微小RNA-1180在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及其臨床意義

孔令玉, 朱天怡

(中國(guó)人民解放軍北部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院 呼吸內(nèi)科, 遼寧 沈陽(yáng), 110000)

肺癌又稱(chēng)為原發(fā)性支氣管肺癌，是中國(guó)及至全球范圍內(nèi)發(fā)病率排在首位的惡性腫瘤，非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)是其最常見(jiàn)的病理類(lèi)型，占80%～85%[1]。由于NSCLC早期缺乏特異性癥狀，且其具有高侵襲和轉(zhuǎn)移的特性，因此絕大多數(shù)患者在出現(xiàn)明確的癥狀就診時(shí)已處于晚期，錯(cuò)失了手術(shù)治療的最佳時(shí)機(jī)，導(dǎo)致患者的5年生存率普遍較低[2]。

目前，臨床尚且缺乏有效診斷及評(píng)估NSCLC患者預(yù)后的生物標(biāo)志物。多種微小RNA(miRNA)被證實(shí)可輔助NSCLC的早期診斷及預(yù)后評(píng)估，如miR-21、miR-33a等[3-4]。miR-1180是一種與多種惡性腫瘤密切相關(guān)的miRNA, 其在前列腺癌中可作為抑癌因子，抑制癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲[5], 而肝癌中miR-1180則是作為促癌因子，促進(jìn)腫瘤的惡性進(jìn)展[6], 可見(jiàn)其在惡性腫瘤中發(fā)揮著雙重作用。目前關(guān)于miR-1180和 NSCLC的研究較少，尤其是作為潛在生物標(biāo)志物在NSCLC的診斷和預(yù)后評(píng)估方面罕見(jiàn)報(bào)道。本研究檢測(cè)了NSCLC血清及組織中miR-1180的表達(dá)情況，并探討其與臨床病理特征的關(guān)系及對(duì)疾病診斷和預(yù)后評(píng)估的價(jià)值，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2013年6月—2015年12月在中國(guó)人民解放軍北部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院接受治療的NSCLC患者72例，其中男48例，女24例; 平均年齡(63.15±8.96)歲; 有吸煙史者52例，無(wú)吸煙史者20例; 病理類(lèi)型為腺癌42例，鱗癌30例; 腫瘤大小<3 cm共40例, ≥3 cm共32例; TNM分期Ⅰ期15例，Ⅱ期29例，Ⅲ期28例; 淋巴結(jié)有轉(zhuǎn)移32例，無(wú)轉(zhuǎn)移40例; 分化程度為低分化24例，中分化33例，高分化15例。納入標(biāo)準(zhǔn): ① 所有患者均經(jīng)病理證實(shí)患有NSCLC; ② 入組前未接受任何形式的抗腫瘤治療者; ③ 未合并其他惡性腫瘤者; ④ 有完整的病例資料和隨訪資料者; ⑤ 患者自愿參與本次研究，對(duì)本次研究?jī)?nèi)容知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn): ① NSCLC復(fù)發(fā)者; ② 合并有心、肝、腎等重要臟器嚴(yán)重功能障礙者; ③ 合并有精神疾病者; ④ 合并其他系統(tǒng)的感染性疾病者。

另選取同期接受治療的良性肺部疾病患者50例，其中肺囊腫21例，間質(zhì)性肺炎29例; 男35例，女15例; 平均年齡(62.18±7.94)歲; 有吸煙史者36例，無(wú)吸煙史者14例。NSCLC患者和良性肺部疾病患者的性別、年齡、吸煙史等資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。本研究已通過(guò)本院倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)。

1.2 方法

抽取所有研究對(duì)象的空腹靜脈血5 mL, 離心后提取血清，將其置于低溫環(huán)境下保存待測(cè)。另收集NSCLC患者手術(shù)切除的癌組織和癌旁組織，癌旁組織的定義為遠(yuǎn)離癌組織3 cm以上的非癌組織，放于液氮中冷凍保存待測(cè)。采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(qRT-PCR)技術(shù)檢測(cè)血清及組織中的miR-1180的相對(duì)表達(dá)量，加入Trizol試劑(北京索萊寶公司)提取總RNA, 采用微量分光光度計(jì)(美國(guó)Thermo公司, Nanodrop 2000)測(cè)定RNA濃度及純度(A260/A280), 滿意后采用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(大連寶生物有限公司)合成cDNA。

內(nèi)參U6引物F: 5′-CTCGCTTCGGCAGCACA-3′, R: 5′-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3′; miR-1180引物F: 5′-ACACTCCAGCTGGGTTTCCGGCTCGCGTGG-3′, R: 5′-TGGTGTCGTGGAGTCG-3′。反應(yīng)條件: 95 ℃ 5 s, 之后在以下環(huán)境中進(jìn)行40個(gè)循環(huán): 95℃ 5 s、72 ℃ 10 s。采用2-△△Ct法計(jì)算血清和組織中miR-1180的相對(duì)表達(dá)量。

所有NSCLC患者均進(jìn)行為期5年的隨訪，每3個(gè)月至少進(jìn)行1次隨訪，隨訪截止事件為患者死亡或隨訪時(shí)間結(jié)束，主要通過(guò)電話以及門(mén)診復(fù)查的方式進(jìn)行隨訪調(diào)查。根據(jù)NSCLC患者組織中miR-1180的表達(dá)量進(jìn)行分組，高于或等于中位數(shù)的納入到miR-1180高表達(dá)組(37例)，低于中位數(shù)的納入到miR-1180低表達(dá)組(35例)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

使用SPSS 23.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。miR-1180相對(duì)表達(dá)量等計(jì)量數(shù)據(jù)均通過(guò)正態(tài)性檢驗(yàn)，以均值±標(biāo)準(zhǔn)差描述，采用t檢驗(yàn)。采用受試者工作特征(ROC)曲線分析血清miR-1180對(duì)NSCLC的診斷價(jià)值。采用Kaplan-Meier乘積極限法生存曲線模型分析組織miR-1180相對(duì)表達(dá)量與預(yù)后的關(guān)系，組間生存率比較為L(zhǎng)og-rank檢驗(yàn)。統(tǒng)計(jì)推斷的檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05(雙側(cè)檢驗(yàn))。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

2 結(jié) 果

2.1 NSCLC患者血清及組織中miR-1180的相對(duì)表達(dá)量情況

miR-1180在NSCLC患者和良性肺部疾病患者血清中的相對(duì)表達(dá)量分別為(2.12±0.68)、(1.06±0.42), NSCLC患者血清miR-1180的相對(duì)表達(dá)量高于良性肺部疾病患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05); miR-1180在癌組織和癌旁組織中的相對(duì)表達(dá)量分別為(2.65±0.73)、(1.24±0.54), 癌組織中miR-1180的相對(duì)表達(dá)量高于癌旁組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.2 NSCLC患者血清及組織中miR-1180的相對(duì)表達(dá)量與一般資料及臨床病理特征的關(guān)系

NSCLC患者血清及組織中miR-1180的相對(duì)表達(dá)量與性別、年齡、吸煙史、病理類(lèi)型無(wú)關(guān)(P>0.05), 與腫瘤大小、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及分化程度有關(guān)(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 NSCLC患者血清及組織中miR-1180的相對(duì)表達(dá)量與一般資料及臨床病理特征的關(guān)系

2.3 血清miR-1180相對(duì)表達(dá)對(duì)NSCLC的診斷價(jià)值分析

由前述分析知, NSCLC患者和良性肺部疾病患者血清miR-1180相對(duì)表達(dá)水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05), 故進(jìn)一步探討其對(duì)NSCLC發(fā)生的診斷評(píng)估價(jià)值。以NSCLC患者為陽(yáng)性樣本(72例)，以良性肺部疾病患者為陰性樣本(50例)，建立ROC診斷分析模型，分析顯示，血清miR-1180相對(duì)表達(dá)對(duì)NSCLC具有較高的診斷價(jià)值，曲線下面積(AUC)為0.747, 95%CI為0.580～0.914, 準(zhǔn)確度為0.754(92/122), 靈敏度為0.764(55/72), 特異度為0.740(37/50)。見(jiàn)表2、圖1。

表2 血清miR-1180相對(duì)表達(dá)對(duì)NSCLC的診斷價(jià)值分析結(jié)果

2.4 組織miR-1180與NSCLC患者預(yù)后的關(guān)系

隨訪5年結(jié)果顯示, 72例NSCLC患者的5年生存率為40.28%(29/72)。miR-1180高表達(dá)組的5年生存率為24.32%(9/37), miR-1180低表達(dá)組的5年生存率為57.14%(20/35), miR-1180高表達(dá)組的5年生存率低于miR-1180低表達(dá)組(P<0.05), 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見(jiàn)表3、圖2。

表3 NSCLC患者組織 miR-1180高、低表達(dá)組的Kaplan-Meier生存期資料及比較[ n(%)]

3 討 論

據(jù)流行病學(xué)統(tǒng)計(jì)[7-9]顯示，肺癌發(fā)病率呈逐年遞增趨勢(shì)，已成為影響人類(lèi)生命健康的重要疾病。NSCLC是肺癌的主要類(lèi)型，患者在初診時(shí)通常已到中晚期，而目前的相關(guān)臨床指南僅建議對(duì)TNM分期為Ⅰ～Ⅱ期的患者進(jìn)行外科手術(shù)根治性切除，同時(shí)也有少部分Ⅲ期可進(jìn)行手術(shù)治療，大部分Ⅲ～Ⅳ期的NSCLC患者預(yù)后情況不容樂(lè)觀[10-12]。盡管目前臨床可通過(guò)腫瘤標(biāo)志物、計(jì)算機(jī)斷層掃描、磁共振成像等方式對(duì)肺癌進(jìn)行早期的篩查，但整體效果欠佳，且臨床準(zhǔn)確評(píng)估患者預(yù)后的方式較為有限，因此尋找與NSCLC相關(guān)的新型生物標(biāo)志物具有重要的臨床價(jià)值[13]。

相關(guān)研究[14]表明, miR-1180在肝癌細(xì)胞中呈高表達(dá)，且其可通過(guò)靶向調(diào)控分泌型卷曲相關(guān)蛋白1來(lái)促進(jìn)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β信號(hào)通路的激活，進(jìn)而有效促進(jìn)肝癌的遷移和侵襲。在胰腺癌中miR-1180依然發(fā)揮著促癌因子的作用，其可有效促進(jìn)癌細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移，而在抑制其表達(dá)后，癌細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移能力明顯減弱[15]。GU Z W等[16]研究顯示, miR-1180可增強(qiáng)卵巢癌的化療耐藥(抗順鉑)，且高表達(dá)的miR-1180與患者的預(yù)后不良密切相關(guān)。但miR-1180在不同惡性腫瘤中發(fā)揮的作用存在差異，其在部分惡性腫瘤中發(fā)揮抑癌因子的作用。miR-1180在膀胱癌細(xì)胞中呈低表達(dá)，且其可通過(guò)調(diào)控細(xì)胞周期相關(guān)蛋白的表達(dá)干擾細(xì)胞周期進(jìn)程，抑制癌細(xì)胞增殖[17]。在前列腺癌中, miR-1180可靶向調(diào)節(jié)腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子1以及核轉(zhuǎn)錄因子-κB信號(hào)通路，抑制癌細(xì)胞的惡性進(jìn)展[5]。本研究結(jié)果顯示, NSCLC患者血清及組織中miR-1180的相對(duì)表達(dá)量均異常升高，且其表達(dá)水平升高與NSCLC的惡性進(jìn)展密切相關(guān)，提示miR-1180在NSCLC中可能發(fā)揮著促癌因子的作用。CHEN E G等[18]研究顯示, miR-1180在肺癌細(xì)胞中表達(dá)升高，且可通過(guò)靶向GSK-3β調(diào)控β-catenin信號(hào)通路，促進(jìn)癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲。另有研究[19]顯示, miR-1180-3p在肺癌組織和肺癌細(xì)胞系(A549和H1975)中均表達(dá)上調(diào)。以上可能是miR-1180參與NSCLC惡性進(jìn)展的作用機(jī)制之一，但目前關(guān)于miR-1180與肺癌的基礎(chǔ)研究較少，其具體作用機(jī)制還有待更多的研究進(jìn)行探索。

血清指標(biāo)由于具有樣本易獲取、重復(fù)性好等特點(diǎn)，一直是術(shù)前無(wú)創(chuàng)診斷的重點(diǎn)研究對(duì)象。組織中的指標(biāo)雖然可更好的反映病變情況，然而獲取組織后可直接做病理檢測(cè)，因此組織中的指標(biāo)對(duì)于惡性腫瘤的診斷無(wú)實(shí)際的臨床意義，但其在患者的預(yù)后評(píng)估方面具有重要的參考價(jià)值。鑒于此，本研究重點(diǎn)分析了血清miR-1180對(duì)NSCLC的診斷價(jià)值以及組織miR-1180對(duì)患者預(yù)后的評(píng)估價(jià)值。本研究結(jié)果顯示，血清miR-1180對(duì)NSCLC的輔助診斷價(jià)值較高,AUC為0.747, 95%CI為0.580～0.914。此外, miR-1180高表達(dá)組的5年生存率顯著低于miR-1180低表達(dá)組(P<0.05)。這提示miR-1180可作為NSCLC疾病診斷和預(yù)后評(píng)估的新型生物標(biāo)志物。但本研究選取的病例較少，且病例均來(lái)源于中國(guó)人民解放軍北部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院，未進(jìn)行多中心的研究，這可能會(huì)導(dǎo)致研究結(jié)果出現(xiàn)一定的偏差，在后續(xù)的研究中將增加病例的數(shù)量和擴(kuò)大地區(qū)范圍，以得到更加準(zhǔn)確、更有臨床價(jià)值的結(jié)論。

綜上所述，本文創(chuàng)新性地研究了miR-1180與NSCLC的關(guān)系，結(jié)果發(fā)現(xiàn)其在NSCLC的血清和癌組織中均呈異常高表達(dá)，且其表達(dá)水平與腫瘤大小、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及分化程度有關(guān)。血清miR-1180對(duì)NSCLC的輔助診斷價(jià)值較高，組織miR-1180的表達(dá)情況與患者的預(yù)后密切相關(guān)。miR-1180有望成為NSCLC的新型生物標(biāo)志物。但目前關(guān)于miR-1180對(duì)NSCLC惡性進(jìn)展的具體作用機(jī)制尚不明確，仍有待更多的基礎(chǔ)研究進(jìn)行更加深入的探索。