血清miR-92a-1-5p及miR-92a-2-5p表達(dá)水平與老年卒中后抑郁的關(guān)系

劉賢秀，韓莎莎，姜艷平

(膠州中心醫(yī)院康復(fù)醫(yī)學(xué)科，山東 青島 266300)

卒中是一種急性腦血管疾病，有部分患者在治療后恢復(fù)期出現(xiàn)抑郁癥[1]。據(jù)統(tǒng)計(jì)[2]，卒中后抑郁在卒中后1個(gè)月的發(fā)病率為30%～50%，嚴(yán)重影響患者神經(jīng)功能恢復(fù)。微小核糖核酸-92a-1-5p(micro-ribonucleic acid-92a-1-5p，miR-92a-1-5p)和miR-92a-2-5p均是微小核糖核酸(micro-ribonucleic acid，miRNA)家族成員，有研究顯示[3，4]，miR-92a-1-5p和miR-92a-2-5p在抑郁癥患者外周血血清中存在異常表達(dá)。但血清miR-92a-1-5p、miR-92a-2-5p表達(dá)是否與卒中后患者合并抑郁的發(fā)生相關(guān)尚不清楚。鑒于此，本研究選取129例老年卒中患者和110名健康體檢者探討血清miR-92a-1-5p、miR-92a-2-5p表達(dá)與老年卒中后抑郁的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象

選擇膠州中心醫(yī)院2018年2月至2020年10月收治的129例老年卒中患者為研究組，另選取同期110名健康體檢者為對照組。研究組男性84例，女性45例；年齡61～78(69.16±5.85)歲；體質(zhì)量指數(shù)16.3～27.4(23.12±4.22)kg/m2；美國國立衛(wèi)生研究院卒中量表(National Institutes of Health stroke scale，NIHSS)評分9～15(12.26±1.71)分；卒中類型：出血性卒中18例，缺血性卒中111例；合并癥：高血壓47例，糖尿病58例，高脂血癥29例；病變部位：枕葉11例，頂葉31例，顳葉17例，額葉33例，放射冠42例，基底節(jié)55例；左額病變41例，右額病變94例。對照組男性71例，女性39例，年齡61～77(68.82±5.81)歲；體質(zhì)量指數(shù)18.6～24.8(22.79±4.92)kg/m2。2組患者性別、年齡、體質(zhì)量指數(shù)等一般資料比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)，具有可比性。

納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)研究組均符合卒中診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]，且經(jīng)頭顱磁共振成像(magnetic resonance imaging，MRI)或電子計(jì)算機(jī)斷層掃描(computed tomography，CT)檢查證實(shí)；(2)研究組均為首次發(fā)病、單側(cè)病變，且NIHSS評分[6]>8分；(3)年齡>60歲；(4)均知情同意。

排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)既往抑郁癥史；(2)合并免疫系統(tǒng)、血液系統(tǒng)疾病；(3)失語、癡呆等無法配合檢查者；(4)合并惡性腫瘤；(5)伴嚴(yán)重心、肝、腎、肺、內(nèi)分泌等系統(tǒng)疾病。

1.2 方法

血清miR-92a-1-5p、miR-92a-2-5p表達(dá)水平均采用實(shí)時(shí)熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(quantitative real-time polymerase chain reaction，qRT-PCR)檢測，對照組于體檢當(dāng)天檢測，研究組于入院后第2天、入院后1個(gè)月分別進(jìn)行檢測。2組患者均于清晨抽取空腹靜脈血4 ml，采用Trizol法提取總RNA，以miRNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(南京諾唯贊生物科技股份有限公司，貨號：MR101-01)將RNA逆轉(zhuǎn)錄為miRNA。反應(yīng)條件為：37 ℃逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)15 min，98 ℃逆轉(zhuǎn)錄酶失活反應(yīng)5 min，產(chǎn)物于-20 ℃保存。采用TaqMan實(shí)時(shí)熒光聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chain reaction，PCR)儀[賽默飛世爾科技(中國)有限公司]對miR-92a-1-5p、miR-92a-2-5p進(jìn)行擴(kuò)增。反應(yīng)流程：95℃反應(yīng)10 s，55℃反應(yīng)30 s，72℃反應(yīng)20 s，共進(jìn)行40個(gè)循環(huán)。以U6為內(nèi)參基因，采用2-△△Ct法計(jì)算miR-92a-1-5p、miR-92a-2-5p的相對表達(dá)量，其中△Ct=Ct(miRNA)-Ct(U6)。PCR反應(yīng)引物序列詳見表1。

表1 PCR反應(yīng)引物序列

根據(jù)《腦卒中診療手冊》中相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)[7]，采用對應(yīng)藥物控制老年卒中患者的血脂、血糖、血壓，并進(jìn)行腦保護(hù)及適量的康復(fù)運(yùn)動(dòng)。治療期間每隔7 d應(yīng)用漢密爾頓抑郁量表(Hamilton depression scale-17，HAMD-17)[8]對患者進(jìn)行評分，根據(jù)《中國卒中后抑郁障礙規(guī)范化診療指南》[9]中相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，對入院后1個(gè)月內(nèi)合并抑郁的患者進(jìn)行抗抑郁治療。將入院后1個(gè)月內(nèi)HAMD-17分?jǐn)?shù)≥8分的患者記為合并抑郁患者，將HAMD-17分?jǐn)?shù)<8分的患者記為未合并抑郁患者。

總結(jié)可能影響老年卒中患者合并抑郁的因素，記為自變量[10，11]，將老年卒中患者是否合并抑郁記為因變量。對老年卒中患者血清miR-92a-1-5p、miR-92a-2-5p表達(dá)與合并抑郁的關(guān)系進(jìn)行分析。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié) 果

2.1 2組患者入院后血清miR-92a-1-5p和miR-92a-2-5p表達(dá)水平比較

研究組患者入院后第2天及入院后1個(gè)月血清miR-92a-1-5p、miR-92a-2-5p表達(dá)水平均明顯高于對照組；研究組患者入院后1個(gè)月血清miR-92a-1-5p、miR-92a-2-5p表達(dá)水平均明顯低于入院后第2天，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05；表2)。

表2 2組患者入院后血清miR-92a-1-5p和miR-92a-2-5p表達(dá)水平比較

2.2 抑郁組與無抑郁組患者入院后血清miR-92a-1-5p和miR-92a-2-5p表達(dá)水平比較

研究組患者入院后1個(gè)月內(nèi)有49例合并抑郁(抑郁組)，80例患者未合并抑郁(無抑郁組)。

抑郁組患者入院后第2天和入院后1個(gè)月血清miR-92a-1-5p、miR-92a-2-5p表達(dá)水平均明顯高于無抑郁組患者；2組患者入院后1個(gè)月血清miR-92a-1-5p、miR-92a-2-5p表達(dá)水平均明顯低于入院后第2天，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05；表3)。

表3 抑郁組與無抑郁組患者入院后血清miR-92a-1-5p、miR-92a-2-5p表達(dá)水平比較

2.3 入院后第2天血清miR-92a-1-5p和miR-92a-2-5p表達(dá)水平與老年卒中后抑郁的關(guān)系

抑郁組患者女性占比、NIHSS評分、基底節(jié)病變占比、左額病變占比、文化程度為高中以上占比、家庭支持度、血清miR-92a-1-5p和miR-92a-2-5p表達(dá)水平均高于無抑郁組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，表4)；logistic多元回歸分析結(jié)果顯示，上述因素均為老年卒中患者合并抑郁的危險(xiǎn)因素(P<0.05；表5)。

表4 老年卒中后抑郁組和無抑郁組可能影響因素比較

表5 老年卒中后抑郁危險(xiǎn)因素的多因素logistic回歸分析

3 討 論

卒中是老年人常見的一種疾病，發(fā)病機(jī)制較為復(fù)雜，加之老年患者常多種基礎(chǔ)疾病共存，治療較為棘手[12]。卒中后患者神經(jīng)再生減少，大腦突觸可塑性失凋，易發(fā)生抑郁癥[13]。本研究中研究組入院1個(gè)月后合并抑郁的發(fā)生率為37.98%，稍高于倪婷等[14]報(bào)道的31.60%，這可能與本研究中觀察對象機(jī)體差異有關(guān)。老年卒中后抑郁會(huì)增加卒中患者的致殘率和死亡率，因此，積極探尋影響老年后抑郁的相關(guān)因素以指導(dǎo)臨床防控工作，對改善老年卒中患者的預(yù)后意義重大。

本研究中研究組入院后第2天和入院后1個(gè)月，血清miR-92a-1-5p、miR-92a-2-5p表達(dá)水平均明顯高于對照組，且研究組入院后1個(gè)月二者表達(dá)水平均明顯低于入院后第2天(P<0.05)，表明老年卒中患者血清miR-92a-1-5p、miR-92a-2-5p表達(dá)水平呈現(xiàn)高表達(dá)，且二者表達(dá)水平在治療后降低。miRNA作為一類單鏈小分子非編碼RNA，其性質(zhì)穩(wěn)定且對機(jī)體細(xì)胞的生長、發(fā)育、分化等反應(yīng)極為靈敏，常作為診斷疾病的生物學(xué)標(biāo)志物[15]。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)[16,17]，miR-92a在調(diào)控血管平滑肌細(xì)胞增殖和表性轉(zhuǎn)化等方面均具有重要作用。miR-92a-1-5p和miR-92a-2-5p均是miR-92a基因家族的主要成員，當(dāng)血管受損或血管平滑肌細(xì)胞受到生長因子刺激時(shí)，可促進(jìn)細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶磷酸化增加，進(jìn)而導(dǎo)致miR-92a-1-5p、miR-92a-2-5p表達(dá)上調(diào)，進(jìn)一步促進(jìn)腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷和腦微血管平滑肌細(xì)胞的增殖及遷移，加快腦微血管粥樣硬化病變發(fā)展。

本研究中合并抑郁患者入院后第2天和入院后1個(gè)月的血清miR-92a-1-5p和miR-92a-2-5p表達(dá)水平均明顯高于未合并抑郁患者，且logistic回歸分析證實(shí)老年卒中患者入院后第2天二者表達(dá)水平均為老年卒中后抑郁的危險(xiǎn)因素。miRNA轉(zhuǎn)錄后可調(diào)節(jié)基因表達(dá)，在神經(jīng)元生成和大腦突觸可塑性等方面具有重要作用，推測卒中可通過影響miRNA的表達(dá)調(diào)控抑郁[18]。miR-92a-1-5p是腦發(fā)育和神經(jīng)元分化過程中的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，與海馬神經(jīng)元發(fā)育及神經(jīng)元活動(dòng)變化有關(guān)，miR-92a-1-5p高表達(dá)可降低抗凋亡蛋白B細(xì)胞淋巴瘤2等神經(jīng)元分化因子的表達(dá)，進(jìn)而參與抑郁發(fā)生過程[19]。miR-92a-2-5p可調(diào)控細(xì)胞腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖、分化等多種生命活動(dòng)，抑制miR-92a-2-5p可調(diào)節(jié)內(nèi)皮細(xì)胞增殖[20]，進(jìn)而緩解因缺血缺氧導(dǎo)致的腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞死亡，維持海馬結(jié)構(gòu)重建，從而改善記憶及認(rèn)知功能。因此血清miR-92a-1-5p、miR-92a-2-5p表達(dá)水平越高，其促進(jìn)腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞死亡的作用越強(qiáng)烈，對患者記憶及認(rèn)知功能的損害越明顯，抑郁程度就越嚴(yán)重，老年卒中后抑郁風(fēng)險(xiǎn)就越大。

本研究結(jié)果顯示，女性、NIHSS評分升高、基底節(jié)病變、左額病變、文化程度為高中以上、家庭支持度降低也均是老年卒中后抑郁的危險(xiǎn)因素，與既往報(bào)道相符[21-23]，提示應(yīng)積極控制上述因素以降低老年卒中后抑郁的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。

綜上所述，老年卒中患者血清miR-92a-1-5p和miR-92a-2-5p表達(dá)高，且二者表達(dá)在老年卒中后抑郁患者中更高，二者同女性、NIHSS評分升高等也均為老年卒中后抑郁的危險(xiǎn)因素。