基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)探析三化湯治療中風(fēng)組方的科學(xué)內(nèi)涵

楊長(zhǎng)花，程 芬，彭修娟，劉 峰，2*，戶憲珍，許 剛，2，李 華

1.陜西國(guó)際商貿(mào)學(xué)院，咸陽(yáng) 712046；2.陜西步長(zhǎng)制藥有限公司，西安 710075；3.陜西省核工業(yè)215醫(yī)院，咸陽(yáng) 712046；4.咸陽(yáng)市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，咸陽(yáng) 712046

經(jīng)典名方三化湯出自《素問(wèn)病機(jī)氣宜保命集·中風(fēng)論第十》，為金元醫(yī)家劉完素創(chuàng)制，劉氏在其著作中述及：“若忽中臟者，則大便多秘澀，宜以三化湯通其滯?！眲⑹细嬖V后人，三化湯用于治療中風(fēng)中臟腑的急性期伴有大便不通發(fā)作的患者。三化湯由大黃、枳實(shí)、厚樸、羌活組成，主治中風(fēng)外有六經(jīng)之行證，內(nèi)有便溺之阻格[1-2]。4味藥古籍記載均有治療中風(fēng)的作用[3]。三化湯的方解是大黃為君，瀉實(shí)攻積，清熱瀉火；枳實(shí)為臣，破氣除痞，化痰消積；厚樸為佐，行氣、燥濕、消積；羌活為使，散寒祛風(fēng)，勝濕止痛，諸藥合用，共奏通經(jīng)絡(luò)、瀉腑實(shí)的作用[4]，全方宣行氣血、通腑開(kāi)結(jié)、調(diào)暢氣機(jī)、開(kāi)通玄府。

用人單位及社會(huì)評(píng)價(jià)好壞是判斷課程改革及人才培養(yǎng)是否成功的根本標(biāo)準(zhǔn)，通過(guò)到用人單位調(diào)研及發(fā)放就業(yè)調(diào)查表等方式與用人單位進(jìn)行了深層次的交流及探討，大部分用人單位對(duì)課改的效果表示認(rèn)同，認(rèn)為學(xué)生在崗位上表現(xiàn)出的專(zhuān)業(yè)能力及素質(zhì)水平明顯優(yōu)于以前。

網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)是從系統(tǒng)角度分析藥物與機(jī)體的交互作用[5]，能體現(xiàn)中醫(yī)治療疾病多途徑、多靶點(diǎn)的特點(diǎn)[6]，可以采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)來(lái)研究中藥的作用機(jī)制。中醫(yī)藥整合藥理學(xué)研究平臺(tái) V2.0(Integrative Pharmacology-based Research Platform of Traditional Chinese Medicine，TCMIP V2.0)是在TCMIP V1.0的基礎(chǔ)上升級(jí)、優(yōu)化而建成的網(wǎng)絡(luò)藥理預(yù)測(cè)平臺(tái)，是預(yù)測(cè)和揭示中藥分子作用機(jī)制的數(shù)據(jù)研究平臺(tái)，其數(shù)據(jù)主要來(lái)自中醫(yī)藥百科全書(shū)(an encyclopaedia of traditional Chinese medicine，ETCM)的中藥材數(shù)據(jù)庫(kù)、中藥方劑數(shù)據(jù)庫(kù)、中藥成分?jǐn)?shù)據(jù)庫(kù)、中藥靶標(biāo)數(shù)據(jù)庫(kù)、疾病相關(guān)分子庫(kù)五大數(shù)據(jù)庫(kù)，可以進(jìn)行中藥、方劑、疾病、靶標(biāo)、功能、通路之間的網(wǎng)絡(luò)關(guān)聯(lián)預(yù)測(cè)，并可以建立可視化的網(wǎng)絡(luò)構(gòu)圖，從而揭示中醫(yī)藥治療疾病的科學(xué)內(nèi)涵。本研究擬采用該平臺(tái)，研究經(jīng)典名方三化湯治療中風(fēng)的作用機(jī)制，揭示其治療中風(fēng)的科學(xué)內(nèi)涵。

1 資料與方法

1.1 三化湯組成藥味的使用規(guī)律分析

在TCMIP V2.0平臺(tái)，在功能列表菜單欄選“組方用藥規(guī)律分析”模塊，方劑組成輸入處方藥味，主治疾病輸入“stroke”，勾選分析類(lèi)型，單擊提交，即可得到三化湯組成藥味在治療中風(fēng)方劑中的使用情況。

1.2 三化湯靶標(biāo)預(yù)測(cè)及功能分析

在功能列表菜單欄選“中藥(含方劑)靶標(biāo)預(yù)測(cè)及功能分析”模塊，選擇“藥材”，輸入三化湯處方藥味大黃、厚樸、枳實(shí)、羌活，勾選成分成藥性，數(shù)據(jù)庫(kù)勾選“GO”和“Reactome Pathway”，點(diǎn)擊提交，命名方劑，即可得到處方的靶標(biāo)預(yù)測(cè)和功能分析。再使用韋恩圖，即可得到三化湯組成藥味之間作用靶標(biāo)的交互圖。

1.3 三化湯中醫(yī)藥關(guān)聯(lián)網(wǎng)絡(luò)挖掘

在中醫(yī)藥關(guān)聯(lián)網(wǎng)絡(luò)挖掘模塊，選擇“疾病-方劑”，疾病輸入“stroke”，選方劑，點(diǎn)擊名稱(chēng)，提交，即可得到疾病-方劑相關(guān)的核心靶標(biāo)和網(wǎng)絡(luò)構(gòu)圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 三化湯組成藥味使用規(guī)律的分析

在閩西北地區(qū)洋桔梗常見(jiàn)的病害有葉斑病、立枯病、霜霉病和灰霉病[5]。葉斑病用80%戊唑醇水分散粒劑6000～8000倍液噴霧防治。立枯病用3%甲霜·噁霉靈水劑(甲霜靈0.5%+噁霉靈2.5%)兌水噴霧。霜霉病可用增威贏綠殺菌劑+80%代森錳鋅可濕性粉劑600～800倍液，連續(xù)噴施2～3次?；颐共】蛇B續(xù)噴施20%腐霉利400～500倍液，每5～7 d噴1次，連續(xù)2次。平時(shí)要加強(qiáng)通風(fēng)，降低棚內(nèi)空氣濕度，減少類(lèi)似病例發(fā)生。

近3000名學(xué)生在學(xué)校里學(xué)習(xí)、生活，守護(hù)他們的安全，讓他們健康成長(zhǎng)，這是一位校長(zhǎng)的天職?？赡軐?xiě)信給我的這個(gè)孩子剛好目睹了這一切。這是一個(gè)細(xì)心的學(xué)生，也是一個(gè)有心的學(xué)生。我放下手中的信，感到內(nèi)心非常充實(shí)，因?yàn)槲铱吹綄W(xué)校的付出和培育有了成果。這成果不是學(xué)生考了高分，進(jìn)了名校，也不是他們一朝聲名顯赫，獲得高官厚祿，而是孩子澄澈的心靈和樸素的語(yǔ)言告訴我—他們有一顆感恩的心，他們知道自己的成長(zhǎng)有賴于許多人的相助，包括做清潔的、做飯的叔叔阿姨。這是我做校長(zhǎng)、當(dāng)老師最大的欣慰，這是培英教育的成功。

三化湯組成藥味有厚樸、大黃、枳實(shí)、羌活，研究治療中風(fēng)的成方制劑，統(tǒng)計(jì)分析該4味藥在治療中風(fēng)的方劑中出現(xiàn)的頻次和藥對(duì)出現(xiàn)的頻次，結(jié)果見(jiàn)表1。在治療中風(fēng)的7個(gè)成方制劑中，羌活出現(xiàn)7次，大黃出現(xiàn)4次，厚樸出現(xiàn)2次，表明羌活、大黃、厚樸是治療中風(fēng)的關(guān)鍵藥味。再進(jìn)行處方藥味治療中風(fēng)的藥對(duì)分析，羌活組成71對(duì)，大黃組成58對(duì)，厚樸組成48對(duì)，進(jìn)一步說(shuō)明羌活、大黃、厚樸是治療中風(fēng)的關(guān)鍵藥味。

2.2 三化湯組成藥味化學(xué)成分及靶標(biāo)的分析

參與機(jī)體炎癥反應(yīng)和免疫應(yīng)答的核心靶標(biāo)有VHL、NR3C1、ESR1和NFKBIA。VHL基因與β-連環(huán)蛋白、缺氧誘導(dǎo)因子、氧化磷酸化的調(diào)控有密切的關(guān)系[15-16]。NR3C1是糖皮質(zhì)激素受體基因，糖皮質(zhì)激素是在促腎上腺素激素作用下，刺激腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞分泌的一種類(lèi)固醇激素，具有抗炎和調(diào)節(jié)免疫的作用，糖皮質(zhì)激素與糖皮質(zhì)激素受體結(jié)合發(fā)揮抗炎的作用[17-18]。ESR1是雌激素受體的ER-β亞型，雌激素通過(guò)與雌激素受體結(jié)合發(fā)揮生理作用，雌激素可降低纖溶酶原激活物抑制因子1的活性，增加纖溶活性，還可促進(jìn)一氧化氮和前列腺素的合成，這兩者都有抑制血小板聚集和黏附的作用[19]。NFKBIA是炎癥反應(yīng)調(diào)節(jié)通路NF-κB信號(hào)通路的NF-κB復(fù)合物抑制蛋白基因[20]。

勘探開(kāi)發(fā)一體化是精細(xì)勘探有別于常規(guī)勘探思路的一個(gè)重要方面，井位部署中必須以此為原則，統(tǒng)一考慮探井和開(kāi)發(fā)井的位置，為下一步開(kāi)發(fā)做準(zhǔn)備。通過(guò)反復(fù)論證，將探井、開(kāi)發(fā)井和水井納入同一個(gè)井網(wǎng)系統(tǒng)。根據(jù)低滲油田的開(kāi)發(fā)經(jīng)驗(yàn)，參考臨區(qū)開(kāi)發(fā)方案，本區(qū)井網(wǎng)方式采用五點(diǎn)法不規(guī)則面積注水井網(wǎng)。探井和開(kāi)發(fā)準(zhǔn)備井采用放大的五點(diǎn)法，即800×566m井距，兩口相鄰探井、兩口相鄰的開(kāi)發(fā)準(zhǔn)備井之間井距為800m，探井和開(kāi)發(fā)準(zhǔn)備井之間井距為566m。根據(jù)上述部署方案，試驗(yàn)區(qū)內(nèi)共部署探井9口，開(kāi)發(fā)準(zhǔn)備井6口。初步預(yù)測(cè)成熟區(qū)內(nèi)下步開(kāi)發(fā)總井?dāng)?shù)為50口，其中油井35口，注水井15口，利用老井7口，新鉆井43口。

參與機(jī)體能量代謝的核心靶標(biāo)有MLXIPL和HIF-1。MLXIPL在肝臟、脂肪組織、胰臟和腎臟中高度表達(dá)，主要通過(guò)磷酸化和去磷酸化途徑控制葡萄糖信號(hào)通路上的核心基因來(lái)調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)糖類(lèi)和脂類(lèi)的代謝[21]。HIF-1是一種DNA結(jié)合蛋白，由α亞基和β亞基組成，缺氧時(shí)HIF-1α的降解被抑制而與HIF-1β形成有活性的HIF-1，HIF-1與血管內(nèi)皮細(xì)胞上的GLUT-1靶基因結(jié)合，GLUT-1表達(dá)上調(diào)促進(jìn)腦細(xì)胞對(duì)血液中葡萄糖的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)而促進(jìn)糖代謝，有利于迅速提供能量，增強(qiáng)腦細(xì)胞對(duì)缺氧的耐受能力[22-23]。

表1 三化湯處方藥味出現(xiàn)的頻次和關(guān)聯(lián)性分析結(jié)果

圖1 三化湯各藥味的共同靶標(biāo)分析圖

2.3 三化湯治療中風(fēng)的疾病-方藥核心靶標(biāo)網(wǎng)絡(luò)分析

影響RNA和DNA的轉(zhuǎn)錄、復(fù)制、剪切及氧化應(yīng)激等的核心靶標(biāo)有ASS1、NFKB2、ELN、AR、JAG1、APP、TP53、GTF2I、SMAD4、LIMK1和HSP90AA1等，這些核心靶標(biāo)通過(guò)影響RNA和DNA的合成和剪切、氧化應(yīng)激等保護(hù)腦神經(jīng)細(xì)胞，修復(fù)血管結(jié)構(gòu)等發(fā)揮作用。GF-β信號(hào)通路調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖、分化、遷移和凋亡，SMAD4蛋白是TGF-β誘導(dǎo)的基因表達(dá)調(diào)控的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子[24]。ASS1是合成精氨酸的關(guān)鍵酶，對(duì)體內(nèi)的尿素循環(huán)有調(diào)控作用，參與體內(nèi)的氨代謝[25]。ELN是組成細(xì)胞外基質(zhì)的結(jié)構(gòu)蛋白，在穩(wěn)定血管結(jié)構(gòu)方面發(fā)揮重要作用[26]。LIMK1是存在于腦、脊髓組織中的絲氨酸/蘇氨酸和絡(luò)氨酸雙重活性蛋白激酶，有維持神經(jīng)細(xì)胞發(fā)育的功能[27]。NFKB2在遺傳信息轉(zhuǎn)錄的過(guò)程中發(fā)揮重要作用，待轉(zhuǎn)錄的DNA序列與NFKB2蛋白結(jié)合，之后NFKB2蛋白再與其他關(guān)鍵蛋白結(jié)合(如RNA聚合酶等)[28-29]。AR是配體依賴性轉(zhuǎn)錄因子，同時(shí)也是類(lèi)固醇激素受體超家族中的一員。HSP90AA1是一類(lèi)熱應(yīng)激蛋白，廣泛存在于人體中，具有在各種壓力條件下保護(hù)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能的作用[30]。

圖2 三化湯治療中風(fēng)的核心靶標(biāo)網(wǎng)絡(luò)圖

2.4 三化湯治療中風(fēng)的核心靶標(biāo)

對(duì)三化湯治療中風(fēng)的核心靶標(biāo)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，選取網(wǎng)絡(luò)節(jié)點(diǎn)度(Degree)、節(jié)點(diǎn)緊密度(Closeness)、節(jié)點(diǎn)介度(Betweenness)在中位卡值以上的節(jié)點(diǎn)，排名靠前的核心靶標(biāo)，其通過(guò)多數(shù)靶點(diǎn)發(fā)揮抗炎，調(diào)節(jié)免疫，調(diào)節(jié)能量代謝，影響RNA、DNA的復(fù)制及氧化應(yīng)激發(fā)揮作用，核心靶標(biāo)見(jiàn)表2。

通過(guò)檢索藥理學(xué)平臺(tái)，收集到大黃化學(xué)成分88個(gè)，厚樸化學(xué)成分76個(gè)，枳實(shí)化學(xué)成分48個(gè)，羌活化學(xué)成分57個(gè)。各藥味的潛在靶標(biāo)，大黃629個(gè)，厚樸280個(gè)，枳實(shí)222個(gè)，羌活329個(gè)。經(jīng)相似性分析≥0.8篩選后，候選靶標(biāo)數(shù)量分別為大黃145個(gè)，厚樸150個(gè)，枳實(shí)84個(gè)，羌活206個(gè)。方中各味藥之間均存在共同靶標(biāo)，結(jié)果見(jiàn)圖1。4味藥味兩兩之間、三味藥間、四味藥間都存在共同靶標(biāo)，表明三化湯藥味可能存在協(xié)同增效的作用。

一年來(lái)，佛山市政府以及相關(guān)職能部門(mén)加強(qiáng)溝通、強(qiáng)化協(xié)作，借力河長(zhǎng)制、橋長(zhǎng)制，在西江可視化、協(xié)同化等方面取得了積極成果。全面啟動(dòng)三水河口綜合執(zhí)法基地、高明船員警示教育基地、南海九江海船安檢基地、順德均安智慧監(jiān)管基地等“四大基地”建設(shè)，持續(xù)提升西江監(jiān)管能力。全力推進(jìn)廣東首個(gè)交通管理系統(tǒng)（雷達(dá)）項(xiàng)目，建立風(fēng)險(xiǎn)分級(jí)嚴(yán)控、兩級(jí)預(yù)警機(jī)制，全面提升西江可視化。全面規(guī)范西江三處公共錨地運(yùn)作管理，開(kāi)展臨時(shí)裝卸點(diǎn)、三無(wú)閑置船、橋區(qū)隱患清零行動(dòng)，持續(xù)改善西江通航環(huán)境。全力推進(jìn)“兩體三區(qū)”、重點(diǎn)水道拖輪值守等應(yīng)急網(wǎng)絡(luò)建設(shè)，全力提升西江應(yīng)急救援和防污染能力。

表2 三化湯治療中風(fēng)的核心靶標(biāo)

利用TCMI2.0網(wǎng)絡(luò)調(diào)控機(jī)制挖掘功能構(gòu)建核心網(wǎng)絡(luò)靶標(biāo)圖，結(jié)果見(jiàn)圖2。核心網(wǎng)絡(luò)靶標(biāo)49個(gè)，其中疾病靶標(biāo)33個(gè)，藥物靶標(biāo)14個(gè)，二者共有靶標(biāo)2個(gè)，分別是PTGS2、PRKAG2。PTGS2是前列腺素內(nèi)過(guò)氧化物合成酶2，是前列腺素合成中的重要酶，是一種誘導(dǎo)型催化花生四烯酸生成前列腺素的限速酶，在中風(fēng)發(fā)生時(shí)，受炎性介質(zhì)等的影響，產(chǎn)生大量的前列腺素，促進(jìn)中風(fēng)病理結(jié)果的繼續(xù)惡化[7-8]，當(dāng)PTGS2受到抑制時(shí)，腦組織病灶可發(fā)生凝血，減輕病灶的惡化。PRKAG2是人類(lèi)腺甘酸單磷活化蛋白激酸γ2亞基，是AMP激活的蛋白激酶，廣泛分布在全身各種組織細(xì)胞中，調(diào)控ATP的消耗和ATP的產(chǎn)生[9-10]，當(dāng)中風(fēng)發(fā)生時(shí)，腦組織處于缺血、缺氧狀態(tài)，細(xì)胞出現(xiàn)能量耗竭，PRKAG2可以調(diào)節(jié)細(xì)胞產(chǎn)生ATP的過(guò)程。由三化湯加減化裁的通腑化痰活血方可提高腦梗死急性期患者的治療效果，改善患者的日常生活能力，其作用機(jī)制與糾正高凝狀態(tài)、抑制血栓形成有關(guān)[11]；由三化湯加減化裁而來(lái)的活血方，治療腦梗死急性期療效顯著，能促進(jìn)患者神經(jīng)功能的恢復(fù)，其作用機(jī)制可能與降低患者血清炎性因子有關(guān)[12]。研究三化湯對(duì)大鼠腦缺血再灌注后血腦屏障的損傷后發(fā)現(xiàn)，大鼠對(duì)腦缺血再灌注后血腦屏障損傷具有一定的抑制作用[13-14]。三化湯治療中風(fēng)的作用機(jī)制與抗炎、調(diào)節(jié)能量代謝、促進(jìn)組織修復(fù)有密切關(guān)系。

2.5 三化湯治療中風(fēng)的生物功能分析和通路分析

對(duì)核心靶標(biāo)進(jìn)行生物功能分析和信號(hào)通路分析，結(jié)果見(jiàn)表3和表4。

表3 三化湯治療中風(fēng)的生物功能分析

由表3可見(jiàn)，三化湯治療中風(fēng)的作用主要與20個(gè)生物功能有關(guān)，如NF-κB轉(zhuǎn)錄因子活性的正向調(diào)控、細(xì)胞對(duì)缺氧的反應(yīng)、對(duì)脂多糖的響應(yīng)、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、蛋白質(zhì)去泛素化作用、RNA聚合酶Ⅱ?qū)D(zhuǎn)錄的負(fù)調(diào)控、細(xì)胞增殖、基因表達(dá)負(fù)調(diào)控、基因表達(dá)的正向調(diào)控、雄性性腺發(fā)育等，這些生物學(xué)功能與抗炎調(diào)節(jié)，免疫調(diào)節(jié)，能量調(diào)節(jié)，RNA和DNA的復(fù)制、轉(zhuǎn)錄、剪切及氧化應(yīng)激和激活等生物功能相關(guān)。NF-κB活性主要受到抑制因子κB(inhibitor ofκB，IkB)的影響，正常情況下NF-κB與IkB結(jié)合后，以無(wú)活性的形式存在于細(xì)胞液中，在一些炎癥因子、病毒、自由基等因素的作用下，IkB激酶(IkB kinas，IKK)會(huì)被激活，進(jìn)而使得正常存在于細(xì)胞質(zhì)中的NF-κB轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核中，并與相關(guān)靶基因序列中啟動(dòng)子區(qū)域的κB序列結(jié)合，發(fā)揮其炎癥效應(yīng)[31]。表4列出了7個(gè)主要的通路，有TRAF6參與NF-κB介導(dǎo)的激活通路、TAK1通過(guò)磷酸化和IKKS激活的NF-κB通路、白細(xì)胞介素-4和白細(xì)胞介素-13信號(hào)通路、類(lèi)固醇激素受體的熱休克蛋白90伴侶循環(huán)通路、細(xì)胞受體泛素相關(guān)修飾途徑、核受體轉(zhuǎn)錄途徑、Ub-特異性加工蛋白酶途徑。白細(xì)胞介素-1β(interleukin，IL-1β)與細(xì)胞間黏附分子-1(intercelluar adhesion molecule-1，ICAM-1)在參與腦缺血再灌注后的炎癥過(guò)程中發(fā)揮重要的作用，其表達(dá)量的增加可引發(fā)和加重腦損傷，三化湯能降低腦缺血再灌注模型大鼠腦組織中IL-1β和ICAM-1的表達(dá)，對(duì)腦缺血再灌注模型大鼠腦損傷起到一定的抑制作用[32]。樊凱芳等[32]還發(fā)現(xiàn)三化湯能明顯提高腦缺血再灌注老齡大鼠胃腸組織Na+-K+-ATP酶活性及Ca2+-ATP酶活性，對(duì)腦缺血再灌注老齡大鼠胃腸損傷有一定保護(hù)作用。自由基是腦缺血和再灌注損傷中重要的因子，超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)能催化超氧自由基發(fā)生歧化反應(yīng)，生成過(guò)氧化氫和氧，是機(jī)體清除自由基的關(guān)鍵酶，三化湯能明顯升高腦缺血再灌注老齡大鼠腦組織中SOD的含量，明顯降低其丙二醛(malondialdehyde，MDA)含量，對(duì)腦缺血再灌注老齡大鼠腦損傷具有抑制作用[33]。綜上所述，三化湯通過(guò)上述生物過(guò)程和通路發(fā)揮抗炎、調(diào)節(jié)免疫、改善中風(fēng)腸道功能以及修復(fù)腦血管的生理活性。

表4 三化湯治療中風(fēng)的通路分析

2.6 三化湯治療中風(fēng)的方劑-中藥-成分-疾病-靶標(biāo)-通路多維網(wǎng)絡(luò)分析

基于三化湯藥物靶標(biāo)和中風(fēng)的疾病靶標(biāo)，構(gòu)建三化湯治療中風(fēng)的方劑-中藥-成分-靶標(biāo)-通路多維網(wǎng)絡(luò)，結(jié)果見(jiàn)圖3。在方劑和中藥中，預(yù)測(cè)到核心靶標(biāo)18個(gè)，核心通路7條，活性成分24種。作用的核心靶點(diǎn)有APP、HSP90AA1、SMAD4、ASS1、ELN、GTF2I、LIMK1、TBL2、VHL、NFKB2、JAG1、NR3C1、TP53、MLXIPL、NFKB1A、ELN、MLXIPL、ESR1和AR?；钚猿煞址謩e屬于酚酸類(lèi)、甾醇類(lèi)、酚類(lèi)、木脂素類(lèi)、黃酮類(lèi)、鞣質(zhì)類(lèi)和揮發(fā)油類(lèi)等，其中包含大黃中的12種成分、枳實(shí)中的2種成分、厚樸中的8種成分和羌活中的2種成分。對(duì)活性成分進(jìn)行成藥性分析，結(jié)果見(jiàn)表5。成藥性好的成分有7種，分別是橙皮素、丁香酸、厚樸脂素M、6′-甲氧基和厚樸酚、異厚樸酚、丁香醛和香草酸，成藥性中等的成分有4種，分別是山柰酚、表兒茶酸、兒茶素和乙酰龍腦酯。山柰酚能通過(guò)降低CK、LDH的活性和MDA的含量，升高SOD的活性，從而對(duì)缺氧損傷細(xì)胞發(fā)揮保護(hù)作用[34]，具有抗癌、抗氧化、抗病毒、抗炎、抗菌和增強(qiáng)機(jī)體免疫等多種藥理作用。原花青素是雙黃酮衍生物的天然多酚化合物，依據(jù)構(gòu)象或鍵合位置不同分為B1～B8亞型，B1亞型的活性最強(qiáng)，可以清除人體內(nèi)的自由基，保護(hù)細(xì)胞組織免受自由基的氧化損傷，其在抗氧化、抗炎等過(guò)程中發(fā)揮廣泛的藥理作用[35-36]。沒(méi)食子酸通過(guò)下調(diào)核因子κB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，降低白介素-33的表達(dá)，發(fā)揮抑制炎癥反應(yīng)的作用[37]。橙皮素早期干預(yù)可明顯改善APP/PS1dE9小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力和海馬神經(jīng)元的損傷情況，其機(jī)制可能與下調(diào)TLR2和NF-κB蛋白的表達(dá)水平有關(guān)[38]。丁香酚可通過(guò)降低氧化應(yīng)激水平和抗NF-κB抑制大鼠腎缺血再灌注性損傷[39]。β-谷甾醇具有降血脂、抗氧化、抗炎和抗腫瘤等藥理活性[40]。厚樸酚已經(jīng)被證實(shí)能夠與維甲酸受體α過(guò)氧化物酶體增殖因子活化受體γ等相互作用，從而參與對(duì)糖脂代謝的調(diào)控[41]。香草酸具有抗氧化、抗炎和抗凋亡等多種藥理學(xué)活性[42]。綜上所述，三化湯的化學(xué)成分通過(guò)抗炎、抗氧化等過(guò)程發(fā)揮對(duì)中風(fēng)的治療作用。

表5 三化湯治療中風(fēng)的活性成分

2.7 三化湯治療中風(fēng)中的理-法-方藥-成分-靶標(biāo)-通路-活性的相關(guān)性分析

依據(jù)三化湯的組方理論，分析組方的理法方藥，采用網(wǎng)絡(luò)藥理平臺(tái)預(yù)測(cè)三化湯的成分、靶點(diǎn)、通路，構(gòu)建三化湯中醫(yī)癥候、方劑、成分、通路、靶點(diǎn)的關(guān)聯(lián)性網(wǎng)絡(luò)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)三化湯以多成分、多靶點(diǎn)、多通路發(fā)揮抗炎、抗氧化、修復(fù)血管管壁等藥效作用，結(jié)果見(jiàn)圖4。另外，自大黃預(yù)測(cè)出的標(biāo)靶成分不是其瀉下的主要活性成分，大黃的瀉下活性成分是否以代謝產(chǎn)物或與其他成分結(jié)合的形式發(fā)揮瀉下作用有待進(jìn)一步研究。

圖4 三化湯治療中風(fēng)的理-法-方藥-成分-靶標(biāo)-通路-活性的相關(guān)性分析

3 討論

三化湯用于中風(fēng)急性期患者的治療，療效顯著，無(wú)不良反應(yīng)[43-44]，但由于針對(duì)三化湯的基礎(chǔ)研究較薄弱，藥效物質(zhì)尚不清楚，使質(zhì)量控制方法針對(duì)性不強(qiáng)，產(chǎn)品質(zhì)量控制受到限制，故對(duì)三化湯的物質(zhì)基礎(chǔ)進(jìn)行研究是開(kāi)發(fā)此經(jīng)典名方的迫切需求。本研究發(fā)現(xiàn)三化湯治療中風(fēng)的核心成分有24個(gè)，成藥性好的活性成分有橙皮素、丁香酸、厚樸脂素M、6′-甲氧基和厚樸酚、異厚樸酚、丁香醛和香草酸。作用的靶點(diǎn)有APP、HSP90AA1、SMAD4、ASS1、ELN、GTF2I、LIMK1、TBL2、VHL、NFKB2、JAG1、NR3C1、TP53和MLXIPL等。作用的通路有由TRAF6參與NF-κB介導(dǎo)的激活通路、TAK1通過(guò)磷酸化和IKKS激活的NF-κB通路、白細(xì)胞介素-4和白細(xì)胞介素-13信號(hào)通路、類(lèi)固醇激素受體的熱休克蛋白90伴侶循環(huán)通路、細(xì)胞受體泛素相關(guān)修飾途徑、核受體轉(zhuǎn)錄途徑和Ub-特異性加工蛋白酶途徑。成分、靶點(diǎn)和通路顯示三化湯的藥效作用與抗炎和細(xì)胞修復(fù)有關(guān)系，尤其和抗炎的關(guān)系密切，這些成分、靶點(diǎn)、通路和文獻(xiàn)記載的治療中風(fēng)的作用相吻合，表明本研究的結(jié)果可信。另外，預(yù)測(cè)出成藥性好的成分存在于厚樸和枳實(shí)中，而大黃的活性成分成藥性普遍較差，羌活中的活性成分較少，這些與2.1項(xiàng)下羌活和大黃在治療中風(fēng)藥對(duì)出現(xiàn)概率高的使用規(guī)律分析相反，預(yù)示可能存在各種協(xié)同增效作用，對(duì)此尚待進(jìn)一步研究。本研究通過(guò)分析藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)中的數(shù)據(jù)初步探討了三化湯治療中風(fēng)的成分、靶標(biāo)、通路、活性之間的關(guān)聯(lián)性，以期為三化湯治療中風(fēng)提供理論研究依據(jù)，為產(chǎn)品的開(kāi)發(fā)和質(zhì)量控制提供參考。