化橘紅粉末飲片顆粒度適宜性研究

曾樂(lè)

摘要：為了將化橘紅原飲片粉碎分級(jí)處理，研究粉碎度對(duì)質(zhì)量的影響。將化橘紅飲片粉碎成不同粒徑的粉末，分別加相當(dāng)于飲片質(zhì)量15倍的水量，設(shè)置水浴溫度90℃，加熱30 min，將化橘紅內(nèi)柚皮苷的溶出度、高效液相色譜圖譜及浸出物量作為指標(biāo)，考察不同粉粹度的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，2號(hào)樣品飲片粒徑為24～50目時(shí)所含有效成分柚皮苷的溶出度最大（平均為48.50 mg/g），是原樣品0號(hào)（平均為37.77 mg/g）的1.29倍;其次是3號(hào)和4號(hào)樣品，質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為47.72、47.52 mg/g。分析總浸出物測(cè)定結(jié)果發(fā)現(xiàn)，9號(hào)樣品的總浸出物最多，浸膏得率為21.07%;其次是8號(hào)樣品，浸膏得率為18.85%。根據(jù)上面兩項(xiàng)指標(biāo)可知，化橘紅不是粒徑越小越好，而是粉碎度在24～50目時(shí)最佳。對(duì)化橘紅粉末飲片粉碎度進(jìn)行適宜性研究，為化橘紅飲片的實(shí)際應(yīng)用提供借鑒，以期在臨床上更好地發(fā)揮作用。

關(guān)鍵詞：化橘紅;柚皮苷;含量測(cè)定; HPLC;浸出物

化橘紅具有理氣寬中、燥濕化痰的功效[1-2]，主要用于治療風(fēng)寒、咳嗽、痰多、胸悶，可健胃[3-4]?；偌t的成分有黃酮類(lèi)、多糖[5]、香豆素類(lèi)等化合物，包括柚皮苷、芳樟醇[6]及野漆樹(shù)苷等。藥用成分柚皮苷可以改善微血管通透性增強(qiáng)、炎癥性白細(xì)胞游走等狀況，驗(yàn)證了化橘紅抗炎的作用。同時(shí)，對(duì)棉球肉芽腫也有抑制作用。但目前對(duì)化橘紅飲片顆粒度的適宜性研究不多，本研究針對(duì)化橘紅粉末飲片顆粒度進(jìn)行適宜性研究，旨在為化橘紅飲片的臨床應(yīng)用提供借鑒，使其在臨床上發(fā)揮更大的療效。

1 儀器與試藥

1.1 主要儀器

數(shù)顯鼓風(fēng)干燥箱（GZX-9070MBE型，上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠(chǎng)）、數(shù)控超聲波清洗器（KQ-300DB ，昆山市超聲儀器有限公司，功率40 Hz）、高效液相色譜儀（Agilent1260，美國(guó)Agilent公司）、 Agilent ChemStation工作站以及DAD檢測(cè)器（Agilent Technologies Co. Ltd.）。

1.2 試藥

柚皮苷對(duì)照品（H PL C級(jí)，純度不低于98%，批號(hào)： BCTG-0807，江西省中藥固體制劑制造技術(shù)國(guó)家工程研究中心）、醋酸（分析純，西隴化工股份有限公司）、甲醇（色譜純，Dikmapure，DIMA TECHNOLOGY Inc.）。

1.3 藥材收集與前處理

化橘紅飲片[國(guó)藥集團(tuán)馮了性（佛山）藥材飲片有限公司]按照2015年版（一部）《中國(guó)藥典》Ⅱ A“藥材取樣法”稱(chēng)取化橘紅藥材若干克，粉碎后用藥典篩1～9號(hào)篩分。共有10個(gè)同一批次藥材的不同粉碎度樣品，編號(hào)為0～9號(hào)。

2 柚皮苷的含量測(cè)定

2.1 HPLC色譜條件

色譜柱：依利特Sino Chrom ODS-BP 5μm，尺寸為4.6 mm×250.0 mm，柱號(hào)E1922350;流動(dòng)相：甲醇-醋酸-水（35∶4∶61）;檢測(cè)波長(zhǎng)為283 nm，柱溫為25℃，進(jìn)樣量為10μL，流速為1.0 mL/min，理論板數(shù)應(yīng)不低于1500。

2.2 供試品及對(duì)照品溶液的制備

2.2.1 供試品溶液的制備

模擬傳統(tǒng)飲片煎煮方式，0 ～9號(hào)粉末飲片各精確稱(chēng)取4.0000 g，放在100 mL圓底燒瓶中，加入相當(dāng)于飲片質(zhì)量15倍的蒸餾水60 mL稱(chēng)重，設(shè)置90℃恒溫水浴加熱30 min，過(guò)濾，放冷，加水補(bǔ)足質(zhì)量，用0.22μm的有機(jī)濾頭過(guò)濾，取續(xù)濾液300μL放在2 mL的容量瓶中，加甲醇稀釋定容，充分搖勻，用 0.22μm的有機(jī)濾頭過(guò)濾，得到樣品制備液。

2.2.2 對(duì)照品溶液的制備

精確稱(chēng)取柚皮苷對(duì)照品3.00 mg，放在5 mL容量瓶中，加溶劑甲醇溶解，搖勻定容，制成質(zhì)量濃度為0.60 mg/mL的柚皮苷對(duì)照品溶液。

2.3 系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)

精確吸取10μL對(duì)照品溶液和供試品溶液，按2.1中的色譜條件進(jìn)樣，采用外標(biāo)法測(cè)定指標(biāo)成分的含量，在上述條件下，得到柚皮苷色譜峰理論塔板數(shù)不低于6000，分離度均大于1.5。

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 線(xiàn)性關(guān)系考察

精確吸取對(duì)照品溶液2、4、6、8、10、12μL進(jìn)樣，記下峰面積，將對(duì)照品溶液質(zhì)量（μg）作為橫坐標(biāo)，峰面積作為縱坐標(biāo)，得到柚皮苷的線(xiàn)性回歸方程： Y=1263.2X+9.5547，線(xiàn)性范圍：1.2～7.2μg（R2=0.9999）。

2.4.2 精密度實(shí)驗(yàn)

按2.1中的色譜條件，精確吸取柚皮苷對(duì)照品溶液10 μ L，連續(xù)進(jìn)樣5次，記下色譜峰面積分別為7 543.7、7 591.0、7577.4、7641.1、7615.0，計(jì)算柚皮苷的峰面積相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（Relative? Standard Deviation，RSD）為0.49%，表明該儀器的精密度良好。

2.4.3 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

精確稱(chēng)取5份2號(hào)樣品粉末各2.0000 g，按2.2.1中的供試品處理方法制備，按2.1中的色譜條件進(jìn)行分析，記下指標(biāo)成分色譜峰面積分別為6218.3、6212.5、6038.9、6200.6、6 001.8，計(jì)算得到化橘紅中柚皮苷的峰面積RSD為1.71%，表明該方法的重現(xiàn)性良好。

2.4.4 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

按2.2.1中的方法制備2號(hào)樣品，得供試品溶液，分別在0、3、6、9、12、24 h進(jìn)行測(cè)定，記下色譜峰面積分別為6 275.7、6270.5、6272.3、6275.8、6224.9、6287.6，計(jì)算得到柚皮苷的峰面積RSD為0.35%，表明樣品在24 h內(nèi)穩(wěn)定性較好。

2.4.5 加樣回收實(shí)驗(yàn)

精確稱(chēng)取6份2號(hào)樣品粉末各200.00 mg，分別加入一定量的柚皮苷對(duì)照品，按2.2.1中的方法制備樣品溶液，按2.1中的色譜條件進(jìn)行色譜分析，根據(jù)測(cè)得量與加入量計(jì)算回收率，結(jié)果如表1所示，計(jì)算得到平均回收率為99.50%，RSD為1.38%，表明柚皮苷的回收率符合實(shí)驗(yàn)要求，本實(shí)驗(yàn)方法的準(zhǔn)確性良好。

2.5 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

分別精確稱(chēng)取0～9號(hào)不同粉碎度的化橘紅粉末樣品適量，按2.2.1中的方法制備供試品溶液，再按2.1中的色譜條件測(cè)定各樣品中柚皮苷的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，結(jié)果如表2所示。

3 化橘紅粉末飲片浸出物的測(cè)定

3.1 實(shí)驗(yàn)方法

分別精確稱(chēng)取0～9號(hào)化橘紅飲片4.0000 g，每組各取3份放在100 mL圓底燒瓶中，加入相當(dāng)于飲片質(zhì)量15倍的蒸餾水60 mL稱(chēng)重，90℃水浴恒溫加熱提取30 min，放冷稱(chēng)重，加水補(bǔ)足質(zhì)量，過(guò)濾，濾液置于﹣20℃的冰箱中冷凍5～6 h，再轉(zhuǎn)移至﹣80℃的環(huán)境中冷凍24 h，干燥，得水提浸出物，稱(chēng)定質(zhì)量。

3.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

精確稱(chēng)定0～9號(hào)化橘紅粉末飲片干燥浸出物量，結(jié)果如表3所示。

4 結(jié)語(yǔ)

經(jīng)測(cè)定，化橘紅粉末飲片的質(zhì)量分?jǐn)?shù)從大到小為2號(hào)、4號(hào)、3號(hào)、8號(hào)、9號(hào)，證明不同粉碎度對(duì)成分的溶出度有一定的影響。采用冷凍干燥法測(cè)定化橘紅粉末飲片水提取浸膏，得率高的是9號(hào)、8號(hào)，其次是0～2號(hào)?？傮w趨勢(shì)是，隨著飲片粉碎度的提高，化橘紅粉末飲片浸出物的質(zhì)量分?jǐn)?shù)提高，但在過(guò)濾取濾液的過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，0～2號(hào)樣品的粉碎度適中，不易堵塞濾紙，過(guò)濾效率較高，同時(shí)顆粒度較大、吸附溶劑量小，損失量也相應(yīng)減小，所以得率較高。3號(hào)、4號(hào)樣品的固液分離困難，吸附損失量大，過(guò)濾慢、效率低。粉碎后的中藥飲片表面積增大，提取時(shí)容易出現(xiàn)糊化、結(jié)焦、固液分離困難等問(wèn)題，也會(huì)增加淀粉、膠質(zhì)類(lèi)等成分的溶出，如7～9號(hào)樣品的浸出物得率明顯高于其他組。綜合考慮柚皮苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)測(cè)定和浸出物測(cè)定實(shí)驗(yàn)結(jié)果，建議選擇2號(hào)樣品（粉碎度在24～50目）比較合適。

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