中草藥益生菌復(fù)合物對雞免疫能力的影響

陳瀟飛，譚德俊，林先明，李 蓉，謝駿輝，艾倫強，王國貴，馬 進，向極釬，朱云芬

（1.恩施土家族苗族自治州農(nóng)業(yè)科學(xué)院，湖北恩施 445000；2.湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院中藥材研究所，湖北恩施 445000）

抗生素在養(yǎng)殖過程中起到重要的作用，可以有效防治病菌感染，對微生物病原菌有高效的抑制作用［1］。養(yǎng)殖過程中抗生素被濫用的情況較為常見，較多的抗生素被用來促進飼料轉(zhuǎn)化率的提升，致使畜禽產(chǎn)品中抗生素含量超標(biāo)，危害人類健康。從2020 年1 月1 日起，國家明令禁止在飼料中添加抗生素，對于動物性食品安全的改善起到關(guān)鍵的推進作用。國內(nèi)畜禽養(yǎng)殖抗生素替代品的研究處于初步階段，尋求能控制成本、效果穩(wěn)定、易于實施的替代抗生素新品，是畜牧從業(yè)者所關(guān)注的問題。中國傳統(tǒng)的中草藥在提升免疫、抗病殺菌等方面有著獨到的作用。中草藥具有減少病菌耐藥性、改善腸道菌群的特點［2，3］。作為天然植物源藥用資源，中草藥有效含量較低、作用機制復(fù)雜，制約著中草藥在無抗養(yǎng)殖中的研究應(yīng)用。益生菌對于改善腸道菌群，提高微生物菌群多樣性，增強畜禽抗病能力也較為顯著［4］。本研究利用中草藥和益生菌在提升動物機體免疫方面的獨特優(yōu)勢，結(jié)合不同的調(diào)控機制，對景陽雞實施無抗干涉試驗，為應(yīng)用中草藥益生菌復(fù)合物促進動物機體免疫能力的提升提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

枯草芽孢桿菌（1010CFU/100g）由恩施清江生物工程有限公司提供，土霉素和試驗所需的中草藥由湖北元昌藥業(yè)有限公司提供。

景陽雞由湖北恩施建始縣景陽雞保種場提供，雞大小一致，30 日齡，共計180 羽。

1.2 試驗方法

試驗分為3 組，每組60 羽，分別為空白對照組、抗生素組和中草藥益生菌復(fù)合組（中益組）。中草藥、益生菌復(fù)合比例分組見表1。飼養(yǎng)方式為平養(yǎng)，飼養(yǎng)至180 日齡，每組隨機挑取6 羽，使用肝素鈉抗凝真空采血管頸靜脈采血，隨后進行血常規(guī)測定，同時分離出血清，進行免疫球蛋白G（IgG）、白細胞介素1（IL-1）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-PX）等抗炎因子測定；采集胸腺、脾臟、法氏囊進行器官免疫指數(shù)測定。器官免疫指數(shù)為免疫器官的重量占體重的比例［5］。試驗期間所有試驗雞苗做好程序免疫，并進行系統(tǒng)飼養(yǎng)記錄。

表1 各組添加成分及比例

1.3 數(shù)據(jù)分析

采用SPSS18.0 軟件進行One-way ANOVA 顯著性分析，采用LSD 法進行多重比較。統(tǒng)計結(jié)果采用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”（Mean±SD）的形式表示，以P<0.05 作為差異顯著性判斷標(biāo)準(zhǔn)，P<0.01 作為差異極顯著性判斷標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 組間成活率的比較

根據(jù)飼養(yǎng)記錄，飼養(yǎng)180 d 后成活率如圖1 所示，中益組88.33%>抗生素組83.33%>空白對照組78.33%。

圖1 組間成活率的比較

2.2 器官免疫指數(shù)的比較

中草藥益生菌復(fù)合物對景陽雞免疫器官的發(fā)育起一定作用（表2），主要表現(xiàn)在法氏囊指數(shù)上，中益組和抗生素組法氏囊指數(shù)均高于對照組，中益組與抗生素組無顯著性差異（P>0.05）；在脾臟指數(shù)上，中益組與對照組存在顯著性差異（P<0.05）；三者在胸腺指數(shù)上無顯著性差異（P>0.05）。

表2 各組免疫器官的重量及免疫指數(shù)

2.3 血常規(guī)指標(biāo)的比較

血常規(guī)指標(biāo)見表3，中益組、抗生素組與對照組間白細胞數(shù)無明顯差異（P>0.05）；中益組、抗生素組均與對照組紅細胞數(shù)存在顯著差異（P<0.05）；中益組與抗生素組、對照組血紅蛋白差異顯著（P<0.05）；三者間血小板數(shù)無顯著性差異（P>0.05）。

表3 各組血常規(guī)指標(biāo)測定結(jié)果

2.4 抗炎因子及抗氧化性能的比較

抗炎因子及抗氧化性能的比較見表4，組間差異極顯著（P<0.01），抗炎因子檢測結(jié)果顯示，中益組含量均顯著高于抗生素組（P<0.01）。圖2 直觀地顯示出該種差異。

圖2 IgG、IL-1、SOD、GSH-px 含量測定結(jié)果

表4 各組血清抗炎因子測定結(jié)果 （單位：μg/mL）

3 小結(jié)與討論

中草藥益生菌復(fù)合物作為飼料添加劑應(yīng)用在景陽雞無抗養(yǎng)殖中，能不同程度地提高景陽雞成活率，促進免疫器官發(fā)育，增強其抗炎和抗氧化能力，可以全面提升景陽雞的免疫能力。

3.1 中草藥益生菌復(fù)合物對景陽雞成活率的影響

中草藥提高動物機體抗病能力的研究較多，其作用機理主要集中在抗病毒、殺菌、增強自身體液免疫和細胞免疫［6］，直接反映的結(jié)果就是動物成活率的提高。益生菌對改善動物腸道健康，提升動物免疫能力效果較為顯著。本研究中，飼喂中草藥益生菌復(fù)合組景陽雞的成活率高于抗生素組和對照組，吳詩樵等［7］在對揚州鵝飼喂研究中使用中草藥飼料添加劑，顯著提高了揚州鵝的成活率，本研究的結(jié)果與之相符。中草藥益生菌的配合組方在本試驗中對提升景陽雞的成活效果顯著。

3.2 中草藥益生菌復(fù)合物對景陽雞器官免疫指數(shù)的影響

脾臟是最大的外周免疫器官，當(dāng)動物機體發(fā)生免疫應(yīng)答時，能夠參與吞噬病原菌，同時脾臟還是體液免疫和細胞免疫的應(yīng)答場所［8］。胸腺和法氏囊是重要的中樞免疫器官，而法氏囊屬于禽類特有器官，能夠分化產(chǎn)生淋巴細胞［9，10］。脾臟、胸腺和法氏囊的發(fā)育狀況能夠直接反映出動物機體免疫狀況，免疫器官指數(shù)的高低決定了淋巴細胞的增值能力，機體免疫功能在一定范圍內(nèi)與器官指數(shù)呈正相關(guān)［11］。本研究中，中益組法氏囊指數(shù)高于對照組，與抗生素組相當(dāng)（P<0.05），表明中草藥和益生菌復(fù)合能夠誘導(dǎo)禽類法氏囊發(fā)育，增強景陽雞的免疫能力。

3.3 中草藥益生菌復(fù)合物對景陽雞血常規(guī)指標(biāo)的影響

血常規(guī)指標(biāo)反映了血液中細胞水平的變化。當(dāng)抗原入侵后，抗原通過組織黏膜表面的M 細胞以胞飲方式進入細胞后對紅細胞進行分解破壞，致使紅細胞數(shù)量減少［12］，機體發(fā)生免疫應(yīng)答，刺激白細胞數(shù)急劇增多，吞噬病原菌維護機體的免疫平衡。趙德建［13］在研究小鼠沙門氏菌攻毒試驗中發(fā)現(xiàn)，攻毒后小鼠紅細胞數(shù)減少，白細胞數(shù)增多，進行中藥復(fù)方干涉后，紅細胞數(shù)量逐漸恢復(fù)。這與本試驗結(jié)果相似，景陽雞疫苗免疫后發(fā)生炎癥反應(yīng)，白細胞數(shù)增多，通過中草藥益生菌調(diào)節(jié)，細胞免疫應(yīng)答，抑制抗原激增，防止紅細胞數(shù)下降。

3.4 中草藥益生菌復(fù)合物對景陽雞抗炎因子及酶活性的影響

機體在代謝過程中會生成多種自由基，誘發(fā)脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，致使細胞發(fā)生氧化應(yīng)激損傷［14］。而動物機體內(nèi)存在的超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過氧化物酶可以清除體內(nèi)過多的自由基，維持自由基代謝平衡，修復(fù)氧化損傷。免疫球蛋白是受抗原刺激后由B 細胞分泌的能與對應(yīng)抗原結(jié)合的球蛋白，是參與體液調(diào)節(jié)的重要成分［15］。白細胞介素1 參與免疫調(diào)節(jié)，刺激T 細胞活化促進B 細胞增殖并促使抗體產(chǎn)生，反映了機體的抗炎能力［16］。研究顯示，中益組IgG、IL-1、SOD、GSH-px 含量均極顯著高于對照組和抗生素組（P<0.01）。研究表明，添加中草藥和益生菌的復(fù)合物后，景陽雞的抗氧化能力顯著增強，體液免疫水平顯著升高，機體抗炎能力得到明顯加強。