循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測(cè)對(duì)于結(jié)腸癌患者的臨床意義分析

陳 維 李蘇卿 朱 瑋 呂成余

南京醫(yī)科大學(xué)附屬南京醫(yī)院(南京市第一醫(yī)院)普外科，江蘇省南京市 210006

隨著我國飲食結(jié)構(gòu)的變化，結(jié)腸癌發(fā)病率逐年增高，對(duì)結(jié)腸癌相關(guān)檢測(cè)的深入研究非常必要。循環(huán)腫瘤細(xì)胞(Circulating tumor cells，CTCs)檢測(cè)是近年來開展的一種新型檢測(cè)技術(shù)，是目前三種熱門非侵入性液體活檢方法中的一種，對(duì)腫瘤的診斷和預(yù)后有重要的參考價(jià)值。隨著檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展，目前CTCs的檢測(cè)已經(jīng)可以達(dá)到十分精確的水準(zhǔn)[1]，其臨床價(jià)值也日益受到重視。對(duì)于結(jié)腸癌與CTCs關(guān)系的文獻(xiàn)目前尚不多，本文擬對(duì)結(jié)腸癌患者CTCs與病理及預(yù)后之間的關(guān)聯(lián)進(jìn)行探討。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2017年2月—2018年2月在我院普外科住院并接受手術(shù)的62例結(jié)腸癌患者，其中男39例，女23例，年齡39～81歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)經(jīng)腸鏡及活檢病理學(xué)確診；(2)排除其他腫瘤史；(3)入院前未接受過任何腫瘤相關(guān)治療；(4)預(yù)計(jì)生存期至少半年以上。以上患者均接受結(jié)腸癌根治術(shù)，切除標(biāo)本均行常規(guī)病理學(xué)檢查。

1.2 CTCs檢測(cè) 以上患者均于術(shù)前應(yīng)用專用的Cellsave管采集肘正中靜脈血7.5ml。試劑及檢測(cè)：人外周血白細(xì)胞去除試劑盒(江蘇萊爾生物醫(yī)藥科技有限公司)，熒光原位雜交樣品處理試劑盒(江蘇萊爾生物醫(yī)藥科技有限公司)。CTC檢測(cè)采用萊爾染色體擴(kuò)增型CTC檢測(cè)SOP技術(shù)。陽性標(biāo)準(zhǔn)：CTC細(xì)胞≥2即為陽性，<2為陰性，見圖1。

圖1 循環(huán)腫瘤細(xì)胞(CTCs)鏡下表現(xiàn)

1.3 術(shù)后隨訪 對(duì)所有患者進(jìn)行術(shù)后隨訪跟蹤，除死亡隨訪終止外，隨訪期36個(gè)月。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS22.0數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析軟件完成，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 CTCs檢測(cè)結(jié)果與臨床病理的相關(guān)性 患者CTCs陽性與性別、年齡、腫瘤大小及腫瘤分化程度無關(guān)(P>0.05)，與病理T分期、淋巴轉(zhuǎn)移及脈管侵犯有關(guān)(P<0.05)，見表1。

表1 CTCs結(jié)果與臨床病理的相關(guān)性

2.2 CTCs檢測(cè)結(jié)果與術(shù)后轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)的相關(guān)性 CTCs陰性患者術(shù)后36個(gè)月隨訪時(shí)間內(nèi)1例出現(xiàn)術(shù)后復(fù)發(fā)，無死亡。CTCs陽性患者出現(xiàn)復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移9例，死亡7例。兩者比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(χ2=4.142，P=0.042<0.05)，見圖2。

圖2 兩組生存曲線

3 討論

目前CTCs的檢測(cè)方法較多，但每種方法均有局限性。筆者選取的萊爾染色體擴(kuò)增型CTC檢測(cè)是基于染色體擴(kuò)增平臺(tái)的Cyttel-CTC檢測(cè)技術(shù)，通過對(duì)不同實(shí)體瘤選擇不同標(biāo)志物進(jìn)行相對(duì)特異性的檢測(cè)，實(shí)現(xiàn)了高靈敏性的檢出，在早期患者中，同樣有較高檢出率。

進(jìn)入血液循環(huán)中的腫瘤細(xì)胞大部分被免疫系統(tǒng)吞噬或被血液中調(diào)節(jié)細(xì)胞消滅[2]，有極少數(shù)能逃避免疫侵蝕，并且在特定條件下離開血液循環(huán)，侵入原發(fā)或遠(yuǎn)處器官，即臨床出現(xiàn)復(fù)發(fā)或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移[3]。目前已在乳癌、胃癌、胰腺癌及肝癌等多種惡性腫瘤中發(fā)現(xiàn)了CTCs 存在的證據(jù)[4-7]。研究顯示，CTCs 能有效預(yù)測(cè)多種腫瘤的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移及預(yù)后，同時(shí)可以作為預(yù)測(cè)相關(guān)輔助治療療效的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)[8-11]。

本文結(jié)果發(fā)現(xiàn)，結(jié)腸癌患者CTCs的出現(xiàn)與性別、年齡、腫瘤大小及腫瘤分化程度無關(guān)，而與病理T分期、淋巴轉(zhuǎn)移及脈管侵犯有關(guān)。據(jù)此可以推測(cè)出在結(jié)腸癌的發(fā)生發(fā)展過程中，腫瘤侵犯基底膜后，進(jìn)而腫瘤細(xì)胞進(jìn)入血液循環(huán)及淋巴循環(huán)，導(dǎo)致循環(huán)腫瘤細(xì)胞的出現(xiàn)。CTCs的發(fā)生和腫瘤浸潤局部毛細(xì)血管及毛細(xì)淋巴管密切相關(guān)。CTCs陽性的患者，即使手術(shù)能達(dá)到R0切除，體內(nèi)依然有存在腫瘤細(xì)胞的可能，因此腫瘤復(fù)發(fā)的風(fēng)險(xiǎn)大大增加。對(duì)兩組患者進(jìn)行36個(gè)月的隨訪，證實(shí)了 CTCs陽性患者的腫瘤復(fù)發(fā)率明顯高于CTCs陰性的患者。由此可見CTCs檢測(cè)對(duì)結(jié)腸癌的預(yù)后有相當(dāng)重要的意義。

因此臨床上對(duì)于術(shù)前 CTCs陽性的結(jié)腸癌患者，即使行R0切除，或者術(shù)后病理分期較早，仍然要考慮到預(yù)后不佳的可能，可適當(dāng)加強(qiáng)術(shù)后全身性輔助治療的時(shí)間及強(qiáng)度，縮短術(shù)后復(fù)查周期。有研究發(fā)現(xiàn)CTC 檢測(cè)可以一定程度反映轉(zhuǎn)移灶腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性[12]，因此在輔助治療期間也可行多次CTC檢測(cè)，從細(xì)胞水平對(duì)化療方案或藥物療效進(jìn)行評(píng)價(jià)。由于 CTCs的出現(xiàn)和局部毛細(xì)血管及毛細(xì)淋巴管的浸潤密切相關(guān)，而腫瘤患者外周血中的CTCs半衰期為1～2.4h[13]，存活時(shí)間短，假陰性的可能性增大。因此對(duì)于術(shù)前CTCs陰性的患者，如果術(shù)后病理有脈管侵犯，也應(yīng)該作為預(yù)后不佳的考慮因素。

綜上所述，循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測(cè)作為一種新型檢測(cè)技術(shù)，其結(jié)果與結(jié)腸癌術(shù)后病理分期及預(yù)后有相關(guān)性，CTCs陽性患者預(yù)后較陰性患者差。