極光激酶B、腫瘤蛋白53在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)及與臨床病理特征、預(yù)后的關(guān)系

楊怡 席子涵 張林穎

研究發(fā)現(xiàn)，肝細(xì)胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)病理變化與酗酒、病毒感染、有絲分裂異常、免疫調(diào)節(jié)、基因突變、信號異常轉(zhuǎn)導(dǎo)等有關(guān)[1-4]。經(jīng)生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，極光激酶B(aurora kinase B, AURKB)是HCC病變過程中的核心基因，其可能在HCC發(fā)生發(fā)展中起作用[5]；另外，腫瘤蛋白P53(tumor protein P53, TP53)在HCC患者中呈高表達(dá)，其可能是診治HCC的潛在靶點(diǎn)[6]。本研究通過測定HCC患者癌組織中AURKB、TP53表達(dá)水平，探究二者與HCC臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系，以期為臨床診治HCC、改善預(yù)后提供參考。

資料與方法

一、臨床資料

選取2015年4月至2018年1月于空軍軍醫(yī)大學(xué)第一附屬醫(yī)院行根治性切除術(shù)的Ⅱ期HCC患者95例，年齡為(51.8±11.4)歲；男65例，女30例；年齡<50歲者43例，年齡≥50歲者52例；單發(fā)腫瘤者38例，多發(fā)腫瘤者57例；病灶無轉(zhuǎn)移者33例，病灶轉(zhuǎn)移者62例；低分化者41例，中、高分化者54例。

納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合HCC診斷標(biāo)準(zhǔn)[7]，術(shù)后病理檢查確診；②患者術(shù)前未經(jīng)過分子靶向治療、放化療等抗腫瘤治療；③具有完整檢查資料。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他惡性腫瘤者；②妊娠期/哺乳期女性；③合并炎癥性腸病、胃腸道潰瘍者。

本研究符合《赫爾辛基宣言》，經(jīng)本院倫理委員會批準(zhǔn)，且受試者均知情同意。

二、方法

(一)Ualcan數(shù)據(jù)庫檢索 利用Ualcan數(shù)據(jù)庫(http://ualcan.path.uab.edu)檢索AURKB、TP53表達(dá)水平。gene symbol設(shè)置為AURKB、TP53，TCGA數(shù)據(jù)集設(shè)定為Liver hepatocellular carcinoma，進(jìn)行檢索。

(二)組織標(biāo)本收集 將根治性切除的HCC組織標(biāo)本、癌旁正常組織標(biāo)本(距離癌組織>2 cm)置于液氮罐中約24 h后，移至-80℃冰箱中保存。

(三)實(shí)時熒光定量PCR(quantitative real-time PCR，qRT-PCR)法檢測組織標(biāo)本AURKB、TP53 mRNA表達(dá)水平

將凍存組織標(biāo)本研碎，用TRIzol試劑盒(美國Invitrogen公司)提取總RNA，使用First Strand cDNA Synthesis試劑盒(上海鈺博生物科技有限公司)將RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA，利用Perfectstart SYBR Green qPCR master mix(北京索萊寶科技有限公司)、qRT-PCR儀(StepOne TM，美國ABI公司)將cDNA進(jìn)行擴(kuò)增、檢測。擴(kuò)增循環(huán)參數(shù)為96℃預(yù)變性4 min；95℃變性25 s，64℃退火/延伸30 s，40個循環(huán)。AURKB、TP53均以GAPDH為內(nèi)參，引物序列見表1。以2-ΔΔCT法計(jì)算AURKB、TP53 mRNA相對表達(dá)量。

三、隨訪

對95例HCC患者術(shù)后隨訪3年(以微信/電話/門診方式隨訪)，隨訪截至2021年1月或HCC患者死亡，統(tǒng)計(jì)分析HCC患者生存情況。

表1 AURKB、TP53、GAPDH引物序列

四、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

結(jié) 果

一、Ualcan數(shù)據(jù)庫中HCC組織和正常肝組織AURKB、TP53 mRNA表達(dá)水平比較

Ualcan數(shù)據(jù)庫中，HCC組織AURKB、TP53 mRNA表達(dá)水平分別為5.00(2.12, 10.575)和19.91(12.77, 29.72)，均高于正常肝組織的0.27(0.19, 0.88)和13.37(11.24, 15.29)，(P<0.05)。

二、HCC患者組織中AURKB、TP53 mRNA表達(dá)情況

HCC組織中AURKB和TP53 mRNA表達(dá)水平分別為(1.82±0.61)和(1.75±0.59)，高于癌旁正常組織的(1.01±0.34)和(1.04±0.35)，(P<0.05)。

三、HCC組織AURKB、TP53 mRNA表達(dá)水平與臨床特征關(guān)系

以HCC組織AURKB(1.82)、TP53 mRNA(1.75)表達(dá)平均值為界，48例高于AURKB平均值的HCC患者為AURKB高表達(dá)組，47例低于AURKB平均值的HCC患者為AURKB低表達(dá)組；46例高于TP53平均值的HCC患者為TP53高表達(dá)組，49例低于TP53平均值的HCC患者為TP53低表達(dá)組。結(jié)果顯示，HCC組織AURKB、TP53 mRNA表達(dá)水平與病灶轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)(P<0.05)，與腫瘤分化程度呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)，與性別、年齡、腫瘤數(shù)目無關(guān)(P>0.05)。見表2。

四、HCC組織中AURKB mRNA表達(dá)水平與TP53 mRNA的相關(guān)性

HCC組織中AURKB mRNA表達(dá)水平與TP53 mRNA呈正相關(guān)(r=0.577，P<0.05)。見圖1。

圖1 95例HCC患者肝癌組織中AURKB mRNA表達(dá)水平與TP53 mRNA的相關(guān)性

表2 HCC組織AURKB、TP53 mRNA表達(dá)水平與臨床特征關(guān)系[例(%)]

五、HCC組織AURKB、TP53 mRNA表達(dá)水平與HCC患者預(yù)后的關(guān)系

對95例HCC患者隨訪36個月，死亡40例，總生存率為57.89%。AURKB高表達(dá)組HCC患者術(shù)后36個月總生存率為41.67%，明顯低于AURKB低表達(dá)組總生存率74.47%(χ2=10.482，P=0.001)；TP53高表達(dá)組HCC患者術(shù)后36個月總生存率為34.78%，明顯低于TP53低表達(dá)組總生存率79.59%(χ2=19.543，P<0.01)。Kaplan-Meier生存曲線分析顯示，AURKB高表達(dá)組HCC患者術(shù)后36個月累積生存率明顯低于AURKB低表達(dá)組(χ2=10.449，P=0.001)；TP53高表達(dá)組HCC患者術(shù)后36個月累積生存率明顯低于TP53低表達(dá)組(χ2=20.319，P<0.01)。

六、Cox回歸分析HCC患者預(yù)后的影響因素

單因素Cox分析顯示，病灶轉(zhuǎn)移、AURKB、TP53是影響HCC患者不良預(yù)后的危險因素(P<0.05)，分化程度是影響HCC患者不良預(yù)后的保護(hù)因素(P<0.05)；多因素Cox分析結(jié)果顯示，病灶轉(zhuǎn)移、AURKB、TP53均是影響HCC患者不良預(yù)后的獨(dú)立危險因素(P<0.05)。見表3。

討 論

HCC惡性程度高，患者的總體生存預(yù)后差。因此，為延長HCC患者生存期、改善預(yù)后，需尋找影響HCC發(fā)病，且可評估HCC患者預(yù)后的指標(biāo)。

AURKB可調(diào)控染色體濃縮，影響雙極紡錘體形成、細(xì)胞質(zhì)分裂，與腫瘤病理過程密切相關(guān)[8-9]。近期報道，AURKB有望成為診治肺腺癌的潛在靶標(biāo)[10]；另外，AURKB可能通過靶向調(diào)節(jié)相關(guān)基因表達(dá)，進(jìn)而促進(jìn)胃癌發(fā)生發(fā)展，其可能是胃癌的潛在治療靶點(diǎn)[11-12]。本研究與黃康等[5]研究結(jié)果及Ualcan數(shù)據(jù)庫結(jié)果趨勢一致，提示AURKB表達(dá)異常可能與HCC病變進(jìn)程有關(guān)，但具體機(jī)制有待結(jié)合基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步探究證實(shí)。此外，本研究顯示，HCC組織AURKB mRNA表達(dá)水平與病灶轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)，與分化程度呈負(fù)相關(guān)，提示AURKB與HCC病情進(jìn)展關(guān)系密切，AURKB可能是治療HCC的潛在靶標(biāo)。

TP53基因可調(diào)控多種基因表達(dá)，參與信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、監(jiān)測G1、G2/M檢測點(diǎn)，調(diào)節(jié)細(xì)胞周期[13-14]。研究發(fā)現(xiàn)，TP53在食管鱗癌患者中呈過表達(dá)，具有評估食管鱗癌患者預(yù)后的潛在價值[15]；另外，TP53在卵巢癌中表達(dá)水平升高，與腫瘤分化程度及卵巢癌患者預(yù)后顯著相關(guān)[16]。本研究與王艷梅等[6]研究結(jié)果及Ualcan數(shù)據(jù)庫結(jié)果相符，提示TP53可能在HCC中起作用，其原因是野生型P53可通過調(diào)控細(xì)胞生長、凋亡而發(fā)揮抑癌作用，促進(jìn)血管新生[16]，在HCC中發(fā)揮促癌作用，但TP53突變在HCC的作用機(jī)制及突變程度仍需深入探究。本研究中TP53 mRNA水平隨分化程度降低、病灶轉(zhuǎn)移而升高，提示TP53與HCC病理進(jìn)展密切相關(guān)，檢測癌組織TP53表達(dá)水平有利于判定HCC患者病情，確定針對性治療方案。

既往研究顯示，AURKB可調(diào)節(jié)P53表達(dá)[17]，研究提示AURKB、TP53可能共同影響HCC病變進(jìn)程，其具體機(jī)制仍需進(jìn)一步探討。本研究顯示AURKB、TP53與HCC患者預(yù)后相關(guān)，AURKB、TP53 mRNA表達(dá)水平越高，HCC患者預(yù)后可能越差。此外，病灶轉(zhuǎn)移、AURKB、TP53表達(dá)水平上調(diào)均可能會使HCC患者發(fā)生不良預(yù)后風(fēng)險升高，測定癌組織AURKB、TP53表達(dá)水平有助于及早診治、評估HCC預(yù)后。

表3 Cox回歸分析HCC患者預(yù)后影響因素