銀耳多糖的急性毒性、遺傳毒性和亞慢性毒性研究

楊 非 ,姚文環(huán) ,李 慧 ,張 靜 ,唐 慧 ,呂實(shí)波 ,郭婕,孫劭靖,陸 震,程 東?

(1.山東省疾病預(yù)防控制中心,濟(jì)南 250014;2.山東華熙海御生物醫(yī)藥有限公司,濟(jì)南 250000;3.華熙生物科技股份有限公司,濟(jì)南 250000)

銀耳為擔(dān)子菌門真菌銀耳的子實(shí)體,又稱白木耳、雪耳。中國食用銀耳歷史悠久,可追溯到南北朝時(shí)期。銀耳多糖(Tremellapolysaccharide)是銀耳的主要組成和活性成分,其種類較多,主要包括酸性、中性雜多糖、胞壁、胞外多糖、酸性低聚糖等五大類。目前,關(guān)于銀耳多糖的研究主要集中在提取技術(shù)、多糖結(jié)構(gòu)種類、保健作用方面,如調(diào)節(jié)機(jī)體免疫力、抗腫瘤,抗氧化、抗輻射、抗衰老、提高記憶力、皮膚保濕等[1-16],而關(guān)于銀耳多糖的食用安全性的毒理學(xué)資料極少。為此我們選用華熙生物科技股份有限公司從銀耳孢子經(jīng)發(fā)酵等環(huán)節(jié)獲得的銀耳多糖為研究對象,依照食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)要求,進(jìn)行急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)、遺傳毒性試驗(yàn)和大鼠90 d經(jīng)口毒性試驗(yàn)[17-21]等毒理學(xué)試驗(yàn),為初步確定銀耳多糖的食用安全性,并為其開發(fā)利用提供基礎(chǔ)毒理學(xué)資料。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

本研究均使用SPF 級(jí)動(dòng)物。90 d 經(jīng)口毒性試驗(yàn):SD 大鼠140 只雌雄各半,體重63～85 g,急性經(jīng)口毒性試驗(yàn):ICR 小鼠20 只雌雄各半,體重18.1～22.0 g,均來源于濟(jì)南朋悅實(shí)驗(yàn)動(dòng)物繁育有限公司[SCXK(魯)2019-0003];哺乳動(dòng)物紅細(xì)胞微核試驗(yàn):ICR 小鼠50 只雌雄各半,體重25.0～35.0 g,小鼠精原細(xì)胞染色體畸變試驗(yàn):ICR 雄性小鼠30 只,體重31.0～34.0 g,均來源于北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司[SCXK(京)2016-0006]。動(dòng)物均飼養(yǎng)于山東省疾病預(yù)防控制中心屏障環(huán)境[SYXK(魯)2018-0014],實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼料來源于北京華阜康生物科技股份有限公司。本次實(shí)驗(yàn)經(jīng)山東省疾病預(yù)防控制中心實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)批準(zhǔn)(A20210312-2),并按實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用的3R 原則給予人道關(guān)懷。

1.1.2 菌株

組氨酸缺陷型鼠傷寒沙門氏菌菌株購自上海寶錄生物科技有限公司。

1.2 主要試劑與儀器

銀耳多糖,黃褐色粉末,由華熙生物科技股份有限公司提供,總糖含量≥61%,蛋白質(zhì)含量為≥6.2%。

S9 混合液,上海寶錄生物科技有限公司提供;血液學(xué)試劑,SYSMEX 公司提供;血生化試劑,SIEMENS 公司提供。

CX21 生物顯微鏡,奧林巴斯公司提供;XN-1000 全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀,希思美康公司提供;Dimension Xpandplus 全自動(dòng)生化分析儀,美國西門子公司提供;CombiScan500 全自動(dòng)尿液分析儀,Combi 公司提供;Coatron 3000 全自動(dòng)血凝儀,TECO公司提供;Multifuge 3plus 離心機(jī),Heraeus 公司提供;病理設(shè)備,LEICA 公司提供;檢眼鏡,蘭羚公司提供;電子天平,梅特勒-托勒多公司提供等。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)

按照限量法試驗(yàn)進(jìn)行。受試物最大灌胃濃度為100 mg/mL,按0.4 mL/10 g 體重(bw),一日內(nèi)3次進(jìn)行經(jīng)口灌胃(ig),每次間隔4 h,合并一次劑量為12.0 g/(kg·bw),觀察動(dòng)物一般表現(xiàn)并記錄,持續(xù)14 d。

1.3.2 細(xì)菌回復(fù)突變試驗(yàn)

考慮受試物對菌株的毒性和溶解度,最高劑量設(shè)置為每皿5 mg,按等比組距原則下設(shè)4 個(gè)劑量組(每皿8、40、200、1000 μg)和4 個(gè)對照組(自發(fā)回變、溶劑對照、DMSO 對照組和陽性對照組)。分別在加/不加S9 條件下用平板摻入法進(jìn)行兩次試驗(yàn)。

1.3.3 哺乳動(dòng)物紅細(xì)胞微核試驗(yàn)

受試物最大灌胃濃度為100 mg/mL,按0.2 mL/(kg·bw)灌胃,高劑量組為2.0 g/(kg·bw),按2 倍組距下設(shè)2 個(gè)劑量組[即1.0、0.5 g/(kg·bw)]。另設(shè)純化水組和環(huán)磷酰胺組(40 mg/(kg·bw))。受試物按0.2 mL/10 (g·bw)間隔24 h 兩次ig 給予。第二次ig 后6 h 采集胸骨骨髓,制片。每只動(dòng)物至少觀察200 個(gè)紅細(xì)胞(RBC),同時(shí)計(jì)數(shù)嗜多染紅細(xì)胞(PCE)在總紅細(xì)胞中的比例。每只動(dòng)物至少觀察2000 個(gè)PCE,計(jì)數(shù)有微核的PCE 頻率。

1.3.4 精原細(xì)胞染色體畸變試驗(yàn)

受試物最大灌胃濃度為100 mg/mL,按0.2 mL/(kg·bw)灌胃,1 日內(nèi)兩次進(jìn)行ig(間隔6 h),高劑量組為4.0 g/(kg·bw),按2 倍組距下設(shè)2 個(gè)劑量組(即2.0、1.0 g/(kg·bw))。另設(shè)純化水對照組和環(huán)磷酰胺對照組(40 mg/(kg·bw),單次ip)。高劑量組于末次ig 后的第24 h 和第48 h 處死動(dòng)物采樣,其余各組動(dòng)物于末次ig 后第24 h 處死動(dòng)物采樣。處死動(dòng)物前5 h,ip 秋水仙素(4 mg/(kg·bw))。常規(guī)制片。每只動(dòng)物鏡檢1000 個(gè)細(xì)胞以確定精原細(xì)胞有絲分裂指數(shù)。每只動(dòng)物計(jì)數(shù)100 個(gè)中期分裂相細(xì)胞,記錄每個(gè)中期分裂相細(xì)胞的畸變類型和數(shù)量,計(jì)算染色體畸變細(xì)胞率。

1.3.5 90 d 經(jīng)口毒性試驗(yàn)

(1)劑量選擇與受試物給予方式

劑量組:大鼠100 只,隨機(jī)分為5 組,每組20只,雌雄各半。根據(jù)《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)90 d 經(jīng)口毒性試驗(yàn)》要求設(shè)計(jì)試驗(yàn)劑量:大鼠每日攝食量按體重8%折算,受試物最高可摻入飼料比例為質(zhì)量分?jǐn)?shù)10%,動(dòng)物攝入劑量可達(dá)到8.00 g/(kg·bw),以此為高劑量組。下設(shè)三個(gè)劑量,分別為4.00、2.00、1.00 g/(kg·bw)。所有劑量組調(diào)整飼料配方,加酪蛋白使蛋白含量與對照組一致(蛋白含量約19%)。衛(wèi)星組:設(shè)衛(wèi)星對照組和衛(wèi)星8.00 g/(kg·bw)劑量組,每組10 只,雌雄各5 只,衛(wèi)星對照組給予基礎(chǔ)飼料,衛(wèi)星8.00 g/(kg·bw)劑量組給予受試物高劑量組飼料。于試驗(yàn)第45 天(試驗(yàn)中期)和停止給予受試物后(恢復(fù)期) 28 d 處死取材。

(2)方法

每天觀察大鼠一般表現(xiàn),每周記錄大鼠攝食量、體重。試驗(yàn)前和試驗(yàn)結(jié)束時(shí),對高劑量組和對照組大鼠進(jìn)行眼部檢查(角膜、結(jié)膜、虹膜和晶狀體);試驗(yàn)中期、試驗(yàn)結(jié)束、恢復(fù)期結(jié)束血液學(xué)檢查、血生化血檢查和尿液檢查。試驗(yàn)結(jié)束,麻醉解剖大鼠,稱心臟、肝、腎、脾、胸腺、腎上腺、腦、睪丸、附睪、卵巢和子宮的絕對重量,計(jì)算臟/體比值和臟器組織病理學(xué)檢查。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

統(tǒng)計(jì)學(xué)處理用SPSS 22.0 軟件進(jìn)行分析,結(jié)果以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()形式表示。計(jì)量資料用方差分析、計(jì)數(shù)資料用卡方檢驗(yàn)和Poisson 分布進(jìn)行組間比較,以P<0.05 為顯著性差異,P<0.01 為極顯著性差異。

2 結(jié)果

2.1 急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)

各組小鼠飲水進(jìn)食正常,未見中毒癥狀,體重逐日增加,14 d 內(nèi)無死亡。結(jié)果顯示雌雄小鼠的LD50均大于12.0 g/(kg·bw),屬實(shí)際無毒級(jí)。

2.2 細(xì)菌回復(fù)突變試驗(yàn)

兩次試驗(yàn)中受試物各劑量組回變菌落數(shù)均未大于自發(fā)回變菌落數(shù)的2 倍,亦無劑量-反應(yīng)關(guān)系,說明在加與不加S9 時(shí)該受試物對五株試驗(yàn)菌株均未呈現(xiàn)遺傳毒性(見表1、表2)。

表1 細(xì)菌回復(fù)突變試驗(yàn)結(jié)果(,第一次)Table 1 Results of bacterial reverse mutation test (,First time)

表1 細(xì)菌回復(fù)突變試驗(yàn)結(jié)果(,第一次)Table 1 Results of bacterial reverse mutation test (,First time)

注:(1):敵克松,每皿50 μg;(2):2-氨基芴,每皿10 μg;(3):甲基磺酸甲酯,每皿0.5 μL;(4):1,8-二羥基蒽醌,每皿50 μg;(5):疊氮鈉,每皿0.25 μg ;(6):2-氨基蒽,每皿1 μg。Note.(1),Dioxone,50 μg per dish.(2),2-aminofluorene,10 μg per dish.(3),Methyl sulfonic acid,0.5 μL per dish.(4),1,8-dihydroxyanthraquinone,50 μg per dish.(5),Sodium azide,0.25 μg per dish.(6),2-aminoanthracene,1 μg per dish.

表2 細(xì)菌回復(fù)突變試驗(yàn)結(jié)果(,第二次)Table 2 Results of bacterial reverse mutation test(,Second time)

表2 細(xì)菌回復(fù)突變試驗(yàn)結(jié)果(,第二次)Table 2 Results of bacterial reverse mutation test(,Second time)

注:(1):敵克松,每皿50 μg;(2):2-氨基芴,每皿10 μg;(3):甲基磺酸甲酯,每皿0.5 μL;(4):1,8-二羥基蒽醌,每皿50 μg;(5):疊氮鈉,每皿0.25 μg ;(6):2-氨基蒽,每皿1 μg。Note.(1),Dioxone,50 μg per dish.(2),2-aminofluorene,10 μg per dish.(3),Methyl sulfonic acid,0.5 μL per dish.(4),1,8-dihydroxyanthraquinone,50 μg per dish.(5),Sodium azide,0.25 μg per dish.(6),2-aminoanthracene,1 μg per dish.

2.3 哺乳動(dòng)物紅細(xì)胞微核試驗(yàn)

如表3 所示,與陰性對照組比較,銀耳多糖各劑量組對雌雄小鼠的含微核細(xì)胞率無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),結(jié)果為陰性。

表3 小鼠哺乳動(dòng)物紅細(xì)胞微核試驗(yàn)(n=5)Table 3 Results of mammalian erythrocyte micromucleus test

2.4 小鼠精原細(xì)胞染色體畸變試驗(yàn)

如表4、表5 所示,與陰性對照組比較,銀耳多糖各劑量組對小鼠的染色體畸變細(xì)胞率無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),結(jié)果為陰性。

表4 小鼠精原細(xì)胞染色體畸變試驗(yàn)結(jié)果(個(gè),%)Table 4 Results of mouse spermatogonial chromosomal aberration test(n,%)

表5 小鼠精原細(xì)胞染色體畸變試驗(yàn)結(jié)果(n=5)Table 5 Results of mouse spermatogonial chromosomal aberration test

2.5 90 d 經(jīng)口毒性試驗(yàn)

2.5.1 動(dòng)物的一般觀察

90 d 試驗(yàn)期間和28 d 恢復(fù)期間,各組動(dòng)物生長狀況良好,體重逐周增長,被毛光滑、皮膚無潰破、眼、黏膜、分泌物和排泄物(大小便)無異常,呼吸、神經(jīng)系統(tǒng)、自主活動(dòng),無實(shí)驗(yàn)動(dòng)物死亡。

2.5.2 對大鼠體重、食物利用率的影響

與陰性對照組比較,銀耳多糖各劑量組的每周體重、進(jìn)食量、食物利用率和體重增重、總進(jìn)食量、總食物利用率均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(表6)。

表6 90 d 經(jīng)口毒性試驗(yàn)對大鼠總食物利用率的影響()Table 6 Results of total food utilization rate of rats in 90 d oral toxicity test

表6 90 d 經(jīng)口毒性試驗(yàn)對大鼠總食物利用率的影響()Table 6 Results of total food utilization rate of rats in 90 d oral toxicity test

2.5.3 眼部檢查

試驗(yàn)前后,8.00 g/(kg·bw)劑量組和對照組大鼠的角膜、晶狀體、虹膜和結(jié)膜表面光滑,無充血水腫等異常表現(xiàn)。

2.5.4 血液學(xué)測定結(jié)果

與陰性對照組比較,試驗(yàn)?zāi)┢谛坌?.00 g/(kg·bw)劑量組白細(xì)胞分類嗜酸(%)升高、2.00 g/(kg·bw)劑量組PT 降低和8.00 g/(kg·bw)劑量組PT 降低,雌性4.00 g/(kg·bw)劑量組白細(xì)胞分類中性(%)升高、淋巴(%)降低(P<0.05 或P<0.01)(表7、表8、表9)。

表7 90 d 經(jīng)口毒性試驗(yàn)中期血液學(xué)檢查結(jié)果()Table 7 Results of hematological examination for mid-term in 90 d oral toxicity test

表7 90 d 經(jīng)口毒性試驗(yàn)中期血液學(xué)檢查結(jié)果()Table 7 Results of hematological examination for mid-term in 90 d oral toxicity test

表8 90 d 經(jīng)口毒性試驗(yàn)?zāi)┢谘簩W(xué)檢查結(jié)果(,n=10)Table 8 Results of hematological examination for final-term in 90 d oral toxicity test

表8 90 d 經(jīng)口毒性試驗(yàn)?zāi)┢谘簩W(xué)檢查結(jié)果(,n=10)Table 8 Results of hematological examination for final-term in 90 d oral toxicity test

注:與對照組比較,?P<0.05,??P<0.01。Note.Compared with the negative control group,?P<0.05,??P<0.01.

表9 90 d 經(jīng)口毒性試驗(yàn)恢復(fù)期結(jié)束血液學(xué)檢查結(jié)果(,n=5)Table 9 Results of hematological examination for recovery-term in 90 d oral toxicity test

表9 90 d 經(jīng)口毒性試驗(yàn)恢復(fù)期結(jié)束血液學(xué)檢查結(jié)果(,n=5)Table 9 Results of hematological examination for recovery-term in 90 d oral toxicity test

2.5.5 血液生化學(xué)測定結(jié)果

試驗(yàn)中期,雌性實(shí)驗(yàn)動(dòng)物8.00 g/(kg·bw)劑量組氯離子與對照組比較有顯著性差異(P<0.05),但仍在本研究室正常值范圍內(nèi),不認(rèn)為存在生物學(xué)意義;試驗(yàn)?zāi)┢诤突謴?fù)期,劑量組動(dòng)物各項(xiàng)指標(biāo)與對照組比較均無顯著性差異(P>0.05),且其值均在本實(shí)驗(yàn)室正常值范圍內(nèi)(表10、表11、表12)。

表10 90 d 經(jīng)口毒性試驗(yàn)中期血液生化結(jié)果(,n=5)Table 10 Results of biochemistry examination for mid-term in 90 d oral toxicity test

表10 90 d 經(jīng)口毒性試驗(yàn)中期血液生化結(jié)果(,n=5)Table 10 Results of biochemistry examination for mid-term in 90 d oral toxicity test

注:與對照組比較,?P<0.05。Note.Compared with the negative control group,?P<0.05.

表11 90 d 經(jīng)口毒性試驗(yàn)?zāi)┢谘荷Y(jié)果(,n=10)Table 11 Results of biochemistry examination for final-term in 90 d oral toxicity test

表11 90 d 經(jīng)口毒性試驗(yàn)?zāi)┢谘荷Y(jié)果(,n=10)Table 11 Results of biochemistry examination for final-term in 90 d oral toxicity test

表12 90 d 經(jīng)口毒性試驗(yàn)恢復(fù)期結(jié)束血液生化結(jié)果(,n=5)Table 12 Results of biochemistry examination for recovery-term in 90 d oral toxicity test

表12 90 d 經(jīng)口毒性試驗(yàn)恢復(fù)期結(jié)束血液生化結(jié)果(,n=5)Table 12 Results of biochemistry examination for recovery-term in 90 d oral toxicity test

2.5.6 尿液檢查結(jié)果

與對照組比較,試驗(yàn)中期雄性8.00 g/(kg·bw)劑量組尿蛋白有顯著性差異(P<0.05);試驗(yàn)?zāi)┢诖菩?.00 g/(kg·bw)劑量組pH 值有顯著性差異(P<0.05),但均在本研究室正常值范圍內(nèi),不認(rèn)為存在生物學(xué)意義。其余各劑量組各項(xiàng)指標(biāo)均無顯著性差異。

2.5.7 病理解剖

(1)大體解剖

90 d 經(jīng)口毒性試驗(yàn)結(jié)束后,大體觀察各劑量組動(dòng)物的腦、垂體、甲狀腺、胸腺、肺、心臟、肝、脾、腎、腎上腺、胃、十二指腸、空腸、回腸、結(jié)腸、直腸、胰腺、腸系膜淋巴結(jié)、卵巢、子宮、睪丸、附睪、前列腺和膀胱等組織器官均未見明顯異常。

(2)組織病理學(xué)檢查

對照組和高劑量組大鼠各臟器病理切片檢查發(fā)現(xiàn)對照組和高劑量組有少數(shù)動(dòng)物出現(xiàn)肝、肺和腎輕微病理改變:雄性對照組和雌性高劑量組、對照組各1 只大鼠可觀察到肝小葉內(nèi)點(diǎn)狀的炎癥灶,灶內(nèi)炎細(xì)胞浸潤,個(gè)別肝細(xì)胞壞死,雄性高劑量組、對照組各1 只內(nèi)可見匯管區(qū)內(nèi)點(diǎn)狀的炎癥灶;雄性高劑量組1 只大鼠可觀察到肺氣腫,部分肺泡腔融合成肺大泡,雄性對照組和雌性高劑量組、對照組各有1 只可觀察到肺間質(zhì)炎,肺泡上皮增生,肺泡壁變厚,肺泡腔和肺泡壁有炎細(xì)胞浸潤;雄性高劑量組、對照組各1 只大鼠可觀察腎小管變性,小管上皮細(xì)胞腫脹,嗜堿性染色增強(qiáng),胞漿內(nèi)出現(xiàn)透明空泡樣區(qū),胞核疏松淡染,小管管腔變窄。

(3)臟器系數(shù)測定結(jié)果

試驗(yàn)?zāi)┢诩盎謴?fù)期,腦、心臟、胸腺、腎上腺、肝、脾、腎、睪丸、附睪、子宮、卵巢等臟器的重量和臟器系數(shù)與對照組比較均無顯著性差異(P>0.05)(表13～表16)。

表13 90 d 經(jīng)口毒性試驗(yàn)?zāi)┢谂K器重量(,n=10)Table 13 Organ weight for final-term in 90 d oral toxicity test

表13 90 d 經(jīng)口毒性試驗(yàn)?zāi)┢谂K器重量(,n=10)Table 13 Organ weight for final-term in 90 d oral toxicity test

表14 90 d 經(jīng)口毒性試驗(yàn)?zāi)┢谂K器系數(shù)(,n=10)Table 14 Organ coefficient for final-term in 90 d oral toxicity test

表14 90 d 經(jīng)口毒性試驗(yàn)?zāi)┢谂K器系數(shù)(,n=10)Table 14 Organ coefficient for final-term in 90 d oral toxicity test

表15 90 d 經(jīng)口毒性試驗(yàn)恢復(fù)期結(jié)束臟器重量(,n=10)Table 15 Organ coefficient for recovery-term in 90 d oral toxicity test

表15 90 d 經(jīng)口毒性試驗(yàn)恢復(fù)期結(jié)束臟器重量(,n=10)Table 15 Organ coefficient for recovery-term in 90 d oral toxicity test

表16 90 d 經(jīng)口毒性試驗(yàn)恢復(fù)期結(jié)束臟器系數(shù)(,n=10)Table 16 Organ coefficient for recovery-term in 90 d oral toxicity test

表16 90 d 經(jīng)口毒性試驗(yàn)恢復(fù)期結(jié)束臟器系數(shù)(,n=10)Table 16 Organ coefficient for recovery-term in 90 d oral toxicity test

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銀耳多糖生理活性廣泛,具有廣闊的市場價(jià)值,但作為食品原料開發(fā)利用還缺乏充分的毒理安全評價(jià)資料?，F(xiàn)僅查閱到賈漢卿等[22-25]報(bào)道的關(guān)于銀耳多糖J 的小鼠急性毒性、慢性毒性、生殖毒性、致癌試驗(yàn)文章,其采用的試驗(yàn)方法參考文獻(xiàn)為1978 年人民衛(wèi)生出版社出版的《食品毒理》。報(bào)道未對受試物銀耳多糖來源、性狀等作出說明,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選用小鼠,未標(biāo)明小鼠品系、來源、飼養(yǎng)環(huán)境等,在慢性毒性試驗(yàn)中,未提供每周體重、進(jìn)食量、食物利用率、血液學(xué)、血生化學(xué)、尿液檢查、臟器濕重、臟體比等多項(xiàng)指標(biāo)數(shù)據(jù),也未設(shè)置衛(wèi)星組,研究不夠深入系統(tǒng)。本次研究依據(jù)最新的食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)[17-21]對華熙生物科技股份有限公司生產(chǎn)的銀耳多糖開展毒理學(xué)試驗(yàn),初步研究銀耳多糖的食用安全性。急性毒性試驗(yàn)采用限量法[17],24 h 內(nèi)經(jīng)口累積給予小鼠12.0 g/(kg·bw)的銀耳多糖,小鼠無一死亡,無明顯的毒性癥狀,可見銀耳多糖屬實(shí)際無毒級(jí)。在遺傳毒性試驗(yàn)中,無論原核細(xì)胞試驗(yàn)還是真核細(xì)胞試驗(yàn),無論體內(nèi)試驗(yàn)還是體外試驗(yàn),結(jié)果均為陰性,初步判斷該銀耳多糖沒有遺傳毒性。在90 d 經(jīng)口毒性試驗(yàn)中,各劑量組動(dòng)物每周體重、體重增重、進(jìn)食量、總進(jìn)食量、食物利用率和總食物利用率與對照組比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,可見銀耳多糖對大鼠生長發(fā)育、進(jìn)食、營養(yǎng)吸收沒有不良影響。血液學(xué)、血生化、尿液檢查中,個(gè)別劑量白細(xì)胞分類嗜酸、中性、淋巴、PT,氯離子、尿蛋白、尿PH 值等與對照組比較出現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,但沒有劑量反應(yīng)關(guān)系,時(shí)間沒有連續(xù)性,與性別無關(guān),且其值均在本研究室正常值范圍內(nèi),不認(rèn)為有生物學(xué)意義和毒理學(xué)意義,可能與動(dòng)物個(gè)體差異有關(guān)。組織病理學(xué)檢查對照組和高劑量組少數(shù)動(dòng)物的標(biāo)本出現(xiàn)病理改變,但這些病理改變程度較輕且無組間特異性分布,考慮與動(dòng)物質(zhì)量有關(guān),不認(rèn)為與銀耳多糖作用有關(guān)。

綜合以上結(jié)果,在本次條件下,本次所研究的銀耳多糖屬于實(shí)際無毒級(jí)物質(zhì),未見遺傳毒性效應(yīng),根據(jù)銀耳多糖的實(shí)際攝入劑量初步確定該樣品最大未觀察到有害作用劑量(NOAEL)為:雄性動(dòng)物為7.21 g/(kg·bw),雌性動(dòng)物為8.18 g/(kg·bw)。本次對華熙生物科技股份有限公司生產(chǎn)的銀耳多糖開展的毒理學(xué)安全研究為銀耳多糖開發(fā)利用提供了科學(xué)數(shù)據(jù),為進(jìn)行下一步的毒理學(xué)試驗(yàn)提供了劑量參考依據(jù)。