錦燈籠和枸杞子水提液對乳酸菌的促生作用

姜 琦，風(fēng) 蘭，辛 毅，李新莉

（大連醫(yī)科大學(xué)生物技術(shù)系，遼寧大連 116044）

錦燈籠和枸杞子水提液對乳酸菌的促生作用

姜 琦，風(fēng) 蘭，辛 毅，李新莉

（大連醫(yī)科大學(xué)生物技術(shù)系，遼寧大連 116044）

目的 研究錦燈籠和枸杞子對乳酸菌的促生作用，為微生態(tài)制劑的開發(fā)及中藥合理使用提供理論依據(jù)。方法 將不同濃度的錦燈籠和枸杞子水提液添加到乳酸菌的體外生長培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)48h，活菌計數(shù)。結(jié)果 2％和5％的錦燈籠以及0.5％和1％的枸杞子對乳酸菌生長具有明顯的促進作用（P＜0.01），5％的錦燈籠促進乳酸菌生長的效果最好，菌數(shù)分別是對照組的1.6倍左右，但隨著藥物濃度的增加，兩種藥物促乳酸菌生長的作用顯著減弱。結(jié)論 一定濃度的錦燈籠和枸杞子水提液能夠促進乳酸菌的生長。

錦燈籠；枸杞子；乳酸菌；促生作用

人體腸道中益生菌和致病菌協(xié)調(diào)并存又相互制約，形成復(fù)雜而穩(wěn)定的微生態(tài)環(huán)境［1］。其中，乳酸菌黏附于腸上皮細胞表面，在增強機體免疫力、降解有毒物質(zhì)、激活免疫應(yīng)答等方面發(fā)揮著重要作用［2］，且能夠促進宿主的消化、吸收和腸胃功能［3］。

錦燈籠Physalis alkekengi L var.francheti（Mast.）Makino又名掛金燈、酸漿、紅姑娘，具有清熱解毒、利咽化痰、利尿等功效［4］。枸杞子為寧夏枸杞Lycium barbarismL.的干燥成熟果實，用于治療虛勞精虧、腰膝酸痛、眩暈耳鳴、內(nèi)熱消渴、血虛萎黃、目眩不明等證［5］。二者為茄科植物，且藥食同源，主要成分為甾體、多糖、蛋白質(zhì)、黃酮等。其中，酸漿多糖（Physalis alkekengi var.francheti polysaccharide，PPSB）和枸杞多糖（Lycium barbarism polysaeeharide，LPB）均有抗衰老［6－7］、增強機體免疫力的功效。

乳酸菌是人體腸道中正常的優(yōu)勢菌群，在維持人體腸道微生態(tài)平衡，增強機體免疫力，合成人體所需的某些營養(yǎng)物質(zhì)等方面發(fā)揮重要作用。大量文獻表明，中藥提取物能夠促進腸道正常有益菌群的生長，可維護機體微生態(tài)平衡。曹國文等［8］選用黨參、黃芪、山楂等對乳酸桿菌進行體外培養(yǎng)，促進了乳酸桿菌的增殖。丁軻等［9］研究了白術(shù)、黃芪、陳皮、黨參、麥芽等15種中藥，結(jié)果表明這些中藥都對乳酸桿菌有不同程度的促進作用。本實驗初步研究錦燈籠和枸杞子對乳酸菌的體外促生作用，為微生態(tài)制劑的開發(fā)及中藥合理使用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器 錦燈籠、枸杞子購自大連市中藥房；乳酸細菌培養(yǎng)基：山東省青島海博生物技術(shù)有限公司；瓊脂粉：北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司；氯化鈉、氯化鋇、硫酸等均為分析純：上海國藥集團化學(xué)試劑有限公司。Lactobacillus delbrueckii ATCC 7830德氏乳酸桿菌由大連醫(yī)科大學(xué)生物技術(shù)系提供。

RE－52A型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：上海亞榮生化儀器廠；SHZ－82恒溫振蕩器：常州國華電器有限公司；DHG－9071A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱：上海申光儀器儀表有限公司；HC－3018R高速冷凍離心機：安徽中科中佳科學(xué)儀器有限公司；SE－CJ－2FD潔凈工作臺：上海博迅實業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠。

1.2 實驗方法

1.2.1 中藥水提液制備：稱取錦燈籠和枸杞子各100g，分別加水1L，浸泡1h，煎煮1h，過濾，濾渣加同量水再煎1次［10］，合并濾液蒸發(fā)濃縮至250 ml，生藥含量為0.4g／ml。115℃高壓滅菌15min后放冰箱備用。

1.2.2 培養(yǎng)基制備：以乳酸細菌液體培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，分別添加體積分數(shù)分別為2％、5％、7％和10％的錦燈籠水提液，得到錦燈籠乳酸細菌固體培養(yǎng)基；以乳酸細菌液體培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，分別添加體積分數(shù)分別為0.5％、1％、1.5％和2％的枸杞子水提液，得到枸杞子乳酸細菌固體培養(yǎng)基，二者均補足水分后于115℃高壓滅菌15min。乳酸細菌固體培養(yǎng)基為乳酸細菌液體培養(yǎng)基加1％的瓊脂粉。

1.2.3 菌液制備：將德氏乳酸桿菌劃線接種于乳酸細菌固體培養(yǎng)基上，37℃厭氧條件下培養(yǎng)48h，用接種環(huán)刮取少量菌苔，加無菌生理鹽水配成每毫升

（1～2）×108集落形成單位（colony forming unit，CFU）的菌懸液［11］，稀釋10 000倍備用。

1.2.4 細菌計數(shù)法：將錦燈籠和枸杞子乳酸細菌固體培養(yǎng)基各20ml傾入無菌平皿中，待冷卻凝固后，吸取備用菌懸液10μl于平皿內(nèi)，用無菌玻耙涂布均勻，以不加藥液的乳酸細菌固體培養(yǎng)基為對照，37℃厭氧條件下培養(yǎng)48h，進行活菌計數(shù)［12］，每個實驗濃度重復(fù)3次。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 10.0進行統(tǒng)計學(xué)分析，連續(xù)型變量采用“均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）”進行統(tǒng)計學(xué)描述，組間均數(shù)比較采用方差分析。

2 結(jié)果

見表1。不同種類、濃度的中草藥對乳酸菌的作用不完全相同。其中，2％和5％的錦燈籠對德氏乳酸桿菌生長表現(xiàn)出顯著的促進作用（P＜0.01），5％錦燈籠促進乳酸菌生長效果最好，菌數(shù)是對照組菌數(shù)的1.6倍左右，但隨著藥物濃度的增加，這種促生長作用減弱。0.5％和1％的枸杞子也顯著促進乳酸菌的生長（P＜0.01），菌數(shù)是對照組的1.4倍左右，隨著藥物濃度的增加，促生長作用也減弱。

表1 錦燈籠和枸杞子對乳酸菌生長的影響（±s，n＝3）

表1 錦燈籠和枸杞子對乳酸菌生長的影響（±s，n＝3）

注：與0.0％藥物濃度組比較，＊＊P＜0.01。

錦燈籠濃度／％活菌數(shù)／（108 CFU／ml）枸杞子濃度／％活菌數(shù)／（108 CFU／ml）0.0 1.60±0.02 0.0 1.60±0.02 2.0 1.71±0.02＊＊0.5 2.25±0.13＊＊5.0 2.48±0.07＊＊1.0 2.34±0.09＊＊7.0 0.65±0.03＊＊1.5 0.87±0.14＊＊10.0 0.51±0.02＊＊2.0 0.61±0.02＊＊

3 討論

本實驗首次考察了不同濃度的錦燈籠和枸杞子水提液對德氏乳酸桿菌的促生作用。結(jié)果表明，不同的中草藥及其濃度對乳酸菌的作用不完全相同，適宜濃度的錦燈籠和枸杞子可以促進乳酸菌的生長，但隨著藥物濃度的增加，促生長作用也減弱。結(jié)果表明兩藥對乳酸菌的促生效應(yīng)呈一定的劑量依賴關(guān)系，過低或過高劑量均會影響其療效。其原因可能為：①德氏乳酸桿菌的增殖主要利用糖類［13］，對蛋白質(zhì)的利用率低。當(dāng)中藥含量低時，多糖含量較多而蛋白質(zhì)較少，促進其增殖；當(dāng)中藥含量高時，蛋白質(zhì)起了主要作用，抑制德氏乳酸桿菌的增殖［13］，所以低濃度的錦燈籠和枸杞子水提液能夠促進乳酸菌的增殖，而高濃度則抑制生長。②中藥成分復(fù)雜，可能同時存在某些促生長因子或抑制因子，中藥對乳酸菌生長的影響受藥液種類、濃度及菌種的耐受性等多種因素的影響。因此，隨著錦燈籠和枸杞子藥物濃度的增大，其中某些抑制因子發(fā)揮主導(dǎo)作用，促生長作用隨之減弱。③乳酸菌等益生菌通過分泌到細胞外的各種酶如α－D－半乳糖苷酶、D－木糖苷酶等來分解利用中藥益生元，促進益生菌生長繁殖［14］。

總之，一定濃度的錦燈籠和枸杞子水提液能夠促進乳酸菌的生長，為微生態(tài)制劑的開發(fā)及中藥合理使用提供了理論依據(jù)。這種中藥微生態(tài)制劑若與抗生素合用，會減弱藥物對益生菌的抑制和殺死作用，維持腸道菌群平衡。中藥以其獨特性能如天然性、整體調(diào)節(jié)、扶正祛邪、雙向調(diào)節(jié)等作用，將有可能在一定程度上解決抗生素帶來的不良反應(yīng)［15］，并在治病防病、調(diào)節(jié)機體免疫功能、平衡腸道微生態(tài)平衡等方面發(fā)揮一定的作用，但這類中藥中具體的促生作用物質(zhì)基礎(chǔ)尚有待于進一步研究。

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Growth－Promoting Effects of Physalis alkekengi L.var.franchetii（Mast.）Makino and Lycium barbarumL.on Lactobacillus

JIANG Qi，F(xiàn)ENG Lan，XIN Yi，LI Xin－li
（Department of Biotechnology，Dalian Medical University，Liaoning Dalian 116044，China）

Objective To study the growth－promoting effects of Physalis alkekengi L.var.franchetii（Mast.）Makino and Lycium barbarumL.on Lactobacillus and to provide a theoretical basis for the development of microecologics and proper use of traditional Chinese medicines.Methods Different concentrations of water extracts of P.alkekengi L.var.franchetii（Mast.）Makino and L.barbarumL.were added into the in vitro culture medium of Lactobacillus delbrueckii，and then viable count was performed after 48hof culture at 37℃.Results The growth of L.delbrueckii was significantly promoted by 2％and 5％water extracts of P.alkekengi L.var.franchetii（Mast.）Makino and 0.5％and 1％of water extracts of L.barbarumL.（P＜0.01）；5％water extract of P.alkekengi L.var.franchetii（Mast.）Makino had the best growth－promoting effect，and it led to an about 1.6－fold increase in the number of bacteria as compared with that in the control group.However，the growthpromoting effects of the two medicines decreased significantly as their concentrations increased.Conclusion The growth of Lactobacillus can be promoted by certain concentrations of water extracts of P.alkekengi L.var.franchetii（Mast.）Makino and L.barbarumL.

Physalis alkekengi L.var.franchetii（Mast.）Makino；Lycium barbarumL.；Lactobacillus；Growth－promoting effect

R285.5

A

10.3969／j.issn.2095－7246.2014.02.027

2013－07－11）

遼寧省高等教育本科教學(xué)改革研究項目（遼教發(fā)［2012］130－772）

姜琦（1991－），女，在讀本科生

李新莉，linxinlibio＠163.com