聚合酶鏈反應檢驗應用于肺結(jié)核早期診斷的準確性評價

王瑜

作者單位：264000 山東煙臺，煙臺肺科醫(yī)院檢驗科

肺結(jié)核是一種常見的呼吸系統(tǒng)傳染性病變，主要由結(jié)核分枝桿菌感染所致，具有高發(fā)病率，患者發(fā)病后主要表現(xiàn)為低熱、乏力、盜汗等全身癥狀，還伴有咳嗽、咯痰、胸痛、咯血等呼吸系統(tǒng)癥狀，隨著病情進展，還可能會累及其他部位，引發(fā)肺外結(jié)核，導致患者死亡風險增高，嚴重危害生命健康［1-2］。對于肺結(jié)核臨床上主張對患者盡早診斷，以明確病情，給予及時有效的治療。臨床用于肺結(jié)核診斷的手段主要包括痰涂片檢查、結(jié)核菌素皮膚試驗等，其中痰涂片檢查和結(jié)核菌素皮膚試驗在肺結(jié)核診斷時較常用，可在一定程度上檢出肺結(jié)核病灶，但存在部分漏診和誤診情況。近年來，聚合酶鏈反應（polymerase chain reaction，PCR）檢驗在肺結(jié)核的診斷中得到應用，PCR檢驗輔助診斷結(jié)核分枝桿菌引起的肺部感染效果良好［3-4］。為探討PCR檢驗在肺結(jié)核診斷中的作用，本研究選擇2020年1月—2022年8月在煙臺肺科醫(yī)院就診的120例疑似肺結(jié)核患者作為研究對象，在患者中分別開展痰涂片檢查、結(jié)核菌素皮膚試驗和PCR檢驗，比較3種方法對肺結(jié)核的診斷價值，現(xiàn)將結(jié)果報告如下。

1 資料與方法

1.1研究對象及一般資料 選擇2020年1月—2022年8月在本院就診的120例疑似肺結(jié)核患者作為研究對象，其中男性71例，女性49例；年齡35～87歲，中位年齡64歲。

1.1.1納入標準 ① 由于出現(xiàn)不明原因的低熱、乏力、咳嗽、咯痰、胸痛、咯血等癥狀而在醫(yī)院就診，就診后發(fā)現(xiàn)具有與結(jié)核病病例密切接觸史，懷疑發(fā)生肺結(jié)核；② 年齡≥18歲；③ 在檢查過程中患者意識始終保持清醒并自愿配合。

1.1.2排除標準 ① 既往有胸部手術史者；② 處于妊娠期或哺乳期的女性；③ 在認知、精神等方面存在障礙者。

1.1.3倫理學 本研究符合醫(yī)學倫理學標準，并經(jīng)本院醫(yī)學倫理委員會審批（審批號：2022-11），患者均了解本研究方法及目的，同意參與研究。

1.2研究方法 在所有患者中開展痰涂片檢查、結(jié)核菌素皮膚試驗和PCR檢驗。

1.2.1痰涂片檢查 在清晨采集患者咽拭子痰液標本，置于專用試管中，再將痰液標本均勻涂抹在載玻片上，采用4%多聚賴氨酸對載玻片進行固定，待痰液自然晾干后，對標本進行抗酸染色處理，在顯微鏡下觀察痰液標本，如發(fā)現(xiàn)痰液中存在結(jié)核分枝桿菌即可判斷為陽性。

1.2.2結(jié)核菌素皮膚試驗 在患者前臂皮下注射結(jié)核菌素蛋白衍生物，注射劑量為0.1 mL，在注射后72 h內(nèi)觀察注射點部位的皮膚，根據(jù)患者既往是否有卡介苗接種史判斷不同情況下的陽性表現(xiàn)。如患者既往有卡介苗接種史，當注射點皮膚紅腫硬塊的直徑達到15 mm時，即可判斷為陽性；如患者既往未接種卡介苗，當注射點皮膚紅腫硬塊的直徑達到5 mm時，即可判斷為陽性。

1.2.3PCR檢驗 在清晨采集患者深度咳嗽后的第一口痰液0.5 mL作為痰液標本，在痰液標本中加入5 μL濃度為1 mol/L的氫氧化鈉（NaOH）溶液，混合均勻后將其放置在37 ℃孵育箱中靜置40 min，再使用離心機對混合液進行離心處理，離心速度為10 000 r/min（離心半徑為10 cm），持續(xù)離心5 min后將上清液去除，取底部沉淀物。采用生理鹽水洗脫液對沉淀物進行洗脫處理，連續(xù)洗滌2次，得到沉淀物。采用QSDX實時熒光定量PCR檢測儀（購自美國應用生物系統(tǒng)公司）以及結(jié)核分枝桿菌PCR檢測試劑盒（由上海康朗生物科技有限公司生產(chǎn)）對沉淀物標本進行PCR檢驗，嚴格按照儀器及檢測試劑盒說明書進行操作，如在實時熒光定量PCR檢測儀檢測時出現(xiàn)熒光帶，即可判斷為陽性。

1.3觀察指標 ① 以臨床綜合診斷結(jié)果作為“金標準”，比較痰涂片檢查、結(jié)核菌素皮膚試驗、PCR檢驗對肺結(jié)核的診斷效能，考察指標包括敏感度、特異度、準確度、陽性預測值及陰性預測值，計算公式如下：敏感度＝真陽性例數(shù)/（真陽性例數(shù)+假陰性例數(shù)）×100%，特異度＝真陰性例數(shù)/（真陰性例數(shù)+假陽性例數(shù)）×100%，準確度＝（真陽性例數(shù)+真陰性例數(shù)）/總例數(shù)×100%，陽性預測值＝真陽性例數(shù)/（真陽性例數(shù)+假陽性例數(shù)）×100%，陰性預測值＝真陰性例數(shù)/（真陰性例數(shù)+假陰性例數(shù)）×100%。② 分析結(jié)核菌素皮膚試驗、痰涂片檢查和PCR檢驗對肺結(jié)核的診斷結(jié)果與診斷“金標準”結(jié)果的一致性。③ 將確診肺結(jié)核患者分為活動期和好轉(zhuǎn)期，比較結(jié)核菌素皮膚試驗、痰涂片檢查和PCR檢驗對不同分期肺結(jié)核患者的診斷符合率。

1.4統(tǒng)計學方法 應用SPSS 22.0軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析。計數(shù)資料以例（%）表示，進行組間比較采用χ2檢驗，P＜0.05即差異具有統(tǒng)計學意義。采用Kappa檢驗對不同診斷方法對肺結(jié)核診斷結(jié)果進行一致性分析，依據(jù)κ值來判斷診斷結(jié)果的一致性，κ值＜0.4即存在低度一致性，0.4≤κ值＜0.7即存在中度一致性，κ值≥0.7即存在高度一致性。

2 結(jié)果

2.1痰涂片檢查、結(jié)核菌素皮膚試驗和PCR檢驗對肺結(jié)核診斷的結(jié)果比較與分析 在120例疑似肺結(jié)核患者中，經(jīng)臨床綜合診斷，有80例患者確診肺結(jié)核，其余40例患者均證實非肺結(jié)核。在80例確診肺結(jié)核患者中，分期為活動期59例，好轉(zhuǎn)期21例。依照診斷“金標準”（臨床綜合診斷結(jié)果），在肺結(jié)核診斷時，結(jié)核菌素皮膚試驗和PCR檢驗的敏感度、特異度、準確度、陽性預測值及陰性預測值均明顯高于痰涂片檢查，而PCR檢驗的敏感度、特異度、準確度、陽性預測值及陰性預測值均明顯高于結(jié)核菌素皮膚試驗（均P＜0.05）。見表1～2。

表1 痰涂片檢查、結(jié)核菌素皮膚試驗和PCR檢驗對肺結(jié)核的診斷結(jié)果比較

2.2痰涂片檢查、結(jié)核菌素皮膚試驗和PCR檢驗對肺結(jié)核的診斷結(jié)果與“金標準”診斷結(jié)果的一致性分析 在肺結(jié)核診斷結(jié)果中，PCR檢驗和結(jié)核菌素皮膚試驗的診斷結(jié)果與臨床綜合診斷結(jié)果呈高度一致，κ值分別為0.892、0.745，而痰涂片檢查診斷結(jié)果與臨床綜合診斷結(jié)果的一致性為中度，κ值為0.561。

2.3痰涂片檢查、結(jié)核菌素皮膚試驗、PCR檢驗對不同分期肺結(jié)核的診斷符合率比較 在活動期和好轉(zhuǎn)期肺結(jié)核診斷中，PCR檢驗和結(jié)核菌素皮膚試驗的診斷符合率均明顯高于痰涂片檢查，PCR檢驗的診斷符合率明顯高于結(jié)核菌素皮膚試驗，差異均有統(tǒng)計學意義（均P＜0.05）。見表3。

表3 結(jié)核菌素皮膚試驗、痰涂片檢查和PCR檢驗對不同分期肺結(jié)核的診斷符合率

3 討論

肺結(jié)核在臨床上屬于常見的傳染性疾病，主要由結(jié)核分枝桿菌感染所致［5］。結(jié)核分枝桿菌感染引起的結(jié)核病可在多器官及組織中分布，肺結(jié)核是其中最常見的一種類型，在發(fā)病后患者會伴有乏力、低熱、咳嗽、咯血等癥狀，隨著病情進展，還可能影響肺功能［6-8］。由于肺結(jié)核的病程較長，病情常反復發(fā)作，嚴重影響患者日常生活和工作，還容易發(fā)生傳播，因此，在患者發(fā)病后需盡早診斷，以做好肺結(jié)核的防控工作［9-10］。

對于肺結(jié)核，臨床診斷時常采用痰涂片檢查，痰涂片檢查是臨床對呼吸系統(tǒng)感染性疾病進行診斷的最常用方法，主要是通過采集痰液標本進行抗酸染色，并在顯微鏡下對染色結(jié)果進行觀察，來判斷是否發(fā)生結(jié)核分枝桿菌感染。結(jié)核菌素皮膚試驗是臨床診斷肺結(jié)核的常用方法，可通過對患者皮膚注射結(jié)核菌素蛋白衍生物，觀察注射后的皮膚是否出現(xiàn)紅腫硬塊及紅腫硬塊面積，判斷患者是否發(fā)生肺結(jié)核。痰涂片檢查與結(jié)核菌素皮膚試驗均可在一定程度上檢出活動期肺結(jié)核，但對好轉(zhuǎn)期的肺結(jié)核容易出現(xiàn)漏診［11］。

近年來，臨床上關于肺結(jié)核與PCR檢驗的研究較多，PCR檢驗是一種新型的快速核酸檢驗技術，主要是通過對痰液標本的沉淀物進行洗脫后，采用實時熒光定量PCR檢測儀對結(jié)核分枝桿菌進行檢測，這種檢測方法對結(jié)核分枝桿菌可進行有效識別，其檢測準確度較高，可避免檢測結(jié)果受到人為因素的影響［12-14］。本研究結(jié)果顯示，依照診斷“金標準”，在肺結(jié)核診斷時，結(jié)核菌素皮膚試驗和PCR檢驗的敏感度、特異度、準確度、陽性預測值及陰性預測值均明顯高于痰涂片檢查，而PCR檢驗的敏感度、特異度、準確度、陽性預測值及陰性預測值均明顯高于結(jié)核菌素皮膚試驗，且PCR檢驗和結(jié)核菌素皮膚試驗的診斷結(jié)果與病理診斷結(jié)果高度一致，痰涂片檢查的診斷結(jié)果與病理診斷結(jié)果的一致性為中度，表明PCR檢驗對肺結(jié)核的診斷準確度較高，可減少誤診和漏診。

本研究還表明，在活動期和好轉(zhuǎn)期肺結(jié)核診斷中，PCR檢驗和結(jié)核菌素皮膚試驗的診斷符合率均比痰涂片更高，PCR檢驗的診斷符合率明顯高于結(jié)核菌素皮膚試驗，表明PCR檢驗不僅可準確檢出活動期肺結(jié)核，還可對好轉(zhuǎn)期肺結(jié)核進行診斷，準確率較高，推薦將其用于肺結(jié)核的病情及預后評估中。

綜上所述，PCR檢驗對肺結(jié)核具有良好的診斷價值，其診斷準確度優(yōu)于痰涂片檢查和結(jié)核菌素皮膚試驗，可更加靈敏、準確地檢出肺結(jié)核，還可輔助鑒別和診斷肺結(jié)核的分期，為肺結(jié)核的臨床治療提供指導和借鑒。

利益沖突作者聲明不存在利益沖突