重慶市犬和貓弓形蟲病的血清學調查

徐 斌，董春霞，陳忠瓊，曾 政*，蔣佳利，邵東東

(1.重慶市巴南區(qū)動物疫病預防控制中心，重慶 401320；2.重慶市動物疫病預防控制中心，重慶 401147)

弓形蟲病(Toxoplasmosis)是由剛地弓形蟲(Toxoplasmagongdii)引起的一種人獸共患寄生原蟲病[1]。弓形蟲呈世界性分布，可感染所有溫血動物。人、犬和家畜等是弓形蟲的中間宿主，貓是終末宿主[2]。終末宿主糞便中的卵囊(孢子化后)、終末宿主和中間宿主組織中的速殖子及包囊，均可引起人和動物感染。犬和貓可通過消化道、呼吸道、胎盤、皮膚等途徑感染并傳播弓形蟲病。弓形蟲可引起人和動物的發(fā)熱、生長發(fā)育障礙、流產、死胎等，弓形蟲病甚至會造成免疫功能低下者的死亡[3]。全球人類弓形蟲感染率較高，血清陽性率平均25%～50%，部分國家和地區(qū)甚至高達85%以上[4]。寵物飼養(yǎng)者的弓形蟲陽性率明顯高于普通人群[5-6]。本研究隨機收集了重慶市部分地區(qū)2019年的犬和貓血清樣品，應用ELISA對犬和貓弓形蟲感染情況進行調查[7]，以期為重慶市弓形蟲病的防治提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 血清樣本 789份犬血清樣本于2019年采自重慶市18個區(qū)縣的城市寵物犬和農村家養(yǎng)犬，其中城市寵物犬血清432份，農村家養(yǎng)犬血清357份，76份貓血清樣本采自重慶市渝北區(qū)。

1.1.2 主要試劑 ID Screen?弓形體抗體檢測試劑盒-多種動物(試劑批號：F35)，法國ID-VET公司產品。

1.1.3 主要儀器設備 SunriseTM光吸收酶標儀、HYDROSPEED洗板機-96/384高速洗板機，瑞士帝肯(TECAN)公司產品；恒溫恒濕箱，德國美墨爾特(MEMMERT)公司產品； MultidropTMCombi自動分液器，美國賽默飛世爾(ThermoFisher)公司產品。

1.2 方法

1.2.1 犬和貓弓形蟲抗體檢測方法 試劑使用前恢復至室溫(21℃±5℃)，輕搖顛倒或振蕩混合均勻。血清樣本10倍稀釋：在ELISA反應板上每孔加入90 μL 2號緩沖稀釋液，在A1和B1孔加入10 μL陰性對照，在C1和D1孔加入10 μL陽性對照，剩余每孔加入10 μL待測樣本。室溫孵育45 min±4 min。棄去孔內液體，加入約300 μL洗液(1×)洗板3次，洗板間隔應避免微孔干燥。用3號緩沖稀釋液將濃縮酶標抗體(10×)稀釋10倍為酶標抗體(1×)，每孔加入100 μL酶標抗體。蓋住反應板，室溫孵育30 min±3 min。棄去孔內液體，加入約300 μL洗液(1×)洗板3次。每孔加入100 μL底物溶液，室溫避光孵育15 min±2 min。每孔加入100 μL終止液終止反應。在450 nm波長處讀取吸光值(OD)，具體操作按說明書進行。

1.3 結果判定

計算每個樣本的SP值：S/P%=[(OD樣品-ODNc)/(ODPC-ODNc)]×100%

樣品S/P%≤40%為陰性，40%～50%為可疑，≥50%為陽性。對于犬血清，IDvet驗證顯示，40%～70%的ELISA結果很難被IFAT解讀。因此，IDvet建議犬血清有更寬的可疑區(qū)(40%～70%)。試驗結果中陽性對照平均OD值(ODPC)應大于0.350，陽性和陰性對照平均OD值(ODPC和ODNc)的比值應大于3，否則需重新試驗。

2 結果

2.1 弓形蟲抗體監(jiān)測結果

共檢測渝北區(qū)(城市)寵物貓血清樣本76份，檢出弓形蟲抗體陽性5份，陽性率為6.58%。共檢測18個區(qū)縣犬血清樣本789份，檢出弓形蟲抗體陽性159份，陽性率為20.15%。14個區(qū)縣檢出了犬弓形蟲抗體陽性樣本，陽性率從0～55%，其中有11個區(qū)縣(主城區(qū)5個，渝東北5個，渝東南1個)弓形蟲陽性率達到10%以上(表1)。

2.2 不同來源犬、貓血清弓形蟲抗體檢測結果

犬和貓對弓形蟲都存在一定程度的感染，不同來源的犬弓形蟲感染陽性率都很高，且差異極顯著(P<0.01)，其中，農村家養(yǎng)犬弓形蟲感染陽性率最高為29.97%，其次為城市寵物犬，陽性率為12.04%；城市寵物貓感染陽性率較低，為6.58%(表2)。

表1 重慶部分地區(qū)犬血清弓形蟲抗體檢測結果

表2 重慶市犬貓血清弓形蟲抗體檢測結果

2.3 不同季節(jié)犬血清弓形蟲抗體檢測結果

不同季節(jié)農村犬弓形蟲感染率差異極顯著(P<0.01)。冬春兩季犬血清弓形蟲感染率較低，夏季開始上升，秋季是高峰季節(jié)，陽性率為27.26%。夏季主城區(qū)犬弓形蟲感染率較高，秋冬兩季是渝東北三峽庫區(qū)的犬弓形蟲感染率更高(表3、表4)。

2.4 不同年齡犬、貓血清弓形蟲抗體檢測結果

不同年齡犬、貓弓形蟲感染陽性率差異不顯著(P>0.05)，但犬陽性率從6月齡～1歲開始增加，3歲之后隨著年齡增長，陽性率遞增，10歲以上的陽性率達40%以上(表5)。城市寵物貓在6月齡～6歲年齡段最易感染，6歲以后，感染陽性率則大幅下降(表6)。

3 討論

本試驗共檢測渝北(城市)寵物貓血清樣本76份，檢出弓形蟲抗體陽性5份，陽性率為6.58%，感染率較高。共采集了重慶18個區(qū)縣2019年的城市犬和農村犬共789份血清樣本。789份樣本中，檢出弓形蟲抗體陽性159份，平均陽性率20.15%。其中城市寵物犬弓形蟲抗體陽性率為12.04%，農村家養(yǎng)犬弓形蟲感染陽性率為29.97%，感染率較高。

從地域分布上看，犬弓形蟲感染在主城區(qū)、渝東北三峽庫區(qū)、渝東南武陵山區(qū)中均有感染。渝東北三峽庫區(qū)高于主城區(qū)和渝東南武陵山區(qū)，可能是弓形蟲喜歡溫暖潮濕的低海拔地區(qū)。

表3 不同季節(jié)城市和農村犬血清弓形蟲抗體檢測結果

表4 不同地區(qū)和季節(jié)犬血清弓形蟲抗體檢測結果

表5 不同年齡犬血清弓形蟲抗體檢測結果

表6 不同年齡貓血清弓形蟲抗體檢測結果

不同來源犬、貓血清樣本檢測結果表明，農村家養(yǎng)犬弓形蟲感染率最高。農村家養(yǎng)犬和城市寵物犬弓形蟲抗體陽性率均高于貓，與文獻[8]部分研究結果一致。秋季是犬弓形蟲發(fā)病的高峰季，可能原因是秋季天氣變涼，晝夜溫差大，動物抵抗力下降，犬、貓更易感染弓形蟲，與文獻[9]報道有差異。農村犬弓形蟲陽性率更高，夏季主城區(qū)的犬弓形蟲陽性率較高，可能是由于城市熱島效應，主城區(qū)溫度更高、濕度較大利于弓形蟲生存，同時夏季遛犬時間較長，犬與犬、犬與其他動物感染幾率增多。

6月齡以上的犬、貓弓形蟲抗體陽性率均明顯升高，可能原因是6月以下的幼年犬貓外出少，6月齡后的犬、貓接觸感染弓形蟲的幾率大。犬抗體陽性率高于貓，可能是犬較貓更喜聚集玩耍，外出多，更易接觸感染源。10歲以上犬弓形蟲抗體陽性率在40%以上，增長明顯，可能是犬10歲以后，身體機能逐漸退化，抵抗力下降，更易感染弓形蟲，且弓形蟲抗體一旦產生，能終身存在于動物體內[10]。6歲后的城市寵物貓弓形蟲抗體陽性率大幅度下降，可能是城市寵物貓定期進行了預防處理，感染幾率降低。

本次調查得出城市寵物犬弓形蟲抗體陽性率為12.04%，比文獻[11]中重慶主城區(qū)寵物犬弓形蟲血清抗體陽性檢出率高6.67%。東莞地區(qū)犬弓形蟲抗體陽性率0.66%(4/610)，是報道感染率最低的地區(qū)[12]。而北京、上海地區(qū)犬弓形蟲抗體陽性率均在13%左右。重慶市寵物犬弓形蟲感染率在全國處于較高水平，說明環(huán)境中存在弓形蟲高污染的狀況。

本研究發(fā)現(xiàn)重慶市犬貓弓形蟲感染率較高，有潛在的公共衛(wèi)生安全隱患，應進一步全面監(jiān)測分析，掌握重慶市弓形蟲病的流行規(guī)律，提出預防策略，降低犬貓的感染率，保障人和動物健康。