標(biāo)本溶血對(duì)化學(xué)發(fā)光免疫分析法測(cè)定胰島素和葉酸及鐵蛋白結(jié)果的影響

張秀芳，林 平

（惠州市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 廣東 惠州 516000）

胰島素主要是指胰臟內(nèi)胰島β 細(xì)胞受到內(nèi)源或者外緣性物質(zhì)比如葡萄糖、乳糖及胰高血糖素等刺激分泌的蛋白質(zhì)激素，胰島素屬于體內(nèi)唯一能夠降低血糖水平的激素，并且作用還包括促進(jìn)糖原、脂肪以及蛋白質(zhì)的合成，通過(guò)對(duì)機(jī)體胰島素水平的測(cè)定可用于評(píng)價(jià)糖尿病患者的胰島β 細(xì)胞功能，評(píng)價(jià)糖尿病的發(fā)生及發(fā)展[1]。葉酸屬于一種水溶性維生素，該物質(zhì)在蛋白質(zhì)的合成、細(xì)胞分裂生長(zhǎng)過(guò)程均有顯著作用，常用于婦女貧血的評(píng)價(jià)[2]。鐵蛋白屬于一種急性時(shí)相蛋白，通過(guò)對(duì)血清鐵蛋白的檢測(cè)可用于臨床診斷缺鐵性貧血的重要依據(jù)。對(duì)胰島素、葉酸與鐵蛋白的測(cè)定，具體測(cè)定時(shí)只有確保標(biāo)本正常情況才能獲得準(zhǔn)確數(shù)據(jù)，標(biāo)本若是出現(xiàn)溶血情況則使得一系列測(cè)定數(shù)值存在差異[3]。本次研究中，探討了標(biāo)本發(fā)生溶血對(duì)于臨床測(cè)定胰島素、葉酸與鐵蛋白結(jié)果的影響，報(bào)道如下。

1.資料與方法

1.1 一般資料

選取2020 年1 月—2021 年1 月接收的150 名健康體檢人員。將150 名患者的血液標(biāo)本采取低滲溶血法分成程度不一的溶血標(biāo)本與未溶血標(biāo)本，溶血標(biāo)本111 份，未溶血標(biāo)本39 份，溶血標(biāo)本根據(jù)溶血程度分成輕度、中度與重度，各37 份。輕度溶血組男性22 名，女性15 名，年齡17 ～65 歲，平均年齡（43.12±2.26）歲；中度溶血組男21 名，女16 名，年齡18 ～65 歲，平均年齡（42.96±2.31）歲；重度溶血組男20 名，女17 名，年齡17 ～66 歲，平均年齡（43.06±2.27）歲；未溶血對(duì)照組男20 名，女19 名，年齡19 ～66 歲，平均年齡（42.87±2.31）歲。四組一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。納入標(biāo)準(zhǔn)：①所有的體檢人員均無(wú)明顯用藥史；②具備正常的精神狀態(tài)，有良好溝通交流能力；③體檢前3 個(gè)月無(wú)用藥史；④本人對(duì)相關(guān)研究知情并簽署同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并嚴(yán)重肝腎功能不全者；②合并高脂血癥及黃疸疾病者；③精神疾病或認(rèn)知功能障礙者。

1.2 方法

（1）儀器與試劑：胰島素、葉酸、鐵蛋白檢測(cè)試劑盒均購(gòu)自Siemens 公司，對(duì)胰島素、葉酸、鐵蛋白水平的測(cè)定上，主要是應(yīng)用Siemens ADVIA CENTAUR 化學(xué)發(fā)光免疫分析儀。（2）血紅蛋白（hemoglobin, Hb）液制備：收集不同患者50 mL 的抗凝全血，對(duì)血液做離心處理，去除掉其中血漿以及白細(xì)胞，對(duì)于下層紅細(xì)胞也要0.9%氯化鈉溶液洗滌3 次以獲得純凈的紅細(xì)胞，置入零下70 ℃的冰箱中儲(chǔ)存30 min 后取出，取出后置入溫度37 ℃水浴箱中40 min，反復(fù)凍融3 次以使紅細(xì)胞破裂，經(jīng)超速離心取出掉破紅細(xì)胞碎片，得到Hb 液，測(cè)定Hb為310 g/L 備用。（3）人工溶血血清制備：采集所有對(duì)象的新鮮血清，以3 000 r/min 的速度持續(xù)離心10 min分離血清，在常溫下按照化學(xué)發(fā)光免疫分析儀、相關(guān)配套試劑對(duì)每份溶血標(biāo)本進(jìn)行胰島素、葉酸、鐵蛋白水平的測(cè)定。分別予以溶血與未溶血標(biāo)本數(shù)值的測(cè)定。輕度溶血組血清Hb 濃度為0 ～1 g/L；中度溶血組血清Hb 濃度為1 ～5 g/L；重度溶血組Hb 濃度＞5 g/L。

1.3 觀察指標(biāo)

對(duì)比溶血前后各組胰島素、葉酸、鐵蛋白水平測(cè)定值，同未溶血組的結(jié)果比較，分析標(biāo)本溶血對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響。在室溫環(huán)境下，在溶血標(biāo)本配置后的0、0.5、2、18 h，分別進(jìn)行非溶血標(biāo)本以及溶血標(biāo)本胰島素、葉酸、鐵蛋白水平的測(cè)定，相關(guān)操作均是嚴(yán)格按照儀器以及試劑盒說(shuō)明說(shuō)規(guī)范進(jìn)行。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

使用SPSS 21.0 統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（± s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以頻數(shù)（n）和百分率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.結(jié)果

2.1 溶血標(biāo)本與未溶血標(biāo)本對(duì)各指標(biāo)測(cè)定結(jié)果影響

溶血后各溶血組胰島素檢測(cè)水平均降低，且隨著溶血程度的增加，胰島素水平也逐漸降低，溶血后各溶血組葉酸、鐵蛋白水平均升高，且隨著溶血程度的增加，葉酸、鐵蛋白也逐漸升高（P＜0.05），見(jiàn)表1。

表1 溶血與未溶血標(biāo)本對(duì)血清胰島素、葉酸、鐵蛋白檢測(cè)結(jié)果的影響（ ± s）

表1 溶血與未溶血標(biāo)本對(duì)血清胰島素、葉酸、鐵蛋白檢測(cè)結(jié)果的影響（ ± s）

注：*與溶血前比較，P ＜0.05。

胰島素/（mIU?L-1）溶血前 溶血后輕度溶血組 37 222.86±28.26 142.25±22.16*中度溶血組 37 223.01±28.16 98.62±18.52*重度溶血組 37 222.71±28.21 62.24±17.14*對(duì)照組 39 223.36±28.41組別 人數(shù)葉酸/（ng?mL-1）溶血前 溶血后輕度溶血組 37 5.52±1.71 9.56±2.25*中度溶血組 37 5.49±1.72 14.45±2.35*重度溶血組 37 5.56±1.74 18.95±2.47*對(duì)照組 39 5.56±1.75組別 人數(shù)鐵蛋白/（ng?mL-1）溶血前 溶血后輕度溶血組 37 207.96±112.25 219.56±115.56*中度溶血組 37 208.02±111.84 231.15±117.75*重度溶血組 37 208.12±112.06 253.36±118.84*對(duì)照組 39 208.86±113.36組別 人數(shù)

2.2 溶血時(shí)間對(duì)血清胰島素、葉酸、鐵蛋白檢測(cè)結(jié)果的影響

考慮溶血時(shí)間對(duì)胰島素、葉酸以及鐵蛋白檢測(cè)結(jié)果的影響，結(jié)果顯示在胰島素檢測(cè)上，隨著標(biāo)本留置時(shí)間的延長(zhǎng)，在檢測(cè)值上0.5、2、18 h 的胰島素水平均是低于0 h，對(duì)比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；而在葉酸、鐵蛋白的測(cè)定結(jié)果上，隨著標(biāo)本放置時(shí)間的增加，檢測(cè)結(jié)果也在不斷提高，0.5、2、18 h 的葉酸與鐵蛋白測(cè)定結(jié)果均高于0 h，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表2。

表2 溶血時(shí)間對(duì)血清胰島素、葉酸、鐵蛋白檢測(cè)結(jié)果的影響（ ± s）

表2 溶血時(shí)間對(duì)血清胰島素、葉酸、鐵蛋白檢測(cè)結(jié)果的影響（ ± s）

注：#與0 h 時(shí)刻比較，P ＜0.05。

指標(biāo) 人數(shù) 0 h 0.5 h胰島素/（mIU?L-1）111 222.85±28.41 201.13±26.15#葉酸/（ng?mL-1） 111 5.45±1.66 9.12±2.15#鐵蛋白/（ng?mL-1）111 207.15±105.56 215.25±106.65#指標(biāo) 人數(shù) 2 h 18 h胰島素/（mIU?L-1）111 181.15±21.15# 142.25±17.15#葉酸/（ng?mL-1） 111 12.42±2.41# 15.36±2.66#鐵蛋白/（ng?mL-1）111 231.15±114.45# 251.16±127.74#

2.3 溶血程度、溶血時(shí)間對(duì)檢測(cè)結(jié)果綜合影響

充分考量溶血程度、溶血時(shí)間對(duì)血清胰島素測(cè)定值的具體影響，顯示不同溶血程度，標(biāo)本置入時(shí)間上存在差異，其中在放置0.5 h 的血液標(biāo)本，在測(cè)定數(shù)值上同0、2 h 上差異小，但是在標(biāo)本放置時(shí)間超過(guò)2 h，在測(cè)定結(jié)果上就會(huì)發(fā)生明顯差別。通過(guò)重復(fù)測(cè)定設(shè)計(jì)方差的結(jié)果，發(fā)生不同程度溶血標(biāo)本，在溶血時(shí)間上同胰島素、葉酸以及鐵蛋白影響比較大，胰島素檢測(cè)結(jié)果在不同時(shí)間段會(huì)隨時(shí)間的改變呈現(xiàn)出線性相關(guān)。

3.討論

臨床生化檢驗(yàn)工作中，需要做好標(biāo)本分析前、中、后各階段的質(zhì)量控制，而其中標(biāo)本溶血?jiǎng)t屬于標(biāo)本分析前的質(zhì)量控制環(huán)節(jié)[4-6]。正常情況下的各指標(biāo)數(shù)值處在規(guī)定值范圍，紅細(xì)胞正常，而若是標(biāo)本溶血可出現(xiàn)紅細(xì)胞破裂，破裂紅細(xì)胞使得其中的相關(guān)物質(zhì)會(huì)釋放至血漿中，繼而引起檢測(cè)結(jié)果的偏差，影響最終的判定。

本次研究中探討了標(biāo)本溶血對(duì)臨床測(cè)定結(jié)果的影響，結(jié)果顯示隨著溶血程度的增加，INS 胰島素的測(cè)定值也逐漸降低。INS 胰島素降解酶存在于紅細(xì)胞內(nèi)，INS 胰島素降解酶屬于過(guò)氧化物水解酶，具備高效及特異性降解INS 胰島素的作用，如果溶血標(biāo)本中的紅細(xì)胞發(fā)生破裂情況，會(huì)使得紅細(xì)胞內(nèi)存在的INS 胰島素降解酶釋放到血清中，使溶血標(biāo)本中INS 胰島素發(fā)生降解及胰島素指標(biāo)水平降低[7-9]。溶血的程度越嚴(yán)重從紅細(xì)胞釋放至單位體積中的胰島素降解酶含量也越多，同樣胰島素也被大量分解，胰島素的測(cè)定數(shù)值也就明顯更低[10]。胰島素作為體內(nèi)唯一的一個(gè)能夠降低血糖水平的物質(zhì)，常用于糖尿病的分型判定以及治療指導(dǎo)參考，對(duì)于臨床生化檢驗(yàn)，發(fā)生溶血標(biāo)本尤其是重度溶血，常需重新進(jìn)行血清標(biāo)本的采集以作測(cè)定結(jié)果的復(fù)查，但重新采血一方面會(huì)增加患者的痛苦以及經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，另一方面則是隨著時(shí)間變化，使得重新采集的血清標(biāo)本無(wú)法具備臨床參考價(jià)值，因此有效避免標(biāo)本溶血對(duì)臨床生化檢驗(yàn)而言至關(guān)重要[11-12]。

本文結(jié)果顯示，隨著溶血程度的增加，溶血后在血清FA 葉酸、鐵蛋白檢測(cè)水平也不斷升高，表明標(biāo)本溶血會(huì)使得葉酸、鐵蛋白測(cè)定值升高。正常情況下，紅細(xì)胞中FA 葉酸的水平明顯要比血清中葉酸水平更高，這一比值大約是16.7:1，而在標(biāo)本出現(xiàn)溶血后，因?yàn)榧t細(xì)胞發(fā)生破裂，會(huì)使得紅細(xì)胞內(nèi)的葉酸釋放到血清中，繼而使得血清FA 葉酸測(cè)定值明顯提高[13]。同樣標(biāo)本在發(fā)生溶血后，會(huì)大量釋放鐵蛋白，這樣使得鐵蛋白測(cè)定結(jié)果增高，此外在鐵蛋白的測(cè)定上，Hb 也有可能同鐵蛋白抗體結(jié)合，使得非特異反應(yīng)情況出現(xiàn)，最終導(dǎo)致鐵蛋白測(cè)定結(jié)果同未溶血標(biāo)本測(cè)定結(jié)果出現(xiàn)偏差[8]。

針對(duì)標(biāo)本溶血對(duì)胰島素、葉酸、鐵蛋白測(cè)定值的影響，需要控制好檢測(cè)各環(huán)節(jié)的質(zhì)量，提高檢驗(yàn)的準(zhǔn)確性及減少差錯(cuò)率，采取合理的預(yù)防措施，首先是需要明確影響溶血的原因，具體包括兩方面的因素，一方面的因素主要是儀器設(shè)備引起的，比如在標(biāo)本進(jìn)行離心的時(shí)候，若是離心的速度過(guò)快、水浴箱的溫度過(guò)高以及抽血針頭的質(zhì)量較差，容器污染就容易引起溶血的發(fā)生[14]。另一方面的因素則是因?yàn)闄z驗(yàn)人員操作不當(dāng)引起，若是在采血的時(shí)候止血繃帶繃的太緊以及淤血過(guò)程比較常，未能進(jìn)行充分的消毒處理及對(duì)穿刺部位不斷拍打也容易使得溶血情況發(fā)生。對(duì)發(fā)生溶血的原因進(jìn)行分析就可采取相應(yīng)的干預(yù)措施，具體如下：第一，需要減少干擾以提供給檢驗(yàn)醫(yī)師準(zhǔn)確的參考數(shù)據(jù)，具體是進(jìn)行血清標(biāo)本的采集中需做到細(xì)致操作，控制注射器、針頭、試管質(zhì)量；第二，標(biāo)本采集人員需掌握血液標(biāo)本采集的正確方法及妥善保存標(biāo)本，控制好注射器與試管質(zhì)量，確保測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性，減少不必要的檢測(cè)誤差出現(xiàn)[15]。同時(shí)在進(jìn)行采血的時(shí)候，還需要保證技術(shù)的熟練，盡可能的做到“一針見(jiàn)血”，這樣避免損傷組織使得血樣溶血發(fā)生，且標(biāo)本采集的過(guò)程可將試管傾斜30 度，讓針頭的斜面充分靠近試管壁，避免血液射向管底，避免直接振蕩采集的血液，在采血過(guò)程囑咐患者避免用力握拳，控制血液流出速度的適宜；第三，在將標(biāo)本采集后也需要按照規(guī)范進(jìn)行即刻的送檢，避免即刻檢測(cè)標(biāo)本在室溫下放置時(shí)間超過(guò)2 h，確保檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性及合理性；第四，在采血完成后，若是發(fā)生標(biāo)本溶血情況，盡早的應(yīng)用相應(yīng)的補(bǔ)救措施，而這對(duì)溶血情況明顯嚴(yán)重影響結(jié)果準(zhǔn)確性，告知患者原因，再次采血后檢測(cè)，確保結(jié)果準(zhǔn)確性，有效避免結(jié)果差錯(cuò)問(wèn)題；第五，還需要檢驗(yàn)科室同臨床科室間默契合作，發(fā)現(xiàn)問(wèn)題做及時(shí)的反饋，減少檢驗(yàn)結(jié)果誤差及確保結(jié)果的可靠性。

綜上所述，標(biāo)本溶血的出現(xiàn)會(huì)對(duì)胰島素、葉酸、鐵蛋白測(cè)定結(jié)果造成影響，因此需嚴(yán)把檢測(cè)質(zhì)量關(guān)，盡可能的減少誤差的出現(xiàn)，以提供給患者臨床診治可靠依據(jù)。