中晚期胃癌患者血清lncRNAANRIL和lncRNA H19表達(dá)及與預(yù)后相關(guān)性

陳濤

胃癌是常見(jiàn)的一種惡性腫瘤，具有較高的發(fā)病率和病死率，不僅威脅患者生命健康，而且影響患者生存質(zhì)量[1]。由于胃癌患者早期癥狀隱匿，大部分患者確診時(shí)已屬中晚期，從而失去了最佳根治時(shí)機(jī)，預(yù)后較差[2-3]。因此，尋求新的生物學(xué)指標(biāo)來(lái)預(yù)測(cè)胃癌患者預(yù)后對(duì)指導(dǎo)胃癌臨床治療工作尤為關(guān)鍵[4]。lncRNA主要是長(zhǎng)度超過(guò)200個(gè)核苷酸、無(wú)法編碼蛋白的一類RNA，其可通過(guò)多途徑在某些疾病中發(fā)揮重要調(diào)控作用（尤其是在惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中）。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，lncRNA-ANRIL和lncRNA H19在多種惡性腫瘤中異常表達(dá)[5-6]，但其在胃癌發(fā)生、發(fā)展中的具體機(jī)制尚未完全明確。本文旨在探討中晚期胃癌患者血清lncRNA-ANRIL和lncRNA H19表達(dá)及與預(yù)后相關(guān)性，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 對(duì)象和方法

1.1 對(duì)象 選取浙江新安國(guó)際醫(yī)院2017年1月至2019年1月收治的中晚期胃癌患者79例作為觀察組，其中男 47 例，女 32 例；年齡 34～75（59.83±6.75）歲；BMI 18～27（23.12±1.87）kg/m2；TNM 分期：Ⅱb 期13例，Ⅲ期37例，Ⅳ期29例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移21例。另選取同期本院健康體檢者68例作為對(duì)照組，其中男41例，女 27 例；年齡 39～74（58.97±7.86）歲；BMI 19～27（23.25±1.84）kg/m2。兩組受試者基線資料比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）經(jīng)病理學(xué)或細(xì)胞學(xué)檢查證實(shí)為胃癌，且TNM分期Ⅱb～Ⅳ期；（2）卡氏功能評(píng)分≥70分，預(yù)計(jì)生存3個(gè)月以上者；（3）臨床資料和隨訪資料完整者。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）合并自身免疫系統(tǒng)疾病患者；（2）合并其他部位惡性腫瘤患者；（3）合并感染性疾病者；（4）患者存在精神或意識(shí)功能障礙；（5）合并重要臟器嚴(yán)重異常者。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有患者及家屬均知情同意。

1.2 血清lncRNA-ANRIL和lncRNA H19相對(duì)表達(dá)量檢測(cè) 采用qRT-PCR法。應(yīng)用7500實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀（美國(guó)ABI公司）。抽取兩組受試者清晨空腹外周靜脈血 6 ml，離心（3 000 r/min、半徑 15 cm，8 min）后吸取血清，置于-70℃保存?zhèn)溆?，采用TRIzol試劑提取血清總RNA，取5 μl總RNA進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳并檢測(cè)總RNA的純度和完整度。按照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（美國(guó)Biomiga公司）說(shuō)明書(shū)操作將其逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，以GAPDH作為內(nèi)參基因，檢測(cè)血清lncRNA-ANRIL和lncRNA H19表達(dá)。取cDNA進(jìn)行qRT-PCR，反應(yīng)條件：95 ℃預(yù)變性 10 min，95 ℃ 15 s、60 ℃ 1 min，共完成40個(gè)循環(huán)，每個(gè)樣品設(shè)置3個(gè)復(fù)孔。引物序列由上海生工生物工程有限公司合成，引物序列：lncRNAANRIL 上游引物：5'-TGCTCTATCCGCCAATCAGG-3'，下游引物：5'-GGGCCTCAGTGGCACATACC-3'；lncRNA H19 上游引物：5'-ACCACTCACTACCTGACTC-3'；下游引物：5'-CCGCAGGGGGTGGCCATGAA-3'；GAPDH上游引物：5'-GAGTCAACGGATTTGGTCGT-3'，下游引物：5'-TTGATTTTGGAGGG ATCTCG-3'。采用 2-ΔΔCt法計(jì)算lncRNA-ANRIL和lncRNA H19相對(duì)表達(dá)量。

1.3 預(yù)后評(píng)價(jià) 所有患者通過(guò)門(mén)診、電話方式隨訪，隨訪時(shí)間截止2021年1月10日，以患者死亡或至隨訪截止日為隨訪終點(diǎn)，統(tǒng)計(jì)平均總生存期（OS）。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 25.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩組間比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。生存分析采用Kaplan-Meier法，組間生存情況比較采用log-rank檢驗(yàn)。預(yù)后獨(dú)立危險(xiǎn)因素分析采用多因素Cox回歸模型。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者血清lncRNA-ANRIL和lncRNA H19相對(duì)表達(dá)量比較 觀察組血清lncRNA-ANRIL和lncRNA H19相對(duì)表達(dá)量均明顯高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.01）。見(jiàn)表1。

表1 兩組血清lncRNA-ANRIL和lncRNA H19相對(duì)表達(dá)量比較

2.2 不同病理特征患者血清lncRNA-ANRIL相對(duì)表達(dá)量比較 不同性別、年齡、BMI和腫瘤直徑患者血清lncRNA-ANRIL相對(duì)表達(dá)量比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)（均P＞0.05）；而不同TNM分期及是否存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者血清lncRNA-ANRIL相對(duì)表達(dá)量比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.01）。見(jiàn)表2。

表2 不同病理特征患者血清lncRNA-ANRIL相對(duì)表達(dá)量比較

2.3 不同病理特征患者lncRNA H19相對(duì)表達(dá)量比較 不同性別、年齡、BMI和腫瘤直徑患者血清lncRNA H19相對(duì)表達(dá)量比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）；而不同TNM分期和是否存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者血清lncRNA H19相對(duì)表達(dá)量比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.01）。見(jiàn)表3。

表3 不同病理特征患者血清lncRNA H19相對(duì)表達(dá)量比較

2.4 患者預(yù)后與lncRNA-ANRIL和lncRNA H19相對(duì)表達(dá)量相關(guān)性 以中晚期胃癌患者血清lncRNAANRIL相對(duì)表達(dá)量中位數(shù)2.75為界，將患者分為lncRNA-ANRIL＞2.75與≤2.75兩組（分別為43和36例），其OS分別為19和32個(gè)月，≤2.75患者總體生存情況明顯優(yōu)于＞2.75患者（P＜0.05）。見(jiàn)圖1。

圖1 不同lncRNA-ANRIL相對(duì)表達(dá)量中晚期胃癌患者生存曲線比較

以中晚期胃癌患者血清lncRNA H19相對(duì)表達(dá)量中位數(shù)1.83為界，將患者分為lncRNA H19＞1.83與≤1.83分別為45和34例，其OS分別為21和31個(gè)月，≤1.83患者總體生存情況明顯優(yōu)于＞1.83患者（P＜0.05）。見(jiàn)圖 2。

圖2 不同lncRNA H19相對(duì)表達(dá)量中晚期胃癌患者生存曲線比較

2.5 中晚期胃癌患者影響預(yù)后獨(dú)立危險(xiǎn)因素分析經(jīng)Cox回歸模型分析，TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、lncRNA-ANRIL和lncRNA H19相對(duì)表達(dá)量為影響預(yù)后獨(dú)立危險(xiǎn)因素（均P＜0.05）。見(jiàn)表4。

表4 中晚期胃癌患者影響預(yù)后獨(dú)立危險(xiǎn)因素分析

3 討論

胃癌是多基因變化積累的結(jié)果，其具體發(fā)病機(jī)制尚未完全明確[7]。通常情況下，胃癌在發(fā)病初期無(wú)較明顯的表現(xiàn)特征，一經(jīng)檢查確診，多數(shù)患者病情程度均較為嚴(yán)重[8-9]。我國(guó)胃癌發(fā)病率較高，而早期胃癌檢出率僅為10%左右[10]。目前，由于胃癌缺少針對(duì)性、敏感的篩查及早期診斷標(biāo)準(zhǔn)，故而研究關(guān)于胃癌的關(guān)鍵性分析靶點(diǎn)以及調(diào)控機(jī)制非常重要，以期能從根本上達(dá)到防治胃癌的目的[11]。

lncRNA是特殊的一種RNA分子，是重要的基因表達(dá)調(diào)控因子。在多種生物學(xué)過(guò)程中，lncRNA發(fā)揮重要的作用，且近年來(lái)成為惡性腫瘤研究的熱點(diǎn)。同時(shí)，在腫瘤細(xì)胞中l(wèi)ncRNA異常可作為促癌基因或者抑癌基因，從而參與到腫瘤細(xì)胞增殖、分化、侵襲及凋亡等過(guò)程中。外周血中l(wèi)ncRNA-ANRIL主要定位于細(xì)胞核內(nèi)，研究報(bào)道顯示，lncRNA-ANRIL在多種惡性腫瘤中異常表達(dá)[12]。有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，lncRNA-ANRIL在骨肉瘤組織中異常表達(dá)，且呈高表達(dá)，而抑制lncRNA-ANRIL能夠有效抑制骨肉瘤細(xì)胞的增殖、侵襲能力[13]。此外，研究報(bào)道顯示，lncRNA-ANRIL在胰腺癌組織中呈高表達(dá)，且lncRNA-ANRIL過(guò)表達(dá)可促進(jìn)胰腺癌細(xì)胞遷移和侵襲能力[14]。H19是被發(fā)現(xiàn)的首個(gè)與腫瘤相關(guān)的lncRNA，其可在轉(zhuǎn)錄和表觀遺傳水平上調(diào)控細(xì)胞增殖、分化和凋亡[15]。H19在胚胎組織中高表達(dá)，通常在成年組織中不表達(dá)，但在腫瘤中異常表達(dá)。lncRNA H19具有抑癌和促癌的雙重作用。林映汐等[16]研究結(jié)果表明，乳腺癌患者血漿lncRNA H19高表達(dá)，且明顯高于乳腺良性病變及健康體檢者，認(rèn)為其可能成為診斷和治療乳腺癌的潛在的一個(gè)生物學(xué)標(biāo)志物。本研究發(fā)現(xiàn)，觀察組血清lncRNA-ANRIL和lncRNA H19相對(duì)表達(dá)量均明顯高于對(duì)照組，由此可見(jiàn)中晚期胃癌患者血清lncRNA-ANRIL和lncRNA H19相對(duì)表達(dá)量異常升高；TNM分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移血清lncRNA-ANRIL和lncRNA H19相對(duì)表達(dá)量比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，由此可見(jiàn)中晚期胃癌患者TNM分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與血清lncRNA-ANRIL和lncRNA H19密切相關(guān)；lncRNA-ANRIL和lncRNA H19相對(duì)表達(dá)量均為影響預(yù)后獨(dú)立危險(xiǎn)因素，由此可見(jiàn)中晚期胃癌患者lncRNAANRIL和lncRNA H19相對(duì)表達(dá)量與預(yù)后密切相關(guān)。

綜上所述，中晚期胃癌患者血清lncRNA-ANRIL和lncRNA H19呈高表達(dá)，且與預(yù)后密切相關(guān)。但本研究存在一些不足：樣本量小且隨訪時(shí)間短，還需增加樣本量和延長(zhǎng)隨訪時(shí)間進(jìn)行深入研究，來(lái)提供可靠的臨床參考價(jià)值。