噴槍角度，設置主機轉速為2 r/min，預熱磨片1～3 min，取100片素片，稱定質量，設置參數(shù)為，進風溫度（60±10）℃，主機轉速2～5 r/ min，蠕動泵轉速30～600 r/ min，開槍壓力0.20～0.40 MPa，霧化壓力0.20～0.40 MPa，開始包衣，包衣增重約3%，停止噴漿，將主機轉速調至2 r/ min，干燥15～25 min，停止加熱，待冷卻至出風溫度不超過35 ℃，出料，即得非布司他片包衣片。

2.2 溶出介質確定

測定非布司他在不同pH（pH=1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，5.2，5.4，5.6，5.8，6.0，6.2，6.4，6.6，6.8，7.0，8.0）條件下的溶解度，結果非布司他為pH-溶解度依賴藥物，幾乎不溶于水和酸性溶液，溶解度隨pH 的增大而逐漸增大。為建立具備區(qū)分能力的溶出曲線，測定非布司他在水及0.1%，0.3%，0.4%，0.5%，0.6%十二烷基硫酸鈉溶液中的溶解度，各pH 條件平行測定3次，結果非布司他在0.5%十二烷基硫酸鈉溶液中能達到漏槽條件。故最終確定溶出介質為0.5%十二烷基硫酸鈉溶液。

2.3 含量測定

2.3.1 色譜條件

色譜柱：ACE Excel 3 C18-AR柱（50 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈 -pH 3.0 醋酸溶液（50∶50，V/V）；流速：1.0 mL/min；檢測波長：317 nm；柱溫：40 ℃；進樣量：20 μL。

2.3.2 溶液制備

取非布司他對照品適量，精密稱定，加乙腈-水溶液（60∶40，V/V）溶解，稀釋成每1 mL 含非布司他40 μg的對照品溶液。取樣品，加0.5% 十二烷基硫酸鈉溶液900 mL，按2020 年版《中國藥典（四部）》0931 溶出度與釋放度測定法第二法（槳法）測定，設置轉速為50 r/min，分別取溶出10，15，20，30，45，60 min 時的溶液適量，即時補充相同體積0.5% 十二烷基硫酸鈉溶液，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。按處方量稱取不含主藥的輔料，混勻，取細粉300 mg，加0.5%十二烷基硫酸鈉溶液900 mL，超聲（功率為600 W，頻率為40 kHz）10 min，濾過，即得空白輔料溶液。

2.3.3 方法學考察

專屬性試驗：分別吸取2.3.2 項下3 種溶液及0.5%十二烷基硫酸鈉溶液、乙腈-水溶液（60∶40，V/V），按2.3.1項下色譜條件進樣測定。結果供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相同位置處有相應色譜峰，其他溶劑均無干擾，表明方法專屬性良好。色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖1.Reference solution 2.Test solution 3.0.5% Sodium dodecyl sulfate solution 4.Acetonitrile aqueous solution（60∶40，V/V）5.Blank excipient solutionFig.1 HPLC chromatograms

線性關系考察：取非布司他對照品適量，精密稱定，加乙腈 - 水溶液（60∶40，V/V）溶解，稀釋成每1 mL約含非布司他0.1 mg 的線性試驗貯備液。精密量取線性試驗貯備液1，2，5，8，10，15 mL，置100 mL容量瓶中，加乙腈 - 水溶液（60∶40，V/V）稀釋至刻度，搖勻，得10%，20%，50%，80%，100%，150%系列溶液。精密量取上述溶液各20 μL，按2.3.1項下色譜條件進樣測定，記錄色譜圖，以質量濃度（X，μg/mL）為橫坐標、峰面積（Y）為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程Y=1 577 459.94X+38 998.32（r=0.999 9，n=6）。結果表明，非布司他質量濃度在0.99～14.85 μg/mL 范圍內(nèi)與峰面積線性關系良好。

定量限與檢測限確定：取線性關系考察項下線性試驗貯備液適量，逐級稀釋，按2.3.1 項下色譜條件進樣測定 6 次，分別以信噪比（S/N）的 10 倍和 3 倍為定量限和檢測限。結果定量限和檢測限分別為2.59 ng/mL和0.78 ng/mL。

日間精密度試驗：取2.3.2項下溶出60 min 時的供試品溶液適量，由不同分析人員在不同時間采用不同溶出儀，按2.3.1項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積，并計算溶出度。結果平均溶出量為97.73%，RSD為0.93%（n=6）。

穩(wěn)定性試驗：取供試品溶液適量，分別于室溫下放置 2，4，6，8，12，24 h 時按 2.3.1 項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結果的RSD小于1.00%（n= 6），且未發(fā)現(xiàn)其他新的未知峰，表明供試品溶液在室溫下放置24 h穩(wěn)定性良好。

加樣回收試驗：取非布司他對照品20，40，48 mg，精密稱定，分別置200 mL容量瓶中，按處方比例加入空白輔料230 mg，加乙腈 - 水溶液（60∶40，V/V）適量，超聲使溶解，稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5 mL，置100 mL容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，作為低、中、高3個濃度水平的加樣回收試驗溶液，每個濃度水平平行制備3 份。按2.3.1 項下色譜條件進樣測定，結果見表1。

表1 非布司他加樣回收試驗結果（n=9）Tab.1 Results of the recovery test of Febuxostat Tablets（n=9）

2.4 體外一致性評價

取3 批自研制劑與1 批原研制劑，各12 片，溶出介質為0.5%十二烷基硫酸鈉溶液，按2020 年版《中國藥典（四部）》0931 溶出度與釋放度測定法第二法（槳法）測定，比較溶出曲線。采用相似因子（f2）法評價相似性，結果見表2?？梢?，3批自研制劑的f2最低為76，均大于50，表明相似性較好。

表2 自研制劑與原研制劑相似性評價結果Tab.2 Results of similarity evaluation between the homemade preparation and the original preparation

3 討論

3.1 流化床制粒

流化床制?？稍谝慌_設備內(nèi)一步完成混合、制粒、干燥、包衣，具有簡便、機械化程度高的特點。處方中選擇的輔料適合流化床的工藝特點，混合工序能保證顆粒的均勻性，表明本工藝具有良好的可行性，適用于放大生產(chǎn)。物料溫度是制粒的關鍵步驟，溫度過高，霧化后的液滴來不及黏附在粉末上，即被干燥成細粉和細顆粒；溫度過低，粉末表面的浸膏來不及干燥，甚至形成團塊，出現(xiàn)“塌床”現(xiàn)象。本研究中進風溫度為（80±10）℃，蠕動泵轉速為80～120 r/ min，可合理控制物料溫度。原料藥難溶于水，為增加其溶出度，同時擬合原研制劑的溶出行為，將非布司他原料藥經(jīng)微粉化處理，得到 ≤ 25 μm、≤ 50 μm、≤ 75 μm、≤ 100 μm 4 個粒徑的原料藥，分別制成片劑后考察其溶出行為。結果該溶出方法能區(qū)分這4種不同粒徑原料藥生產(chǎn)的制劑。

3.2 溶出度測定方法

本研究中采用高效液相色譜法測定溶出度，同紫外光譜法相比，其測定靈敏，結果準確，更能保證f2測定的準確性。方法學考察結果表明，本方法專屬、靈敏、準確，符合2020年版《中國藥典（四部）》中相關要求［8］。

美國食品藥物管理局發(fā)布的橙皮書中收載的溶出度方法，以pH 6.0 磷酸鹽緩沖液為介質，采用槳法，以50 r/min的轉速進行測定。在該條件下，自研制劑于30 min時溶出超過80%，不具備區(qū)分能力。采用紫外光譜法，以0.5%十二烷基硫酸鈉溶液為溶出介質［9］，區(qū)分能力仍然不夠。非布司他為BCSⅡ類低溶解性-高滲透性藥物，溶出速率是藥物吸收的限速步驟［10］，樣品投入溶出杯后迅速崩解成細小顆粒。故確定了2.2項下的溶出介質，非布司他滿足漏槽條件，且與腸道生理條件下的pH相近，能合理模擬體內(nèi)的溶解環(huán)境。

以不同品牌十二烷基硫酸鈉為溶劑時，溶出度測定結果存在差異［11］，故其品牌不能隨意更換，且批號應盡量一致。按本試驗條件測定原研制劑的溶出度，結果在45～60 min 時溶出量達85%，且曲線上無拐點和突釋，可用于區(qū)分溶出能力。

3.3 原料藥選擇

原料藥的晶型和粒度嚴重影響藥品的溶出，故研究原料藥的晶型十分必要。經(jīng)調研，本品具有6 種晶型［9］，但不同晶型的表觀溶解度和飽和溶解度無顯著差異，且晶型不影響本品的有效性。故可使用適合工業(yè)化生產(chǎn)的晶型A。

3.4 方法評價

本研究中采用流化床工藝制備非布司他片，其與原研制劑的f2均大于50，體外溶出曲線相似，適用于非布司他片的制備。