miR-30b在子宮內(nèi)膜異位癥中的表達(dá)及功能研究

黃敏 徐超逸 陳海燕 朱旦華 梁宗文 段萍

[摘要] 目的 檢測miR-30b在子宮內(nèi)膜異位癥中的表達(dá)水平，并探究miR-30b對子宮內(nèi)膜異位癥的治療作用。 方法 2018年7月至2020年7月在溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院手術(shù)獲取的27例子宮內(nèi)膜異位癥患者病理組織為子宮內(nèi)膜異位癥組，15例子宮肌瘤患者子宮內(nèi)膜組織為正常子宮內(nèi)膜組。實時定量PCR（qRT-PCR）檢測組織中miR-30b的表達(dá)量。培養(yǎng)人原代子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞（HESCs），5-乙炔基-2′-脫氧尿苷摻入（EdU）法來檢測miR-30b對細(xì)胞增殖能力的影響。根據(jù)starBase 2.0軟件預(yù)測與miR-30b相互作用的長鏈非編碼RNA（lncRNA），使用qRT-PCR初步驗證該lncRNA在異位內(nèi)膜中的表達(dá)量及與miR-30b的相互關(guān)系。進(jìn)一步建造子宮內(nèi)膜異位癥SD大鼠模型，在活體實驗水平，使用miR-30b的模擬物來驗證miR-30b對子宮內(nèi)膜異位癥異位囊腫的治療作用。 結(jié)果 與正常子宮內(nèi)膜（EN）相比，miR-30b在子宮內(nèi)膜異位癥（EC）中的表達(dá)顯著下降。miR-30b的外源性過表達(dá)抑制了HESCs的增殖能力，同時，下調(diào)miR-30b的表達(dá)量可促進(jìn)HESCs的增殖能力。StarBase 2.0軟件預(yù)測lncRNA OIP5-AS1與miR-30b有多個結(jié)合位點，與正常內(nèi)膜比較，lncRNA OIP5-AS1在異位內(nèi)膜中表達(dá)上調(diào)，且與miR-30b的表達(dá)量呈負(fù)相關(guān)。此外，在子宮內(nèi)膜異位癥的大鼠模型中，miR-30b模擬物顯著抑制子宮內(nèi)膜異位癥異位囊腫的生長。 結(jié)論 miR-30b在異位子宮內(nèi)膜中低表達(dá)且抑制HESCs的增殖能力，可能成為子宮內(nèi)膜異位癥潛在的治療靶點。

[關(guān)鍵詞] 子宮內(nèi)膜異位癥;miR-30b;lncRNA OIP5-AS1;增殖;SD大鼠

[中圖分類號] R711.7? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1673-9701（2022）04-0035-05

[Abstract] Objective To detect the expression level of miR-30b in endometriosis and explore the therapeutic effect of miR-30b on endometriosis. Methods All specimens were obtained during surgery in the Second Affiliated Hospital of Wenzhou Medical University from July 2018 to July 2020. Quantitative real-time PCR （qRT-PCR） was used to detect the expression of miR-30b in tissues. The pathological tissues of 27 patients with endometriosis were extracted as the endometriosis group， and the endometrial tissues of 15 patients with uterine fibroids were extracted as the normal endometrium group. Human primary endometrial stromal cells （HESCs） were cultured， and 5-ethynyl-2′-deoxyuridine incorporation （EdU） assay was used to detect the effect of miR-30b on cell proliferation ability. Long non-coding RNAs （lncRNAs） that interact with miR-30b were predicted according to starBase 2.0 software. The expression of this lncRNA in ectopic endometrium and its interrelationship with miR-30b were preliminarily validated using qRT-PCR. Furthermore，a SD rat model of endometriosis was constructed. At the in vivo level， miR-30b mimics were used to validate the therapeutic effect of miR-30b on endometriotic ectopic cysts. Results The expression of miR-30b was significantly decreased in ectopic endometrium （EC） compared with normal endometrium （EN）. Exogenous overexpression of miR-30b inhibited the proliferation ability of HESCs. Meanwhile， down-regulation of miR-30b expression promoted the proliferation ability of HESCs. StarBase 2.0 software predicted that lncRNA OIP5-AS1 had multiple binding sites with miR-30b， and lncRNAOIP5-AS1 was up-regulated in ectopic endometrium compared with normal endometrium， and was negatively correlated with the expression of miR-30b. In addition， in a rat model of endometriosis，we observed that miR-30b mimics significantly inhibited the growth of endometriotic ectopic cysts. Conclusion miR-30b is lowly expressed in ectopic endometrium and inhibits the proliferation of HESCs， which may become a potential therapeutic target for endometriosis.

[Key words] Endometriosis; miR-30b; LncRNAOIP5-AS1; Proliferation; SD rat

子宮內(nèi)膜異位癥（簡稱內(nèi)異癥）的特征是子宮內(nèi)膜樣組織種植在子宮腔以外的部位，常見于卵巢、子宮骶韌帶及子宮直腸陷凹，引起盆腔包塊、進(jìn)行性加重的痛經(jīng)、性交痛及不孕等[1]。異位的子宮內(nèi)膜在盆腹腔內(nèi)能夠成為病灶，必須經(jīng)過粘附、侵襲和血管形成的三部曲，得以達(dá)到“生根、生長、生病”，與腫瘤的生物學(xué)行為類似[2-3]。近年來內(nèi)異癥的發(fā)病率呈上升趨勢，約有10%～15%的育齡期女性受其困擾，嚴(yán)重危害女性的身心健康，并增加經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。主要的治療手段為藥物聯(lián)合手術(shù)治療，但術(shù)后5年復(fù)發(fā)率達(dá)15%～50%[4]。因此，尋找新的治療靶點目前仍然是臨床的迫切需求。

miRNAs是一類小的非編碼RNA（約20～24個核苷酸），可在轉(zhuǎn)錄后水平控制許多下游信使RNA（mRNA）的表達(dá)。微小RNA與mRNA的3′非翻譯區(qū)（UTR）相互作用，誘導(dǎo)翻譯抑制或RNA降解[5]。越來越多的證據(jù)表明，miRNAs參與多種細(xì)胞功能，包括細(xì)胞增殖、凋亡、遷移、血管生成和分化[6]。其中miR-30b在許多腫瘤中顯著下調(diào)，并通過影響細(xì)胞生物學(xué)功能而抑制腫瘤發(fā)生[7]。但是，miR-30b在子宮內(nèi)膜異位癥中的表達(dá)和功能仍然是未知的。

長鏈非編碼RNA（lncRNA）是一類長度大于200 nt的RNA，可以作為“分子海綿”與mRNA競爭性結(jié)合miRNA，發(fā)揮內(nèi)源性競爭RNA（ceRNA）的作用，與細(xì)胞增殖、凋亡、侵襲和遷移密切相關(guān)[8]。lncRNA OIP5-AS1是一種新發(fā)現(xiàn)的lncRNA。一些學(xué)者對其在某些種類腫瘤中的表達(dá)狀態(tài)和功能作用進(jìn)行研究。Zou等[9]發(fā)現(xiàn)LncRNA OIP5-AS1在結(jié)直腸癌（CRC）細(xì)胞中抑制細(xì)胞活力并促進(jìn)放射誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。LncRNA OIP5-AS1通過調(diào)節(jié)肝細(xì)胞癌中miR-3163/VEGFA促進(jìn)細(xì)胞增殖和遷移并誘導(dǎo)血管生成[10]。但其在內(nèi)異癥中從未被報道。

本研究旨在驗證miR-30b在內(nèi)異癥中的表達(dá)水平及對人子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞（HESCs）增殖能力的影響。初步探討miR-30b是否通過ceRNA機(jī)制與lncRNA OIP5-AS1相互作用調(diào)控內(nèi)異癥的發(fā)生發(fā)展。此外，本研究建立子宮內(nèi)膜異位癥大鼠模型，進(jìn)一步驗證miR-30b在活體水平對內(nèi)異癥的作用，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 實驗器械及主要試劑

普通手術(shù)器械及眼科剪（溫州長風(fēng)有限公司）;miR-30b模擬物、抑制劑及其各自的陰性對照藥品（廣州銳博生物科技有限公司）;TRIzol試劑盒（Invitrogen，美國卡爾斯巴德）;NanoDrop ND-1000分光光度計（Nanodrop Technologies，美國威爾明頓）;反轉(zhuǎn)錄試劑盒（Toyobo Co，日本）;Ham′s F12/DMEM（Gibco BRL，美國馬里蘭州蓋瑟斯堡）;10%胎牛血清（Gibco BRL，美國馬里蘭州蓋瑟斯堡）;細(xì)胞培養(yǎng)瓶（BD Biosciences，美國）;Lipofectamine 2000（Life Technologies，美國）。

1.2 研究對象

1.2.1 臨床標(biāo)本? 收集2018年7月至2020年7月在溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院行腹腔鏡手術(shù)及術(shù)后病理證實為子宮內(nèi)膜異位癥患者的27例新鮮異位內(nèi)膜組織，取15例非子宮內(nèi)膜異位癥的子宮肌瘤患者新鮮正常子宮內(nèi)膜組織。納入研究27例的內(nèi)異癥患者組年齡25～39歲，平均（30.8±2.34）歲，15例正常內(nèi)膜組年齡26～40歲，平均（32.50±2.19）歲。兩組研究對象年齡比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。所有患者的排卵情況正常，月經(jīng)周期正常，并且至少在3個月內(nèi)沒有給予性激素藥物治療。所有組織樣品均在溫州醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院手術(shù)時收集。將樣品儲存在液氮中以備后用。本研究的所有方案均已獲得溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會的批準(zhǔn)（倫理批準(zhǔn)號：LCKY2020-88），所有書面知情同意書均由患者在參與本研究前簽署。

1.2.2 實驗動物? 選取性成熟雌性SD大鼠25只，6～8周齡，體重180～200 g，均購自溫州醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心，動物許可證號：SCXK（浙）2015-0001。給予標(biāo)準(zhǔn)光照（12 h光照，12 h黑夜），室內(nèi)溫度18～22℃，濕度40%～50%，標(biāo)準(zhǔn)飼料和水。實驗結(jié)束后，所有大鼠經(jīng)戊巴比妥鈉麻醉安樂死。研究經(jīng)動物倫理委員會批準(zhǔn)執(zhí)行。

1.3 實驗方法

1.3.1 RNA提取和實時定量PCR? 使用TRIzol試劑從冷凍組織中提取總RNA，并用200 ml無核酸酶的水洗脫，NanoDrop ND-1000分光光度計檢測RNA濃度，樣品在260/280的吸光度比要求在1.8～2.0。取2 μg總RNA于反轉(zhuǎn)錄試劑盒中進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。將反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物在PCR擴(kuò)增儀中進(jìn)行擴(kuò)增，反應(yīng)條件為94℃ 10 min預(yù)變性;95℃ 30 s、60℃ 20 s、72℃ 20 s，循環(huán)40次。以小核RNA（snRNA）U6作為內(nèi)參，使用2-DDCt方法計算miR-30b的相對表達(dá)水平。

1.3.2 人原代子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞（HESCs）的分離培養(yǎng)? 人原發(fā)性子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞（HESCs）按照先前描述的方法分離[16-17]。用含2%青霉素-鏈霉素的磷酸鹽緩沖鹽水（PBS）沖洗異位子宮內(nèi)膜（EC）組織，然后將其切成約1 mm3的碎片，并在含HEPES（25 mmol/ml），1%鏈霉素-青霉素，膠原酶Ⅳ（1 mg/ml，15 U/mg）和脫氧核糖核酸酶（0.1 mg/ml，1500 U/mg）的水浴中放置4 h。通過400目的過濾器（Falcon，美國紐約）分離子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞，并用Ham′s F12/DMEM（1∶1），熱滅活的10%胎牛血清（FBS）和1%青霉素混合液懸浮子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞。將細(xì)胞置入75 cm2的細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，在含5% CO2的37℃的恒溫恒濕培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。利用波形蛋白的免疫組織化學(xué)染色進(jìn)行細(xì)胞純度鑒定。

1.3.3 細(xì)胞轉(zhuǎn)染? miR-30b模擬物，miR-30b抑制劑及其各自的陰性對照購自廣州銳博生物。使用Lipofectamine 2000進(jìn)行miRNA轉(zhuǎn)染。miR-30b抑制劑及其對照組的濃度為100 nmol，miR-30b模擬物及其對照組的濃度為50 nmol。

1.3.4 細(xì)胞增殖能力測定? 使用EdU（5-乙炔基-2′-脫氧尿苷）摻入測定法檢測細(xì)胞增殖能力。先將HESCs在無血清培養(yǎng)基中饑餓24 h。轉(zhuǎn)染48 h后，使用EdU分析試劑盒檢測細(xì)胞增殖能力。通過將EdU陽性細(xì)胞的數(shù)量除以DAPI染色的細(xì)胞總數(shù)，可以計算出EdU陽性細(xì)胞的百分比。所有實驗至少重復(fù)3遍。

1.3.5 子宮內(nèi)膜異位癥大鼠模型的建立及動物給藥? 子宮內(nèi)膜異位癥大鼠模型是根據(jù)先前的研究，通過對大鼠子宮內(nèi)膜的自體移植建立的[16]。用2%戊巴比妥（2 g/100 ml）麻醉大鼠，在下腹部切一個大約1 cm的小切口，并逐層打開腹腔。左右兩側(cè)結(jié)扎左子宮角，切除中間部分，然后放入冷培養(yǎng)基中。去除脂肪組織，并小心地將子宮內(nèi)膜與子宮肌層分開。將子宮內(nèi)膜切成約5 mm×5 mm的兩段。在腹壁的每一側(cè)分離出皮下間隙，并將兩個子宮內(nèi)膜片分別放置在左和右間隙中，使子宮內(nèi)膜面向腹肌。術(shù)后每4天皮下注射0.1 mg/（kg·d）的苯甲酸雌二醇，共3次注射以促進(jìn)自體移植物的生長。公式V=1/2（L×W2）用于計算異位子宮內(nèi)膜異位囊腫的體積。將大鼠分為兩組，并向子宮內(nèi)膜異位囊腫中注入等體積的核酸溶液。模擬物對照組和miR-30b模擬物組注射1 nmol RNA;抑制劑對照組和miR-30b抑制劑組注射2.5 nmol RNA。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用Graphpad Prism 5.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行分析，所有實驗均重復(fù)3次。計量資料用（x±s）表示。多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較用LSD-t檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 miR-30b在子宮內(nèi)膜異位癥中低表達(dá)

miR-30b在眾多疾病中表達(dá)量下降，但在子宮內(nèi)膜異位癥中的表達(dá)量尚未報道。為了解miR-30b在子宮內(nèi)膜異位癥中的作用，使用實時定量PCR分析異位子宮內(nèi)膜（EC）組織和正常子宮內(nèi)膜（EN）組織中miR-30b的表達(dá)水平。miR-30b在正常子宮內(nèi)膜組（n=15）表達(dá)量為（0.88±0.13），而在異位子宮內(nèi)膜組（n=27）的表達(dá)量為（0.39±0.05），較正常子宮內(nèi)膜組顯著下降（P=0.0005）。見圖1。

2.2 miR-30b抑制人原代子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞的增殖能力

為進(jìn)一步探討miR-30b在子宮內(nèi)膜異位癥中的生物學(xué)功能，培養(yǎng)人原代子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞（HESCs）。使用miR-30b模擬物陰性對照及miR-30b模擬物轉(zhuǎn)染HESCs，上調(diào)miR-30b表達(dá)量，如封三圖1顯示，EdU增殖實驗結(jié)果顯示模擬物對照組增殖陽性的細(xì)胞比率為（0.048±0.003）%，而模擬物組增殖陽性的細(xì)胞比率為（0.036±0.001）%，細(xì)胞增殖能力較細(xì)胞對照組顯著下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），表明miR-30b過表達(dá)可以抑制HESCs的增殖能力;與此同時，使用miR-30b抑制劑及其陰性對照inhibitor NC轉(zhuǎn)染HESCs，下調(diào)miR-30b表達(dá)量，miR-30b抑制物對照組增殖陽性的細(xì)胞比率為（0.027±0.000）%，miR-30b抑制物組增殖陽性的細(xì)胞比率為（0.055±0.005）%，miR-30b抑制劑組增殖能力較對照組明顯上升，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。見表1。以上結(jié)果均表示miR-30b可以抑制HESCs的增殖能力。

2.3 在內(nèi)異癥中miR-30b與lncRNA OIP5-AS1的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)

lncRNA OIP5-AS1的基因ID為 ENSG000002 47556，本研究通過starBase軟件（starbase.sysu.edu.cn）進(jìn)行生物信息學(xué)分析，圖2A所示，預(yù)測miR-30b與OIP5-AS1在RNA水平的不同段堿基序列有多個結(jié)合位點。圖2B顯示，qRT-PCR驗證lncRNA OIP5-AS1的表達(dá)量，正常子宮內(nèi)膜組lncRNA OIP5-AS1的相對表達(dá)量為（1.64±0.54），而在異位子宮內(nèi)膜中的相對表達(dá)量為（3.90±0.64），與正常子宮內(nèi)膜組相比，lncRNA OIP5-AS1在異位內(nèi)膜中的表達(dá)顯著上升，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.0171）。圖2C顯示，本研究進(jìn)一步用Pearson相關(guān)性分析表明，與正常內(nèi)膜相比lncRNA OIP5-AS1在異位子宮內(nèi)膜中表達(dá)與miR-30b表達(dá)量呈負(fù)相關(guān)。

2.4 miR-30b抑制大鼠子宮內(nèi)膜異位癥模型的異位囊腫生長

為進(jìn)一步驗證miR-30b在子宮內(nèi)膜異位癥中的作用，本研究建立子宮內(nèi)膜異位癥大鼠模型，分別將miR-30b模擬物（n=6）及其陰性對照mimic NC（n=6）的核酸混合液注射至大鼠的異位囊腫，5 d一次，共20 d。將異位囊腫離體后，觀察到模擬物對照組異位囊腫體積為（20.61±0.77）cm3，miR-30b模擬物組異位囊腫體積為（11.97±1.09）cm3。見表2。與模擬物對照組相比，miR-30b模擬物組的異位囊腫體積明顯縮?。▓D3A），圖3B所示，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。表明miR-30可以抑制子宮內(nèi)膜異位癥異位囊腫的生長，對子宮內(nèi)膜異位癥有一定的治療作用。

3 討論

子宮內(nèi)膜異位癥是一種常見的婦科疾病，影響全球大約1.76億的育齡期婦女[11]。然而，到目前為止，其發(fā)病機(jī)制未明，手術(shù)去除病灶及性激素藥物治療為主要的治療手段，但高復(fù)發(fā)率和嚴(yán)重的副作用使其治療效果大打折扣[4，12]。所以尋找一種高效且副作用小的治療手段迫在眉睫。miRNA是一類含20～25個核苷酸的單鏈非編碼RNA，參與多種細(xì)胞功能，如細(xì)胞遷移、侵襲、增殖、凋亡、分化等[13-14]，并在子宮內(nèi)膜異位癥中扮演重要作用[15]。許多研究表明，miR-30b在多種疾病中差異表達(dá)，并調(diào)節(jié)這些疾病的發(fā)生和過程，包括膀胱癌[16]、胃癌[17]及結(jié)直腸癌[18]，但miR-30b在子宮內(nèi)膜異位癥中的作用尚未被報道。

本研究觀察到與正常子宮內(nèi)膜相比，miR-30b在異位內(nèi)膜組織中的表達(dá)量顯著下降。進(jìn)一步提取人原代子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞，結(jié)果顯示，上調(diào)miR-30b抑制子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞的增殖能力，而下調(diào)miR-30b則促進(jìn)細(xì)胞的增殖能力，表明miR-30b可以抑制子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞的增殖，進(jìn)而可以在一定程度上治療子宮內(nèi)膜異位癥。lncRNA是另一類非編碼RNA，可以作為“分子海綿”與mRNA競爭性結(jié)合miRNA，發(fā)揮內(nèi)源性競爭RNA（ceRNA）的作用，進(jìn)而參與細(xì)胞的眾多生物學(xué)功能[19-20]，因此本研究猜測miR-30b也通過與某個lncRNA競爭性結(jié)合影響內(nèi)異癥的發(fā)生發(fā)展。starBase軟件預(yù)測了miR-30b與lncRNA OIP5-AS1間存在的多個結(jié)合位點，并初步驗證miR-30b與lncRNA OIP5-AS1的負(fù)相關(guān)關(guān)系，提示miR-30b與lncRNA OIP5-AS1有可能通過ceRNA機(jī)制在內(nèi)異癥中發(fā)揮作用，miR-30b/lncRNA OIP5-AS1海綿體亦有可能是內(nèi)異癥的發(fā)病機(jī)制之一。在未來，本研究將使用熒光素酶報告實驗及RNA沉淀等實驗進(jìn)一步驗證miR-30b與lncRNA OIP5-AS1的關(guān)系。為了在活體實驗中驗證miR-30b的治療作用，本研究建立子宮內(nèi)膜異位癥的大鼠模型，結(jié)果表明miR-30b模擬物抑制了異位囊腫的生長，進(jìn)一步驗證miR-30b可以一定程度上治療子宮內(nèi)膜異位癥。

綜上所述，miR-30b在子宮內(nèi)膜異位癥中低表達(dá)，且與lncRNA OIP5-AS1的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。在體外水平抑制HESC的增殖能力，在活體實驗中抑制子宮內(nèi)膜異位囊腫的生長，提示miR-30b可能是子宮內(nèi)膜異位癥治療的新靶標(biāo)，且miR-30b/OIP5-AS1海綿體為內(nèi)異癥的發(fā)病機(jī)制提供了一定的理論依據(jù)。

[參考文獻(xiàn)]

[1] Chamie LP，Ribeiro D，Tiferes DA，et al. Atypical sites of deeply infiltrative endometriosis：Clinical characteristics and imaging findings[J]. Radiographics：A Review Publication of the Radiological Society of North America，2018， 38（1）：309-328.

[2] Perricos A，Wenzl R，Husslein H，et al. Does the use of the "proseek （R） multiplex oncology I panel" on peritoneal fluid allow a better insight in the pathophysiology of endometriosis，and in particular deep-infiltrating endometriosis？[J]. Journal of Clinical Medicine，2020，9（6）：2009.

[3] Vallee A，Lecarpentier Y. Curcumin and endometriosis[J].International Journal of Molecular Sciences，2020，21（7）：2440.

[4] Li WN，Wu MH，Tsai SJ. Hypoxia and reproductive health：The role of hypoxia in the development and progression of endometriosis[J].Reproduction，2021，161（1）：F19-F31.

[5] Gao X，Li S，Li W，et al.MicroRNA-539 suppresses tumor cell growth by targeting the WNT8B gene in non-small cell lung cancer[J].Journal of Cellular Biochemistry， 2017，120（2）：2687.

[6] Zhang F，Liu J，Xie BB. Downregulation of microRNA-205 inhibits cell invasion and angiogenesis of cervical cancer through TSLC1-mediated Akt signaling pathway[J].Journal of Cellular Physiology，2019，234（10）：18 626-18 638.

[7] Zhang Q，Liu S，Zhang J.Roles and regulatory mechanisms of miR-30b in cancer，cardiovascular disease，and metabolic disorders （Review）[J].Experimental and Therapeutic Medicine，2021，21（1）：44.

[8] Zou L，Chen L，Xia PF. XIST knockdown suppresses vascular smooth muscle cell proliferation and induces apoptosis by regulating miR-1264/WNT5A/beta-catenin signaling in aneurysm[J].Bioscience Reports 2021，41（3）：BSR20 201 810.

[9] Zou Y，Yao S，Chen X，et al.LncRNA OIP5-AS1 regulates radioresistance by targeting DYRK1A through miR-369-3p in colorectal cancer cells[J]. European Journal of Cell Biology，2018，97（5）：369-378.

[10] Shi C，Yang Q，Pan S，et al. LncRNA OIP5-AS1 promotes cell proliferation and migration and induces angiogenesis via regulating miR-3163/VEGFA in hepatocellular carcinoma[J].Cancer Biology & Therapy，2020，21（7）：604-614.

[11] Brunty S，Mitchell B，Bou-Zgheib N，et al. Endometriosis and ovarian cancer risk，An epigenetic connection[J].Annals of Translational Medicine，2020， 8（24）：1715.

[12] Chen I，Veth VB，Choudhry AJ，et al. Pre- and postsurgical medical therapy for endometriosis surgery[J].The Cochrane Database of Systematic Reviews，2020，11：CD003 678.

[13] Xu Q，Xu Z.miR-196b-5p promotes proliferation，migration and invasion of lung adenocarcinoma cells via targeting RSPO2[J].Cancer Management and Research，2020， 12：13 393-13 402.

[14] Guzel TE，Ozturk S.miR-145 suppresses epithelial-mesenchymal transition by targeting stem cells in Ewing sarcoma cells[J]. Bratislavske Lekarske Listy，2021， 122（1）：71-77.

[15] Agrawal S，Tapmeier T，Rahmioglu N，et al. The miRNA mirage：How close are we to finding a non-invasive diagnostic biomarker in endometriosis？A systematic review[J]. International Journal of Molecular Sciences，2018，19（2）：599.

[16] Mahdavinezhad A，Mousavibahar SH，Poorolajal J，et al. Association between tissue miR-141，miR-200c and miR-30b and bladder cancer：A matched case-control study[J]. Urology Journal，2015，12（1）：2010-2013.

[17] Xi Z，Si J，Nan J.LncRNA MALAT1 potentiates autophag yassociated cisplatin resistance by regulating the micro RNA30b/autophagyrelated gene 5 axis in gastric cancer[J].International Journal of Oncology，2019，54（1）：239-248.

[18] Fan M，Ma X，Wang F，et al. MicroRNA-30b-5p func- tions as a metastasis suppressor in colorectal cancer by targeting Rap1b[J].Cancer Letters，2020，477：144-156.

[19] Liu S，Xie S，Chen H，et al. The functional analysis of transiently upregulated miR-101 suggests a "braking" regulatory mechanism during myogenesis[J].Science China Life Sciences，2021，64（10）：1612-1623.

[20] Zhao Z，Liu G，Zhang H，et al. BIRC5，GAJ5，and lncRNA NPHP3-AS1 are correlated with the development of atrial fibrillation-valvular heart disease[J].International Heart Journal，2021，62（1）：153-161.

（收稿日期：2021-02-19）