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    我國16份余甘子種質(zhì)資源果實的綜合品質(zhì)評價

    2022-04-01 11:28:48王建超何銀鶯劉鑫銘沈朝貴陳發(fā)興郭林榕
    關(guān)鍵詞:詔安甘子抗壞血酸

    王建超,何銀鶯,劉鑫銘,沈朝貴,陳發(fā)興,郭林榕

    (1福建省農(nóng)業(yè)科學院 果樹研究所,福建 福州 350013;2福建農(nóng)林大學 園藝學院,福建 福州 350002)

    余甘子(PhyllanthusemblicaL.)為大戟科(Euphorbiaceae)葉下珠屬(Phyllanthus)小喬木或灌木,其果實初食味酸澀,食后回味甘甜,故名余甘[1]。余甘子果實性微寒,具有健胃、消食、潤肺、生津、收斂止瀉、清熱降火、解毒、下氣除痰、消滯止咳,解除疲勞等功效[2]。全世界約有17個國家的傳統(tǒng)藥物體系中使用余甘子,我國約有16個民族使用該藥,歷版《中華人民共和國藥典》均有收錄[3],同時該樹種是聯(lián)合國推薦種植的3種保健樹種之一[4]?,F(xiàn)代醫(yī)學研究表明,余甘子果實中含有大量的超氧化歧化酶(SOD)、鞣質(zhì)、抗壞血酸、有機酸、黃酮和多糖等物質(zhì),具有抗微生物感染、抗腫瘤、抗衰老、抗突變、降血脂和降血壓等功效[5-9],研究余甘子果實品質(zhì)多樣性,對于余甘子功能產(chǎn)品開發(fā)和種質(zhì)資源創(chuàng)新利用有重要意義。

    我國余甘子種質(zhì)資源主要分布于福建、廣東、廣西、云南、海南、貴州、四川、臺灣等省份的熱帶亞熱帶地區(qū)[3]。目前,余甘子良種栽培主要集中在廣東、福建兩省,其中福建除擁有豐富的余甘子野生資源外,人工種植面積也最大[10]。福建省漳州市與廣東省潮州市是兩省的交界地區(qū),兩地余甘子良種栽培歷史悠久,選育的栽培品種(系)眾多,因此綜合分析與評價該地區(qū)不同栽培種的余甘子果實品質(zhì),對于余甘子新品種選育和種質(zhì)資源利用有重要意義。目前余甘子果實的品質(zhì)分析評價研究主要集中在維生素、微量元素、揮發(fā)油、酚酸等方面[11-15],尚未見關(guān)于余甘子果實有機酸的研究報道。為此,本研究以福建漳州與廣東潮州兩地的16份余甘子種質(zhì)資源果實為試材,從基本品質(zhì)指標與有機酸含量等方面,分析余甘子種質(zhì)資源果實品質(zhì)的遺傳多樣性,利用主成分分析和聚類分析等方法,系統(tǒng)分析與評價兩省交界地區(qū)余甘子果實的品質(zhì)差異,以期為余甘子種質(zhì)資源創(chuàng)新利用與選種育種提供科學依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 試驗材料

    2019年10-11月,在位于福建省福州市晉安區(qū)新店鎮(zhèn) (119°19′59″E,26°07′48″N,海拔20 m)的國家熱帶植物種質(zhì)資源庫-余甘子種質(zhì)資源分庫中,選擇成熟度一致、無病蟲害且無機械損傷的16份余甘子種質(zhì)資源的成熟果實作為試驗材料。其中源自福建漳州的種質(zhì)資源有柴甘、甜甘、玻璃種、玻璃甘、正甜、獅頭、土餅、土尖、肉甘、詔安土種1和詔安土種2;源自廣東揭陽的種質(zhì)資源有揭西種、南帶甘、甜種、餅甘接和尖屁股。每品種選3株樹,每株采摘50個成熟果實,共計150個,隨機分為3組,每組50個,去核,果肉液氮冷凍后于-80 ℃超低溫冰箱保存。

    1.2 測定指標與方法

    用電子天平(精度0.01 g)測定單果質(zhì)量,用電子數(shù)顯游標卡尺測定縱徑和橫徑,通過二者比值計算果形指數(shù);還原糖含量測定用直接滴定法 (GB 5009.7―2016);蔗糖含量測定用酸水解-萊因-埃農(nóng)氏法(GB 5009.8―2016),總糖含量=還原糖含量+蔗糖含量/0.95;水分含量測定用直接干燥法(GB 5009.3―2016);總酸含量測定用酸堿滴定法(GB/T 12456―2008);糖酸比=總糖/總酸;蛋白質(zhì)含量測定用凱氏定氮法(GB 5009.5―2016);脂肪含量測定用索氏抽提法(GB 5009.6―2016);有機酸及抗壞血酸含量測定用高效液相色譜法(HPLC)(GB 5009.157―2016),其中,色譜條件:Atlanis T3 色譜柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),流動相是pH 2.2的0.02 mol/L NaH2PO4緩沖溶液(A)和甲醇溶液(B),梯度洗脫(0 min 0% B,8 min 15% B,17 min 30% B,26 min 0% B),柱溫 25 ℃,流速0.8 mL/min,檢測波長210 nm,進樣量10 μL。

    1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

    用Microsoft Excel 2003處理數(shù)據(jù);對于變異系數(shù)大于10%的品質(zhì)指標,首先用SPSS 22.0進行標準化轉(zhuǎn)化,然后進行主成分分析和聚類分析,其中聚類分析方法采用離差平方和法(Ward法),組間距離采用平方歐氏距離。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 16份余甘子種質(zhì)資源果實的外觀品質(zhì)

    16份余甘子種質(zhì)資源果實的外觀品質(zhì)見表1。

    表1表明,16份余甘子種質(zhì)資源果實單果質(zhì)量平均為7.57 g,變異系數(shù)25.83%;以土餅單果質(zhì)量最高,為12.17 g,與其他品種存在顯著差異;柴甘單果質(zhì)量最低,為5.48 g。果實縱徑為18.20~23.56 mm,平均為20.32 mm,其中玻璃種縱徑最小,土餅最大,變異系數(shù)為7.12%。果實橫徑為21.44~28.87 mm,平均為24.09 mm,柴甘橫徑最小,土餅最大,變異系數(shù)為9.64%。果實果形指數(shù)為78.43%~88.58%,平均為84.60%,獅頭果形指數(shù)最小,甜甘最大,變異系數(shù)為3.85%,果實為扁圓形或近圓形。

    2.2 16份余甘子種質(zhì)資源果實的基本營養(yǎng)物質(zhì)含量

    16份余甘子種質(zhì)資源果實的基本營養(yǎng)物質(zhì)含量見表2。

    表2 16份余甘子種質(zhì)資源果實的基本營養(yǎng)物質(zhì)含量Table 2 Basic nutrition quality indexes of 16 germplasm resources of Phyllanthus emblica

    由表2可知,16份余甘子種質(zhì)資源的蛋白質(zhì)含量為0.31~0.69 g/hg,平均為0.50 g/hg,甜甘最小,玻璃甘最大。果實水分含量均比較高,差異較小,變異系數(shù)僅為1.23%,其中水分含量較大的品種為揭西種、土尖、詔安土種2、甜種和甜甘,均在90 g/hg以上。16份余甘子種質(zhì)資源的脂肪含量較低,為0.042~0.181 g/hg,變異系數(shù)為45.78%,差異較大,揭西種最高,與其他品種差異顯著。16份余甘子種質(zhì)資源的糖酸含量均有明顯差異,蔗糖含量為0.127~0.650 g/hg,其中南帶甘最小,詔安土種1最高,二者相差近5倍,整體變異系數(shù)為54.49%;還原糖含量為3.72~6.37 g/hg,總糖含量為3.93~6.73 g/hg,總糖含量較高的品種有詔安土種1、獅頭和尖屁股。余甘子果實總酸含量為11.16~18.27 g/kg,含量較高的有玻璃種、柴甘、土餅、餅甘接和詔安土種1。余甘子果實糖酸比為2.21%~4.81%,變異系數(shù)為21.40%,不同品種糖酸比差異明顯,且糖酸比較低會影響余甘子鮮食口感。

    2.3 16份余甘子種質(zhì)資源果實的有機酸及抗壞血酸含量

    由表3可以看出,用HPLC法從16份余甘子種質(zhì)果實樣品中檢測到7種有機酸,分別為草酸、酒石酸、蘋果酸、乳酸、乙酸、檸檬酸和富馬酸,其中乙酸含量最高,有機酸平均含量從大到小依次為乙酸>乳酸>檸檬酸>草酸>蘋果酸>酒石酸>富馬酸。

    表3 16份余甘子種質(zhì)資源果實的有機酸與抗壞血酸含量Table 3 Organic acid and ascorbic acid contents of 16 germplasm resources of Phyllanthus emblica

    由表3可知,在16份余甘子種質(zhì)資源中,草酸含量最高的是詔安土種2,為16.87 mg/hg;獅頭草酸含量最低,為10.60 mg/hg。酒石酸與富馬酸在余甘子果實中較少,酒石酸含量為0.48~1.80 mg/hg,富馬酸為0.36~1.41 mg/hg,2種有機酸組分在不同種質(zhì)間差異巨大,變異系數(shù)分別為35.87%和39.39%。蘋果酸含量為2.86~10.98 mg/hg,其中土餅與南帶甘2份種質(zhì)相差4倍以上。16份余甘子資源的抗壞血酸含量為167.11~407.76 mg/hg,平均為248.94 mg/hg,變異系數(shù)為26.83%,其中餅甘接和土尖含量均較低,詔安土種1果實中的抗壞血酸含量顯著高于其他品種,含量為407.76 mg/hg。乳酸、乙酸和檸檬酸3種組分含量占有機酸總量的90%以上,其中乳酸含量平均為166.60 mg/hg,以正甜含量最高,為380.82 mg/hg,與其他品種差異顯著。乳酸含量變異系數(shù)達62.25%,為所測品質(zhì)指標中最大。乙酸平均含量為194.68 mg/hg,含量最大的為詔安土種1,為375.72 mg/hg,與其他品種差異顯著;含量最低的為土尖,為108.05 mg/hg。檸檬酸是成熟果實中的主要有機酸之一,16份余甘子果實中檸檬酸含量為15.26~65.61 mg/hg,含量較高的品種為詔安土種2、獅頭和詔安土種1,含量最低的品種為甜種,與其他品種差異顯著。16份余甘子總有機酸含量為232.71~668.73 mg/hg,平均為424.04 mg/hg,占總酸比例為29.59%,其中正甜總有機酸含量最高,占總酸比例為48.84%;餅甘接總有機酸含量最低。16份余甘子種質(zhì)資源的有機酸占總酸比例差異明顯,變異系數(shù)為16.57%。

    2.4 余甘子果實品質(zhì)指標的相關(guān)性分析

    表4表明,16份余甘子種質(zhì)資源果實的水分含量與還原糖、總糖、抗壞血酸、乳酸、富馬酸含量呈極顯著負相關(guān),與乙酸含量呈顯著負相關(guān),與草酸含量極顯著正相關(guān);蛋白質(zhì)含量與乳酸含量存在極顯著負相關(guān);蔗糖含量與總糖含量呈極顯著正相關(guān),與還原糖、乙酸、富馬酸含量呈顯著正相關(guān);草酸含量與總糖、還原糖、乳酸含量呈顯著或極顯著負相關(guān);抗壞血酸含量與乳酸、乙酸、富馬酸含量呈極顯著正相關(guān),表明余甘子果實的抗壞血酸含量與有機酸相關(guān)組分關(guān)系密切;富馬酸含量與乙酸含量呈極顯著正相關(guān)。

    表4 余甘子果實品質(zhì)指標的相關(guān)性分析Table 4 Correlation analysis of fruit quality indicators of Phyllanthus emblica

    2.5 余甘子果實品質(zhì)指標的主成分分析

    主成分分析可將原來多個變量轉(zhuǎn)化成為少數(shù)幾個不相關(guān)的主成分,并保證原始數(shù)據(jù)信息最大限度地保留[16],特征值表示對應(yīng)主成分能夠描述原有信息的多少[17]。余甘子果實品質(zhì)指標主成分的方差貢獻率見表5。

    表5 余甘子果實品質(zhì)指標主成分的方差貢獻率Table 5 Variance contribution rates of principal components to quality characteristics of Phyllanthus emblica

    從表5可見,前5個主成分的特征值均大于1,累積方差貢獻率為82.249%,因此提取前5個主成分代替原品質(zhì)指標分析評價余甘子果實品質(zhì),達到降維目的。根據(jù)主成分載荷矩陣(表6)結(jié)果可知,第1主成分中載荷較高的指標有還原糖、總糖、抗壞血酸、乳酸、乙酸、檸檬酸、富馬酸和總有機酸含量等,說明這些指標對第1主成分產(chǎn)生正向影響;第1主成分越大時,抗壞血酸、有機酸類、糖類等品質(zhì)指標也越大,因有機酸和糖類是影響果實口感的重要因素,因此將第1主成分命名為口感因子。第2主成分中蛋白質(zhì)載荷權(quán)數(shù)最高為0.766,因此將第2主成分命名為蛋白質(zhì)因子。第4主成分中總酸載荷較高,為0.732,命名為酸度因子。草酸和蘋果酸含量對第3主成分產(chǎn)生正向影響。第5主成分中酒石酸載荷為-0.598,產(chǎn)生負向影響,因草酸、酒石酸和蘋果酸是果實產(chǎn)生酸味的重要因素,因此將第3主成分和第5主成分分別命名為酸味因子1和酸味因子2。

    表6 余甘子果實品質(zhì)指標的主成分載荷矩陣Table 6 Loading matrix of 5 principal components of Phyllanthus emblica

    用各指標變量的主成分載荷(表6)除以主成分相對應(yīng)的特征值開平方根(表5),得到 5個主成分中每個指標所對應(yīng)的系數(shù),即特征向量[18],以特征向量為權(quán)重構(gòu)建5個主成分的表達函數(shù)式,以各個主成分對應(yīng)的方差貢獻率作為權(quán)重,由主成分得分和對應(yīng)的權(quán)重線性加權(quán)求和得到綜合評價函數(shù)為:

    F=0.414 25Z1′+0.132 08Z2′+0.106 39Z3′+0.094 97Z4′+0.074 8Z5′。

    式中:F為綜合評價得分,Z1′、Z2′、Z3′、Z4′、Z5′分別為第1至第5主成分的得分。

    根據(jù)綜合評價模型,計算出16份余甘子種質(zhì)資源果實品質(zhì)的綜合評價得分和排序結(jié)果見表7。

    表7 16份余甘子種質(zhì)資源綜合評價得分(F)和排名Table 7 Scores and rankings of principal components from 16 germplasm resources of Phyllanthus emblica

    由表7可見,在5種主成分評價體系下,可以較為直觀地揭示余甘子果實品質(zhì)性狀的優(yōu)劣情況。綜合評價得分排在前5位的余甘子種質(zhì)資源為詔安土種1、柴甘、正甜、獅頭和尖屁股。以第1主成分與第2主成分得分建立直角坐標系(圖 1),可將16份種質(zhì)分為兩類,第1類為柴甘、甜甘、正甜、獅頭、詔安土種1和尖屁股,均為綜合評價得分較高品種;其余種質(zhì)分為另一類。

    1.柴甘;2.甜甘;3.玻璃種;4.玻璃甘;5.正甜;6.獅頭;7.土餅;8.土尖;9.肉甘;10.詔安土種1;11.詔安土種2;12.揭西種;13.南帶甘;14.甜種;15.餅甘接;16.尖屁股1.Chaigan;2.Tiangan;3.Bolizhong;4.Boligan;5.Zhengtian;6.Shitou;7.Tubing;8.Tujian;9.Rougan;10.Zhaoantuzhong 1;11.Zhaoantuzhong 2;12.Jiexizhong;13.Nandaigan;14.Tianzhong;15.Bingganjie;16.Jianpigu圖1 16份余甘子種質(zhì)資源的主成分1和2得分Fig.1 PCA scores for 16 germplasm resources of Phyllanthus emblica on PC1 and PC2

    2.6 16份余甘子種質(zhì)資源的系統(tǒng)聚類分析

    聚類分析結(jié)果(圖2)顯示,正甜、獅頭、柴甘與尖屁股平方歐氏距離=15時聚在一起,后在平方歐氏距離=20時與詔安土種1聚為一類;該研究結(jié)果與主成分分析結(jié)果基本一致,綜合評價得分較高品種聚為一類,也進一步驗證了綜合評價模型的有效性。平方歐氏距離=20時,16份余甘子種質(zhì)資源分為2類:第1類聚集了5份種質(zhì),分別為正甜、獅頭、柴甘、尖屁股、詔安土種1;其中正甜、獅頭、柴甘、詔安土種1為福建本地種,尖屁股為廣東品種,表明相同地域的品種營養(yǎng)成分相近或品質(zhì)相當,有一定的地域特點。第2類聚集了玻璃種、土餅、甜甘、南帶甘、土尖、甜種、餅甘接、肉甘、詔安土種2、玻璃甘、揭西種;其中南帶甘、揭西種、甜種、餅甘接4份種質(zhì)均為廣東地區(qū)品種,其余為福建品種,表明地理位置相近區(qū)域存在較頻繁的種質(zhì)遺傳交叉,可以通過種質(zhì)交流和品種選育篩選品質(zhì)較好的栽培種加以推廣。

    通過對平方歐氏距離=20時的2類種質(zhì)不同品質(zhì)指標平均值進行分析(表8)發(fā)現(xiàn),第1類種質(zhì)的糖類、抗壞血酸及乳酸、乙酸、檸檬酸等有機酸含量均較高。

    表8 不同聚類類別余甘子果實品質(zhì)的比較Table 8 Comparison of quality indexes of different Phyllanthus emblica types

    3 討論與結(jié)論

    目前,研究者對臍橙[19]、梨[20]、桃[21]、蘋果[22]、荔枝[23]、枇杷[24]、菠蘿[25]、芒果[26]、菠蘿蜜[27]和葡萄[28]等果實中的有機酸種類和含量進行了分析評價,根據(jù)積累主要有機酸的不同可將植物果實分為3大類,即蘋果酸型、檸檬酸型和酒石酸型[29]。多數(shù)植物果實中含有較多酒石酸、蘋果酸、檸檬酸,根據(jù)本研究結(jié)果,余甘子果實內(nèi)含量較高的有機酸為乙酸、乳酸和檸檬酸。猜測原因可能為,余甘子最初是由中草藥發(fā)展為保健果樹的,其果實風味獨特;此外,余甘子掛樹期較長且落果率低[30],生產(chǎn)上可采摘至2月份,成熟期往往以果實表形判斷,因此余甘子果實成熟后掛樹期間有機酸可能發(fā)生了降解與轉(zhuǎn)化。研究表明,有機酸可在果實成熟過程中作為糖酵解、三羧酸循環(huán)等呼吸作用基質(zhì)或糖原異生作用的基質(zhì)而被消耗[29]。磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)[31]、烏頭羧酸酶(ACO)[32]、蘋果酸酶(ME)等是影響有機酸代謝的重要酶,其中ACO 可促使檸檬酸降解,從而導(dǎo)致成熟果實有機酸水平下降[33];ME活性升高,可以促進蘋果酸的降解和轉(zhuǎn)化[34]。因此,以余甘子果實發(fā)育為基礎(chǔ),研究余甘子果實的有機酸積累與代謝機制,有助于揭示果實有機酸代謝調(diào)控和提升果實品質(zhì)。

    1~16代表的余甘子種質(zhì)資源,與圖1相同1-16.Phyllanthus emblica germplasm resources with same order in Fig.1圖2 16份余甘子種質(zhì)資源系統(tǒng)的聚類分析結(jié)果Fig.2 Dendrogram obtained from cluster analysis of Phyllanthus emblica fruit quality in 16 germplasm resources

    余甘子果實中抗壞血酸豐富且穩(wěn)定,在高溫下能夠較長時間保持穩(wěn)定[35]且擁有多種生理功能,適宜作為食品加工及保健品原材料加以開發(fā)利用[36]。本研究通過相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn),余甘子中抗壞血酸含量與乳酸、乙酸、富馬酸含量呈極顯著正相關(guān),相關(guān)系數(shù)分別為0.713,0.879和0.950,表明余甘子果實的抗壞血酸含量與有機酸相關(guān)組分關(guān)系密切。已有研究表明,抗壞血酸及其氧化態(tài)脫氫抗壞血酸可與部分有機酸相互轉(zhuǎn)化[37],表明抗壞血酸代謝相關(guān)機制與有機酸密不可分。

    本研究通過評價模型對16份余甘子種質(zhì)的綜合評價表明,得分排名前10的種質(zhì)中有 8 份來自福建省,表明以糖酸指標評價時,福建省余甘子果實品質(zhì)占優(yōu),這是因為福建地區(qū)栽培歷史悠久,野生馴化的栽培品種較多,其有機酸等品質(zhì)較廣東品種更優(yōu),風味更為獨特,且與廣東種質(zhì)相比福建種質(zhì)口感多為偏酸類型。

    綜上所述,不同品種(系)余甘子種質(zhì)資源果實品質(zhì)表現(xiàn)出豐富的遺傳多樣性,從16份余甘子種質(zhì)資源果實中檢測到7種有機酸,其中乙酸、乳酸和檸檬酸含量較高;用主成分分析方法建立的綜合評價模型發(fā)現(xiàn),16份種質(zhì)資源中詔安土種1、柴甘、正甜、獅頭、尖屁股等品種(系)的綜合評價得分較高;主成分評分較高的種質(zhì)資源含有較多的抗壞血酸和有機酸等物質(zhì),適宜作為功能食品加工原材料加以開發(fā)利用。

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