基于網絡藥理學探究祛瘀平肝化痰湯降壓作用機制及實驗驗證

田豐銘　佘瑞寧　藺曉源　胡國恒

〔摘要〕 目的 運用網絡藥理學探討祛瘀平肝化痰湯治療高血壓病的可能靶點及作用機制，并選取部分關鍵靶點及通路進行實驗驗證，為其臨床應用及后續(xù)研究提供理論支持。方法 運用TCMSP、BATMAN、TCMIP網絡藥理學分析平臺挖掘祛瘀平肝化痰湯的中藥有效成分，運用SWISS、STITCH數據庫整理其作用靶標;以OMIM、TTD、GeneCards數據庫挖掘高血壓病的相關靶標并與藥物成分靶標取交集，整理后得到祛瘀平肝化痰湯的成分-疾病靶標;通過STRING數據庫及Cytoscape軟件，構建蛋白互作的網絡圖，并篩選關鍵靶點;最后將所得的靶標及通路進行富集分析。依據網絡藥理學所得結果，設置4組SD大鼠進行實驗驗證，包括空白組、模型組、中藥組、西藥組。除空白組外，其余組以N’-硝基-L-精氨酸（N'-nitro-L-arginine， L-NNA）腹腔注射進行造模。空白組與模型組予純凈水灌胃，中藥組予祛瘀平肝化痰湯20.29 g/kg，西藥組予卡托普利混懸液2.11 mg/kg，每天灌胃2次，連續(xù)4周。HE染色觀察胸主動脈病理形態(tài)變化，ELISA法檢測血清中腎素（Renin）、血管緊張素Ⅱ（angiotensin Ⅱ， AngⅡ）、醛固酮（aldosterone， Ald）的含量，免疫組化檢測胸主動脈內皮素1（endothelin-1， ET-1）的含量。結果 整理各網絡藥理學分析平臺數據得到祛瘀平肝化痰湯治療高血壓病相關的靶點有162個，最終通過篩選得到EDN1、NOS3、INS、TNF、VEGFA、ACE等34個關鍵蛋白靶點，主要富集在血管收縮調節(jié)、血壓調節(jié)等生物過程及鈣、腎素-血管緊張素系統(tǒng)、腎素分泌等信號通路。動物實驗結果顯示，中藥組和西藥組大鼠胸主動脈內膜結構較模型組完善;空白組、中藥組、西藥組經灌胃4周后，Renin、Ang Ⅱ、Ald表達均較模型組降低（P<0.01）;鏡下觀察免疫組化結果，模型組的ET-1表達顯著高于空白組及各給藥組（P<0.05）。結論 祛瘀平肝化痰湯可以通過多途徑、多靶點調節(jié)血壓，其藥理作用可能通過干預腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)（renin angiotensin aldosterone system， RAAS）、血管內皮舒縮等得以實現。實驗結果表明祛瘀平肝化痰湯能夠改善血管狀態(tài)，降低血清中Renin、Ang Ⅱ、Ald的表達，干預RAAS，抑制血管內ET-1的釋放，保護血管內皮。

〔關鍵詞〕 祛瘀平肝化痰湯;網絡藥理學;腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng);血管內皮損傷;內皮素-1

〔中圖分類號〕R285.5? ? ? ?〔文獻標志碼〕A? ? &nbsp; ? 〔文章編號〕doi：10.3969/j.issn.1674-070X.2022.03.012

〔Abstract〕 Objective To explore the possible targets and mechanism of Quyu Pinggan Huatan Decoction in the treatment of hypertension by using network pharmacology， and select some key targets and pathways for experimental verification， so as to provide theoretical support for its clinical application and follow-up research. Methods TCMSP， BATMAN， TCMIP network pharmacological analysis platforms were used to mine the effective components of Quyu Pinggan Huatan Decoction， and SWISS and STITCH databases were used to sort out its action targets; OMIM， TTD and GeneCards databases were used to mine the related targets of hypertension and the intersection with the drug component targets were obtained， and then the component-disease target of Quyu Pinggan Huatan Decoction was obtained; the network diagram of protein-protein interaction was constructed by STRINGdatabase and Cytoscape software， and the key targets were screened; finally， the obtained targets and pathways were enriched and analyzed. According to the results of network pharmacology， four groups of SD rats were set up for experimental verification， including blank group， model group， traditional Chinese medicine group and western medicine group. Except the blank group， the other groups were modeled by intraperitoneal injection of N'-nitro-L-arginine （L-NNA）. The blank group and model group were given purified water by gavage， the traditional Chinese medicine group was given 20.29 g/kg Quyu Pinggan Huatan Decoction， and the western medicine group was given 2.11 mg/kg captopril suspension by gavage， twice a day for 4 weeks. The pathological changes of thoracic aorta were observed by HE staining， the content of Renin， angiotensin Ⅱ （Ang Ⅱ） and? aldosterone （Ald） in serum were detected by ELISA， and the content of endothelin-1 （ET-1） in thoracic aorta was detected by immunohistochemistry. Results After sorting out the data of various network pharmacological analysis platforms， it was found that there were 162 targets related to the treatment of hypertension by Quyu Pinggan Huatan Decoction. Finally， 34 key protein targets such as EDN1， NOS3， INS， TNF， VEGFA and ACE were obtained through screening， which were mainly concentrated in biological processes such as vasoconstriction regulation and blood pressure regulation， calcium signal pathway， renin angiotensin system， renin secretion and other signaling pathways. The results of animal experiments showed that the intimal structure of thoracic aorta in traditional Chinese medicine group and western medicine group was better than that in model group; the expression levels of Renin， Ang Ⅱ and Ald in blank group， traditional Chinese medicine group and western medicine group were lower than those in model group （P<0.01）; immunohistochemical results were observed under microscope that， the expression of ET-1 in the model group was significantly higher than that in the blank group and each administration group （P<0.05）. Conclusion Quyu Pinggan Huatan Decoction can regulate blood pressure through multiple channels and targets， and its pharmacological effect may be realized by intervening renin angiotensin aldosterone system （RAAS）， vascular endothelial relaxation and contraction， etc. The experimental results show that Quyu Pinggan Huatan Decoction can improve the vascular state， reduce the expression of Renin， Ang Ⅱ and? Ald in serum， intervene RAAS， inhibit the release of ET-1 in blood vessels and protect vascular endothelium.

〔Keywords〕 Quyu Pinggan Huatan Decoction; network pharmacology; renin-angiotensin-aldosterone system; vascular endothelial injury; endothelin-1

原發(fā)性高血壓病（essential hypertension， EH）是一種常見的慢性疾病，其發(fā)病與年齡、遺傳、肥胖、精神壓力、飲食習慣等多種因素有關。WHO與國際高血壓學會聯合聲明中提到高血壓占全球疾病經濟負擔的4.5%[1]。隨著我國人民生活水平的日漸改善，EH的發(fā)病率逐漸增長，并呈現年輕化的趨勢[2]。中國心血管病報告2018年數據顯示，EH患者超過2.45億，并以每年1000萬人的速度遞增[3]。EH會引起機體的代謝紊亂，并能成為心腦血管疾病和糖尿病的獨立風險因素[4]。因此，提升EH的防治水平，將是我國社會長期面臨的問題。臨床治療EH以血管緊張素轉化酶抑制劑、鈣離子通道拮抗劑、受體阻滯劑、袢利尿劑等西藥為主，用藥干預周期較長，副作用較多，若患者依從性欠佳，則難以達到預期的療效，不能降低相關并發(fā)癥的發(fā)病率[5]。中醫(yī)藥基于整體觀念，可以根據患者癥狀、體征，通過辨病辨證相結合進行施治，對患者的血壓調節(jié)及臟器保護均有作用。因此，圍繞EH的中醫(yī)病因病機，對其進行理法方藥的探究，在EH的防治上具有重要的價值。祛瘀平肝化痰湯為胡國恒教授治療EH的臨床經驗用方[6-7]。本研究通過網絡藥理學挖掘祛瘀平肝化痰湯中相關組方成分的中藥作用靶點，并對該方進行動物實驗驗證，旨在初步揭示祛瘀平肝化痰湯的藥理作用，為其應用于EH的防治提供相關依據。

1 方法

1.1? 祛瘀平肝化痰湯化學成分的收集

以“鉤藤”“蒺藜”“葛根”“茯苓”“澤瀉”“石菖蒲”“丹參”“當歸”“白芍”為關鍵詞，通過TCMSP搜索化學成分，以口服藥物生物利用度≥30%、藥物相似性≥0.18為標準進行篩選。以相同的關鍵詞從BATMAN數據庫搜索中藥成分，BATMAN數據庫中以Score≥20、P≥0.05為篩選條件。運用相同關鍵詞在TCMIP V2.0搜索中藥成分，篩選靶標預測卡值≥0.8的有效成分。匯總3個數據庫得到的有效成分，經整理去重后，在PubChem數據庫中搜索各個藥物的化學成分，下載各成分的Canonical SMILES格式分子結構并保存。

1.2? 祛瘀平肝化痰湯的靶點預測

將保存的化學成分，分別錄進SWISS、STITCH數據庫，并設置研究對象為“人類”，整理兩個數據庫有效成分作用靶點并降重后得到祛瘀平肝化痰湯的作用靶點。

1.3? 高血壓病靶點的獲取

利用OMIM、TTD、GeneCards、DisGeNET、CTD 5個數據庫，錄入“Hypertension”為關鍵詞，設置每個數據庫中的靶點相關度為前300，挑選出EH的相關作用靶點[8]，整理并降重后得到EH的作用靶點。

1.4? 潛在作用靶點的獲取

將祛瘀平肝化痰湯的作用靶點及EH的靶點分別錄進Venny 2.1作圖工具，繪成韋恩圖，取交集，為祛瘀平肝化痰湯抗EH的潛在作用靶點，即成分-疾病靶點。

1.5? 構建蛋白互作網絡及篩選關鍵蛋白靶點

將前項所述靶點錄進STRING 11.0數據庫，設置限定“Homo sapiens”，整理得到蛋白交互信息，運用Cytoscape 3.9軟件進行可視化分析，并篩選關鍵靶點[9]。

1.6? 通路富集分析

將成分-疾病靶點以Gene Symbol的格式錄進DAVID 6.8數據庫，分別選擇分子功能、生物過程和細胞成分，而后進行GO富集分析，設置Count值為2、P<0.05;選擇KEGG進行基因通路注釋分析，設置Count值為2、P<0.05。然后運用Bioinformatics平臺將富集分析符合條件的結果做成條形圖。

1.7? 動物實驗

1.7.1? 動物分組及造模處理? 采用SPF級SD雄性大鼠20只，體質量（220±30） g，許可證編號：SCXK（湘）2016-0002，實驗操作通過湖南中醫(yī)藥大學倫理委員會批準，倫理審批號：LL2021030505。運用SPSS統(tǒng)計分析軟件中的隨機數字法，將20只老鼠分為4組，每組5只。空白組以生理鹽水15 mL/（kg·d）進行腹腔注射。模型組、西藥（卡托普利）組、中藥（祛瘀平肝化痰湯）組，進行EH大鼠造模：采用L-NNA水溶液，濃度1 mg/mL，以15 mg/（kg·d）劑量對單只大鼠進行腹腔注射，連續(xù)造模21 d，每日注射藥物兩次[10-11]。以大鼠的尾部動脈血壓SBP≥160 mmHg持續(xù)穩(wěn)定1周以上為造模成功的標準[5]。

1.7.2? 藥物與試劑? 祛瘀平肝化痰湯：天麻、鉤藤、白蒺藜、澤瀉、石菖蒲、丹參、當歸、白芍各20 g，全蝎10 g，葛根40 g，茯苓30 g。傳統(tǒng)方法煎煮后獲得的煎液再濃縮成生藥含量為2 g/mL的藥液，放入4 ℃冰箱中冷藏備用?？ㄍ衅绽瑒ㄈA中藥業(yè)股份有限公司，國藥準字：H42020384，批號：20200302，規(guī)格：25 mg/片）研碎摻和蒸餾水配制成0.3 mg/mL濃度的混懸液，放入4 ℃冰箱中冷藏備用。L-NNA（大連美侖生物技術有限公司，批號：MB3299）;Renin ELISA試劑盒（批號：RA20331）、Ang Ⅱ ELISA試劑盒（批號：RA20065）、Ald ELISA試劑盒（批號：RA20556）均購于武漢貝茵萊生物科技有限公司;ET-1 兔 pAb（ABclona生物公司，批號：AB2757337）;SABC-POD兔IgG試劑盒（批號：SA1028）、DAB顯色試劑盒（批號：15F16BA00）、Mayor’蘇木素（批號：16C10A05）、中性樹膠（批號：AR0038）均采購于BOSTER生物公司。

1.7.3? 給藥方法? 空白組常規(guī)喂養(yǎng)，每次予以3 mL純凈水進行灌胃，早晨、下午各1次。模型組進行造模處理后，常規(guī)飲食，每次予以3 mL純凈水進行灌胃，早晨、下午各1次。中藥組在造模成功后，予以濃縮含生藥液20.29 g/kg進行灌胃，早晨、下午各1次。西藥組予以含卡托普利混懸液2.11 mg/kg進行灌胃，早晨灌藥，下午為純凈水。均連續(xù)干預4周。大鼠給藥劑量換算參考公式：Db’=Da*Rab*Sb，Db’為動物b實際體質量下所需藥物劑量，Da為動物a標準體質量下藥物劑量，Rab為標準體質量下的動物a到動物b的換算系數，Sb為非標準體質量動物b的校正系數[12]。得出大鼠灌胃劑量。成人取標準體質量60 kg，給藥前大鼠平均體質量約280 g。

1.7.4? 取材? 4組大鼠于末次灌胃后2 h，運用10%水合氯醛進行麻醉[5]，麻醉成功后置于冰臺操作，行腹主動脈采血，靜置半小時后離心15 min，溫度設定為4 ℃，速度3000 r/min，離心半徑8.5 cm，離心后保留血清;大鼠采血后當場剝離胸主動脈經PBS沖洗，置于4%多聚甲醛樣本固定液中固存。

1.8? 指標檢測

1.8.1? HE染色觀察大鼠胸主動脈組織病理改變? 每組從4%多聚甲醛固定液中取出2個樣本，經梯度乙醇脫水、二甲苯透明后，浸蠟、包埋，切成薄片，經烘干后脫蠟，再行HE染色、樹膠封片。最后低倍鏡選擇視野，200倍鏡下攝片，觀察胸主動脈組織病理變化。

1.8.2? 血液生化指標檢測? 從冰箱中取出血清標本，室溫下放置，進行解凍，按照試劑盒說明書步驟操作，采用ELISA法檢測血漿Renin、AngⅡ、Ald的水平。用標準品的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度[13]。

1.8.3? 免疫組化法檢測各組大鼠胸主動脈ET-1的表達? 每組從4%多聚甲醛樣本固定液中取出3個樣本，進行免疫組化檢測，遵照試劑盒說明書操作。每張切片隨機取2個不同視野（400倍），棕黃色的成像即為陽性表達，使用圖像分析軟件分別計算組織面積（Area）、積分光密度值（IOD）及平均光密度值（AOD），AOD=IOD/Area[5]。

1.9? 統(tǒng)計學分析

所有數據采用SPSS 21.0統(tǒng)計學軟件進行分析。計量資料以“x±s”的方式表示。多組間的比較滿足正態(tài)分布及方差齊性時，采用單因素方差分析，兩兩比較用LSD法;不滿足正態(tài)性分布或方差不齊性時，用非參數檢驗，兩組比較采用秩和檢驗。檢驗水準設置P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1? 祛瘀平肝化痰湯的潛在化學成分

通過TCMSP、BATMAN、TCMIP數據庫檢索到祛瘀平肝化痰湯中11味中藥化學成分共576個，其中澤瀉31個、天麻25個、石菖蒲23個、全蝎3個、蒺藜20個、鉤藤72個、葛根45個、茯苓54個、當歸107個、丹參131個、白芍65個。其中，sitosterol為葛根、鉤藤、當歸、白芍、蒺藜、澤瀉所共有，kaempferol為鉤藤、蒺藜、石菖蒲、白芍所共有，20-hexadecanoylingenol為天麻、全蝎所共有，整理去重后中藥化學成分為310個。

2.2? 祛瘀平肝化痰湯抗高血壓病的可能作用靶點

SWISS、SRING數據庫篩選的藥物成分靶點為5348個，去重后得到1366個靶點，繪制中藥-成分-靶點統(tǒng)計信息。見表1。通過OMIM、TTD、GeneCards、DisGeNET、CTD數據庫查找EH病的靶點，去重復后得到343個。將藥物可能作用靶點及EH相關靶點錄入Venny平臺繪制韋恩圖。見圖1。取交集后共162個，表明祛瘀平肝化痰湯可能調節(jié)多靶點來發(fā)揮作用。

2.3? PPI網絡構建

將162個共同靶點導入STRING 11.5數據庫，設置combined score≥0.07，得到蛋白互作網絡，利用Cytoscape 3.9軟件將蛋白互作網絡可視化。見圖2。運用Cytoscape 3.9的CytoHubba功能，分別以MCC、Betweenness、Closeness、Degree為計算指標篩選出排名前20的關鍵靶點，整理去重后的關鍵靶點有EDN1、NOS3、INS、ALB、EGFR、TNF、VEGFA、AKT1、IL6、ACE、NOS2等34個。見圖3。

2.4? GO富集分析及KEGG通路注釋分析

將162個潛在靶點導入DAVID數據庫進行GO富集分析（P<0.05），共得到418個生物過程，44個細胞成分，94個分子功能。見圖4。生物過程主要涉及腺苷酸環(huán)化酶激活腎上腺素能受體信號通路、血管收縮調節(jié)、一氧化氮生物合成過程的正調控、平滑肌細胞增殖的正調控、血壓調節(jié)、細胞對缺氧的反應、平滑肌收縮的正向調節(jié)、細胞對藥物的反應等;在細胞成分中，主要涉及細胞質膜、質膜的組成部分、膜筏、細胞外空間、受體復合物、電壓門控鈣通道復合體等;分子功能主要包括腎上腺素結合、支架蛋白結合等。

KEGG分析（P<0.05）共富集到68條信號通路。見圖5。主要集中在鈣信號通路、心肌細胞中的腎上腺素能信號傳導、神經活性配體-受體相互作用、腎素-血管緊張素系統(tǒng)、腎素分泌、血管內皮生長因子信號通路、脂肪細胞脂解的調節(jié)、腫瘤壞死因子信號通路等。上述生物功能及信號通路與祛瘀平肝化痰湯治療EH病密切相關。

2.5? 實驗驗證結果

2.5.1? 各組大鼠胸主動脈的病理形態(tài)變化? HE染色中，空白組大鼠胸主動脈內膜結構完善，內皮平整，表面光滑、無凹凸樣突起及缺損，中膜平滑肌細胞排列整齊，外膜與中膜分界明顯。模型組大鼠動脈內膜結構較紊亂，內皮欠光滑，表面有凹凸樣突起及缺損，中膜增厚，外膜與中膜分界不清晰。中藥組和西藥組大鼠主動脈內膜結構基本完善，內皮大致完整，內膜較模型組光滑，外膜與中膜分界較清楚。見圖6。

2.5.2? 各組大鼠RAAS相關的生化指標? 經灌胃4周后，模型組與空白組相比，Renin、Ang Ⅱ、Ald均顯著升高，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.01）;中藥組、西藥組經灌胃4周后，與模型組相比，Renin、AngⅡ、Ald均顯著降低，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.01）;中藥組與西藥組相比，經灌胃4周后，Renin、AngⅡ、Ald指標的差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。見表2。

2.5.3? 大鼠胸主動脈ET-1表達結果? 鏡下可見，ET-1免疫陽性表達于胸主動脈血管內膜、中膜平滑肌細胞胞漿內及外膜纖維中，呈棕黃色染色。見圖7?？瞻捉M的表達顯著低于模型組（P<0.01）;模型組比各給藥組ET-1陽性表達較高，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05），而中藥組與西藥組相近，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。見表3。

3 討論

中醫(yī)學將EH歸納為“眩暈”“頭痛”等病癥，多數醫(yī)家遵從“諸風掉眩，皆屬于肝”的思想，對本病的病因病機認識以肝風、肝陽來立論。而結合當今社會環(huán)境來看，EH具有病機復雜、纏綿難愈、須長期服藥等特點。現代醫(yī)學對高血壓的早期診斷、早期用藥干預，使升高的血壓可以被迅速控制，直接改變了EH的自然進程，因此，對高血壓的中醫(yī)學病機探討值得重新審視。胡國恒教授經過長期臨床實踐，對EH的認識形成了“痰濁瘀毒為病理因素，肝腎失調為發(fā)病關鍵，血絡形成為發(fā)病根本”的理論體系，自擬驗方祛瘀平肝化痰湯來治療EH[6]。

中藥組方貫徹了中醫(yī)治療疾病時強調的整體觀念、辨證論治思想。中藥復雜的化學成分決定了其藥理機制往往是能同時對多個所治療疾病的信號通路、蛋白靶點進行調節(jié)，以達到相應的治療目的。現代藥理學研究表明，祛瘀平肝化痰湯的組方藥物，具有許多調控EH的活性成分，方中鉤藤的有效成分鉤藤堿能有效降低EH大鼠的血清以及心肌中的 Ang Ⅱ表達，同時能對腎組織中ACE mRNA起到下調作用[14];研究表明蒺藜的有效成分能通過IKK-β/NF-KB信號通路干預血壓調節(jié)中樞[15];葛根素可降低血漿中Renin、Ang Ⅱ的水平[16];丹參酮ⅡA能調節(jié)心肌組織中腎素-血管緊張素系統(tǒng)（renin-angiotensin system， RAS）的不同成分表達[17];當歸萃取的揮發(fā)油可干預ACE2-Ang（1-7）-MasR軸拮抗ACE系統(tǒng)以調節(jié)血壓[18];白芍總苷能夠調節(jié)RAS，拮抗炎癥介質和自由基的生成[19];茯苓、澤瀉功擅利水滲濕，石菖蒲長于豁痰化濕，部分文獻報道指出此三者的降壓作用與促進利尿相關，其具體機制有待進一步驗證[20]。

通過運用網絡藥理學分析祛瘀平肝化痰湯的組成藥物，經過SWISS與STRING數據庫挖掘，發(fā)現其作用靶點有1366個，這與經過OMIM、TTD、GeneCards等數據庫查找的505個EH靶點有162個交集。最終通過篩選得到34個關鍵蛋白靶點，包括EDN1、NOS3、INS、ALB、EGFR、TNF、VEGFA、AKT1、IL6、ACE、NOS2等。其中EDN1能夠干預全身動靜脈的收縮，并調控腎素分泌，在循環(huán)系統(tǒng)的穩(wěn)定中發(fā)揮重要作用[21];NOS3、NOS2屬于內皮NO合成酶，通過生成NO來維持血管擴張的穩(wěn)態(tài)，可以干預偏頭痛及動脈高血壓的發(fā)生[22];ACE是RAAS中最重要的成分之一，在心血管疾病中具有重要的調控作用，目前仍然是用于開發(fā)治療相關疾病的重要藥物靶點[23];TNF及VEGFA主要參與調解血管內皮炎癥、增殖等病理生理變化，也會對心血管系統(tǒng)產生部分影響。網絡藥理學關鍵靶點結果與現代藥理實驗研究結合表明，祛瘀平肝化痰湯可以通過EDN1、NOS3、ACE等關鍵靶點對EH起到治療作用。

將祛瘀平肝化痰湯抗EH的162個靶點經過GO、KEGG富集分析可以發(fā)現，祛瘀平肝化痰湯主要通路為鈣通道信號通路、心肌細胞中的腎上腺素能信號傳導、神經活性配體-受體相互作用、腎素-血管緊張素系統(tǒng)、腎素分泌、血管內皮生長因子信號通路、脂肪細胞脂解的調節(jié)、腫瘤壞死因子信號通路等。這些通路表明祛瘀平肝化痰湯具有較好的靶向干預作用。以鈣信號通路為例，動脈的收縮需要Ca2+及鈣通道的活化參與，動脈平滑肌細胞（artery smooth

muscle cells， ASMCs）中有鈣敏感受體的表達[24]，同時Ca2+通道分布與開放對RAAS也有明顯的干預作用[25]。富集分析的同時表明祛瘀平肝化痰湯作用靶點涉及調控心肌細胞中的腎上腺素能信號傳導、腎素-血管緊張素系統(tǒng)、腎素分泌等通路，三者均為RAAS的調控范疇。神經活性配體-受體相互作用、脂肪細胞脂解的調節(jié)在細胞和全身組織影響穩(wěn)態(tài)代謝信號，在EH的狀態(tài)下二者的正常作用受到干擾，可能與相關并發(fā)癥的發(fā)生有關系。血管內皮生長因子信號通路則往往參與血管生成及影響血管分布的組織細胞的遷移情況，EH狀態(tài)下往往造成血管內皮的損傷，誘發(fā)該通路的活化。

本課題組據網絡藥理學結果推測，祛瘀平肝化痰湯能夠通過上述途徑改善血管狀態(tài)，降低心肌及血管收縮力來起到降壓的效果，并對血管內皮具有保護作用。運用祛瘀平肝化痰湯對L-NNA 所致的高血壓大鼠模型進行實驗干預。結果表明，祛瘀平肝化痰湯干預后的中藥組大鼠胸主動脈的病理形態(tài)較模型組改善;中藥組血漿中Renin、Ang Ⅱ、Ald的含量較模型組低（P<0.05），表明其對RAAS具有調控作用;免疫組化分析血管活性物質ET-1的表達，發(fā)現中藥組較模型組低（P<0.05），說明祛瘀平肝化痰湯具有較好的血管內皮保護作用。

RAAS在循環(huán)系統(tǒng)中表現出巨大的生理調控作用，各個器官都會受到RAAS激活以及由此產生的高血壓、炎癥和細胞增殖、纖維化的損害[26]，Renin和Ang Ⅱ的分泌過多會導致大量的慢性和急性疾病，長期高血壓最終會導致血管內皮損傷，尤以腎小球血管損傷最為嚴重，這往往又能刺激腎素分泌的增加，形成惡性循環(huán)。因此，拮抗RAAS的相關環(huán)節(jié)，目前是治療EH中藥物開發(fā)的重要關注點。血管平滑肌收縮構成血壓升高的外周循環(huán)阻力，這往往與ET-1的釋放密切相關，因此，拮抗血管內皮收縮肽制劑的研發(fā)，已經成為一個新的值得關注的領域。

綜上所述，祛瘀平肝化痰湯具有多靶點、多途徑的抗EH作用。本次實驗僅通過其干預RAAS中的相關指標及ET-1的表達，來探討其治療EH的可行性，但仍需進一步的臨床及基礎研究提供支持。

參考文獻

[1] WHITWORTH J A， WORLD HEALTH ORGANIZATION， INTERNATIONAL SOCIETY OF HYPERTENSION WRITING GROUP. 2003 World Health Organization （WHO） / International Society of Hypertension （ISH） statement on management of hypertension[J]. Journal of Hypertension， 2003， 21（11）： 1983-1992.

[2] 鄒劍銘，李蕊均.高血壓流行病學研究進展及危險因素分析[J].中國療養(yǎng)醫(yī)學，2013，22（9）：796-798.

[3] 國家心血管病中心.中國心血管病報告-2018[M].北京：中國大百科全書出版社，2019.

[4] 馮? 靜.心血管危險因素智能評估系統(tǒng)降低高血壓患者并發(fā)癥發(fā)生率的效果研究[J].解放軍預防醫(yī)學雜志，2019，37（2）：111-113.

[5] 藺曉源，易? 健，雍蘇南，等.復方鉤藤降壓片對高血壓模型大鼠血壓及血管內皮功能的影響[J].中國中醫(yī)藥信息雜志，2021，28（10）：75-80.

[6] 田豐銘，胡國恒.胡國恒教授治療中青年原發(fā)性高血壓暈痛[J].吉林中醫(yī)藥，2020，40（11）：1445-1448.

[7] 李? 騰，胡國恒，秦? 甜，等.祛瘀平肝化痰湯聯合硝苯地平控釋片治療高血壓性頭痛的療效臨床觀察[J].中醫(yī)藥臨床雜志，2019，31（6）：1093-1096.

[8] 徐文華，鄭景輝，趙? 陽，等.基于網絡藥理學和生物信息學的丹參酮ⅡA治療冠心病的分子生物學機制分析[J].中草藥，2019，50（5）： 1131-1140.

[9] 韓彥琪，劉耀晨，武? 琦，等.基于網絡藥理學的痰熱清膠囊治療新型冠狀病毒肺炎（COVID-19）機制研究[J].中草藥，2020，51（11）：2967-2976.

[10] 何以紅，胡展豪，付? 裕，等.蘆薈提取物對左旋硝基精氨酸誘導的高血壓大鼠影響的研究[J].中華全科醫(yī)學，2017，15（3）：407-410，

474.

[11] 楊昌振，張雯斐，陳丹陽，等.非手術性高血壓大鼠模型建立的研究進展與比較[J].中國循證心血管醫(yī)學雜志，2019，11（1）：118-121.

[12] 黃繼漢，黃曉暉，陳志揚，等.藥理試驗中動物間和動物與人體間的等效劑量換算[J].中國臨床藥理學與治療學，2004（9）：1069-1072.

[13] 吳? 俁，劉良麗，朱曉龍.TGF-β1/Smad通路在養(yǎng)肺保元湯治療慢性阻塞性肺病合并肺間質纖維化中的作用[J].海南醫(yī)學，2021，32（2）：137-140.

[14] 龍吉美，黃德彬，李魁武，等.鉤藤堿對阿霉素誘導的大鼠腎損傷的作用及其機制[J].中國病理生理雜志，2012，28（10）：1887-1891.

[15] 郭金昊，姜月華，楊傳華，等.蒺藜超微粉對血管緊張素Ⅱ誘導的下丘腦神經元細胞損傷IKK-β/NF-κB信號通路的影響[J].中醫(yī)雜志，2017，58（2）：151-156.

[16] 黃幀檜，張? 培，楊? 帆，等.葛根素對腎性高血壓大鼠apelin-12、AngⅡ 及NO含量與血壓的影響[J].中國病理生理雜志，2011，27（12）：2323-2327.

[17] 余良主，石春蓉.丹參酮ⅡA對高血壓大鼠左心室肌腎素-血管緊張素系統(tǒng)不同成分表達量的影響[J].中國中藥雜志，2014，39（8）：1468-1472.

[18] 伊? 琳，曲? 強，紀祿風，等.當歸揮發(fā)油對自發(fā)性高血壓大鼠ACE2/Ang1-7/Mas 受體軸的影響[J].臨床心血管病雜志，2017，33（6）：584-587.

[19] 戴淑萍，顏勤明.白芍總苷在心血管疾病模型動物中的藥理研究進展[J].中國藥房，2015，26（10）：1418-1420.

[20] 劉偉芳，黃曉瑾，夏淋霞，等.中藥利尿降壓作用的研究進展[J].上海中醫(yī)藥雜志，2011，45（9）： 73-78.

[21] DOUMA L G， SOLOCINSKI K， MASTEN S H， et al. EDN1-AS， A novel long non-coding RNA regulating endothelin-1 in human proximal tubule cells[J]. Frontiers in Physiology， 2020， 11： 209.

[22] SHNAYDER N A， PETROVA M M， MOSKALEVA P V， et al. The role of single-nucleotide variants of NOS1， NOS2， and NOS3 genes in the comorbidity of arterial hypertension and tension-type headache[J]. Molecules， 2021， 26（6）： 1556.

[23] POLAKOVI[[ˇ][C]]OVá M， JAMPíLEK J. Advances in structural biology of ACE and development of domain selective ACE-inhibitors[J]. Medicinal Chemistry， 2019， 15（6）： 574-587.

[24] TYKOCKI N R， BOERMAN E M， JACKSON W F. Smooth muscle ion channels and regulation of vascular tone in resistance arteries and arterioles[J]. Comprehensive Physiology， 2017， 7（2）： 485-581.

[25] THAMCHAROEN N，SUSANTITAPHONG P，WONGRAKPANICH S，et al. Effect of N-and T-type calcium channel blocker on proteinuria， blood pressure and kidney function in hypertensive patients： A meta-analysis[J]. Hypertension Research， 2015，38（12）：847-855.

[26] XIONG X J， YANG X C， LIU W， et al. Trends in the treatment of hypertension from the perspective of traditional Chinese medicine[J]. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine： ECAM， 2013， 2013： 275279.