腦小血管病患者外周血Hcy，VILIP-1和UA水平與病情嚴重程度及認知障礙的相關(guān)性研究

李 璐，張 穎，張春麗，趙殿蘭，劉亞靜，王 輝，張春和

（1.滄州市人民醫(yī)院醫(yī)專院區(qū)a.醫(yī)學(xué)檢驗中心;b 神內(nèi)五區(qū);c.急診科，河北滄州 061000；2.滄州市人民醫(yī)院本部院區(qū)神內(nèi)三區(qū),河北滄州 061000）

腦小血管?。╟erebral small vessel disease，CSVD）發(fā)病率約占腦卒中30%，若未積極處理，極易引起認知障礙，導(dǎo)致病情惡化[1-2]。近年研究證實，血管內(nèi)皮細胞功能中同型半胱氨酸（homocysteine，Hcy）水平變化與CSVD 患者認知障礙、病情程度有關(guān)[3-4]。尿酸（uric acid，UA）屬于抗氧化劑和氧自由基清除劑，UA水平升高提示認知障礙[5]。視椎蛋白樣蛋白1（visinin-like protein 1，VILIP-1）是神經(jīng)細胞內(nèi)高度表達蛋白質(zhì)，新近研究發(fā)現(xiàn)，VILIP-1 可能參與缺血性腦卒中發(fā)病過程，其水平高低提示患者伴有不同程度認知障礙[6]，但尚未見其與CSVD 患者認知障礙、病情程度研究報道，因此本研究檢測CSVD 患者外周血Hcy，VILIP-1和UA水平，分析其與病情程度、認知功能關(guān)系，以期為CSVD 患者認知障礙、病情程度提供有效預(yù)測因子，指導(dǎo)臨床治療。結(jié)果如下。

1 材料與方法

1.1 研究對象 經(jīng)我院倫理委員會審核通過，選取2017年6月～2019年6月滄州市人民醫(yī)院醫(yī)專院區(qū)70 例CSVD 患者作為觀察組，納入標準：①符合CSVD 診斷標準[7]：頭顱MRI 顯示多發(fā)腔隙型腦梗死或腦白質(zhì)變性、腦微出血，頸動脈狹窄＜50%，無皮層下、分水嶺區(qū)域梗死及大血管病變病灶；②入組前1 個月未服用維生素制劑及促智藥物；③患者家屬知曉并簽署同意書。排除標準：①血管性癡呆；②其他原因（顱內(nèi)感染、帕金森?。┧抡J知障礙；③肝、腎等臟器器質(zhì)性病變；④顱腦腫瘤；⑤顱內(nèi)大血管狹窄；⑥入組前1 個月外科手術(shù)史及創(chuàng)傷史；⑦臨床資料不完整。同期選取30例健康體檢者作為對照組。觀察組：男性37 例，女性33 例；年齡40～81（61.03±6.84）歲；其中19 例吸煙史，20 例飲酒史；對照組：男性15 例，女性15 例；年齡41～81（60.47±7.31）歲；其中8例吸煙史，7 例飲酒史。兩組性別、年齡、吸煙史、飲酒史等臨床資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2 儀器與試劑 Hcy，UA 試劑盒購自羅氏診斷產(chǎn)品（上海）有限公司，所用儀器為日本奧林巴斯1700 全自動生化分析儀；VILIP-l 試劑盒購自南京卡米洛生物工程有限公司，所用儀器為美國BIORAD680 酶標儀及美國DEM-3 型自動洗板機；JIDI-20D 臺式多用途高速離心機（廣州吉迪儀器有限公司）；1.5 ml 離心管（北京蘇博生物科技有限公司）。

1.3 方法

1.3.1 檢測方法:入院后24～72h 抽取4ml 空腹肘靜脈血，靜置20min，離心15min(2 500r/min)，取上清液，-20℃保存待測。酶比色法測定外周血Hcy，UA水平。酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定外周血VILIP-l水平。

1.3.2 評估標準:①認知障礙:采用蒙特利認知評估量表（Montreal cognitive assessment，MoCA）[8]評估認知障礙，總分30分，＜26分為認知障礙，≥26分為無認知障礙；②病情程度：參照美國國立衛(wèi)生研究所腦卒中量表（the national institutes of health stroke scale，NIHSS）[9]分為輕度（NIHSS 評分＜4分，n=36）、中度（NIHSS 評分4～15分，n=24）、重度（NIHSS 評分＞15分，n=10）三組；根據(jù)腦動脈搏動指數(shù)（PI）[10]分為輕度（PI ＜1.0，n=24）、中度（PI 1.0～1.5，n=29）、重度（PI ＞1.5，n=17）三組。③高Hcy，VILIP-1，UA：根據(jù)認知障礙患者中外周血Hcy，VILIP-1，UA水平平均值進行界定，分別為28 例，20 例，26 例。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析 通過SPSS22.0 處理數(shù)據(jù)，計量資料以均數(shù)±標準差(±s)表示，行t檢驗，多組間比較用單因素方差分析，兩兩比較用LSD-t檢驗，Spearman,多元線性回歸模型分析外周血各指標與病情程度、認知障礙相關(guān)性，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組外周血Hcy，VILIP-1，UA水平 獨立樣本t檢驗，觀察組外周血Hcy(20.83±6.25μmol/L),VILIP-1(671.05±201.32pg/ml)，UA(352.21±78.66μmol/L)水平均高于對照組(10.05±3.02μmol/L,475.12±142.54pg/ml,241.25±40.86μmol/L)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=8.989,4.831,7.698,均P＜0.05）。

2.2 觀察組不同病情程度外周血Hcy，VILIP-1，UA水平 見表1。觀察組PI及NIHSS 評分重度者外周血Hcy，VILIP-1，UA水平高于PI及NIHSS評分輕中度者，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05）。

表1 觀察組不同病情程度外周血Hcy，VILIP-1，UA水平比較(±s)

表1 觀察組不同病情程度外周血Hcy，VILIP-1，UA水平比較(±s)

項 目PI F P NIHSS 評分FP輕度（n=24）中度（n=29）重度（n=17）輕度（n=36）中度（n=24）重度（n=10）Hcy（μmol/L）15.33±4.6020.58±6.2730.43±5.89 35.749 0.00116.05±4.8221.42±5.9128.33±5.46 23.020 ＜0.001 VILIP-1（pg/ml）502.51±150.75 689.84±206.95 876.94±263.08 16.726 ＜0.001 498.88±149.65 692.27±207.61 941.35±282.41 22.592 ＜0.001 UA（μmol/L）273.46±82.04 360.18±108.05 449.79±134.94 13.545 ＜0.001 280.25±84.08 372.59±111.78 443.70±133.11 12.544 ＜0.001

2.3 觀察組有無認知障礙外周血Hcy，VILIP-1，UA水平 見表3。獨立樣本t檢驗，觀察組認知障礙者Hcy，VILIP-1，UA水平均高于無認知障礙者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05）。

表2 觀察組有無認知障礙外周血Hcy，VILIP-1，UA水平比較(±s)

表2 觀察組有無認知障礙外周血Hcy，VILIP-1，UA水平比較(±s)

項 目有認知障礙（n=40）無認知障礙（n=30）tP Hcy（μmol/L）25.66±7.7114.39±4.327.710 ＜0.001 VILIP-1（pg/ml）811.52±243.56 483.76±145.13 6.565 ＜0.001 UA（μmol/L）389.96±116.99 301.88±90.56 3.4240.001

2.4 外周血Hcy，VILIP-1，UA水平與病情程度、認知障礙相關(guān)性 見表3。外周血Hcy，VILIP-1，UA與PI及NILIP-1 呈正相關(guān)，與認知障礙呈負相關(guān)。

表3 外周血Hcy,VILIP-1,UA水平與PI,NIHSS及認知障礙的相關(guān)性

2.5 多元線性結(jié)果 見表4。在控制年齡、性別等其他因素后，外周血Hcy，VILIP-1，UA與PI，NIHSS 評分、認知障礙顯著相關(guān)（均P＜0.05）。

表4 多元線性結(jié)果

3 討論

腦小血管?。–SVD）是顱內(nèi)小血管病變所致缺血或出血性疾病，早期臨床表現(xiàn)輕微，隨疾病進展，出現(xiàn)認知障礙，甚至癡呆[11]。據(jù)統(tǒng)計，50%血管性認知障礙由CSVD 所致，但由于其癥狀隱匿，早期發(fā)現(xiàn)率及就診率極低[12]。因此，臨床需探索敏感度高、檢測方便指標來評估CSVD 患者認知功能及病情程度。

CSVD 發(fā)病機制尚未闡明，臨床普遍認為與遺傳、代謝、感染、創(chuàng)傷等因素綜合作用所致腦部小血管內(nèi)皮功能病變有關(guān)，可損傷血腦屏障，引起淀粉樣沉積[13]。UA 是腦組織最重要內(nèi)源性抗氧化劑，可抑制過氧亞硝基，產(chǎn)生促氧化作用，減少一氧化氮（Nitric oxide，NO）生成量，導(dǎo)致血管內(nèi)皮細胞功能紊亂，破壞血腦屏障，提示UA 可能參與CSVD 發(fā)病過程，與本研究結(jié)論相符。文獻報道，在控制腦血管病其他危險因素外，高UA 可增加血管性癡呆發(fā)生風(fēng)險[14]。在此基礎(chǔ)上，本研究分析UA水平與認知障礙關(guān)系，發(fā)現(xiàn)觀察組認知障礙者UA水平高于無認知障礙者，且UA水平與認知障礙呈正相關(guān)，與王學(xué)穎等[15]研究觀點相似，究其原因，UA 升高可誘發(fā)腦血管內(nèi)皮細胞炎癥反應(yīng)和氧化應(yīng)激反應(yīng)，損傷血管內(nèi)皮，加劇血腦屏障破壞，致使UA 促氧化作用覆蓋抗氧化作用，從而增加認知障礙發(fā)生風(fēng)險。同時發(fā)現(xiàn)，觀察組PI及NIHSS評分重度者外周血UA水平高于PI及NIHSS 評分輕中度者（均P＜0.05），主要機制為高UA水平可影響內(nèi)皮功能所致腦部小血管硬化，從而導(dǎo)致腦白質(zhì)改變，而腦白質(zhì)改變可影響前額葉-皮質(zhì)下路結(jié)構(gòu)功能，抑制神經(jīng)元間、前額葉皮質(zhì)和皮質(zhì)下中樞信號傳遞，損害CSVD 患者認知功能及神經(jīng)功能。由上述結(jié)果可知，高UA水平對評估CSVD 病情變化具有顯著現(xiàn)實意義，可為CSVD 預(yù)防提供科學(xué)依據(jù)。

Hcy 是人體構(gòu)成中必需氨基酸之一，當前研究證實，高Hcy 是心血管疾病形成的獨立危險因素[16]。高Hcy 可通過氧自由基生成、氧化應(yīng)激、內(nèi)皮祖細胞功能障礙等途徑加劇血管炎性反應(yīng)，損傷內(nèi)皮細胞，參與心腦血管疾病發(fā)生發(fā)展。多項研究結(jié)果表明，Hcy 損傷腦小動脈內(nèi)皮功能損傷所需濃度遠低于其在主動脈產(chǎn)生類似效應(yīng)濃度，提示高Hcy 對CSVD的影響遠遠超過腦大血管病變[17-18]。胡康等[19]進一步研究發(fā)現(xiàn)，血清Hcy水平升高是CSVD 患者認知障礙危險因素。高Hcy 可抑制內(nèi)皮依賴性血管舒張反應(yīng)，降低一氧化氮合成酶免疫活性，損傷內(nèi)皮功能，導(dǎo)致血小板聚集于血管壁破損處，形成血栓；高Hcy 可促進血管平滑肌增長，增加血管內(nèi)膜中層厚度，降低血管擴張能力。PI，NIHSS 是反映CSVD 患者病情變化重要指標，根據(jù)其分值進行分組，便于臨床醫(yī)師準確掌握CSVD 病情進展。本研究數(shù)據(jù)顯示，觀察組PI及NIHSS 評分重度者外周血Hcy水平高于PI及NIHSS 評分輕中度者，且外周血Hcy與PI，NIHSS 評分呈正相關(guān)，提示高Hcy 有望成為CSVD 患者病情程度分級的血清標志物，為臨床診治提供新思路。

VILIP-1 是神經(jīng)元鈣傳感蛋白視錐蛋白家族成員之一，可通過結(jié)合鈣離子參與神經(jīng)信號傳導(dǎo)、細胞死亡途徑及基因表達等病理過程。既往關(guān)于VILIP-1研究多集中于大鼠，多為腦脊液標本，近年研究發(fā)現(xiàn)，缺血性腦卒中患者血清VILIP-1水平呈高表達[20]。本研究推測血清VILIP-1在CSVD中亦呈升高趨勢，故對此展開研究，發(fā)現(xiàn)觀察組外周血VILIP-1水平高于對照組，且認知障礙、PI及NIHSS 評分重度者外周血VILIP-1水平高于無認知障礙、PI及NIHSS評分輕中度者?？紤]與下述兩方面原因有關(guān)，一方面是VILIP-1 參與磷酸化taud 蛋白病理過程，導(dǎo)致表達VILIP-1的神經(jīng)元細胞出現(xiàn)損傷，引起神經(jīng)元細胞功能障礙，出現(xiàn)注意力無法集中、記憶丟失等認知障礙表現(xiàn)，加劇病情進展[21]。另一方面是其可調(diào)節(jié)煙堿型乙酰膽堿受體，增強在細胞表面表達及受體激動劑敏感度，影響鈣離子失活速率及神經(jīng)突觸生長，進而導(dǎo)致神經(jīng)缺損，誘發(fā)認知障礙。Spearman及多元線性回歸分析顯示，外周血VILIP-1與認知障礙呈負相關(guān)，與PI，NIHSS 呈正相關(guān)（P＜0.05），提示檢測外周血VILIP-1水平變化有助于了解CSVD 患者病情變化、認知障礙，指導(dǎo)臨床治療。

綜上所述，CSVD 患者外周血Hcy，VILIP-1，UA水平呈高表達，與病情程度、認知障礙密切相關(guān)，聯(lián)合檢測其水平變化有助于指導(dǎo)臨床治療。