血清lncRNA TUG1和miR-542-3p表達(dá)與急性腦梗死患者病情和預(yù)后的關(guān)系

王 瑞 姜曉霞 裴雯雯 劉丹丹 張春燕

臨汾市人民醫(yī)院，山西 臨汾041000

急性腦梗死（acute cerebral infarction，ACI）是一種嚴(yán)重危害全球人類健康的缺血性腦血管疾?。?-2］。近年來(lái)ACI 患病率和致殘率呈上升趨勢(shì)，給社會(huì)和家庭帶來(lái)嚴(yán)重的負(fù)擔(dān)［3］，積極尋找能夠預(yù)測(cè)疾病嚴(yán)重程度和預(yù)后的特異性標(biāo)志物具有重要意義。長(zhǎng)鏈非編碼RNA ?；撬嵘险{(diào)基因1（long non-coding RNA taurine up-regulated gene 1，LncRNA TUG1）最早被發(fā)現(xiàn)與視網(wǎng)膜發(fā)育關(guān)系密切［4］。LncRNA TUG1過(guò)表達(dá)在動(dòng)脈粥樣硬化和缺血性腦卒中等疾病中發(fā)揮重要作 用［5-6］。miR-542-3p 是 一 種 內(nèi) 源 性miRNA，是miR-542 亞型之一［7］。miR-542-3p 可在正常腦組織中表達(dá)，在人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞中表達(dá)降低，可抑制細(xì)胞的侵襲及遷移［8］，推測(cè)其可能也參與急性腦梗死的發(fā)展進(jìn)程。生物信息學(xué)分析顯示miR-542-3p中存在與lncRNA TUG1 互補(bǔ)結(jié)合的核酸序列。目前l(fā)ncRNA TUG1、miR-542-3p 與ACI 嚴(yán)重程度及預(yù)后之間的關(guān)系研究較少。本研究旨在探討lncRNA TUG1、miR-542-3p 在ACI 患者血清中的表達(dá)與疾病程度和預(yù)后的相關(guān)性。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象選取2020-01—2021-12 在臨汾市人民醫(yī)院就診并確診為ACI 的患者174 例（研究組），其中男85 例，女89 例，年齡（66.70±6.62）歲。選取150 例健康者為對(duì)照組，其中男80 例，女70 例，年齡（67.24±6.35）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）診斷符合《中國(guó)急性缺血性腦卒中診療指南2018》［9］中的標(biāo)準(zhǔn)；（2）所有患者均經(jīng)頭顱CT/MRI 確認(rèn)為腦梗死；（3）發(fā)病后24 h 內(nèi)入院；（4）首次發(fā)病。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）有惡性腫瘤、痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎、腎臟病、全身感染或自身免疫性疾病史者；（2）合并其他嚴(yán)重疾?。ㄈ缂毙孕募」Ｋ馈⒑粑ソ?、腎衰竭、休克、昏迷、敗血癥）者；（3）發(fā)病后7 d 內(nèi)死亡或未完成90 d 隨訪者；（4）意識(shí)障礙、失語(yǔ)、癡呆患者。本研究所有對(duì)象均征得患者及家屬知情同意，符合《世界醫(yī)學(xué)協(xié)會(huì)赫爾辛基宣言》。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集及臨床指標(biāo)檢測(cè)：ACI 患者于入院當(dāng)日，對(duì)照組于體檢當(dāng)日清晨采集空腹靜脈血5 mL，4 ℃、3 000 r/min離心20 min，分離血清標(biāo)本，—80 ℃保存?zhèn)溆?。采用生化分析儀器檢測(cè)甘油三酯（TG）、總膽固醇（TC）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）水平。采用常規(guī)血糖儀檢測(cè)血糖，電子血壓計(jì)測(cè)量收縮壓、舒張壓。

1.2.2 實(shí)時(shí)熒光定量PCR 法檢測(cè)血清lncRNA TUG1、miR-542-3p水平：采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)血清lncRNA TUG1、miR-542-3p的表達(dá)水平。采用miRNeasy血清高級(jí)試劑盒（Qiagen）提取總RNA，在制造商的指導(dǎo)下用iScriptTMcDNA Synthesis Kit（Bio-Rad）進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，按照制造商的指導(dǎo)使用THUNDERBIRD?SYBR?qPCR Mix（Toyobo）進(jìn) 行qPCR。采用2-△△CT法對(duì)lncRNA TUG1、miR-542-3p 的相對(duì)表達(dá)量進(jìn)行定量分析。

1.2.3 疾病嚴(yán)重程度及預(yù)后評(píng)估：ACI 患者均在入院后第1 天進(jìn)行疾病嚴(yán)重程度評(píng)估，采用美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生研究院卒中量表（National Institute of Health stroke scale，NIHSS）評(píng)分，總分范圍0～42 分，分?jǐn)?shù)越高表明疾病越嚴(yán)重。本研究中輕度患者70 例（NIHSS 評(píng)分<5 分），中度患者55 例（5 分≤NIHSS 評(píng)分<16分），重度患者49例（NIHSS評(píng)分≥16分）。通過(guò)電話或門(mén)診對(duì)患者進(jìn)行90 d 的短期隨訪，采用改良Rankin 量表（modified Rankin scale，mRS）評(píng)分評(píng)估患者預(yù)后，總分范圍0～5分，總分越高表明患者預(yù)后越差［9］。本研究中預(yù)后不良患者70例（mRS評(píng)分>2分），預(yù)后良好患者104例（mRS評(píng)分≤2分）。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析應(yīng)用SPSS 22.0 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料采用例數(shù)（%）表示，進(jìn)行χ2檢驗(yàn)。計(jì)量資料經(jīng)檢驗(yàn)符合正態(tài)分布采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，進(jìn)行t 檢驗(yàn)；多組數(shù)據(jù)間比較采用單因素方差分析，進(jìn)一步兩兩比較采用SNK-q 檢驗(yàn)。Pearson 法分析lncRNA TUG1、miR-542-3p 表達(dá)的相關(guān)性。受試者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲線預(yù)測(cè)血清lncRNA TUG1、miR-542-3p 水平對(duì)ACI 患者預(yù)后不良的預(yù)測(cè)價(jià)值。Logistic 回歸分析影響ACI 患者預(yù)后的因素。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 2組一般資料對(duì)比2組性別、年齡、吸煙史、飲酒史、糖尿病史、高血壓史、血糖、TG 比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。研究組患者收縮壓、舒張壓、TC、LDL-C水平均顯著高于對(duì)照組，HDL-C水平低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表1。

表1 2組一般資料比較Table 1 Comparison of general data of two groups

2.2 2 組血清lncRNA TUG1、miR-542-3p 的相對(duì)表達(dá)量比較ACI 患者血清lncRNA TUG1 表達(dá)水平高于對(duì)照組，miR-542-3p表達(dá)水平低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表2。

表2 2組血清lncRNA TUG1、miR-542-3p的相對(duì)表達(dá)量比較 （±s）Table 2 Comparison of the relative expression level of serum lncRNA TUG1 and miR-542-3p between the two groups （±s）

表2 2組血清lncRNA TUG1、miR-542-3p的相對(duì)表達(dá)量比較 （±s）Table 2 Comparison of the relative expression level of serum lncRNA TUG1 and miR-542-3p between the two groups （±s）

組別研究組對(duì)照組t值P值n 174 150 lncRNA TUG1 2.72±0.89 1.01±0.33 22.246＜0.001 miR-542-3p 0.51±0.14 1.21±0.38 22.590＜0.001

2.3 ACI 患者血清lncRNA TUG1 與miR-542-3p的相關(guān)性采用TargetScan 數(shù)據(jù)庫(kù)（http://www.targetscan.org/）進(jìn)行生物信息學(xué)分析，預(yù)測(cè)結(jié)合位點(diǎn)，結(jié)果顯示lncRNA TUG1 與miR-542-3p 具有靶向關(guān)系。Pearson 分析顯示ACI 患者血清miR-542-3p 與lncRNA TUG1 呈顯著負(fù)相關(guān)（r= —0.492，P<0.05）。見(jiàn)圖1。

圖1 ACI患者血清lncRNA TUG1與miR-542-3p的相關(guān)性分析Figure 1 Correlation analysis of lncRNA TUG1 and miR-542-3p expression in serum of ACI patients

2.4 各組ACI患者血清lncRNA TUG1、miR-542-3p的相對(duì)表達(dá)量比較與輕度組患者比較，重度組和中度組患者血清lncRNA TUG1表達(dá)、NIHSS評(píng)分升高，且重度組表達(dá)水平高于中度組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；重度組和中度組患者血清miR-542-3p 表達(dá)降低，且重度組表達(dá)水平低于中度組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表3。

表3 各組血清lncRNA TUG1、miR-542-3p的相對(duì)表達(dá)量、NIHSS評(píng)分比較 （±s）Table 3 Comparison of the relative expression levels of serum lncRNA TUG1 and miR-542-3p and NIHSS score in each group （±s）

表3 各組血清lncRNA TUG1、miR-542-3p的相對(duì)表達(dá)量、NIHSS評(píng)分比較 （±s）Table 3 Comparison of the relative expression levels of serum lncRNA TUG1 and miR-542-3p and NIHSS score in each group （±s）

注：與輕度組比較，aP＜0.05；與中度組比較，bP＜0.05

組別重度組中度組輕度組F值P值n 49 55 70 lncRNA TUG1 3.85±1.03ab 2.69±0.89a 1.95±0.81 70.877＜0.001 miR-542-3p 0.32±0.09ab 0.45±0.14a 0.68±0.15 113.641＜0.001 NIHSS評(píng)分/分19.21±2.33ab 9.03±1.14a 3.12±0.08 1931.276＜0.001

2.5 不同預(yù)后患者一般資料及l(fā)ncRNA TUG1、miR-542-3p的相對(duì)表達(dá)量比較預(yù)后不良組患者的lncRNA TUG1、收縮壓、NIHSS 評(píng)分明顯高于預(yù)后良好患者，miR-542-3p 明顯低于預(yù)后良好患者（P＜0.05）。見(jiàn)表4。

表4 不同預(yù)后患者一般資料及l(fā)ncRNA TUG1、miR-542-3p的相對(duì)表達(dá)量比較 （±s）Table 4 Comparison of general data and relative expression levels of lncRNA TUG1 and miR-542-3p in patients with different prognosis （±s）

表4 不同預(yù)后患者一般資料及l(fā)ncRNA TUG1、miR-542-3p的相對(duì)表達(dá)量比較 （±s）Table 4 Comparison of general data and relative expression levels of lncRNA TUG1 and miR-542-3p in patients with different prognosis （±s）

資料性別（男/女）年齡/歲吸煙史［n（%）］飲酒史［n（%）］糖尿病史［n（%）］高血壓史［n（%）］收縮壓/mmHg舒張壓/mmHg血糖/（mmol/L）TC/（mmol/L）TG/（mmol/L）HDL-C/（mmol/L）LDL-C/（mmol/L）NIHSS評(píng)分/分lncRNA TUG1 miR-542-3p預(yù)后不良組（n=70）35/45 67.18±6.73 30（42.86）17（24.29）15（21.43）29（41.43）137.67±28.13 89.93±10.03 8.45±1.83 3.86±0.71 1.41±0.46 1.21±0.27 2.12±0.77 13.01±1.06 3.49±0.94 0.36±0.11預(yù)后良好組（n=104）50/54 66.38±6.55 42（40.38）32（30.77）17（16.35）36（34.62）129.02±27.23 87.47±9.19 8.24±1.78 3.80±0.64 1.36±0.43 1.26±0.22 2.07±0.72 7.17±1.04 2.21±0.86 0.61±0.16 t/χ2值0.341 0.441 0.105 0.869 0.720 0.830 2.028 1.669 0.755 0.580 1.964 1.340 0.437 36.042 9.272 11.382 P值0.559 0.660 0.745 0.351 0.396 0.362 0.044 0.097 0.452 0.256 0.051 0.182 0.663＜0.001＜0.001＜0.001

2.6 血清lncRNA TUG1、miR-542-3p對(duì)ACI患者預(yù)后不良的預(yù)測(cè)價(jià)值ROC曲線顯示，血清lncRNA TUG1、miR-542-3p 預(yù)測(cè)ACI 患者預(yù)后不良的AUC 分別為0.857（95%CI：0.796～0.905）、0.911（95%CI：0.859～0.949），對(duì)應(yīng)的敏感度分別為85.71%、81.43%，特異度分 別 為75.00%、87.50% ；血 清lncRNA TUG1、miR-542-3p聯(lián)合預(yù)測(cè)的AUC為0.954（95%CI：0.912～0.980），敏感度為82.86%，特異度為96.15%。見(jiàn)圖2、表5。

表5 血清lncRNA TUG1、miR-542-3p對(duì)ACI患者預(yù)后不良的預(yù)測(cè)價(jià)值Table 5 Predictive value of serum lncRNA TUG1 and miR-542-3p for poor prognosis in patients with ACI

圖2 血清lncRNA TUG1、miR-542-3p預(yù)測(cè)ACI患者預(yù)后不良的ROC曲線Figure 2 ROC curve of serum lncRNA TUG1 and miR-542-3p levels in predicting poor prognosis of ACI patients

2.7 預(yù)后不良的影響因素分析以ACI患者預(yù)后不良為因變量，以lncRNA TUG1、miR-542-3p、NIHSS評(píng)分、收縮壓為自變量，進(jìn)行Logistic回歸分析，結(jié)果顯示lncRNA TUG1、miR-542-3p、NIHSS 評(píng)分均與ACI患者預(yù)后不良相關(guān)（P＜0.05）。見(jiàn)表6。

表6 多因素Logistic回歸分析Table 6 Multivariate Logistic regression analysis

3 討論

由于神經(jīng)元的不可再生性，ACI具有極高的致殘率和復(fù)發(fā)率［11-12］。隨著人們生活方式及飲食結(jié)構(gòu)的改變，高血壓、糖尿病等發(fā)病率逐漸升高，造成ACI的發(fā)病也呈上升趨勢(shì)，且趨于年輕化［13］。尋找影響ACI預(yù)后的因素以及預(yù)測(cè)其預(yù)后不良的生物標(biāo)志物，對(duì)降低ACI并發(fā)癥發(fā)生率具有重要意義。

lncRNA 是一種長(zhǎng)度超過(guò)200 bp 的非編碼RNA。目前人類已發(fā)現(xiàn)15 000 多種lncRNA，但對(duì)其結(jié)構(gòu)知之甚少。lncRNA與腫瘤、心血管疾病、內(nèi)分泌疾病等多種疾病的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)［14］。近年來(lái)，在缺血性腦卒中患者和動(dòng)物模型中發(fā)現(xiàn)了數(shù)百個(gè)異常表達(dá)的lncRNA，表明lncRNA 與缺血性腦卒中密切相關(guān)，有可能成為缺血性腦卒中的生物標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)［15］。LncRNA TUG1位于人染色體22q12.2［16］。研究顯示lncRNA TUG1在急性腦梗死患者血清中表達(dá)升高，在疾病診斷中具有重要臨床價(jià)值［17］。另有研究顯示TUG1在缺血性腦卒中患者中表達(dá)升高，可能造成神經(jīng)元損傷從而影響疾病［18］。本研究中ACI患者血清lncRNA TUG1表達(dá)水平高于對(duì)照組，且隨著疾病程度加重而逐漸升高，預(yù)后不良患者血清lncRNA TUG1表達(dá)水平高于預(yù)后良好患者，提示lncRNA TUG1可能參與ACI的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程，且與疾病程度和患者預(yù)后密切相關(guān)，有望成為評(píng)估ACI疾病嚴(yán)重程度及預(yù)后不良的潛在血清學(xué)指標(biāo)。本研究中ROC曲線顯示血清lncRNA TUG1水平預(yù)測(cè)ACI患者預(yù)后不良的AUC分別為0.857，敏感度為85.71%，特異度為75.00%，表明檢測(cè)ACI 患者血清lncRNA TUG1 水平可用于ACI患者預(yù)后判斷。

miRNA 是真核生物中高度保守的非編碼RNA，可參與調(diào)控早期胚胎分化、發(fā)育、細(xì)胞增殖、分化、凋亡、炎癥等過(guò)程。miRNA還在腦缺血的各個(gè)方面發(fā)揮多重作用，調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡、分化、血管炎癥反應(yīng)、缺血再灌注損傷等［18］。miR-542-3p位于X染色體q26.3區(qū)域［20］，miR-542-3p在腦膠質(zhì)瘤、癲癇、腦缺血再灌注損傷等多種疾病中發(fā)揮作用［21-22］。本研究中ACI患者血清miR-542-3p相對(duì)表達(dá)量低于對(duì)照組，且隨著疾病程度加重而降低，表明miR-542-3p與ACI患者疾病嚴(yán)重程度及預(yù)后密切相關(guān)。本研究Pearson相關(guān)性分析顯示ACI患者血清miR-542-3p和lncRNA TUG1表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，提示二者之間存在某種負(fù)反饋調(diào)節(jié)機(jī)制，lncRNA TUG1 可能通過(guò)靶向miR-542-3p，抑制其表達(dá)，從而參與疾病的發(fā)展進(jìn)程［23-30］。預(yù)后不良患者的miR-542-3p明顯低于預(yù)后良好患者，miR-542-3p水平越低可能預(yù)示預(yù)后不良的發(fā)生率更高。本研究中ROC曲線顯示血清miR-542-3p水平預(yù)測(cè)ACI患者預(yù)后不良的AUC 為0.911，敏感度為81.43%，特異度為87.50%，與lncRNA TUG1 水平聯(lián)合預(yù)測(cè)的AUC 為0.954，敏感度為82.86%，特異度為96.15%，表明聯(lián)合檢測(cè)二者在ACI患者血清中的表達(dá)可用于預(yù)測(cè)預(yù)后不良，且預(yù)測(cè)效能高于單一指標(biāo)檢測(cè)，可為降低ACI患者的預(yù)后不良發(fā)生率提供依據(jù)。ACI患者收縮壓、舒張壓、TC、LDL-C水平均顯著高于對(duì)照組，HDL-C水平低于對(duì)照組，且預(yù)后不良組患者的收縮壓、NIHSS評(píng)分均明顯高于預(yù)后良好患者，Logistic 回歸分析表明lncRNA TUG1、miR-542-3p、NIHSS 評(píng)分均是影響ACI 患者預(yù)后的因素，進(jìn)一步表明lncRNA TUG1 和NIHSS評(píng)分升高、miR-542-3p表達(dá)降低均與ACI患者預(yù)后不良密切相關(guān)［31］。

lncRNA TUG1、miR-542-3p是ACI患者預(yù)后的獨(dú)立影響因素，可為ACI 疾病進(jìn)展和預(yù)后評(píng)估提供參考依據(jù)，具有重要的臨床意義。本研究尚有不足之處，未探究二者發(fā)揮作用的確切機(jī)制，且納入樣本較少，在今后的研究中將進(jìn)行更深入的探討。