甘草總黃酮自微乳液對痤瘡和肝損傷的治療研究

嚴慧婕 何金美

（廣州中醫(yī)藥大學第三附屬醫(yī)院藥劑科，廣東 廣州 510360）

甘草總黃酮具有抗炎、保肝、殺菌、調節(jié)免疫反應、抗氧化等[1，2]，在多種臨床疾病中都有很好的治療作用，廣州中醫(yī)藥大學第三附屬醫(yī)院在臨床治療痤瘡和防治肝損傷的過程中也證實了其良好的臨床效果。但甘草總黃酮口服生物利用度低；對痤瘡等表面病癥可通過皮膚給藥，但治標不治本；注射給藥不僅患者順應性低，還涉及安全性等問題。鑒于此，為了提高甘草總黃酮的溶解度并促進吸收，本文將甘草總黃酮以自微乳液形式口服給藥，考察其對痤瘡和肝損傷的療效。

1 材料與方法

1.1 儀器及試劑 磁力攪拌器（艾卡廣州儀器設備有限公司）；超聲波細胞粉碎機（寧波新芝生物科技有限公司）；CP225D 和BS210S 型電子天平（Sartorius，Germany）；控溫搖床（艾卡廣州儀器設備有限公司）。自制甘草總黃酮自微乳液（高劑量及低劑量）；其他試劑為分析純。

1.2 實驗動物 SPF 級雄性昆明種小鼠60 只，體質量20～25 g。

1.3 實驗方法

1.3.1 甘草總黃酮自微乳液的制備 取甘草飲片，粉碎后過20 目篩。80%乙醇回流提取3 次，每次1.5 h，合并提取液，減壓濃縮，所得浸膏中加入8 倍量純水，攪拌后靜置12 h，上清液過M130 大孔樹脂，純水洗除雜質后，用60%乙醇進行洗脫，洗脫液合并、濃縮，備用。取2 g 甘草黃酮提取物、1.65 g 磷脂、16.5 g 油酸乙酯，以適量無水乙醇溶解后，40 ℃旋轉蒸發(fā)去除乙醇，所得溶液加入15 g 吐溫80 和7.5 g 聚乙二醇400，1000 r/min（離心半徑16 cm）室溫條件下攪拌，得甘草總黃酮自微乳化液。

1.3.2 甘草總黃酮自微乳液對痤瘡的藥效考察 SPF 級昆明種小鼠隨機分為空白對照組、甘草總黃酮自微乳液組、陽性對照組，每組10 只。各組小鼠連續(xù)灌胃給藥14 d，每天2 次，每次灌胃劑量如下：甘草總黃酮自微乳液組給予甘草總黃酮自微乳液15 mL·kg-1，空白對照組給予生理鹽水15 mL·kg-1，陽性對照組按1.82 g·kg-1給予金花消痤丸（昆明中藥廠有限公司，國藥準字Z53021120，規(guī)格：4 g×12 袋）。第14 天給藥后，于每只小鼠左耳的固定位置處，兩面均勻涂布0.02 mL 二甲苯，以致其耳部腫脹形成炎癥，右耳則不做處理（作為正常對照）。于涂布二甲苯45 min 后斷頸處死小鼠，繼而分別在左、右耳相同部位用9 mm 打孔器打下圓片（左耳涂布二甲苯處），稱重。以右耳所剪圓片的重量作為參照，腫脹度為左右耳圓片重量差值；腫脹抑制率為：空白對照組平均耳腫脹度與給藥組平均耳腫脹度的差值，與空白組平均耳腫脹度的比值百分數(shù)。進一步剔除小鼠腹部的被毛，取下側腹部的皮脂腺斑組織，立即放入10 倍體積的中性福爾馬林組織固定液中，做HE 染色切片，并在顯微鏡下觀測其組織結構[3]。

1.3.3 甘草總黃酮自微乳液對肝損傷的藥效考察 SPF級昆明種小鼠隨機分為空白對照組、模型組、甘草總黃酮自微乳液組，每組10 只。于末次給藥2 h 后，模型組和甘草總黃酮自微乳液組腹腔注射對乙酰氨基酚（500 mg·kg－1），空白對照組則腹腔注射等體積的生理鹽水15 mL·kg－1；12 h 后各組摘眼球取血，所得血樣在室溫下靜置30 min 后，離心（4500 r/min）10 min，取血清，按照試劑盒說明書中的步驟，分別測定谷草轉氨酶（AST）和谷丙轉氨酶（ALT）的含量；繼而將小鼠斷頸處死，迅速取出肝臟，各肝臟取等同質量混合勻漿，稱取總量10%的肝臟勻漿液，離心（4500 r/min）10 min 后，取上清液，按試劑盒說明書中步驟分別檢測超氧化物歧化酶（SOD）活力和丙二醛（MDA）含量。

2 結果

2.1 甘草總黃酮自微乳液對血清指標及肝組織中相關酶活力的影響 與空白對照組相比較：模型組小鼠的血清中，ALT、AST 活性含量均有顯著升高（P ＜0.01）；小鼠肝組織中的MDA 含量顯著升高（P ＜0.01），SOD 活性顯著降低（P ＜0.01）。以上結果表明小鼠肝損傷模型造模成功。甘草總黃酮自微乳液組與模型組相比，能降低小鼠血清中AST 和ALT 活性（P ＜0.05），降低小鼠肝組織中MDA 含量、升高SOD 活性（P ＜0.01）。見表1、表2。

表1 甘草總黃酮自微乳液對對乙酰氨基酚所致肝損傷的小鼠血清中ALT和AST活性的影響（，U·L-1）

表1 甘草總黃酮自微乳液對對乙酰氨基酚所致肝損傷的小鼠血清中ALT和AST活性的影響（，U·L-1）

注：與空白對照組比較，#P＜0.01；與模型組比較，*P＜0.05。

表2 甘草總黃酮自微乳液對對乙酰氨基酚所致肝損傷小鼠肝組織SOD和MDA活性的影響（）

表2 甘草總黃酮自微乳液對對乙酰氨基酚所致肝損傷小鼠肝組織SOD和MDA活性的影響（）

注：與空白對照組比較，#P＜0.01；與模型組比較，*P＜0.01。

2.2 甘草總黃酮自微乳液對小鼠皮脂腺斑顯微結構的影響 陽性對照組的小鼠皮脂腺體積較大，部分開口于毛囊，結構完整?？瞻讓φ战M的小鼠皮脂腺體積小于模型組且排列較緊密，但大于甘草總黃酮自微乳液組。由以上結果可知，甘草總黃酮乳對皮脂腺組織有一定的影響，可在一定程度上控制皮脂的分泌。見圖1。

圖1 小鼠皮脂腺斑纖維結構

2.3 小鼠耳腫脹抗炎實驗 甘草總黃酮自微乳液組耳腫脹度較空白對照組明顯降低，腫脹抑制率可達37.03%，表明甘草黃酮自微乳液口服對二甲苯所致的小鼠耳腫脹炎癥具有抑制作用。

3 討論

痤瘡為表現(xiàn)在面部、胸部及腹部的慢性炎癥，表觀體現(xiàn)伴有散在性的粉刺、丘疹、膿皰、囊腫，以及皮脂溢出[1]，常在青少年腎上腺及性腺發(fā)育階段發(fā)生；主要與毛囊皮脂腺導管的異常角化、痤瘡丙酸桿菌的異常增殖以及性激素失衡導致的皮脂異常分泌等因素有關。人體在進入青春期后，雄激素中的睪酮水平將迅速升高，這會將促進皮脂腺發(fā)育、產生大量皮脂；并促進毛囊皮脂腺異常角質化，從而引起毛囊皮脂腺導管堵塞、皮脂排出困難，表現(xiàn)為形成微粉刺。如果毛囊中的微生物大量繁殖，則將加重炎癥反應，尤其是痤瘡丙酸桿菌大量繁殖可產生脂酶，而脂酶能夠將皮脂分解為游離脂肪酸，同時趨化炎癥細胞和介質，最終誘導并加重炎癥反應。這些粉刺、丘疹、膿皰、囊腫以及溢出的皮脂，是痤瘡的主要體現(xiàn)。其中發(fā)病的本質原因是激素分泌紊亂，癥狀表現(xiàn)的本質是炎癥。本研究中，小鼠口服甘草總黃酮自微乳液后，可抑制小鼠皮脂腺組織的增生，且具有一定的抗炎效果。

肝臟是藥物代謝的主要器官，同時也是藥物的毒性氧化應激的一個重要靶點。對乙酰氨基酚是一種常見的解熱鎮(zhèn)痛藥物，服用后絕大部分經(jīng)細胞色素P450 代謝后排出體外，少部分的體內轉化物會與肝細胞蛋白結合而引起肝細胞壞死。本文中，對乙酰氨基酚所致肝損傷的小鼠血清ALT、AST 水平升高，甘草總黃酮自微乳灌胃可有效抑制血清中ALT、AST 水平，同時增強抗氧化酶活性，抑制脂質過氧化產物MDA 的生成，推測甘草總黃酮自微乳可通過改善氧化應激及脂質過氧化而發(fā)揮保肝活性。