利伐沙班片經(jīng)鼻胃管給藥方式的體外試驗(yàn)研究

唐 謙，郭艷超，周 璐，馬雯霞

1 浙江省藥品化妝品審評(píng)中心，杭州 310012；2 杭州朱養(yǎng)心藥業(yè)有限公司，杭州 310018

口服固體仿制藥一致性評(píng)價(jià)旨在仿制藥的研究過(guò)程中，力求在質(zhì)量和療效上與參比制劑一致性，是一系統(tǒng)評(píng)價(jià)工程，其內(nèi)容包含體外藥學(xué)研究、體內(nèi)生物等效性研究。對(duì)于臨床吞咽困難的患者，采用鼻飼管給藥可以解決口服給藥存在的缺陷和困難，此類(lèi)藥物在體外藥學(xué)研究中，除了常規(guī)的溶出曲線對(duì)比，還應(yīng)進(jìn)行仿制藥與參比制劑在經(jīng)鼻飼管給藥時(shí)、各物理指標(biāo)的一致性，確保仿制藥質(zhì)量與參比制劑相同。

利伐沙班片在“用法用量”項(xiàng)下標(biāo)明對(duì)于不能吞咽的患者可將藥品分散于水中，通過(guò)鼻管或胃管給藥。借鑒2020 年8 月美國(guó)FDA 發(fā)布的個(gè)藥指南《Draft Guidance on Rivaroxaban》[1]，提出了本品除體內(nèi)生物等效性試驗(yàn)外，還包括體外鼻胃管給藥的試驗(yàn)研究。本實(shí)驗(yàn)參考了相關(guān)文獻(xiàn)[2]，結(jié)合藥物特性，開(kāi)發(fā)鼻飼管給藥體外研究方法，分別開(kāi)展了沉降試驗(yàn)、粒徑分析試驗(yàn)和回收試驗(yàn)等，經(jīng)對(duì)比研究，在模擬鼻飼管給藥的情況下，所選研究指標(biāo)穩(wěn)定，藥物損耗可控，自制制劑與參比制劑均一致。本研究除了證明本公司自制品與參比制劑在特殊給藥方式下、具有相同的體外給藥效果，還給予同樣給藥方式的其他藥物體外研究提供了參考。

1 儀器與藥材

儀器：高效液相色譜儀Agilent1260；馬爾文激光粒度儀Mastersizer 3000；電子天平XSE205。

藥材：16 Fr（Fr 為管徑單位French 的簡(jiǎn)稱，1French=0.33 mm）規(guī)格的鼻胃管，灌注器；利伐沙班片自制品（批號(hào)：180601，含量103.5%，杭州朱養(yǎng)心藥業(yè)有限公司）；參比制劑（批號(hào)：BJ50488，含量100.9%，拜耳醫(yī)藥保健有限公司）；利伐沙班對(duì)照品（批號(hào)：20200310，含量：100.0%，浙江省食品藥品檢驗(yàn)研究院標(biāo)化）；水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 沉降試驗(yàn)

結(jié)合臨床用藥過(guò)程的時(shí)間，選0 min（代表剛配制完的時(shí)間，下同）和15 min 進(jìn)行對(duì)比研究。

取12 片自制品壓碎，倒入60 mL 注射器中，抽取50 mL 純化水，劇烈振搖30 s 后，倒置注射器，靜止15 min。記錄0 min 和15 min 的沉降高度，重復(fù)以上操作，平行制備6 份供試品溶液。結(jié)果見(jiàn)表1。

從表1 可知，自制制劑與參比制劑的沉降情況無(wú)明顯差異。

表1 沉降高度

2.2 粒徑分析試驗(yàn)

《中國(guó)藥典》收載的粒度及粒度分布測(cè)定法有3種，分別為顯微鏡法、篩分法、光散射法。其中光散射法更能準(zhǔn)確對(duì)比自制品和參比制劑的粒度分布情況，結(jié)合臨床用藥過(guò)程，選擇選0min 和15min 進(jìn)行對(duì)比試驗(yàn)，兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)配制兩組供試品溶液進(jìn)行比較。

2.2.1 供試品溶液配制將自制品12 片壓碎成小塊狀，全部投入60 mL 規(guī)格的灌注器內(nèi)；吸取40 mL純化水，上下劇烈振搖30 s，立即將灌注器與16 Fr規(guī)格的鼻胃管連接，將顆粒分散液收集到燒杯中；吸取分散介質(zhì)5 mL，純化水沖洗灌注器和鼻管，沖洗2 次，并收集到同一份燒杯中，即得0 min 供試品混懸液；劇烈振搖灌注器30 s，倒置灌注器15 min后再進(jìn)行操作，得15 min 供試品混懸液。每個(gè)試驗(yàn)制備6 份樣品，每份樣品測(cè)3 次，取平均值。

2.2.2 粒徑檢測(cè)方法驗(yàn)證 樣品折光率1.63，吸收率0.01，轉(zhuǎn)速1000 r·min-1，遮光率10%～15%，內(nèi)置超聲關(guān)閉，分散介質(zhì)為純化水。按照“2.2.1”制備6份0 min 供試品溶液進(jìn)行精密度試驗(yàn)。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 粒徑檢測(cè)精密度試驗(yàn)結(jié)果（μm，n=6）

12 份自制品的D50 的RSD%不大于10%，D10、D90 的RSD%不大于15%，中間精密度符合要求。

2.2.3 粒徑分析對(duì)比試驗(yàn)取自制品與參比制劑按照“2.2.1”方法制備0 min 和15 min 樣品進(jìn)行粒徑檢測(cè)，粒徑對(duì)比結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 自制品與參比制劑粒徑測(cè)試結(jié)果（μm，n=6）

從表3 可知，自制品與參比制劑0 min 與15 min結(jié)果均無(wú)明顯差異，說(shuō)明經(jīng)鼻胃管給藥的粒徑一致。

2.3 回收試驗(yàn)

利伐沙班屬于難溶性藥物，故在設(shè)計(jì)回收試驗(yàn)時(shí)，同時(shí)對(duì)比了直接加水混懸（模擬臨床鼻胃管給藥）和加稀釋劑助溶后自制制劑與參比制劑的回收情況。

2.3.1 檢測(cè)方法驗(yàn)證按照高效液相色譜法，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑（Purospher Star RP endcapped，55 mm×4.0 mm，3 μm），乙腈-水（30∶70）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為250 nm，柱溫為40 ℃，進(jìn)樣量10 μL。對(duì)檢測(cè)方法進(jìn)行方法驗(yàn)證，結(jié)果為：濃度在2.03～12.18 μg·mL-1，r 為0.999 9；回收率在99.71%～102.71%，RSD 為1.2%；6 份供試品重復(fù)性的RSD 為0.3%，12 份供試品中間精密度的RSD 為0.6%。從驗(yàn)證結(jié)果可知，方法準(zhǔn)確可靠。

2.3.2 自制品與參比制劑回收對(duì)比試驗(yàn)精密稱取利伐沙班對(duì)照品約10 mg，置20 mL 量瓶中，加稀釋劑（乙腈-0.01 mol·L-1磷酸溶液，3∶2）超聲溶解，冷卻至室溫，稀釋至刻度，搖勻，吸取1 mL 置50 mL量瓶中，加入純化水稀釋至刻度，搖勻即得。

供試品溶液的制備：取自制品1 片壓碎，全部投入60 mL 規(guī)格的灌注器內(nèi)，吸取40 mL 純化水，上下劇烈振搖30 s，立即將灌注器與16 Fr 規(guī)格的鼻胃管連接，然后使顆粒分散液經(jīng)由灌注器和鼻胃管推入50 mL 量瓶?jī)?nèi)。吸取5 mL 的稀釋劑后輕輕搖晃灌注器，使液體經(jīng)由鼻飼管推入量瓶，對(duì)系統(tǒng)進(jìn)行沖洗，重復(fù)兩次，加入稀釋劑稀釋定容至刻度線。搖勻后過(guò)濾，取續(xù)濾液即得0 min 供試品溶液；振搖30 s，將灌注器倒置15 min 再行同法操作，即得15 min 供試品溶液。平行制備12 份樣品。計(jì)算自制制劑（T）與參比制劑（R）的初始劑量回收率，并報(bào)告T/R 回收率比以及T/R 回收率比的可信區(qū)間，結(jié)果見(jiàn)表4、表5。

由表4、表5 回收試驗(yàn)結(jié)果可知，自制制劑在難溶的情況下（純化水作為溶劑，模擬臨床給藥）和完全溶解情況下（純化水作為溶劑，并加入助溶劑），主成分回收情況均與參比制劑一致。

表4 供試品溶液1（稀釋劑為水）回收試驗(yàn)結(jié)果（%）

表5 供試品溶液2（稀釋劑為乙腈）回收試驗(yàn)結(jié)果（%）

3 討論

本實(shí)驗(yàn)樣品屬于普通口服固體制劑，且無(wú)pH依賴性，故在研究過(guò)程中未考察不同來(lái)源純化水pH 值的影響，如為腸溶制劑可參考相關(guān)文獻(xiàn)[2]進(jìn)行不同類(lèi)型的水及耐酸性進(jìn)行對(duì)比考察。

在臨床給藥過(guò)程中，樣品處于混懸狀態(tài)，考察自制品與參比制劑的混懸液的粒度是否一致顯得尤為重要；檢測(cè)粒度的方法雖然比較多，但篩分法和顯微鏡法都存在明顯的局限性，而光散射法可以充分對(duì)比，說(shuō)明自制品與參比制劑混懸液狀態(tài)是否一致。同時(shí)，對(duì)于試驗(yàn)中的難溶類(lèi)藥物，有必要進(jìn)行兩種溶劑的回收試驗(yàn)：一種模擬臨床實(shí)際用藥，采用50mL 水作為溶劑，經(jīng)鼻胃管給藥；另一種以50mL水作為溶劑，經(jīng)鼻胃管后加助溶劑使藥品主成分完全溶解，這樣可以更充分表明鼻胃管對(duì)藥品有無(wú)吸附，以及吸附情況是否一致。

本實(shí)驗(yàn)就特殊給藥途徑的藥物作了體外對(duì)比研究，包括沉降試驗(yàn)、粒徑分析試驗(yàn)及回收試驗(yàn)，為自制品與參比制劑具有相同的給藥效果提供了數(shù)據(jù)支持，也希望對(duì)同仁提供借鑒。