桂皮醛牙周緩釋制劑制備工藝研究

馮淑萍

（山西省運城市綜合檢驗檢測中心，山西 運城 044000）

牙周疾病是由牙周袋內(nèi)致病微生物引起的局部細(xì)菌感染性疾病。牙周可疑致病菌對多種抗菌藥物敏感，其用藥方法較多，包括漱口、沖洗、系統(tǒng)用藥、局部應(yīng)用緩釋和控釋藥。局部緩釋制劑因可減少全身用藥不良反應(yīng)、局部藥物濃度高、持續(xù)時間長、限制或無系統(tǒng)性攝入等諸多優(yōu)點，現(xiàn)成為牙周病治療的主要用藥方式[1-3]。

桂皮醛是桂皮的主要活性成分，大量藥理研究表明，其具有抗炎、解熱鎮(zhèn)痛、抗腫瘤、抗菌、降糖、抗肥胖等多種藥理活性[4]。桂皮醛在一定藥物濃度范圍內(nèi)無毒害作用，實驗數(shù)據(jù)表明桂皮醛有很強的抑制牙周致病菌的能力[5-6]。但桂皮醛進(jìn)入體內(nèi)后，能很快被代謝[7]，在口腔部位藥物極少，難以達(dá)到治療效果。本文將桂皮醛試制成緩釋制劑，注射于口腔患部，使藥物直接與患部接觸，通過黏膜吸收，發(fā)揮其抗炎鎮(zhèn)痛之功效。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

LC-2010 AHT高效液相色譜儀（紫外可見光檢測器）；A120P型電子天平（德國Sartorius公司）；DL-720超聲儀（浙江象山石浦海天電子儀器廠）；85-2恒溫磁力攪拌器（常州丹瑞實驗儀器設(shè)備有限公司）。

1.2 試藥

桂皮醛（中國食品藥品檢定研究院，批號：110710-201016）；羥丙基纖維素（上海金貿(mào)泰化工有限公司）；聚丙烯酸樹脂IV（沈陽利德爾化工制劑技術(shù)有限公司）；丙二醇（上海玉博生物科技有限公司）；三醋酸甘油酯（宜興市凱欣化工有限公司）；甲醇為色譜純；水為蒸餾水。

2 方法與結(jié)果

2.1 方法學(xué)考察

2.1.1 色譜條件 色譜柱：島津VP-ODS（250 mm×4.6 mm，5 μm），十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動相：乙腈-水（35:75）；檢測波長為290 nm；流速：1.0 ml/min；柱溫：30 ℃；進(jìn)樣量：10 μl。

2.1.2 對照品溶液的制備 精密稱取桂皮醛對照品適量，加甲醇制成每1 ml含桂皮醛80 μg的溶液，作為對照品溶液。

2.1.3 供試品溶液的制備 取生物半透膜，用水洗凈，置生理鹽水中待用。取直徑為1.2 cm的Frank釋放池，兩池之間放半透膜，在膜的一側(cè)供給室放緩釋制劑約0.8 mg，以蒸餾水為溶出介質(zhì)，另一側(cè)接受池中加入蒸餾水15 ml，于37 ℃保溫，并以120 r/min磁力攪拌。分別于24，48，72，96，120 h取出接收池的全部釋放介質(zhì)，并補充新鮮的釋放介質(zhì)。取出的釋放介質(zhì)進(jìn)樣前用0.45 μm微孔濾膜濾過，作為供試品溶液。

2.1.4 線性關(guān)系考察 精密吸取對照品溶液1，2，4，8，12，16，20 μl，注入液相色譜儀，測定峰面積，得回歸方程y=4 974 429.77x+56 475.05，r=0.9996，表明進(jìn)樣量在0.02～2.4 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.1.5 精密度試驗 取對照品溶液，按2.1.1項下色譜條件，重復(fù)進(jìn)樣6次，測定峰面積，RSD為0.3 %（n=6），表明儀器精密度良好。

2.1.6 穩(wěn)定性試驗 取供試品溶液，按2.1.1項下色譜條件分別于0，2，4，8，12，24 h進(jìn)樣，測定峰面積，RSD為1.2 %，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.1.7 重復(fù)性試驗 精密稱取緩釋制劑6份，按2.1.3項下方法制備供試品溶液，測定峰面積并計算體外釋放率，結(jié)果平均體外釋放率為94.21 %，RSD為1.6 %（n=6），表明方法重復(fù)性較好。

2.1.8 加樣回收試驗 精密稱取已知含量的桂皮醛牙周緩釋制劑，精密加入7.5 mg/ml的桂皮醛對照品溶液，按2.1.3項下方法制備供試品溶液，按2.1.1項下色譜條件進(jìn)樣測定，測得平均回收率為99.32 %，RSD為1.2 %（n=9），表明方法回收率較好，結(jié)果見表1。

表1 加樣回收試驗結(jié)果

2.2 桂皮醛牙周緩釋制劑的制備

參考相關(guān)文獻(xiàn)[8-11]，篩選生物降解性良好并適于注射給藥的緩釋物質(zhì)作為載體材料，結(jié)合材料自身性質(zhì)與牙周緩釋制劑的特點進(jìn)行前期預(yù)試驗，確定該制劑的配方組合。通過處方篩選與優(yōu)化，確定桂皮醛牙周緩釋制劑的制備工藝：稱取適量聚丙烯酸樹脂IV和羥丙基纖維素，置干燥燒杯中，加入三醋酸甘油酯，60 ℃下攪拌1 h，使聚丙烯酸樹脂IV和羥丙基纖維素溶解，置于室溫2 h使其自然溶脹。稱取適量桂皮醛，置于干燥燒杯中，加入丙二醇，充分?jǐn)嚢枋蛊淙芙?。之后將溶有聚丙烯酸樹脂IV和羥丙基纖維素的三醋酸甘油酯與溶有桂皮醛的丙二醇混合，攪拌均勻，制得緩釋制劑。

2.3 處方篩選與優(yōu)化

2.3.1 羥丙基纖維素含量對釋放率的影響 制備羥丙基纖維素含量分別為1 %，5 %，10 %，20 %的桂皮醛牙周緩釋制劑，考察處方中不同含量羥丙基纖維素對體外釋藥的影響。分別測定2，12，24，48，72，96，120 h藥物的釋放量，計算桂皮醛累積釋放百分率。結(jié)果見表2。

表2 羥丙基纖維素含量對釋放率的影響

由表2可見，羥丙基纖維素含量對桂皮醛的累積釋放率影響不大，考慮到制劑中其含量過高，將影響主藥桂皮醛的溶解，因此選擇羥丙基纖維素含量不超過5 %，進(jìn)行進(jìn)一步實驗。

2.3.2 聚丙烯酸樹脂IV含量對釋放率的影響 制備聚丙烯酸樹脂IV含量不同（1 %，10 %，15 %，20 %）的桂皮醛牙周緩釋制劑，考察處方中不同含量聚丙烯酸樹脂IV對體外釋藥的影響。分別測定0.5，2，24，48，72，96，120 h藥物的釋放量，計算桂皮醛累積釋放百分率。結(jié)果見表3。

表3 聚丙烯酸樹脂IV含量對釋放率的影響

由表3可見，聚丙烯酸樹脂IV含量為1 %時，釋藥量在2 h達(dá)到80 %，隨聚丙烯酸樹脂IV含量增大，釋藥速率減慢，緩釋效果更加明顯。選擇聚丙烯酸樹脂IV含量15 %～20 %進(jìn)行后續(xù)研究。

2.3.3 正交試驗優(yōu)選制備工藝 選用L9（34）因素水平表，在單因素試驗基礎(chǔ)上，結(jié)合成分性質(zhì)及生產(chǎn)實際確定每個因素的適宜范圍，以聚丙烯樹脂IV含量、羥丙基纖維素含量、桂皮醛含量為試驗因素，各因素水平見表4。以桂皮醛累積釋放率為指標(biāo)，考察三醋酸甘油酯相:丙二醇相=2:1（m:m）條件下，各因素水平對釋放率的影響，結(jié)果見表5～7。

表4 L9（34）正交試驗因素水平表

由表5可見，各因素對累積釋放率的影響大小順序為A＞C＞B，即聚丙烯樹脂IV的含量影響最明顯，其次為桂皮醛載藥量與羥丙基纖維素。由方差分析可知，因素A（聚丙烯樹脂IV含量）對累積釋放率的影響最大，但均無統(tǒng)計學(xué)意義。

表5 正交試驗結(jié)果分析

表6 方差分析結(jié)果

根據(jù)表7結(jié)果，結(jié)合體外釋放率及緩釋性兩個考察指標(biāo)，確定最優(yōu)制備工藝為A2B2C3，即聚丙烯酸樹脂IV、羥丙基纖維素、桂皮醛含量分別為18 %，3 %，3 %，三醋酸甘油酯相:丙二醇相（m:m）為2:1。

表7 累積釋放率測定結(jié)果

3 討論

3.1 聚丙烯酸樹脂IV在三醋酸甘油酯中溶解較緩慢，有可能造成溶解不充分，因此聚丙烯酸樹脂IV比例不宜過高，且粉碎粒度宜小，粉碎時過100目篩，可更好地改進(jìn)實驗效果。

3.2 參考相關(guān)文獻(xiàn)，對可生物降解并適于注射給藥的緩釋材料進(jìn)行優(yōu)化篩選[8-11]，進(jìn)行大量前期預(yù)試驗，確定該緩釋制劑的配方組合。并通過大量前期預(yù)實驗，確定了三醋酸甘油酯相:丙二醇相（m:m）為2:1的最優(yōu)比例；羥丙基纖維素含量對釋藥影響不大，其含量過高，將影響主藥桂皮醛的溶解，因此正交試驗中羥丙基纖維素的濃度不宜太高，選擇1 %～5 %；聚丙烯酸樹脂IV含量增大，緩釋效果更明顯，但當(dāng)聚丙烯酸樹脂IV含量達(dá)20 %時，制劑黏度較大，考慮到該緩釋制劑是灌裝于特制注射器中后注入牙周袋內(nèi)，若黏度過大，制劑不易從注射器中推出，故選擇聚丙烯酸樹脂IV含量不大于20 %。

3.3 試驗優(yōu)選的制備工藝?yán)鄯e釋放率達(dá)90 %以上，釋藥時間較長，符合緩釋制劑的特點。且采用該工藝制備的制劑可用注射器注入牙周袋，使藥物到達(dá)牙周袋的深部, 在牙周袋內(nèi)可緩慢持久地釋放以達(dá)到持續(xù)有效的治療效果。該緩釋制劑具有可生物降解、易于注射和使用方便等優(yōu)點，可為下一步臨床研究提供試驗支撐。