當(dāng)歸生姜羊肉湯對脾腎陽虛型IBS-D 大鼠中醫(yī)證候的影響

王 婷 劉志勇 羅黎明 張 鴻 徐 磊曾憲保鄭梓泓劉志勇?

(1.江西中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)學(xué)院,南昌 330004;2.江西省中醫(yī)基礎(chǔ)理論教研室,南昌 330004;3.江西中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物科技中心,南昌 330004;4.江西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院,南昌 330004)

腹瀉型腸易激綜合征(irritable bowel syndrome with predominant diarrhea,IBS-D)是一種常見的胃腸道功能紊亂性疾病,是腸易激綜合征(IBS)中最普遍的亞型。其特點是在沒有特定的器質(zhì)性病理情況下,以腹痛、腹瀉、腹脹為主要癥狀,常伴有排便習(xí)慣及大便性狀的改變,呈持續(xù)存在或反復(fù)發(fā)作[1]。現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn),該病發(fā)病機(jī)制尚不明確,但是與腸道動力異常、腦腸軸功能紊亂、腸道菌群失調(diào)、內(nèi)臟高敏感性、粘膜免疫和炎性反應(yīng)等因素有關(guān)[2]。如今,腸易激綜合征的發(fā)病率已在功能性疾病中位居第一位[3],經(jīng)過文獻(xiàn)數(shù)據(jù)整理顯示,全球IBS 的總患病率為8.8%,北美、歐洲、澳大利亞、新西蘭等地區(qū)為8.1%、亞洲為9.6%,拉丁美洲最高,患病率為17.5%[4],其中,腹瀉型腸易激綜合征占比大,據(jù)惠州市中心人民醫(yī)院在2015 年3 月～2018年6 月調(diào)查研究發(fā)現(xiàn)符合RomeⅡ診斷標(biāo)準(zhǔn)的54 例腸易激綜合征患者,腹瀉為主要癥狀患者30 例,占55.6%;便秘為主導(dǎo)的患者18 例,占33.3%;交替型患者6 例,占11.1%[5]?？梢?腸易激綜合征患病范圍廣、人口多,并據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)研究,女性的患病率明顯高于男性[6],女性更容易感到疲勞,抑郁,焦慮等情緒,從而影響他們的生活質(zhì)量。目前,西醫(yī)多以對癥治療為主,藥物治療副作用大、不良反應(yīng)多,且停藥后易復(fù)發(fā)[7]。因此,腸易激綜合征是當(dāng)今醫(yī)學(xué)領(lǐng)域研究是重點課題之一,其中腹瀉型腸易激綜合征更加應(yīng)該引起我們的重視。

當(dāng)歸生姜羊肉湯作為藥膳名方,原方由當(dāng)歸、生姜、羊肉組成,當(dāng)歸能補(bǔ)血活血,調(diào)經(jīng)止痛,生姜溫中散寒,羊肉能溫補(bǔ)脾胃,補(bǔ)血益腎。具有補(bǔ)益氣血、溫中散寒止痛的功效。本方在張仲景的《金匱要略》記載:“寒疝,腹中痛及脅痛里急者,當(dāng)歸生姜羊肉湯主之”,以及《金匱要略·婦人產(chǎn)后病脈證》曰:“產(chǎn)后腹中痛,當(dāng)歸生姜羊肉湯主之;并治腹中寒疝,虛勞不足”[8],該方以脾胃為本,使驅(qū)邪而不傷正,以食物協(xié)助藥物發(fā)揮效力,既能治愈疾病,而又不損傷脾胃,主要用于病機(jī)為虛寒性疝氣、腹痛及婦女痛經(jīng)、產(chǎn)后的調(diào)理。經(jīng)現(xiàn)代文獻(xiàn)研究發(fā)現(xiàn),當(dāng)歸生姜羊肉湯已用于呼吸、消化、免疫等系統(tǒng)疾病,均取得了較好的治療作用[9]。

近年來中醫(yī)受到越來越多人的關(guān)注,中醫(yī)治療腹瀉型腸易激綜合征以辨證論治和整體觀念出發(fā),有其副作用小和不易復(fù)發(fā)的優(yōu)勢。由于該病女性發(fā)病率更多,因此本研究以雌性大鼠作為研究對象,通過研究當(dāng)歸生姜羊肉湯對脾腎陽虛型IBS-D大鼠中醫(yī)證候的影響,探討當(dāng)歸生姜羊肉湯對脾腎陽虛IBS-D 大鼠脾腎陽虛證的改善作用,為當(dāng)歸生姜羊肉湯用于臨床一些疾病證候的應(yīng)用提供實驗基礎(chǔ),現(xiàn)報告如下。

1 材料和方法

1.1 實驗動物

SPF 級2 月齡SD 雌性大鼠72 只,體重180～220 g,江西中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物科技中心提供[SCXK(贛)2018-0003],實驗大鼠飼養(yǎng)在江西中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物科技中心SPF 級屏障系統(tǒng)內(nèi)[SYXK(贛)2017-0004],飼養(yǎng)環(huán)境條件為環(huán)境溫度為20℃～25℃、濕度45%～55%。整個實驗通過江西中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物倫理委員會的審查(JZLLSC20210053),并接受其監(jiān)督,實驗過程中做到了3R 原則并對實驗動物進(jìn)行倫理關(guān)懷。

1.2 主要試劑與儀器

上海麥克林生化科技有限公司提供的腺嘌呤(批號:20210307)。大鼠曠場箱,曠場裝置由3 部分構(gòu)成:長100 cm、寬100 cm、高40 cm 的箱體;視頻錄制系統(tǒng)及SMARTv 2.5.21 行為實驗分析軟件(西班牙Panlab 公司);醫(yī)用電子體溫計(TDB-1,深圳雅嵐科技有限公司);華為手機(jī)(榮耀p20,深圳華為公司);Image J 圖像分析軟件(National Institutes of Health,NIH 研發(fā));個人手提式電腦(HUAWEI MateBookD15,華為);量尺(普通市售,精度1 mm);電子天平(JH03K2,北京京衡偉業(yè)科技有限公司,最小稱量0.1 g)。

1.3 實驗方法

1.3.1 模型制備方法

由江西古漢精制中藥飲片有限公司提供煎制的番瀉葉水煎液(批號:20210411),將腺嘌呤和蒸餾水配置成濃度為20 mg/mL 的腺嘌呤藥液,番瀉葉水煎液濃度為2 g/mL,以腺嘌呤和冰番瀉葉水復(fù)合灌胃(各1 mL/100 g)30 d 造成脾腎陽虛型IBS-D模型。

1.3.2 受試物

(1)當(dāng)歸生姜羊肉湯的制備

當(dāng)歸生姜羊肉湯,按照《中華方劑本源劑量大典》方源東漢張仲景《金匱》卷上,組成:當(dāng)歸3 兩(45 g)生姜5 兩(75 g)羊肉1 斤(250 g)用法:上三味,以水8 升(1600 mL),煮取3 L(600 mL),溫服7合(140 mL),濃縮為1 ∶2 ∶4比例的當(dāng)歸生姜羊肉湯,其低、中、高劑量分別為4.2、8.4、16.8 g/kg,用于本實驗。

(2)真武湯的制備

真武湯為治療脾腎陽虛,水濕泛溢的基礎(chǔ)方,全方以助陽氣,利小便以祛水邪,主治陽虛水泛證。畏寒肢厥,小便不利,心下悸動不寧,頭目眩暈,身體筋肉瞤動,站立不穩(wěn),四肢沉重疼痛,浮腫,腰以下為甚;或腹痛,泄瀉,故本實驗采用真武湯做為對照。真武湯藥液的制備:參考全國高等醫(yī)藥院校教材《方劑學(xué)》(第五版),即茯苓9 g、芍藥9 g、生姜9 g、附子(炮)9 g,白術(shù)6 g,置于涼水中浸泡1 h,蒸煮30 min 后濃縮至質(zhì)量濃度為2 g/mL,全過程由江西古漢精制中藥飲片有限公司代煎制備。

1.3.3 動物分組

大鼠檢疫5 d,選取營養(yǎng)良好、健康活潑大鼠72 只,將72 只SD 雌性大鼠隨機(jī)分為6 組,脾腎陽虛IBS-D 造模成功后將大鼠分組為正常組、模型組、陽性組、低劑量組、中劑量組和高劑量組,每組12 只,進(jìn)行灌胃。正常組和模型組每天不限飲食,陽性組每天給予真武湯,低、中、高3 個劑量組分別給與不同劑量的當(dāng)歸生姜羊肉湯,連續(xù)灌胃4 周。

1.3.4 外觀檢查和中醫(yī)證候積分評價

造模過程中,觀察動物的生長情況,對動物飲食飲水和二便情況進(jìn)行觀察。于給藥4 周時(即實驗結(jié)束時),分別在對應(yīng)時間點觀察各組大鼠中醫(yī)證候。參照文獻(xiàn)[10-11],根據(jù)國家衛(wèi)生部《中藥新藥臨床指導(dǎo)原則》及《中醫(yī)虛證辨證參考標(biāo)準(zhǔn)》中脾腎陽虛證判斷標(biāo)準(zhǔn),擬定脾腎陽虛證大鼠模型證候積分評價量表(見表1),分值越高,提示中醫(yī)證候越嚴(yán)重。從大鼠精神狀態(tài)、眼睛、耳尾顏色、毛發(fā)、糞便等項目評價灌胃真武湯陽性組和灌胃當(dāng)歸生姜羊肉湯低、中、高3 個劑量組對脾腎陽虛IBS-D 證候的改善情況。

表1 脾腎陽虛IBS-D 大鼠模型證候積分評價量表Table 1 Syndrome integral evaluation scale of IBS-D rat model of spleen kidney Yang deficiency

1.3.5 體重和肛溫以及腸道病理

每周對各組大鼠的體重和肛溫進(jìn)行稱重和測量,測肛溫是用醫(yī)用電子體溫計TDB-1 放入大鼠肛門,待聲音提示時進(jìn)行讀數(shù)并記錄,以觀察其體重和肛溫變化情況。當(dāng)歸生姜羊肉湯給藥結(jié)束后取腸道進(jìn)行固定并做組織切片,光鏡下觀察腸道的組織學(xué)變化。

1.3.6 飲水量和攝食量

每天記錄各組大鼠飲水量及攝食量,檢查鼠籠、水瓶,確保無漏水情況后,每天早上9:00 投放定量的500 mL 水和300 g 的飼料,于第2 天9:00 對所剩的水和飼料進(jìn)行稱重和測量,以觀察其飲水量和攝食量變化情況。計算方法為:平均日進(jìn)食量(g)=(添加的飼料量-剩余量)/每籠只數(shù);平均日飲水量(mL)=(添加的水量-剩余量)/每籠只數(shù)。

1.3.7 曠場實驗

行為實驗在安靜的環(huán)境下進(jìn)行,實驗開始將動物放入角落區(qū),同時進(jìn)行攝像和計時,記錄6 min 內(nèi)動物的活動狀態(tài),用SMARTv2.5.21 行為實驗分析軟件對后4 min 的活動狀態(tài)進(jìn)行分析。

1.3.8 RGB 值

大鼠爪、尾、舌拍照及圖像處理,將大鼠的左后爪、尾巴中末端及舌面置于同一位置、同一亮度下采用華為手機(jī)拍照。圖像處理:將照片輸入電腦,用Image J 圖像分析軟件對圖片進(jìn)行白平衡,用不規(guī)則曲線工具,分別框定出大鼠舌面、足底和尾部范圍,檢測其RGB 模式下的R(red,紅色),G(green,綠色),B(blue,藍(lán)色)分量值。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

實驗結(jié)果的統(tǒng)計分析采用SPSS 20.0 統(tǒng)計軟件,實驗數(shù)據(jù)均表示為平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()。多組數(shù)據(jù)若全部滿足正態(tài)分布而且方差齊,采用單因素方差分析法比較組間的差異,組間兩兩比較則選擇用LSD 法進(jìn)行多重比較;如果沒有完全滿足,那么就選擇采用非參數(shù)檢驗。兩組數(shù)據(jù)的比較采取獨立樣本t檢驗。P<0.05 為差異具有研究統(tǒng)計學(xué)意義。最后采用GraphPapPrism 8.0.1 做圖。

2 結(jié)果

2.1 動物整體情況的觀察

造模結(jié)束后,模型大鼠出現(xiàn)喜歡扎堆,墊料潮濕污穢加重的情況,模型鼠糞便出現(xiàn)稀軟便溏現(xiàn)象,還可見到大便具有不消化的顆粒狀,見圖1。

圖1 脾腎陽虛IBS-D 模型鼠的表現(xiàn)及糞便狀況的改變Figure 1 Performance of IBS-D model rat with spleen kidney Yang deficiency and the changes of fecal status

2.2 中醫(yī)證候積分評價結(jié)果

正常組的精神狀態(tài)、眼睛、耳尾顏色、毛發(fā)、糞便都為正常狀態(tài),模型組與正常組相比,精神狀態(tài)、眼睛、耳尾顏色、毛發(fā)、糞便都有異常,具有顯著性差異(P<0.05),陽性組和低、中、高3 個劑量組大鼠的中醫(yī)證候積分評價結(jié)果見表2。

表2 各組大鼠中醫(yī)證候積分評價結(jié)果(,n=12)Table 2 Evaluation results of TCM syndrome score of rats in each group

表2 各組大鼠中醫(yī)證候積分評價結(jié)果(,n=12)Table 2 Evaluation results of TCM syndrome score of rats in each group

注:與正常組比較,??P<0.01,???P<0.001,????P<0.0001;與模型組比較,####P<0.0001。Note.Compared with normal group,??P<0.01,???P<0.001,????P<0.0001.Compared with model group,####P<0.0001.

與模型組相比,精神狀態(tài)、眼睛、耳尾顏色、毛發(fā)、糞便的積分有所改善,其中精神狀態(tài)、眼睛、毛發(fā)、糞便的積分都有顯著性差異(P<0.05),而低、中、高劑量組與陽性組相比,精神狀態(tài)、眼睛、耳尾顏色、毛發(fā)、糞便均較好,各組之間無顯著性差異(P>0.05)(見表2)。

2.3 體重和肛溫

從數(shù)據(jù)來看,正常組、模型組、陽性組和3 個劑量組大鼠的體重都呈緩慢上漲趨勢,各組之間的體重?zé)o顯著性差異(P>0.05)(見表3)。從數(shù)據(jù)來看,造模后模型組、陽性組和3 個劑量組大鼠的肛溫與正常組相比都有所下降,其中模型組、陽性組和低、中劑量組大鼠的肛溫與正常組相比具有顯著性差異(P<0.05),在第3 周,模型組大鼠的肛溫與正常組相比明顯更低,具有顯著性差異(P<0.05);中、高劑量組大鼠肛溫與模型組相比明顯更高,具有顯著性差異(P<0.05);低、中、高3 個劑量組大鼠的肛溫與陽性組相比無顯著性差異(P>0.05)(見表4)。

2.4 飲水量和攝食量

由圖可知,在第1 周,陽性組大鼠的攝食量與正常組相比明顯更高,具有顯著性差異(P<0.05),高劑量組大鼠的攝食量與模型組和陽性組相比都明顯更低,均具有顯著性差異(P<0.05);在第2 周,高劑量組大鼠的攝食量與模型組和陽性組相比均更低,都具有顯著性差異(P<0.05),在第3 周和第4周,高劑量組大鼠的攝食量與正常組、模型組、陽性組相比都更低,均具有顯著性差異(P<0.05),提示可能由于灌胃高劑量的當(dāng)歸看生姜羊肉湯和高比例的羊肉導(dǎo)致高劑量組大鼠攝食量的減少(見圖2)。

從圖2 可知,模型組、陽性組和3 個劑量組大鼠的飲水量趨勢線逐漸下降,但與正常組大鼠相比還是明顯較高,具有顯著性差異(P<0.05),其中,在第1 周,高劑量組和陽性組大鼠的飲水量與模型組相比都具有顯著性差異(P<0.05);在第2 周,高劑量組大鼠的飲水量明顯高于陽性組,具有顯著性差異(P<0.05);在第3 周,中、高劑量組大鼠的飲水量與陽性組相比明顯更高,具有顯著性差異(P<0.05);在第4 周,陽性組大鼠的飲水量與模型組相比明顯更低,具有顯著性差異(P<0.05),中、高劑量組大鼠的飲水量明顯高于陽性組,具有顯著性差異(P<0.05),提示3 個劑量組的飲水量可能與灌胃當(dāng)歸生姜羊肉湯有關(guān)(見圖2)。

圖2 各組大鼠每周攝食量和飲水量變化圖Figure 2 Changes of weekly food intake and water consumption of rats in each group

2.5 腸道組織病理學(xué)改變

腸道光鏡下可見,正常組織結(jié)構(gòu)正常、無或少炎性細(xì)胞浸潤,而模型鼠腸道粘膜下層出現(xiàn)大量淋巴細(xì)胞浸潤,喂食當(dāng)歸生姜羊肉湯后炎性浸潤明顯減少,陽性對照組也基本正常(圖3A～3F);模型動物的腸絨毛紊亂,柱狀絨毛破壞,腸隱窩基底部有破壞現(xiàn)象,黏膜下層,黏膜下基層,肌層增寬,結(jié)構(gòu)疏松,喂食當(dāng)歸生姜羊肉湯后結(jié)構(gòu)有所恢復(fù)(圖3G～3L)。

圖3 各組大鼠腸道的病理組織的變化Figure 3 Pathological changes of intestinal tract of rats in each group

2.6 曠場實驗

從運動軌跡來看,正常組大鼠在箱中快速移動,頻繁經(jīng)過中心區(qū)域;模型組大鼠運動度明顯降低,在箱中移動速度緩慢,幾乎不經(jīng)過中心區(qū)域,停留角落區(qū)域時間長,表現(xiàn)出明顯的倦怠乏力;陽性組大鼠通過灌胃真武湯,與模型組相比,運動度明顯提升,在箱中移動速度較快,較多經(jīng)過中心區(qū)域,頻繁在周邊地區(qū)移動;低、中、高3 個劑量組較模型組從運動軌跡來看都有較大的改善,移動速度有依次提升的趨勢,其中中劑量和高劑量大鼠較頻繁經(jīng)過中心區(qū)域(見圖4)。

圖4 曠場實驗中各組大鼠典型運動軌跡圖Figure 4 Typical trajectories of rats in each group in open field experiments

從數(shù)據(jù)結(jié)果分析,與正常組比較,模型組大鼠在周邊區(qū)域時間過長,在中心區(qū)域時間明顯下降,具有顯著性差異(P<0.05),在周邊區(qū)域爬行的距離更短,具有顯著性差異(P<0.05),同時長時間在周邊區(qū)域休息,具有顯著性差異(P<0.05),且無論在周邊區(qū)域還是在中心區(qū)域都行動過慢,其中在中心區(qū)域的行動過慢具有顯著性差異(P<0.05),表明番瀉葉和腺嘌呤造模引起大鼠精神萎靡,活動度下降,倦怠乏力;陽性組和低、中、高3 個劑量組在中心區(qū)域和周邊區(qū)域的時間、距離、快速移動時間、慢速移動時間與模型組比較都有明顯提高,其中陽性組和中、高劑量大鼠的在中心區(qū)域和周邊區(qū)域的時間、中心區(qū)域移動的距離、在周邊休息的時間與模型組都具有顯著性差異(P<0.05);與陽性組相比,低、中劑量組大鼠在周邊區(qū)域更長和在中心區(qū)域時間更短,都具有顯著性差異(P<0.05),高劑量組大鼠在周邊區(qū)域更短和在中心區(qū)域時間更長,具有顯著性差異(P<0.05),可見陽性組灌胃真武湯和3 個劑量組灌胃的當(dāng)歸生姜羊肉湯都明顯改善了大鼠的自主活動狀態(tài),而且高劑量組的活動狀態(tài)比陽性組更佳,為該方緩解倦怠乏力的脾腎陽虛癥狀提供了實驗依據(jù)(見圖5)。

圖5 各組大鼠曠場實驗結(jié)果Figure 5 Open field experiment results of rats in each group

2.7 RGB 值

2.7.1 尾部

從圖片來看,正常組大鼠的尾部紅潤,模型組大鼠的尾部蒼白,近尾尖稍紅,陽性組和低、中、高3個劑量組大鼠的尾部較模型組紅,高劑量組明顯更紅(見圖6)。

從RGB 值數(shù)據(jù)來看,模型組的R、G、B 值與正常組比較,均有明顯下降,其中G、B 值具有顯著性差異(P<0.5);與模型組比較,陽性組和低、中、高劑量組大鼠的R、G、B 值更高,其中R、B 值具有顯著性差異(P<0.5),高劑量組大鼠的G 值更高,也具有顯著性差異(P<0.5),提示灌胃真武湯和當(dāng)歸生姜羊肉湯都明顯改善了大鼠尾部的色澤(見圖6)。

圖6 各組大鼠尾部圖片和尾部色度比較圖Figure 6 Comparison of tail pictures and tail chromaticity of rats in each group

2.7.2 足底

從圖片來看,正常組大鼠足底紅潤,模型組足底蒼白,陽性組和低、中、高3 個劑量組較模型組紅,高劑量組明顯更紅(見圖7)。

從RGB 值數(shù)據(jù)來看,模型組大鼠足底的R、G、B 值與正常組比較有明顯下降,其中R 值具有顯著性差異(P<0.5);陽性組和低、中、高3 個劑量組的R、G、B 值與模型組比較有明顯提高,其中R 值具有顯著性差異(P<0.5),同時,陽性組和中、高劑量組的G 值比模型組更高,具有顯著性差異(P<0.5);低劑量的G 值稍低于陽性組,具有顯著性差異(P<0.5),提示灌胃真武湯和當(dāng)歸生姜羊肉湯都明顯改善了大鼠足底的色澤(見圖7)。

圖7 各組大鼠足底圖片和足底色度比較圖各組大鼠足底色度比較圖Figure 7 Comparison of plantar pictures and plantar chromaticity of rats in each group

2.7.3 舌面

從圖片來看,正常組大鼠舌面淡紅、薄白苔,模型組舌面胖大暗紅,薄白苔,少澤,陽性組低劑量組舌面淡紅、薄白苔,中、高劑量組舌面稍紅(見圖8)。

從RGB 值數(shù)據(jù)來看,與正常組相比,中劑量組大鼠的舌面B 值更高,具有顯著性差異(P<0.05),與模型組比,中、高2 個劑量組大鼠舌面的R 值更高,具有顯著性差異(P<0.05),與陽性組比較,低劑量組的G 值更低,具有顯著性差異(P<0.05),提示灌胃真武湯和當(dāng)歸生姜羊肉湯都明顯改善了大鼠舌面的色澤(見圖8)。

圖8 各組大鼠舌面圖片和舌面色度比較圖Figure 8 Comparison of tongue surface pictures and tongue surface chromaticity of rats in each group

3 討論

本研究采用腺嘌呤和番瀉葉水煎液的方法成功建立脾腎陽虛IBS-D 的雌性大鼠模型,用中醫(yī)證候來探究當(dāng)歸生姜羊肉湯對脾腎陽虛IBS-D 的干預(yù)作用,而真武湯由炮附子、白術(shù)、茯苓、芍藥、生姜組成,功效溫補(bǔ)脾腎陽氣、利水消腫。主治陽虛水泛,臨床應(yīng)用于小便不利、腹痛、泄瀉等癥,王曉東[12]用真武湯合小青龍湯治療腹瀉型IBS-D 和張連文[13]用真武湯合柴胡疏肝散治療腹瀉型IBS-D 均取得了較好的臨床療效。因此,本研究選其作為陽性藥。

脾腎陽虛型IBS-D 是一種消化系統(tǒng)疾病,中醫(yī)學(xué)認(rèn)為,本病屬“腹痛”、“泄瀉”等范疇?！端貑枴づe痛論篇》曰:“寒氣客于小腸,小腸不得成聚,故后泄腹痛矣”,且《醫(yī)宗必讀》也指出“無濕不成泄”,可見該病與寒和濕有關(guān)。脾腎陽虛作為該病的證,《內(nèi)經(jīng)》記載,“脾居中央以灌四旁”,脾主司運化之職,是機(jī)體消化飲食、吸收輸布水谷精微和代謝津液的樞紐。《素問》曰:“腎者主蟄,封藏之本,精之處也?！蹦I藏精,精化氣,腎氣是生氣之源,是生命力活動的原動力,具有推動人體生長發(fā)育、促進(jìn)人體生殖功能、防御外邪入侵的作用。脾與腎的關(guān)系主要表現(xiàn)在先后天相互滋生和水液代謝方面,脾運化水谷精微,依賴于腎陽的溫煦蒸化,才能健運,腎精依賴于脾運化的水谷精微不斷補(bǔ)充,才能充盛。而脾腎兩臟的陽氣虧虛,會引起消化機(jī)能失調(diào)和水液代謝的紊亂,出現(xiàn)腹痛、腹瀉等臨床表現(xiàn)。辨證論治是中醫(yī)理論的核心和精髓,中醫(yī)治病以辯證論治為基本原則,治療主要是溫腎健脾、化濕止瀉。

當(dāng)歸生姜羊肉湯,本方當(dāng)歸能補(bǔ)血活血、溫中止痛,在《名醫(yī)別錄》中記載,“能溫中止痛,補(bǔ)五臟,生肌肉”李時珍認(rèn)為當(dāng)歸可補(bǔ)血活血,甄權(quán)認(rèn)為凡虛寒證,宜重用當(dāng)歸,經(jīng)現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)當(dāng)歸能抗炎、促進(jìn)造血功能,保肝、護(hù)腎,調(diào)節(jié)免疫等藥理作用[14];生姜能溫中散寒,驅(qū)除表邪,《食療本草》中記載生姜“除壯熱,治轉(zhuǎn)筋、心滿”《珍珠囊》中生姜“益脾胃,散風(fēng)寒”有抗炎、抗腫瘤,增強(qiáng)免疫功能,抗動脈粥樣硬化等藥理作用[15];羊肉暖中補(bǔ)虛,補(bǔ)中益氣,益腎氣,治虛勞寒冷,五勞七傷。三者合用,具有補(bǔ)益氣血、溫中散寒、調(diào)經(jīng)止痛的功效,此方藥借食味,食助藥性,有“藥食同源”、“寓藥于食”的特點,以脾胃為本,以后天滋養(yǎng)先天,補(bǔ)益脾腎,促進(jìn)脾運化水谷精微、統(tǒng)攝血液的功能,提高機(jī)體免疫應(yīng)答和造血的能力,腎為一身元陽之本,能提高腎溫煦機(jī)體的作用,推動人體的生命活動。經(jīng)查文獻(xiàn)可知,當(dāng)歸生姜羊肉湯對寒性疾病有良好的治療效果[16-17]?；诖?本研究立足于中醫(yī)基礎(chǔ)理論,探討當(dāng)歸生姜羊肉湯對脾腎陽虛型IBS-D 大鼠中醫(yī)證候的影響,為中醫(yī)治療脾腎陽虛IBS-D 提供實驗支撐和指導(dǎo)臨床實驗,為進(jìn)一步研究IBS-D 的作用機(jī)制打下基礎(chǔ)。本研究采用雌性大鼠,為擴(kuò)大當(dāng)歸生姜羊肉湯適用人群提供一定的實驗基礎(chǔ)。

從實驗結(jié)果來看,給雌性大鼠灌胃低、中、高不同劑量的當(dāng)歸生姜羊肉湯后中醫(yī)癥候評分明顯低于模型組,具有顯著性差異(P<0.05),體重、肛溫、攝食量、飲水量也有相應(yīng)的恢復(fù),可見當(dāng)歸生姜羊肉湯補(bǔ)益脾腎,提高機(jī)體免疫能力,有效的改善脾腎陽虛所引起大鼠精神萎靡、眼睛乏神、毛發(fā)稀疏發(fā)黃、糞便稀溏、食欲不振的癥狀。

曠場實驗可以用于實驗動物的虛證的探索,通過曠場實驗可見,灌胃當(dāng)歸生姜羊肉湯后,低、中、高3 個劑量組大鼠的活動度與模型組比明顯提高,具有顯著性差異(P<0.05),提示當(dāng)歸生姜羊肉湯有其溫中散寒的作用,能有效的改善脾腎陽虛所引起的畏寒肢冷,倦怠乏力懶動的癥狀。腺嘌呤造模腎陽虛對腎造成損害,經(jīng)藥理研究發(fā)現(xiàn)當(dāng)歸對腎具有保護(hù)作用,尤其在腎小球的過濾與腎小管的重吸收作用中有很明顯的效果,減輕腎損傷[18]。曠場實驗有助于我們對由于脾腎原因?qū)е碌臍馓摶顒佣葴p少的定量評價具有重要的參考意義。

中醫(yī)四診是中醫(yī)診病的重要方法,動物的四診等由于實驗動物的特殊性,難以定性和定量判斷,建立圖像和軟件分析的方法可以幫助進(jìn)行診斷。從RGB 值數(shù)據(jù)來看,低、中、高劑量組大鼠尾部、足底、舌面的R、G、B 值與模型組比較更高,具有顯著性差異(P<0.05)。表明當(dāng)歸生姜羊肉湯具有補(bǔ)血活血的作用,能明顯改善了大鼠尾部、足底、舌面的色澤。這可能其中當(dāng)歸含有的多糖有關(guān),它能推動脾臟內(nèi)源性結(jié)節(jié)的生長,使得MSCs 增殖,促進(jìn)骨髓細(xì)胞DNA 的合成,刺激機(jī)制的造血功能,從而緩解缺血性癥狀[19]。

本研究表明,使用曠場實驗和舌、爪、尾的RGB值可以在一定程度上和中醫(yī)的四診在實驗動物上進(jìn)行定量分析,有助于實驗動物模型的中醫(yī)證候指標(biāo)的建立。結(jié)合實驗中的大鼠的中醫(yī)證候的表現(xiàn),當(dāng)歸生姜羊肉湯對脾腎陽虛SD 雌性大鼠中醫(yī)證候具有改善作用,且呈現(xiàn)出一定的劑量效應(yīng)關(guān)系。