涼茶渣替代象草對育肥牛空腸組織形態(tài)、屏障功能以及菌群結(jié)構(gòu)的影響

李 玲 孫小紅 連 旭 羅君誼 陳 婷 習(xí)欠云 張永亮 孫加節(jié)

(華南農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院，廣東省動物營養(yǎng)調(diào)控重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣州510642)

涼茶主要由涼粉草、雞蛋花、金銀花、菊花、夏枯草、布渣葉和甘草等7種植物性中草藥煎制而成，涼茶渣成分與其原材料相近[1]，主要包含7種酚酸類物質(zhì)、6種黃酮苷類物質(zhì)、3種皂苷類物質(zhì)以及1種甾醇類物質(zhì)[2]，具有清熱排毒、抗菌消炎的功效[3-4]。據(jù)初步統(tǒng)計(jì)，目前僅廣東地區(qū)主要涼茶生產(chǎn)企業(yè)，日均可產(chǎn)生約千噸固廢涼茶渣，采用焚燒、填埋的方式進(jìn)行處理，不僅加劇環(huán)境污染，更是對中草藥資源的嚴(yán)重浪費(fèi)。如將涼茶渣作為非常規(guī)飼料資源進(jìn)行開發(fā)，對緩解我國飼料資源緊缺將有很大益處[5]。試驗(yàn)表明，涼茶渣作為后備奶牛功能性粗飼料，能夠部分緩解機(jī)體夏季熱應(yīng)激[6]。

腸道微生物群是一個穩(wěn)定且復(fù)雜的生態(tài)系統(tǒng)，可以通過形成菌膜、促進(jìn)腸道上皮細(xì)胞增殖分化等方式保護(hù)腸道健康[7]。因此，本文將涼茶渣作為育肥牛非常規(guī)粗飼料資源進(jìn)行利用，探究其對育肥?？漳c組織形態(tài)、屏障功能以及菌群結(jié)構(gòu)的影響，為涼茶渣飼料化利用提供技術(shù)數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)及飼養(yǎng)管理

涼茶渣主要營養(yǎng)成分含量(除干物質(zhì)外，其余指標(biāo)均為干物質(zhì)基礎(chǔ))[6]：干物質(zhì)20.55%，中性洗滌纖維61.22%，酸性洗滌纖維40.29%，粗蛋白質(zhì)9.78%，粗脂肪3.52%，粗灰分6.68%。

試驗(yàn)采用單因素隨機(jī)分組設(shè)計(jì)，選用120頭約18月齡、體況良好且體重[(487±29) kg]相近的西門塔爾雜交育肥牛，隨機(jī)分為2個組，分別為對照組(CN組，飼喂基礎(chǔ)飼糧)、試驗(yàn)組(RE組，50%涼茶渣替代部分象草)，每組3個重復(fù)，每個重復(fù)20頭牛。預(yù)試期7 d，正試期60 d。根據(jù)育肥肉?，F(xiàn)階段營養(yǎng)需要與所在養(yǎng)殖場生產(chǎn)實(shí)際配制飼糧，試驗(yàn)飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1。飼糧均由飼料攪拌車混合均勻，每天08:00和17:00定時喂料，自由飲水。牛舍每天清掃，定期進(jìn)行消毒，保持清爽整潔。

表1 試驗(yàn)飼糧組成及營養(yǎng)水平(干物質(zhì)基礎(chǔ))

續(xù)表1項(xiàng)目Items組別 GroupsCNRE粗蛋白質(zhì) CP9.149.70粗脂肪 CF2.053.00鈣 Ca 0.690.63磷 P 0.220.30中性洗滌纖維 NDF71.1668.86酸性洗滌纖維 ADF25.2327.57凈能 NE/(MJ/kg)5.565.36

1.2 樣品采集

試驗(yàn)期結(jié)束前1天，每組隨機(jī)選取10頭牛進(jìn)行尾靜脈采血，采取的血液在離心管中靜置2 h，4 000 r/min離心10 min，分離出的血清于-20 ℃保存?zhèn)溆?。試?yàn)牛屠宰前隔夜禁食16 h，每組隨機(jī)選取10頭，立即分離出腸道，分別取空腸組織、空腸內(nèi)容物于離心管中，液氮速凍后放入-80 ℃冰箱凍存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 空腸組織切片染色

將空腸組織放入4%多聚甲醛溶液中固定24 h后，用0.01 mol/L磷酸鹽緩沖液(PBS)溶液沖洗，再用濃度遞增的乙醇脫水，二甲苯清洗，并包埋在石蠟中；切片后展平放置于載玻片上，再烘干；蘇木精-伊紅(HE)染色后用乙醇脫水，用二甲苯使切片透明，并用封固劑封固。使用Imagel軟件測量空腸絨毛高度和隱窩深度。

1.4 血清免疫指標(biāo)

血清中腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細(xì)胞介素-6(IL-6)、白細(xì)胞介素-10(IL-10)、轉(zhuǎn)化生長因子-β(TGF-β)、D-乳酸(D-Lac)、二胺氧化酶(DAO)濃度采用南京建成生物工程研究所酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)試劑盒進(jìn)行檢測，操作過程嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.5 熒光定量PCR(qRT-PCR)

取黃豆粒兒大小的空腸組織塊并剪碎，用Trizol裂解法提取空腸組織樣品RNA，并按照反轉(zhuǎn)錄試劑盒操作步驟合成cDNA。參照武笑天等[8]的引物序列，對腸道緊密連接蛋白閉合小環(huán)蛋白-1(zonula occludens-1，ZO-1)、閉鎖蛋白(Occludin)、閉合蛋白-1(Claudin-1)進(jìn)行qRT-PCR分析，引物購買于生工生物工程(上海)股份有限公司。

1.6 16S rRNA基因測序及注釋分析

采用十二烷基硫酸鈉(SDS)方法對空腸內(nèi)容物基因組DNA進(jìn)行提取，利用瓊脂糖凝膠電泳判斷檢測DNA的純度和濃度。對16S rDNA的V3～V4設(shè)計(jì)帶Barcode的特異引物，利用高效高保真酶進(jìn)行PCR，確保擴(kuò)增效率和準(zhǔn)確性。文庫構(gòu)建、上機(jī)測序與操作分類單元(operational taxonomic units，OTUs)聚類和物種注釋，以及后續(xù)的組內(nèi)Alpha多樣性分析、組間Beta多樣性分析及Pearson相關(guān)性分析由諾禾致源生物公司完成。

1.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

空腸組織形態(tài)及血清免疫指標(biāo)等試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Excel 2010進(jìn)行初步整理，然后利用SPSS V17.0軟件進(jìn)行獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，以P<0.05為差異顯著性標(biāo)準(zhǔn)。利用MetaStat分析，在屬水平上做2組間空腸微生物的置換檢驗(yàn)(permutation test)，得到P值，然后對P值進(jìn)行修正，得到錯誤發(fā)現(xiàn)率(false discovery rate，F(xiàn)DR)值，以FDR<0.05為菌群差異顯著性標(biāo)準(zhǔn)[9]。

2 結(jié) 果

2.1 涼茶渣對育肥牛空腸組織形態(tài)與屏障功能的影響

空腸組織HE染色結(jié)果見圖1-A。由圖1-B可見，空腸絨毛高度和隱窩深度測量結(jié)果表明，與CN組相比，RE組的空腸絨毛高度顯著增加(P<0.05)，空腸隱窩深度無顯著差異(P>0.05)。由圖1-C可見，血清中D-Lac和DAO濃度檢測結(jié)果表明，與CN組相比，RE組的血清中D-Lac濃度顯著降低(P<0.05)，血清中DAO濃度有所下降，但差異不顯著(P>0.05)。由圖1-D可見，血清中炎癥因子TNF-α、IL-6、IL-10、TGF-β濃度檢測結(jié)果表明，與CN組相比，RE組血清中IL-6和TNF-α濃度均有所下降，但差異不顯著(P>0.05)。由圖1-E可見，為了進(jìn)一步研究涼茶渣對腸道屏障功能的作用，利用RT-qPCR檢測腸道緊密連接蛋白ZO-1、Occludin、Claudin-1的mRNA表達(dá)水平，與CN組相比，RE組的空腸緊密連接蛋白ZO-1的mRNA表達(dá)水平顯著上調(diào)(P<0.05)，Occludin、Claudin-1的mRNA表達(dá)水平均上調(diào)，但差異不顯著(P>0.05)。

2.2 涼茶渣對育肥牛空腸菌群的影響

2.2.1 OTUs聚類和物種注釋

根據(jù)Barcode序列拆分出各樣本數(shù)據(jù)，使用FLASH(http://ccb.jhu.edu/software/FLASH/)對每個樣本的reads進(jìn)行拼接，平均每個樣本得到原始Tags序列(85 403±2 052)條，參照Qiime(http://qiime.org/scripts/split_libraries_fastq.html)質(zhì)量控制流程，每個樣品獲得Effective Tags序列(54 589±1 327)條。利用Uparse軟件(http://www.drive5.com/uparse/)對所有樣本的全部Effective Tags進(jìn)行聚類，默認(rèn)以97%的一致性將序列聚類成為OTUs，共得出3 999個有效OTUs片段，其中2組樣品共有1 835個OTUs，CN和RE組中特有的OTUs數(shù)量分別為1 057和1 107個(圖2-A)。根據(jù)物種注釋結(jié)果，確定了20個樣本中最大相對豐度排名前10的物種(圖2-B)，其中相對豐度最大的2個菌門是厚壁菌門(Firmicutes)和變形菌門(Proteobacteria)，分別為81.37%和8.00%。CN和RE組厚壁菌門相對豐度分別為85.79%、76.96%，變形菌門相對豐度分別為4.44%、11.57%；另外，CN和RE組擬桿菌門相對豐度差別較大，分別為0.54%和3.11%。即RE組厚壁菌門相對豐度較CN組有所減少，變形菌門、擬桿菌門相對豐度較CN組有所增加，但優(yōu)勢菌群在門水平上沒有發(fā)生改變。且與CN組相比，RE組中厚壁菌門與擬桿菌門的比值(F/B)有所降低。

由圖3可見，物種豐度聚類分析表明，在屬水平上，CN組和RE組之間表現(xiàn)出顯著差異的前10個菌屬分別是羅姆布茨菌屬(Romboutsia)、假丁酸弧菌(Pseudobutyrivibrio)、檸檬酸桿菌(Limnobacter)、黑水仙菌屬(Melainabacteria)、艱難桿菌屬(Mogibacterium)、馬文伯里安菌(Marvinbryantia)、丁蓖麻球菌屬(Butyricicoccus)、羅斯氏菌屬(Rothia)、布勞特氏菌屬(Blautia)。另外，與CN組相比，RE組Rothia、Blautia相對豐度顯著增加(P<0.05)，Romboutsia相對豐度顯著減少(P<0.05)。

A：空腸組織HE染色 HE staining of jejunum tissue；B：涼茶渣對育肥?？漳c絨毛高度和隱窩深度的影響 effects of herbal tea residue on villus height and crypt depth of jejunum of fattening cattle；C：涼茶渣對育肥牛血清中D-Lac與DAO濃度的影響 effects of herbal tea residue on concentrations of D-Lac and DAO in serum of fattening cattle；D：涼茶渣對育肥牛血清免疫因子濃度的影響 effects of herbal tea residue on serum immune factor concentration of fattening cattle；E：涼茶渣對育肥?？漳c緊連接蛋白基因表達(dá)的影響 effect of herbal tea residue on gene expression of tight junction proteins in jejunum of fattening cattle。

A：各組基于OTUs的韋恩圖統(tǒng)計(jì) Venn diagram statistics of each group based on OTUs；B：每個樣品在門水平上的物種相對豐度柱形統(tǒng)計(jì) column statistics of species relative abundance of each sample at phylum level。Firmicutes：厚壁菌門；Proteobacteria：變形菌門；Bacteroidetes：擬桿菌門；Euryarchaeota：廣古菌門；Verrucomicrobia：疣微菌門；unidentified-Bacteria：未分類菌門；Actinobacteria：放線菌門；Tenericutes：柔壁菌門；Melainabacteria：黑水仙菌門；Elusimicrobia：迷蹤菌門；Others：其他。

Rothia：羅斯氏菌屬；Fibrobacte：纖維桿菌屬；Blautia：布勞特氏菌屬；Agathobacter：無桿菌屬；Oscillibacter：顫螺旋菌屬；Aeriscardovia：氣斯卡多維亞氏菌屬；Brevundimonas：短波單胞菌屬；Limnobacter：檸檬酸桿菌屬；unidentified_Melainabacteria：未分類黑水仙菌屬；Lachnospira：毛螺菌屬；Klebsiella：克雷伯氏菌屬；Pseudobutyrivibrio：假丁酸弧菌；Tyzzerella：泰澤雷拉菌屬；Tetrasphaera：四球蟲屬；Butyricicoccus：丁蓖麻球菌屬；Hydrogenoanaerobacterium：氫厭氧小桿屬；Eubacterium：真桿菌屬；Rathayibacter：鴨舌草桿菌屬；Solobacterium：梭菌屬；Marvinbryantia：馬文伯里安菌屬；Romboutsia：羅姆布茨菌屬；Terrisporobacter：土孢桿菌屬；Mogibacterium：艱難桿菌屬；Herbinix：赫賓尼菌屬。

2.2.2 空腸菌群多樣性研究

由圖4-A可見，RE組的Observed_species指數(shù)顯著高于CN組(P<0.05)，表明RE組物種數(shù)目顯著高于CN組，但是CN組和RE組之間Shannon、Simpson、Chao1指數(shù)均無顯著差異(P>0.05)。Beta多樣性分析是對不同組間樣品的微生物群落構(gòu)成進(jìn)行比較分析，其中Anosim分析是一種非參數(shù)檢驗(yàn)，用來檢驗(yàn)組間的差異是否顯著大于組內(nèi)差異，從而判斷分組是否有意義[10]。由圖4-B可見，Anosim分析得出R=0.159，P=0.011，R值大于0小于1，且P值小于0.05，表明組間差異水平顯著大于組內(nèi)。

2.3 空腸菌群與其組織形態(tài)、屏障功能相關(guān)性分析

為了進(jìn)一步鑒定與空腸組織形態(tài)、屏障功能顯著相關(guān)的菌屬，進(jìn)行了Pearson相關(guān)性分析，此分析指2個變量之間的線性相關(guān)性，相關(guān)系數(shù)越接近1表明2個變量之間越相關(guān)。由圖5可見，空腸絨毛高度與Blautia、Brevundimonas、Rothia、Tetrasphaera相對豐度呈顯著正相關(guān)(P<0.05)，相關(guān)系數(shù)范圍為0.46～0.57；血清中D-Lac濃度與Romboutsia、Terrisporobacter相對豐度呈顯著正相關(guān)(P<0.05)，相關(guān)系數(shù)分別為0.56、0.62；血清中DAO濃度與赫賓尼菌屬(Herbinix)、Terrisporobacter相對豐度呈顯著正相關(guān)(P<0.05)，相關(guān)系數(shù)分別為0.60、0.52；血清中IL-6濃度與氣斯卡多維亞氏菌屬(Aeriscardovia)相對豐度呈顯著正相關(guān)(P=0.05)，相關(guān)系數(shù)為-0.44；血清中IL-10濃度與Mogibacterium相對豐度呈顯著負(fù)相關(guān)(P<0.05)，相關(guān)系數(shù)分別為-0.53；緊密連接蛋白ZO-1的mRNA表達(dá)水平與Solobacterium相對豐度呈顯著負(fù)相關(guān)(P<0.05)，相關(guān)系數(shù)為-0.50；緊密連接蛋白Occludin的mRNA表達(dá)水平與Herbinix相對豐度呈顯著負(fù)相關(guān)(P<0.05)，相關(guān)系數(shù)為-0.46。

A：各組樣本的Alpha指數(shù)統(tǒng)計(jì) Alpha indexes statistics of each group；B：Anosim組間差異分析 Anosim analysis of differences between group。

Aeriscardovia：氣斯卡多維亞氏菌屬；Agathobacter：無桿菌屬；Blautia：布勞特氏菌屬；Brevundimonas：短波單胞菌屬；Butyricicoccus：丁蓖麻球菌屬；Eubacterium：真桿菌屬；Fibrobacte：纖維桿菌屬；Herbinix：赫賓尼菌屬；Hydrogenoanaerobacterium：氫厭氧小桿屬；Klebsiella：克雷伯氏菌屬；Lachnospira：毛螺菌屬；Limnobacter：檸檬酸桿菌屬；Marvinbryantia：馬文伯里安菌屬；Melainabacteria：黑水仙菌屬；Mogibacterium：艱難桿菌屬；Oscillibacter：顫螺旋菌屬；Pseudobutyrivibrio：假丁酸弧菌屬；Rathayibacter：鴨舌草桿菌屬；Romboutsia：羅姆布茨菌屬；Rothia：羅斯氏菌屬；Solobacterium：梭菌屬；Terrisporobacter：土孢桿菌屬；Tetrasphaera：四球蟲屬；Tyzzerella：泰澤雷拉菌屬。紅色表示正相關(guān)，綠色表示負(fù)相關(guān)；每個單元格包含相應(yīng)的相關(guān)性值(括號外)和P值(括號內(nèi))。Red means positive correlation, and green means negative correlation; each cell contains the correlation value (out brackets) and P-value (in brackets).

3 討 論

3.1 涼茶渣對育肥?？漳c組織形態(tài)與屏障功能的影響

空腸是動物對飼糧營養(yǎng)成分進(jìn)行消化與吸收的主要部位，其消化吸收作用主要依賴于腸上的環(huán)形皺襞、腸絨毛及絨毛表面的柱狀上皮細(xì)胞等結(jié)構(gòu)[11]。腸絨毛的存在極大地增加了小腸與食物的接觸面積，絨毛高度越高，其消化吸收面積就越大；腸隱窩是腸上皮在絨毛根部下陷至固有層而形成的管狀腺，腸隱窩深度代表細(xì)胞的生成率，隱窩越淺細(xì)胞成熟度越好，分泌功能越好。所以腸絨毛高度和隱窩深度是衡量動物消化吸收能力的2個重要指標(biāo)[12-13]，同時也是腸道機(jī)械屏障的依托結(jié)構(gòu)。研究表明，飼糧中添加4%的中草藥顯著增加了大鼠后段小腸的絨毛高度，對小腸形態(tài)與功能的生長發(fā)育具有促進(jìn)作用[14]；另外在飼糧中添加中草藥能夠調(diào)理腸道，顯著提高肉牛的表觀消化率[15]。在本試驗(yàn)中，飼喂涼茶渣的育肥?？漳c絨毛高度顯著升高，與前人的研究結(jié)果一致。因此推測，涼茶渣在一定程度上能夠改變空腸組織形態(tài)，進(jìn)而提高其消化吸收能力。

腸道的屏障功能主要依靠相鄰腸道上皮細(xì)胞之間的緊密連接結(jié)構(gòu)，對于動物健康至關(guān)重要，Occludins、Claudins、ZO-1這3種緊密連接蛋白是緊密連接結(jié)構(gòu)中的關(guān)鍵部分[16-18]。D-Lac主要來自腸道，完整的腸黏膜可以防止D-Lac通過門脈循環(huán)進(jìn)入血液[19]，當(dāng)腸道屏障功能受損時，腸道中大量的D-Lac會被釋放到血液循環(huán)中[20]。DAO是一種細(xì)胞內(nèi)酶，在哺乳動物小腸絨毛上皮中具有高活性，腸黏膜損傷后，血清DAO濃度會增加[21]。因此血清中的D-Lac和DAO濃度可以反映腸道屏障功能是否受損。研究表明，中草藥飼料添加劑能夠改善熱應(yīng)激肉牛的腸道炎癥，修復(fù)腸道受損[15]；中藥渣能通過刺激ZO-1的表達(dá)來增強(qiáng)斷奶仔豬腸上皮細(xì)胞的屏障功能，改善腸道環(huán)境[22]。在本試驗(yàn)中，飼喂涼茶渣的育肥牛血清中D-Lac濃度顯著降低，空腸ZO-1的mRNA表達(dá)水平顯著上調(diào)，與前人的研究結(jié)果一致。這表明涼茶渣能增強(qiáng)育肥牛空腸的屏障功能，改善腸道環(huán)境。

3.2 涼茶渣對育肥?？漳c菌群結(jié)構(gòu)的影響

腸道菌群是機(jī)體腸道微生物的集合體，不僅參與機(jī)體消化和吸收營養(yǎng)物質(zhì)的過程，而且能夠抵抗病原菌的侵入，對機(jī)體健康具有至關(guān)重要的作用[23]。影響腸道菌群組成和多樣性因素很多，主要包括飲食、環(huán)境和年齡，其中飲食在影響腸道菌群結(jié)構(gòu)中尤為重要[24-26]。本研究結(jié)果中，OTUs聚類分析發(fā)現(xiàn)CN和RE組中特有的OTUs數(shù)量分別為1 057和1 107個，表明飼糧中添加涼茶渣使育肥?？漳c菌群物種數(shù)目有所增加。

根據(jù)物種注釋結(jié)果，20個樣本中最豐富的2個菌門是厚壁菌門和變形菌門，RE組厚壁菌門相對豐度較CN組有所減少，擬桿菌門、變形菌門相對豐度有所增加，且RE組厚壁菌門與擬桿菌門的比值有所降低。研究表明，牛腸道中的主要有益微生物是厚壁菌門和擬桿菌門[27]，厚壁菌門內(nèi)的瘤胃球菌可通過發(fā)酵纖維二糖和纖維素產(chǎn)生甲酸與乙酸[28]，擬桿菌門的細(xì)菌可利用葡萄糖發(fā)酵產(chǎn)生乙酸、琥珀酸等[29]。厚壁菌門與擬桿菌門的比值是反映腸道菌群紊亂的重要指標(biāo)，其升高對動物健康是不利的[30-31]。同時，厚壁菌門與擬桿菌門的比值也與機(jī)體的胖瘦程度有關(guān)，肥胖機(jī)體腸道菌群中厚壁菌門與擬桿菌門的比值更高[32]。變形菌門中包括很多病原菌，數(shù)量過多時會引發(fā)腸道炎癥，但本試驗(yàn)結(jié)果表明RE組血清炎癥因子濃度與CN組并無顯著差異。此外，瘤胃酸中毒時期，瘤胃中厚壁菌門相對豐度增加，擬桿菌門相對豐度下降[33]。上述分析說明涼茶渣在一定程度上會影響肉牛的育肥效果，但是牛體內(nèi)脂肪沉積過多會導(dǎo)致內(nèi)分泌功能紊亂，無法正常供應(yīng)機(jī)體所需的糖分[34]。因此從總體而言，涼茶渣能夠維持育肥牛腸道菌群穩(wěn)態(tài)，減少疾病的發(fā)生。

在屬水平上，與CN組相比，RE組Rothia、Blautia相對豐度顯著增加，Romboutsia相對豐度顯著減少。Blautia是一種有益菌，其產(chǎn)生的丁酸酯可通過免疫調(diào)節(jié)來增強(qiáng)抗菌作用[35]；Rothia能夠降解飼料中的蛋白質(zhì)，有助于腸道對營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收[36]，而Romboutsia是腸道菌群失衡的生物標(biāo)志物[37]。這說明涼茶渣能夠使育肥?？漳c菌群有益菌數(shù)量增加，有害菌數(shù)量減少，改善腸道穩(wěn)態(tài)。

Alpha多樣性分析反映了樣品物種豐富度和多樣性，RE組的Observed_species指數(shù)顯著高于CN組，表明RE組菌群物種數(shù)目顯著高于CN組。對于Beta多樣性分析，Anosim方法得出R=0.159，P=0.011，表明組間微生物群落結(jié)構(gòu)差異顯著。Alpha、Beta多樣性分析結(jié)果說明涼茶渣能夠使育肥牛腸道菌群組成和相對豐度發(fā)生顯著變化。

3.3 育肥?？漳c菌群與其組織形態(tài)、屏障功能的相關(guān)性

眾多研究結(jié)果表明腸道菌群影響其組織形態(tài)和功能[38-39]，而且腸道菌群的代謝產(chǎn)物對腸道健康也有重要的影響，比如代謝產(chǎn)物短鏈脂肪酸可以促進(jìn)腸上皮細(xì)胞的增殖和分化，增加ZO-1和Occludin的mRNA表達(dá)水平，增強(qiáng)腸道屏障功能[40]。Pearson相關(guān)性分析結(jié)果中，空腸絨毛高度與Blautia、Brevundimonas、Rothia、Tetrasphaera相對豐度呈顯著正相關(guān)。Blautia可能是通過代謝產(chǎn)物丁酸酯的抗菌作用減少腸道炎癥[35]，從而促進(jìn)絨毛增長；Rothia可能是通過降解飼料蛋白為絨毛增長提供能量[36]。血清中D-Lac濃度與Romboutsia、Terrisporobacter相對豐度呈顯著正相關(guān)，DAO濃度與Herbinix、Terrisporobacter相對豐度呈顯著正相關(guān)。Romboutsia是腸道菌群失衡的生物標(biāo)志物[37]，Terrisporobacter與腸道炎癥有關(guān)[41]，從側(cè)面論證了血清中D-Lac和DAO濃度可以反映腸道屏障功能是否受損。此外，腸道菌群的變化還使動物血清中炎癥因子濃度、緊密連接蛋白基因的mRNA表達(dá)水平發(fā)生相應(yīng)變化。這部分結(jié)果說明空腸菌群能通過自身或代謝產(chǎn)物對其組織形態(tài)、炎癥反應(yīng)、屏障功能產(chǎn)生一定程度的影響。

4 結(jié) 論

涼茶渣替代象草能夠改變育肥?？漳c組織形態(tài)，增強(qiáng)空腸屏障功能，改善空腸菌群組成和相對豐度，促進(jìn)腸道健康。