豬梭菌性腸炎的致病機(jī)制與防治措施

李勇/駐馬店市西平縣農(nóng)村農(nóng)業(yè)局農(nóng)業(yè)綜合執(zhí)法大隊 463900

劉萌/駐馬店市獸藥飼料（動物產(chǎn)品）質(zhì)量檢驗監(jiān)測中心 463000

1 NE 的臨床表現(xiàn)

NE 常影響3 周齡以內(nèi)的新生仔豬，并可在豬群中迅速傳播，在未接種疫苗的豬群中感染C 型產(chǎn)氣莢膜梭菌的仔豬死亡率可高達(dá)100%。NE 的臨床表現(xiàn)可分為最急性、急性、亞急性和慢性的疾病表現(xiàn)形式。最急性和急性NE 主要出現(xiàn)在3 日齡的仔豬。最急性NE 仔豬可不表現(xiàn)任何臨床表現(xiàn)就迅速死亡。急性NE 在仔豬死亡前不久會出現(xiàn)出血性腹瀉。亞急性和慢性NE 病程較長的仔豬會出現(xiàn)非出血性腹瀉、生長減慢和消瘦。感染的動物常在產(chǎn)后的二周內(nèi)死亡。

2 腸道病理變化

臨床剖檢時，NE 的標(biāo)志性病變是小腸階段性黏膜壞死。在最急性和急性病例中，肉眼可見的病變是特征性的小腸階段性黏膜壞死和出血。在大多數(shù)情況下，病變局限于空腸，但病變可延伸至回腸，有研究報道呈病變部位最長可延伸至結(jié)腸，但該種情況極為罕見。死于最急性和急性NE 的豬，小腸絨毛壞死，腸固有層、粘膜下層和肌層有廣泛的出血，并經(jīng)常延伸至漿膜層?？稍陲@微鏡下觀察到大量革蘭氏陽性桿菌覆蓋在壞死絨毛的輪廓。此外，固有層和粘膜下層中的小血管有血栓形成和壞死存在。在NE 的這個階段死亡的動物中沒有或僅有很少的炎性細(xì)胞浸潤。這種自溶會破壞組織結(jié)構(gòu)和其中存在的抗原，因此會影響免疫組織化學(xué)檢測，因此該方法不是常規(guī)檢測的首選方法。在NE 的這個階段，病變腸段出血較少。革蘭氏陽性菌和陰性菌的混合感染在亞急性和慢性病例中較為常見。

3 實驗室檢測方法

雖然肉眼觀察和組織學(xué)病變是NE的特征，但建議以細(xì)菌培養(yǎng)鑒定作為C型產(chǎn)氣莢膜梭菌所致壞死性腸炎的最終檢測方法?？梢詮哪c內(nèi)容物或糞便中取樣進(jìn)行培養(yǎng)，并根據(jù)患病動物的臨床表現(xiàn)進(jìn)行確診NE 的方式，因為單獨分離出C 型產(chǎn)氣莢膜梭菌并不能代表是由該菌引起的疾病。樣品運輸?shù)綄嶒炇抑?，建議使用厭氧菌運輸?shù)木彌_試劑和方法。產(chǎn)氣莢膜梭菌是一種革蘭氏陽性、厭氧、產(chǎn)芽孢的桿菌，但該菌比其他梭菌更耐氧氣，但適宜的培養(yǎng)環(huán)境需要厭氧，并且最好在選擇性培養(yǎng)基上培養(yǎng)，避免其他兼性厭氧的腸道正常菌群過度生長影響產(chǎn)氣莢膜梭菌的生長。在血瓊脂上產(chǎn)氣莢膜梭菌通常會形成特征性的雙溶血環(huán)，其中完全溶血的內(nèi)環(huán)是由PFO 蛋白引起的，不完全的外層溶血環(huán)與CPA 蛋白有關(guān)。有多種選擇性培養(yǎng)基可用于產(chǎn)氣莢膜梭菌的分離，如ESC-EYA 培養(yǎng)基、mCP 培養(yǎng)基。此外，還可以通過生化鑒定等試驗鑒定該菌。PCR 檢測是鑒定產(chǎn)氣莢膜梭菌的常用方法之一，該方法可以鑒定致病性產(chǎn)氣莢膜梭菌，也可用于檢測健康動物腸道中A 型產(chǎn)氣莢膜梭菌，因此確定毒素類型是鑒定C 型產(chǎn)氣莢膜梭菌中有重要作用。在傳統(tǒng)的方法中，毒素的存在是通過動物接種確定的，但現(xiàn)在可用ELISA 檢測樣品中的毒素，樣品可包括糞便樣品或培養(yǎng)物的上清液。PCR 方法現(xiàn)在通常用于檢測編碼毒素的基因，已識別產(chǎn)氣莢膜梭菌的血清型。已有多種用于產(chǎn)氣莢膜梭菌分型的毒素基因多重PCR 檢測方法。毒素基因的PCR 擴(kuò)增不僅可以從培養(yǎng)物分離物進(jìn)行，還可直接對腸內(nèi)容物、腸組織甚至石蠟包裹的組織塊中提取DNA 進(jìn)行。PCR 檢測方法在亞急性和慢性病例以及動物死亡后無法立即進(jìn)行剖檢的診斷中十分重要。

4 致病機(jī)制

見于CPB 與豬和人類疾病相關(guān)的流行病學(xué)數(shù)據(jù)顯示，最初假設(shè)CPB 是C 型產(chǎn)氣莢膜梭菌的主要毒力決定因素，而使用遺傳學(xué)和動物模型的研究也證明CPB 是C 型產(chǎn)氣莢膜梭菌的基本毒力基因。由于胰蛋白酶對CPB 的快速降解，母豬初乳中高水平的胰蛋白酶抑制劑導(dǎo)致NE 的出現(xiàn)。經(jīng)典假設(shè)CPB直接作用于小腸上皮細(xì)胞，導(dǎo)致廣泛的上皮壞死，隨后出血，并且在這些影響存活下的動物會出現(xiàn)明顯的炎癥反應(yīng)。然而，最近的研究描述了C 型產(chǎn)氣莢膜梭菌更為復(fù)雜的發(fā)病機(jī)制。與其他梭菌所致的腸道疾病一樣，NE 的初始步驟是腸道中致病菌株的過度生長。新生仔豬由于腸道菌群發(fā)育不完全，極易受到梭菌過度生長的影響。C 型產(chǎn)氣莢膜梭菌被產(chǎn)后早期仔豬攝入，會迅速超過發(fā)育中其他腸道菌，并且在1～3日齡發(fā)生最急性和急性NE 的仔豬體內(nèi)分離到C 型產(chǎn)氣莢膜梭菌十分容易。接下的致病步驟，尚未完全闡明，現(xiàn)有猜想為上皮屏障的初始改變，在正常情況下，這會抑制毒素和酶擴(kuò)散到下面的粘膜層。研究表明，CPB 本身對培養(yǎng)的豬小腸上皮細(xì)胞無毒，并且在該物種中，在體外或體內(nèi)均不與小腸上皮細(xì)胞結(jié)合。使用兔腸 模型的研究表明CPB 可引起上皮損傷，尚未研究該實驗?zāi)Ｐ椭蠧PB 與上皮細(xì)胞的結(jié)合。在豬中，其他因素，例如毒素、酶或由于大量菌群失調(diào)所致的代謝物積累，在上皮屏障的初始損傷中可能有重要作用，然而，這尚未得到證實。

鑒于腸道屏障的大規(guī)模平破壞，可以想象毒血癥會導(dǎo)致急性感染動物的死亡。假設(shè)CPB 毒血癥對疾病進(jìn)展有顯著影響，然而腸腔中存在的任何毒素都很容易通過受損的粘膜吸收，從而可以作用于全身。更為重要的是，除肺充血和水腫等非特異性病變外，感染的仔豬通常不會觀察到小腸以外器官出現(xiàn)由產(chǎn)氣莢膜梭菌引起的特定病變。部分動物在急性NE 存活下來，并發(fā)展出現(xiàn)一顯著中性粒細(xì)胞浸潤為特征的腸道病變。造成這種情況的原因是最初低感染劑量的C 型產(chǎn)氣莢膜梭菌被仔豬通過口腔攝入或當(dāng)動物在出生幾天后接觸病原體時母豬初乳或部分發(fā)育的腸道菌群中康梭菌的抗體可能會產(chǎn)生部分保護(hù)能力從而防止產(chǎn)氣莢膜梭菌過度生長。

5 防治措施

產(chǎn)氣莢膜梭菌可以在環(huán)境中長期存在，這與其形成芽孢的能力密切相關(guān)。此外，C 型產(chǎn)氣莢膜梭菌也可以在母豬的腸道中持續(xù)存在。在豬群中首次暴發(fā)NE 幾年后，仍可以檢測到C 型產(chǎn)氣莢膜梭菌，但可通過適合的防治計劃防止NE 在豬群中的再次暴發(fā)。眾所周知的是，通過免疫接種疫苗可有效的預(yù)防NE。仔豬通過從接種過的母豬初乳中攝取抗體而受到被動保護(hù)。產(chǎn)氣莢膜梭菌疫苗通常是基于滅活的產(chǎn)氣莢膜梭菌培養(yǎng)物上清液作為免疫原，因此，此類疫苗含有抗原混合物，包括有疫苗菌株分泌的所有毒素?；旧纤械腃 型產(chǎn)氣莢膜梭菌疫苗都含有大量滅活的CPB。迄今為止，母豬，尤其是仔豬的抗CPB 抗體是保護(hù)效果的判定指標(biāo)。然而，尚不清楚疫苗誘導(dǎo)的抗體究竟是如何感染產(chǎn)氣莢膜梭菌所致NE 的致病機(jī)制。C 型產(chǎn)期莢膜梭菌具有非常高的增值能力，并且在其指數(shù)生長期可分泌大量的毒素。初乳中的抗體除了可以中和梭菌毒素外，還可阻止產(chǎn)氣莢膜梭菌在小腸的增殖。C 型產(chǎn)氣莢膜梭菌的生物學(xué)特性和通過疫苗接種預(yù)防疾病要求應(yīng)對預(yù)防策略有幾個因素進(jìn)行思考。首先，產(chǎn)氣莢膜梭菌很容被臨床上甚至細(xì)菌學(xué)上不明顯的帶菌動物傳播，尤其是在出售后備母豬等在不同豬場進(jìn)行動物流通。必須謹(jǐn)慎解釋DNA 提取物陰性細(xì)菌培養(yǎng)物甚至是陰性PCR 結(jié)果，因為可能存在假陰性的可能。產(chǎn)氣莢膜梭菌在健康的成年帶菌動物中排出的細(xì)菌數(shù)量可能非常小或間歇性脫落。因此，在防控工作中讓病原體遠(yuǎn)離養(yǎng)殖場尤為重要。在實際的考慮中，應(yīng)實時監(jiān)測養(yǎng)豬場內(nèi)疾病的發(fā)生及病原攜帶情況，這些措施需要對許多動物進(jìn)行重復(fù)檢測，這種措施屬于勞動密集型和成本密集型。在未接種疫苗的畜群中，將C 型產(chǎn)氣莢膜梭菌引入畜群通常只會表現(xiàn)為NE 的急性暴發(fā)。在這種情況下，必須進(jìn)行嚴(yán)格的衛(wèi)生消毒已減少環(huán)境污染，從而減少新生仔豬的感染壓力，較少第一批NE病例后新出生仔豬的直接損失。

6 結(jié)語

有C 型產(chǎn)氣莢膜梭菌引起的仔豬NE 是一種常見的豬病，具有典型的臨床癥狀和病理變化。NE 可通過完善的病理學(xué)和細(xì)菌學(xué)檢測方法組合起來從而診斷。這種疾病可通過嚴(yán)格和持續(xù)的疫苗接種計劃來預(yù)防，并將疫苗接種和良好的衛(wèi)生管理習(xí)慣的結(jié)合在NE 的防控總十分重要。為了實施養(yǎng)豬業(yè)的NE 防控策略，區(qū)分養(yǎng)豬場的無病癥和無病原體的狀態(tài)十分重要，因為產(chǎn)氣莢膜梭菌可以少量存在于環(huán)境和健康成年豬的腸道中，由于臨床和細(xì)菌學(xué)上的檢測不明顯造成帶菌動物在豬群中傳播C 型產(chǎn)氣莢膜梭菌。