基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)及分子對接探討健脾止動湯通過腦腸軸治療兒童多發(fā)性抽動癥的分子機(jī)制

張莎莎，王素梅，唐艷鵬，王曉聰，郝宏文

(1. 北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京 100029；2. 北京中醫(yī)藥大學(xué)東方醫(yī)院，北京 100078)

多發(fā)性抽動癥是一種復(fù)雜的神經(jīng)精神疾病，以慢性、波動性、多發(fā)性的運動肌肉抽動和(或)伴有不自主的發(fā)聲性抽動為主要臨床表現(xiàn)，常共患強(qiáng)迫癥、注意缺陷障礙等其他神經(jīng)精神障礙而影響認(rèn)知。本病患病率在0.4%～3.8%，男性多于女性，男女比例約為3～4∶1[1]。近年來，多發(fā)性抽動癥的患病率有明顯上升的趨勢。本病多在兒童時期發(fā)病，病情反復(fù)，常持續(xù)1年以上，部分患兒病情可遷延至成年或伴隨終生。研究認(rèn)為多發(fā)性抽動癥的發(fā)病機(jī)制可能與遺傳神經(jīng)免疫、神經(jīng)病理、解剖、環(huán)境等因素有關(guān)。西醫(yī)常以抗精神病類藥物治療，但不良反應(yīng)較為明顯，給患兒及家長造成身心負(fù)擔(dān)，造成患兒依從性差。因此，尋找高效、低毒的治療藥物是目前兒童多發(fā)性抽動癥的研究熱點。Meta分析結(jié)果顯示, 與西藥相比, 中藥治療可以獲得更好的YGTSS評分有效率和更低的中醫(yī)癥狀積分和復(fù)發(fā)率,且不良反應(yīng)率明顯低于西藥治療[2]。健脾止動湯是全國名老中醫(yī)王素梅教授在總結(jié)多年治療經(jīng)驗依據(jù)瀉青丸和六君子湯加減而成，該方由太子參、白術(shù)、茯苓、陳皮、半夏、川芎、當(dāng)歸、防風(fēng)、鉤藤、龍膽組成，具有健脾平肝、化痰熄風(fēng)的功效。本課題組前期臨床研究顯示健脾止動湯可以有效治療兒童多發(fā)性抽動癥，顯著降低患兒的YGTSS評分,降低患兒血清多巴胺(Dopamine,DA)、去甲腎上腺素(Norepinephrine,NE)及谷氨酸(glutamic acid,GLU)水平,升高γ-氨基丁酸(gamma-aminobutyric acid,GABA)含量[3]；并在動物實驗中證實健脾止動湯可以通過調(diào)控多種神經(jīng)遞質(zhì)及紋狀體區(qū)腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子等神經(jīng)營養(yǎng)因子的表達(dá)抑制抽動癥狀[4]。腦腸軸是中樞神經(jīng)系統(tǒng)與胃腸道之間的雙向信息交互系統(tǒng)，其中腸道菌群起著關(guān)鍵作用。研究證實，腸道菌群可以通過介導(dǎo)炎癥的產(chǎn)生、調(diào)控下丘腦-垂體-腎上腺軸和調(diào)節(jié)神經(jīng)遞質(zhì)等途徑對神經(jīng)系統(tǒng)產(chǎn)生影響，糞便移植對多發(fā)性抽動癥具有有益作用[5]，故推測該方可能通過腦腸軸調(diào)節(jié)神經(jīng)遞質(zhì)及免疫抑制抽動癥狀。

網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)是一種以藥物成分、蛋白靶點以及疾病相互作用網(wǎng)絡(luò)為基礎(chǔ)，整合了生物信息學(xué)、藥理學(xué)、計算機(jī)技術(shù)，其系統(tǒng)性、整體性、聯(lián)系性的特點與中醫(yī)辨證論治、整體觀、方劑配伍的理論相一致。因此，本研究將基于此方法分析健脾止動湯通過腦腸軸治療兒童多發(fā)性抽動癥的作用靶點及機(jī)制，為進(jìn)一步研究健脾止動湯治療兒童多發(fā)性抽動癥的作用機(jī)制及臨床應(yīng)用提供一定的理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1健脾止動湯藥物成分的獲取 通過中藥系統(tǒng)藥理學(xué)分析數(shù)據(jù)庫TCMSP(https://www.tcmspw.com)檢索健脾止動湯中藥物太子參、茯苓、白術(shù)、陳皮、半夏、防風(fēng)、鉤藤、川芎、當(dāng)歸、龍膽的化學(xué)成分及作用靶點，并根據(jù)藥物口服生物利用度(OB≥30%)、類藥性指數(shù)(DL≥0.18)為條件進(jìn)行篩選。

1.2藥物及疾病的靶點預(yù)測 通過Swisstargetprediction 數(shù)據(jù)庫(http://www.swisstargetpredictio-n.ch/)獲得各藥物成分相應(yīng)的靶點蛋白，并應(yīng)用Uniprot 蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(htt-ps://www.uniprot.org/)將蛋白質(zhì)靶點對照為標(biāo)準(zhǔn)基因名稱，并去除非人源基因。通過GeneCards(https://www.genecards.org/)、OMIM(http://www.om-im.org/)、TTD(http://bidd.nus.edu.sg/group/cjttd/)等數(shù)據(jù)庫，以“T-ourette syndrome”為關(guān)鍵詞進(jìn)行搜索，刪去重復(fù)項后得到與兒童多發(fā)性抽動癥相關(guān)的疾病基因。

1.3健脾止動湯成分-多發(fā)性抽動障礙共同靶點獲取及PPI網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建 為明確藥物靶點和疾病靶點在蛋白水平上的作用機(jī)制，將藥物基因與疾病基因提交至韋恩圖繪制網(wǎng)站(https://bioinfogp.cnb.csic.es/tools/venny/ind-ex.html)，繪制韋恩圖并獲取二者的交集基因，并將交集基因上傳到STRING基因數(shù)據(jù)庫(https://string-db.org/)構(gòu)建蛋白互作網(wǎng)絡(luò)模型。將物種設(shè)定為“Homo sapiens”，最小相互作用閾設(shè)置為“medium confidence”，并隱藏游離蛋白，得到PPI網(wǎng)絡(luò)。將 PPI 網(wǎng)絡(luò)下載保存為Tsv格式，并導(dǎo)入Cytoscape3.7.2軟件進(jìn)行可視化處理。

1.4藥物-成分-疾病-靶點網(wǎng)絡(luò)圖構(gòu)建 應(yīng)用Cytoscape 3.7.2軟件構(gòu)建藥物-成分-疾病靶點互作網(wǎng)絡(luò)，節(jié)點(node)代表活性成分、藥物、疾病、靶點，邊(edge)代表不同節(jié)點之間的相互關(guān)系。并通過Network Analyzer功能進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)拓?fù)浞治?，推測健脾止動湯治療疾病可能的核心活性成分。

1.5GO及其KEGG分析 將疾病與藥物的交集靶點錄入Metascape網(wǎng)站(https://metascape.org/gp/index.html)進(jìn)行富集分析，設(shè)置 P-value<0.01，得到主要的GO和KEGG通路后，篩選前20條重要通路。

1.6藥物成分-核心靶點分子對接驗證 從TCMSP數(shù)據(jù)庫(https://www.tcmspw.com)中下載主要活性成分的mol2結(jié)構(gòu)。通過PDB 數(shù)據(jù)庫(https://www.rcsb.org/)下載核心靶點蛋白的3D結(jié)構(gòu)，保存為PDB格式，利用PyMOL軟件去除水分子及小分子配體，AutoDockTools軟件加氫，對受體和配體進(jìn)行分子對接，通過對接分?jǐn)?shù)值與氫鍵數(shù)量來評價靶點與活性成分的結(jié)合能力與穩(wěn)定性。使用PyMOL軟件對對接結(jié)果進(jìn)行可視化處理。

2 結(jié) 果

2.1藥物成分的獲取 以O(shè)B≥30%且DL≥0.18為篩選條件，通過TCMSP數(shù)據(jù)庫篩選后獲得健脾止動湯有效成分共96個，其中太子參6個，茯苓6個，白術(shù)4個，陳皮5個，半夏12個，防風(fēng)15個，川芎6個，當(dāng)歸2個，鉤藤32個，龍膽8個。

2.2藥物及疾病靶點預(yù)測 經(jīng)Uniprot數(shù)據(jù)庫共預(yù)測靶1 661個，其中太子參116 個，茯苓32 個，白術(shù)23 個，陳皮95個，半夏172個，防風(fēng)187個，鉤藤794個，川芎42個，當(dāng)歸69個，龍膽131個，合并刪除重復(fù)值后共獲得靶點1 361個，得到的靶點信息進(jìn)行Uniprot ID的標(biāo)準(zhǔn)化。以“Tourette syndrome”為關(guān)鍵詞分別在GeneCards，OMIM，TTD數(shù)據(jù)庫補(bǔ)充靶點疾病基因，刪去重復(fù)值后最終得到靶點1 796個。

2.3藥物疾病共同靶點獲取及PPI網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建 將獲取的健脾止動湯活性成分靶點與多發(fā)性抽動癥疾病靶點利用在線網(wǎng)站構(gòu)建韋恩圖得到共同靶點67個(見圖1)，推測其可能是健脾止動湯治療兒童多發(fā)性抽動癥的潛在靶點。進(jìn)一步應(yīng)用STRING11.0平臺構(gòu)建共同靶點PPI網(wǎng)絡(luò)，將得到的Tsv格式文件導(dǎo)入Cytoscape 3.7.2軟件，進(jìn)行可視化處理(見圖 2)。由于 PPI 網(wǎng)絡(luò)中蛋白的作用是相互的，故歸為無向圖。該圖共有64個節(jié)點，494條邊，節(jié)點大小與顏色反映度值大小。數(shù)據(jù)分析后發(fā)現(xiàn)度值最高的三個靶點基因：c-Fos原癌基因蛋白(Proto-oncogene c-Fos，F(xiàn)OS)、炎癥因子白細(xì)胞介素-6(interleukin- 6，IL-6)、鈉依賴性5-羥色胺轉(zhuǎn)運體(Sodium-dependent serotonin transporter，SLC6A4)，度值分別為39，32，28，說明它們可能是健脾止動湯治療兒童多發(fā)性抽動癥的關(guān)鍵。

圖1 健脾止動湯成分-兒童多發(fā)性抽動癥異常靶點韋恩圖

圖2 健脾止動湯-兒童多發(fā)性抽動癥PPI網(wǎng)絡(luò)

2.4藥物-成分-疾病-靶點網(wǎng)絡(luò)圖構(gòu)建 查找藥物疾病共同靶點的活性成分，應(yīng)用Cytoscape 3.7.2軟件構(gòu)建藥物-活性成分-疾病-靶點互作網(wǎng)絡(luò)(見圖3)，并進(jìn)行拓?fù)浞治?。藍(lán)色六邊形節(jié)點代表藥物成分，綠色圓形節(jié)點代表藥物，黃色菱形節(jié)點代表藥物靶點，紅色三角形代表疾病，紫色正方形代表方劑，圖形大小與節(jié)點度值相關(guān)。數(shù)據(jù)顯示槲皮素、豆甾醇、β-谷甾醇為度值前三的活性成分，度值分別為30，16，15，推測其可能是健脾止動湯對兒童多發(fā)性抽動癥起治療作用的主要化學(xué)活性成分。同時多成分與多靶點相關(guān)，表明中醫(yī)藥治療疾病具有多種成分-靶點共同作用的特點。

2.5GO分析與KEGG分析 應(yīng)用Metascape網(wǎng)站對健脾止動湯治療兒童多發(fā)性抽動癥進(jìn)行GO分析與KEGG通路分析，以P值篩選前 20 條重要通路，(見圖4～7)。KEGG通路富集分析表明該靶點基因能與神經(jīng)活性配體受體相互作用、多巴胺突觸、5-羥色胺突觸、膽堿能信號通路、PI3K-Akt信號通路、催乳素信號通路等有關(guān)。Go富集分析表明：在生物過程方面(GO Biological Processes)富集顯著的通路有：行為、化學(xué)突觸傳遞、有毒物質(zhì)的反應(yīng)、運動行為、認(rèn)知、發(fā)育成長等；在細(xì)胞組分方面(GO Cellular Componen)富集顯著的通路有：突觸后膜的組成部分、樹突、軸突、DA能突觸、神經(jīng)元細(xì)胞體膜等；在分子功能(GO Molecular Functions)富集顯著的通路有G蛋白耦聯(lián)胺受體活性、G蛋白耦聯(lián)神經(jīng)遞質(zhì)受體活性、神經(jīng)遞質(zhì)結(jié)合、單胺跨膜轉(zhuǎn)運蛋白活性等。說明健脾止動湯治療兒童多發(fā)性抽動癥是通過復(fù)雜的分子通路以及各種機(jī)制完成的。

圖3 健脾止動湯-兒童多發(fā)性抽動癥藥物-成分-疾病-靶點網(wǎng)絡(luò)圖

圖4 健脾止動湯治療兒童多發(fā)性抽動癥KEGG通路富集分析

圖5 健脾止動湯治療兒童多發(fā)性抽動癥GO Biological Processes分析

圖6 健脾止動湯治療兒童多發(fā)性抽動癥GO Cellular Components分析

圖7 健脾止動湯治療兒童多發(fā)性抽動癥GO Molecular Functions分析

2.6分子對接驗證 本研究選取健脾止動湯有效活性成分中degree前3的活性成分(槲皮素、豆甾醇、β-谷甾醇)與degree前3的關(guān)鍵靶點(FOS、IL-6、SLC6A4)進(jìn)行分子對接驗證，并對對接分?jǐn)?shù)大于-7.0 kcal/mol的對接結(jié)果利用Pymol軟件繪圖。成分與靶點的結(jié)合能和形成氫鍵數(shù)量是評價結(jié)合能力的重要指標(biāo)。對接分?jǐn)?shù)<-4.25 kcal/mol時表示兩者間有一定的結(jié)合活性，<-5.0 kcal/mol表示有較好的結(jié)合活性，<-7.0 kcal/mol表示有強(qiáng)烈的結(jié)合活性[6]，氫鍵量越多則結(jié)合越穩(wěn)定。對接結(jié)果(見表1及圖8)顯示，除槲皮素和FOS蛋白對接結(jié)合能>-5.0 kcal/mol，其他對接分?jǐn)?shù)均<-5.0 kcal/mol，表明關(guān)鍵藥物活性成分與核心靶點具有較強(qiáng)的結(jié)合活性。除β-谷甾醇未能與FOS形成氫鍵，穩(wěn)定性欠佳，其余均能形成氫鍵增強(qiáng)穩(wěn)定性。

表1 健脾止動湯核心活性成分與主要靶點蛋白的結(jié)合情況

圖8 健脾止動湯-兒童多發(fā)性抽動癥關(guān)鍵藥效物質(zhì)-核心靶點分子對接模式圖

3 討 論

歷代醫(yī)家多認(rèn)為兒童多發(fā)性抽動癥屬于中醫(yī)學(xué)慢驚風(fēng)、瘛瘲、抽搐、筋惕肉瞤等范疇，本課題組王素梅教授根據(jù)小兒“肝常有余，脾常不足”的病理特點，認(rèn)為兒童多發(fā)性抽動癥的發(fā)生主要與肝脾兩臟關(guān)系最為密切，此與腦腸軸具有相同的科學(xué)內(nèi)涵。中醫(yī)理論雖未明確提出腦腸軸這一概念，但已在眾多理論與臨床實踐中進(jìn)行描述。如《難經(jīng)·四十七難》曰“人頭者，諸陽之會也”，手陽明經(jīng)別入腦、支脈通于腦、經(jīng)筋絡(luò)屬腦，二者在經(jīng)絡(luò)上相互聯(lián)系；《靈樞·平人絕谷》曰“神者，水谷之精氣也”，胃腸功能正常，水谷精微才可上充腦竅，在功能上肯定了腦腸間的聯(lián)系。對于本病治療，《幼科發(fā)揮·慢驚有三因》言:“吐瀉何以生風(fēng)而不可治者？吐瀉損脾,脾者,土也。風(fēng)者,肝木所生也。脾土不足,則肝木乘之,木勝土也?！惫蕬?yīng)從脾胃入手。健脾止動湯以四君子太子參、白術(shù)、茯苓等健脾運脾以杜生痰之源，防風(fēng)、鉤藤等疏風(fēng)柔肝以袪內(nèi)外之風(fēng)，龍膽草以瀉肝膽火熱，并以陳皮、半夏等理氣化痰以治其標(biāo)，川芎當(dāng)歸行氣活血以調(diào)久病必瘀。研究發(fā)現(xiàn)中醫(yī)健運脾胃的方藥具有維持調(diào)節(jié)腸道菌群的作用，已證實四君子湯可明顯增加小鼠腸道雙歧桿菌和乳酸桿菌菌量[7]。

腸道菌群是腸道與中樞神經(jīng)系統(tǒng)相互作用的核心。正常情況下，腸道的益生菌和致病菌處于一個動態(tài)平衡的狀態(tài)，如果腸道菌群結(jié)構(gòu)紊亂則會導(dǎo)致疾病的發(fā)生。腸道菌群可以調(diào)節(jié)神經(jīng)遞質(zhì)及免疫系統(tǒng)，目前已證實乳酸桿菌和雙歧桿菌能產(chǎn)生GABA，大腸桿菌、芽孢桿菌和酵母菌能產(chǎn)生去甲腎上腺素，假絲酵母菌、鏈球菌、大腸桿菌和腸球菌能產(chǎn)生5-羥色胺(5-HT)[8]，乳酸桿菌可調(diào)控多巴胺能通路改善抽動樣行為[9]，雙歧桿菌可顯著降低血漿C反應(yīng)蛋白、腫瘤壞死因子α和IL-6水平發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用[10]。

本研究通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)篩選出健脾止動湯的主要成分為槲皮素、豆甾醇、β-谷甾醇等。實驗證明槲皮素可上調(diào)腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子的表達(dá)，通過激活TrkB/ERK/MAPK、PI3K-Akt等通路從而促進(jìn)神經(jīng)元細(xì)胞存活、調(diào)節(jié)突觸功能,同時可以降低DA含量減少抽動癥狀[11]；槲皮素可以通過抑制中性粒細(xì)胞表達(dá)IL-6 mRNA、減少IL-6的合成和分泌, 從而在炎癥早期抑制炎癥反應(yīng)而減輕免疫損害[12]。槲皮素對乳酸桿菌體外增殖有明顯扶植作用[13]，體內(nèi)實驗證實其可明顯抑制蛋雞腸道有害菌群大腸桿菌等的生長，提高益生菌雙歧桿菌的數(shù)量[14]。豆甾醇能明顯減少氯胺酮引起的小鼠的自發(fā)活動、刻板行為，降低DA、腫瘤壞死因子水平，抑制乙酰膽堿酯酶活性，從而改善認(rèn)知功能[15]。β-谷甾醇可抑制小動物自主活動，其可能是通過抑制巨噬細(xì)胞IL-6和腫瘤壞死因子α活性[16]，或產(chǎn)生類似于氫化可的松通過下丘腦-垂體-腎上腺素軸系統(tǒng)發(fā)生抗炎作用進(jìn)而對兒童抽動反復(fù)發(fā)作起到抑制作用[17]。而豆甾醇與β谷甾醇可以增加腸道菌群的豐度，促進(jìn)腸道雙歧桿菌和乳酸桿菌的生長[18]。由此可知，健脾止動湯的主要成分與腸道菌群對神經(jīng)遞質(zhì)及免疫的影響具有一致性，故推測健脾止動湯的主要成分可能通過調(diào)節(jié)腸道菌群進(jìn)而調(diào)控神經(jīng)遞質(zhì)與免疫系統(tǒng)抑制抽動癥狀。

PPI網(wǎng)絡(luò)和分子對接結(jié)果發(fā)現(xiàn)健脾止動湯治療兒童多發(fā)性抽動癥的關(guān)鍵靶點是FOS、IL-6、SLC6A4。FOS是一種即刻早期反應(yīng)基因，在生長因子、神經(jīng)遞質(zhì)等作用下，F(xiàn)OS可即刻、短暫表達(dá)，作為傳遞信息的第三信使。FOS免疫反應(yīng)作為紋狀體中棘狀神經(jīng)元激活的替代標(biāo)記, 在D1表達(dá)的中棘神經(jīng)元中被上調(diào)[19]。研究發(fā)現(xiàn)產(chǎn)生刻板印象的精神刺激物的劑量優(yōu)先上調(diào)FOS，可能導(dǎo)致刻板印象和抽搐[20]。IL-6編碼一種細(xì)胞因子，其在炎癥和B細(xì)胞的成熟中起作用。臨床研究表明，兒童多發(fā)性抽動癥組IL-6濃度顯著高于健康人，且兒童多發(fā)性抽動癥組抗病毒抗體和抗核抗體陽性的患兒明顯增多，表明多發(fā)性抽動癥患兒的免疫活性發(fā)生了改變[21]；體外研究證實IL-6可以影響DA的代謝，認(rèn)為神經(jīng)系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)的細(xì)胞間可通過直接接觸傳遞或通過產(chǎn)生并釋放出來的生物活性因子進(jìn)行信息之間的聯(lián)系[22]。SLC6A4基因編碼一個完整的膜蛋白，可將神經(jīng)遞質(zhì)5-HT從突觸空間轉(zhuǎn)運到突觸前神經(jīng)元，具有終止5-HT的作用。有研究表明該基因啟動因子中的重復(fù)長度多態(tài)性影響5-HT的攝取速率[23]，敲除小鼠SLC6A4基因后會發(fā)生類似抽動動作[24]。

KEGG通路富集分析發(fā)現(xiàn)，健脾止動湯的治療作用可能與神經(jīng)活性配體受體相互作用、多巴胺突觸、5-羥色胺能突觸、膽堿能系統(tǒng)等多種神經(jīng)遞質(zhì)信號通路，及PI3K-Akt信號通路、催乳素信號通路有關(guān)。神經(jīng)活性配體受體相互作用信號通路是質(zhì)膜上所有與細(xì)胞內(nèi)外信號通路相關(guān)的配體的集合，與神經(jīng)功能關(guān)系最為密切；神經(jīng)遞質(zhì)在神經(jīng)元間或神經(jīng)元與靶細(xì)胞間起信號傳遞作用，研究顯示兒童多發(fā)性抽動癥主要與DA、5-HT及氨基酸類等神經(jīng)遞質(zhì)異常有關(guān)[25]，現(xiàn)已證實假絲酵母菌、鏈球菌、大腸桿菌和腸球菌能產(chǎn)生5-HT，乳酸桿菌可調(diào)控多巴胺能通路改善抽動癥狀[8-9]；研究表明，膽堿能信號通路、PI3K-Akt信號通路及催乳素信號通路可能通過調(diào)節(jié)DA功能改善抽動[26-28]，現(xiàn)已證實乳酸桿菌可以通過迷走神經(jīng)調(diào)控大腦內(nèi) GABA 的表達(dá)[29]，而GABA可以激活 PI3K-Akt信號通路[30]。另外，膽堿能通路還可激活磷酸化的JAK2及STAT3，從而使腫瘤壞死因子α、IL-6 等炎癥介質(zhì)減少，調(diào)節(jié)免疫減少抽動癥狀[31]，研究表明腸道菌群也可通過膽堿能通路影響腦組織中炎癥因子分泌，進(jìn)而影響腦認(rèn)知功能[32]。由此表明腸道菌群可以通過腦腸軸調(diào)節(jié)多巴胺突觸、5-羥色胺能突觸、膽堿能系統(tǒng)等多種神經(jīng)遞質(zhì)信號通路，及PI3K-Akt信號通路抑制抽動癥狀。

綜上所述,本研究以中醫(yī)理論為指導(dǎo)，基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)及分子對接技術(shù)，從腸道菌群出發(fā)，方證相應(yīng)，揭示了健脾止動湯可能通過槲皮素、豆甾醇、β-谷甾醇等成分，作用于FOS、IL-6、SLC6A4等靶點，調(diào)節(jié)腸道菌群進(jìn)而調(diào)控多種神經(jīng)遞質(zhì)，抑制炎癥反應(yīng)從而治療兒童多發(fā)性抽動癥。本課題組在前期研究兒童多發(fā)性抽動癥與神經(jīng)遞質(zhì)的關(guān)系上，進(jìn)一步探析了健脾止動湯通過腦腸軸治療兒童多發(fā)性抽動癥的物質(zhì)基礎(chǔ)、分子機(jī)制。本研究與目前兒童多發(fā)性抽動癥的基礎(chǔ)研究成果相一致，表明研究結(jié)果具有較高的參考價值。后續(xù)可以從腸道菌群入手，以槲皮素、豆甾醇、β-谷甾醇等成分及多巴胺突觸信號通路、5-羥色胺能突觸信號通路、膽堿能系統(tǒng)信號通路、PI3K-Akt信號通路為切入點，開展深入研究，為健脾止動湯治療兒童多發(fā)性抽動癥的實驗設(shè)計及進(jìn)一步研究提供思路和方法。

利益沖突：所有作者均聲明不存在利益沖突。