臨床微生物檢驗(yàn)和細(xì)菌耐藥性監(jiān)測(cè)的應(yīng)用價(jià)值研究

李琳

[摘要] 目的 分析微生物檢驗(yàn)工作和細(xì)菌耐藥性監(jiān)測(cè)工作開(kāi)展的臨床意義。 方法 在盤(pán)錦遼油寶石花醫(yī)院檢驗(yàn)科2019年3月至2020年8月接收的送檢微生物標(biāo)本中選出2000份為對(duì)象，根據(jù)標(biāo)本的來(lái)源臨床科室分為ICU組（n=650）、兒科組（n=350）、內(nèi)科組（n=450）、外科組（n=550），收集檢驗(yàn)的病原微生物及對(duì)四組標(biāo)本進(jìn)行細(xì)菌耐藥性監(jiān)測(cè)。 結(jié)果 2000份微生物標(biāo)本共培養(yǎng)出1765株病原菌，其中革蘭陰性菌占54.96%，高于革蘭陽(yáng)性菌的40.79%（P<0.05），真菌僅占4.25%;1765株病原菌中共有507株耐藥菌株，耐藥菌株檢出率為28.73%;四組的耐藥菌株檢出率：ICU組為34.53%，兒科組為16.06%，內(nèi)科組為22.97%，外科組為31.86%，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;在耐藥性監(jiān)測(cè)中：革蘭陽(yáng)性菌對(duì)常見(jiàn)的抗生素耐藥率偏高，對(duì)萬(wàn)古霉素和利奈唑胺的耐藥率較低;革蘭陰性菌對(duì)多數(shù)抗生素的耐藥率居中，其中銅綠假單胞菌對(duì)多數(shù)抗生素的耐藥率偏低。 結(jié)論 臨床微生物檢驗(yàn)和細(xì)菌耐藥性監(jiān)測(cè)的開(kāi)展有利于臨床醫(yī)師明確患者的病原菌，并對(duì)藥物治療提供指導(dǎo)，選擇敏感抗生素治療，從而提高治療效果。

[關(guān)鍵詞] 微生物檢驗(yàn);病原微生物;細(xì)菌耐藥性監(jiān)測(cè);耐藥率

[中圖分類(lèi)號(hào)] R446.5? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B? ? ? ? ? [文章編號(hào)] 1673-9701（2022）02-0123-04

Research on the application value of clinical microbiological test and bacterial drug resistance monitoring

LI Lin

Department of Clinical Laboratory， Panjin Liaoyou Baoshihua Hospital， Panjin? ?124010， China

[Abstract] Objective To investigate the application value of bacterial drug resistance monitoring and clinical microbiological test. Methods A total of 2000 microbiological specimens admitted to the department of clinical laboratory in Panjin Liaoyou Baoshihua Hospital from March 2019 to August 2020 were selected as the research objects. According to the source of clinical departments， the specimens were divided into the intensive care unit （ICU） group（n=650）， the pediatrics group（n=350）， the internal medicine group（n=450） and the surgery group （n=550）. The pathogenic microorganisms were collected and the bacterial drug resistance of 4 groups of specimens was monitored. Results A total of 1765 strains of pathogenic bacteria were cultured from 2000 microbial specimens， of which Gram-negative bacteria accounted for 54.96%. It was higher than 40.79% of the probability of Gram-positive bacteria（P<0.05）. And fungi only accounted for 4.25%. There were 507 drug-resistant strains in 1765 pathogenic bacteria， and the detection rate of drug-resistant strains was 28.73%. The detection rates of drug-resistant strains in four groups were 34.53% in the ICU group， 16.06% in the pediatrics group，22.97% in the internal medicine group and 31.86% in the surgery group， with statistically significant differences（P<0.05）. The results of several main Gram-positive bacteria and Gram-negative bacteria showed that the drug resistance rates of Gram-positive bacteria （Staphylococcus aureus， Streptococcus pneumoniae and Enterococcus） were higher than those of most antibiotics， while the drug resistance rates of vancomycin and linezolid were relatively lower. Meanwhile，the resistance rates of Gram-positive bacteria （Escherichia coli， Pseudomonas aeruginosa and Klebsiella） to most antibiotics were in the middle， and the resistance rate of Pseudomonas aeruginosa to most antibiotics was relatively lower. Conclusion The development of clinical microbiological test and bacterial drug resistance monitoring is helpful for clinicians to identify the pathogenic bacteria of patients， provide guidance for drug treatment， and choose sensitive antibiotics to improve the therapeutic efficacy.

[Key words] Microbiological test; Pathogenic microorganisms; Bacterial drug resistance monitoring; Drug resistance rate

細(xì)菌耐藥性問(wèn)題是指抗生素與細(xì)菌接觸后，細(xì)菌的代謝發(fā)生改變，避免被藥物殺滅[1-3]。近年來(lái)細(xì)菌耐藥性問(wèn)題越來(lái)越多，抗菌藥物的治療效果明顯下降，關(guān)于預(yù)防細(xì)菌耐藥性及延緩細(xì)菌耐藥性逐漸成為重點(diǎn)研究[4-5]。細(xì)菌作為主要的病原體之一，其可引起多種疾病，當(dāng)機(jī)體免疫力降低時(shí)，細(xì)菌更容易侵襲感染，因此抗菌藥物的合理應(yīng)用有重要意義。耐藥菌株的出現(xiàn)使得抗菌藥物的療效大大降低，影響患者的早日康復(fù)。為確保細(xì)菌感染性疾病患者治療中藥物使用的規(guī)范性、合理性，檢驗(yàn)科的微生物檢驗(yàn)工作中根據(jù)實(shí)際情況進(jìn)行必要的細(xì)菌耐藥性監(jiān)測(cè)也成為重要的任務(wù)，以助于臨床醫(yī)師合理選擇抗菌藥物，提高治療效果[6]。本研究選取2000份微生物標(biāo)本為例，探究細(xì)菌耐藥性監(jiān)測(cè)的應(yīng)用價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取盤(pán)錦遼油寶石花醫(yī)院檢驗(yàn)科2019年3月至2020年8月期間接收的送檢微生物標(biāo)本2000份為對(duì)象，根據(jù)標(biāo)本來(lái)源科室分組：ICU組共有650份標(biāo)本，其中血液標(biāo)本222份，痰液標(biāo)本275份，分泌物標(biāo)本87份，尿液標(biāo)本66份;兒科組共有350份標(biāo)本，其中血液標(biāo)本120份，痰液標(biāo)本141份，分泌物標(biāo)本52份，尿液標(biāo)本37份;內(nèi)科組共有450份標(biāo)本，其中血液標(biāo)本138份，痰液標(biāo)本176份，分泌物標(biāo)本75份，尿液標(biāo)本61份;外科組共有550份標(biāo)本，其中血液標(biāo)本180份，痰液標(biāo)本227份，分泌物標(biāo)本80份，尿液標(biāo)本63份。四組一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 菌株鑒定? 本研究的2000份微生物標(biāo)本均先進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)，依照常規(guī)工作流程將標(biāo)本接種到血平板、巧克力平板、麥康凱培養(yǎng)基中，在35℃、5%～7% CO2環(huán)境下培養(yǎng)24～48 h，分離出可疑菌落后，最后用DL-96Ⅱ細(xì)菌測(cè)定系統(tǒng)進(jìn)行細(xì)菌的鑒定。

1.2.2 耐藥性監(jiān)測(cè)? 將分離出來(lái)的細(xì)菌采用MIC法分析，觀察不同抗菌藥物的最低抑菌濃度。并參照CLSI近兩年的標(biāo)準(zhǔn)確定細(xì)菌的耐藥性。最后借助DL-96Ⅱ細(xì)菌測(cè)定系統(tǒng)的藥敏板條進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，嚴(yán)格按照規(guī)范操作。

1.3 觀察指標(biāo)

①統(tǒng)計(jì)本組2000份微生物標(biāo)本中培養(yǎng)分離出的病原菌占比及進(jìn)行病原菌鑒定后的分布狀況。②對(duì)ICU組、外科組、兒科組、內(nèi)科組分離出的病原菌進(jìn)行耐藥性檢測(cè)，統(tǒng)計(jì)四組的耐藥菌株檢出率。③對(duì)分離出的革蘭陽(yáng)性菌和革蘭陰性菌中概率排名前3位的細(xì)菌進(jìn)行耐藥性檢測(cè)，統(tǒng)計(jì)常見(jiàn)抗菌藥物的耐藥率。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 24.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料采用[n（%）]表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 菌株分布情況

本研究中，2000份微生物標(biāo)本經(jīng)培養(yǎng)分離鑒定，共分離出1765株病原菌，其中真菌較少，僅占4.25%，革蘭陰性菌的占比率為54.96%，明顯高于革蘭陽(yáng)性菌的40.79%（χ2=70.950，P=0.000<0.05）。金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、銅綠假單胞菌、肺炎鏈球菌、腸球菌屬、克雷伯屬的占比較高。見(jiàn)表1。

2.2 耐藥菌株檢出率比較

1765株病原菌經(jīng)耐藥性檢測(cè)，共檢出507株耐藥菌株，檢出率為28.73%。ICU組患者的耐藥菌株檢出率最高，其次是外科組，明顯高于兒科組和內(nèi)科組檢出率（P<0.05）。見(jiàn)表2。

2.3 主要菌株對(duì)抗生素的耐藥性

①金黃色葡萄球菌對(duì)紅霉素、青霉素G、克林霉素的耐藥率均較高，超過(guò)50%，而利福平、利奈唑胺、萬(wàn)古霉素的耐藥率較低。肺炎鏈球菌對(duì)紅霉素、青霉素G的耐藥率較高，對(duì)利奈唑胺、萬(wàn)古霉素、莫西沙星的耐藥率較低。腸球菌屬對(duì)紅霉素、青霉素G、四環(huán)素、莫西沙星、苯唑西林的耐藥率較高，對(duì)利奈唑胺、萬(wàn)古霉素的耐藥率較低。見(jiàn)表3。②大腸埃希菌對(duì)氨芐西林、氨曲南、環(huán)丙沙星、哌拉西林、慶大霉素、頭孢曲松、頭孢唑林、左氧氟沙星等藥的耐藥率均較高，對(duì)厄他培南、呋喃妥因、亞胺培南、阿米卡星的耐藥率較低。銅綠假單胞菌對(duì)阿米卡星、頭孢吡肟的耐藥率較低，均在10%以下，對(duì)氨曲南、環(huán)丙沙星、哌拉西林、慶大霉素、頭孢他啶等藥的耐藥率居中，在10%～30%?？死撞畬俣鄶?shù)抗生素的耐藥率居中，其中對(duì)亞胺培南的耐藥率在10%以下。見(jiàn)表4。

3 討論

細(xì)菌有多種耐藥基因，隨著臨床上抗菌藥物的廣泛使用，細(xì)菌耐藥問(wèn)題日益突出，多重耐藥菌株也越來(lái)越多，對(duì)感染類(lèi)疾病的治療造成重大困擾，因此細(xì)菌耐藥問(wèn)題是臨床研究的重點(diǎn)課題，是亟待解決的問(wèn)題之一[7-8]。細(xì)菌的耐藥性可分為兩種：①天然耐藥，又被稱(chēng)為固有耐藥，其關(guān)鍵在于細(xì)菌的染色體基因，經(jīng)過(guò)代代相傳，自身無(wú)變化，如臨床上常見(jiàn)的有鏈球菌對(duì)氨基糖苷類(lèi)抗生素不敏感，腸道G-桿菌對(duì)青霉素類(lèi)抗生素耐藥等就屬于天然耐藥，是由細(xì)菌的染色體基因?qū)е碌哪退幮?。②獲得性耐藥，這種是臨床上最為常見(jiàn)的耐藥，是指細(xì)菌在與抗生素接觸后，在質(zhì)粒介導(dǎo)下使得細(xì)菌無(wú)法被抗生素殺滅，最常見(jiàn)的是金黃色葡萄球菌產(chǎn)生的β-內(nèi)酰胺酶。另外，獲得性耐藥問(wèn)題并不會(huì)因不再接觸抗生素而消失，還可能經(jīng)質(zhì)粒將耐藥基因轉(zhuǎn)移到細(xì)菌的染色體上，代代相傳，形成天然耐藥。

細(xì)菌耐藥性的產(chǎn)生的原因：①細(xì)菌生存過(guò)程中產(chǎn)生滅活酶，這是細(xì)菌耐藥性產(chǎn)生的主要機(jī)制之一，使得抗生素在殺滅細(xì)菌作用發(fā)揮前就被細(xì)菌的滅活酶破壞失去活性，無(wú)法起到預(yù)期的抗菌效果。常見(jiàn)的滅活酶有β-內(nèi)酰胺酶、氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶、氨基糖胺類(lèi)鈍化酶等[9-10];②抗菌藥物作用的靶位變化，抗生素對(duì)細(xì)菌的作用靶位被細(xì)菌所產(chǎn)生的酶等修飾或是發(fā)生突變，使得作用靶位發(fā)生一定變化，無(wú)法發(fā)揮抗菌效果;或抗菌靶位的結(jié)構(gòu)等的變化，使得藥物與細(xì)菌的親和力降低，使得藥物與細(xì)菌無(wú)法結(jié)合，從而喪失抗菌活性。例如：鏈霉素是常用的抗生素，其作用靶位是30S亞基上的S12蛋白，一旦S12蛋白的結(jié)構(gòu)等發(fā)生一定變化，就會(huì)導(dǎo)致鏈霉素?zé)o法順利與其結(jié)合，從而產(chǎn)生耐藥性;③當(dāng)細(xì)菌的細(xì)胞壁通透性改變，使得抗菌藥物無(wú)法順利進(jìn)入細(xì)菌體內(nèi)[11]。當(dāng)細(xì)菌接觸到抗生素后，自主改變通道蛋白的性質(zhì)、數(shù)量等，從而使得細(xì)胞的膜通透性改變，導(dǎo)致獲得性耐藥問(wèn)題的發(fā)生。如革蘭陽(yáng)性菌多數(shù)對(duì)多黏菌素類(lèi)抗生素的耐藥性較高，主要是因?yàn)榭股仉y以通透細(xì)菌的厚細(xì)胞壁導(dǎo)致的。也有細(xì)菌的細(xì)胞膜具有能量依賴(lài)性泵出系統(tǒng)，使得進(jìn)入的抗生素能向外泵出，從而達(dá)到預(yù)期的抗菌效果。

本研究中，對(duì)2000份微生物標(biāo)本共分離培養(yǎng)出1765株病原菌，其中革蘭陰性菌的占比為54.96%，高于革蘭陽(yáng)性菌的40.79%（P<0.05），而真菌則較少，僅占4.25%，常見(jiàn)的病原菌有金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌、腸球菌屬、克雷伯屬、大腸埃希菌、銅綠假單胞菌。對(duì)這幾種概率較高的革蘭陽(yáng)性菌、革蘭陰性菌分別進(jìn)行細(xì)菌耐藥性監(jiān)測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)革蘭陽(yáng)性菌對(duì)多數(shù)抗生素耐藥率較高，其中萬(wàn)古霉素、利奈唑胺的耐藥率較低，可有效殺滅細(xì)菌，因此在臨床用藥時(shí)可結(jié)合患者的具體情況用藥，選擇萬(wàn)古霉素等抗生素，提高抗菌效果。大腸埃希菌、克雷伯屬對(duì)喹諾酮類(lèi)、β-內(nèi)酰胺類(lèi)藥物的耐藥率較高，增加了臨床治療的難度，這主要是因?yàn)榇竽c埃希菌等細(xì)菌能產(chǎn)生超廣譜的β-內(nèi)酰胺酶，β-內(nèi)酰胺酶能水解滅活青霉素、頭孢菌素，而且質(zhì)粒介導(dǎo)在菌株之間傳遞，最終導(dǎo)致細(xì)菌對(duì)青霉素、頭孢菌素的耐藥性偏高。但是對(duì)亞胺培南則較為敏感，故而可將亞胺培南用于革蘭陰性菌引起的感染治療中[12-13]。

本研究進(jìn)行細(xì)菌耐藥性監(jiān)測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)ICU組患者的耐藥菌株檢出率最高，其次是外科組，明顯高于內(nèi)科組和兒科組的耐藥菌株檢出率（P<0.05）。筆者認(rèn)為，ICU收治的患者病情危重，且治療周期長(zhǎng)，侵入性治療操作多，更易發(fā)生感染，使得耐藥菌數(shù)也相應(yīng)較多。外科患者則有暴露的傷口，且多數(shù)患者伴有不同程度的炎癥反應(yīng)，也更容易引起耐藥問(wèn)題。因此臨床上需加強(qiáng)對(duì)ICU、外科患者的監(jiān)測(cè)，重視細(xì)菌耐藥性問(wèn)題的監(jiān)測(cè)觀察，為患者選擇敏感抗生素治療，促進(jìn)患者早日康復(fù)[14-15]。

綜上所述，細(xì)菌耐藥性已成為感染類(lèi)疾病治療中的難點(diǎn)，在微生物檢驗(yàn)工作中，臨床上也需結(jié)合實(shí)際情況進(jìn)行定期、不定期的耐藥性監(jiān)測(cè)，觀察細(xì)菌耐藥性問(wèn)題的現(xiàn)狀、發(fā)展趨勢(shì)等，同時(shí)也指導(dǎo)臨床醫(yī)師根據(jù)患者的耐藥狀況合理選用抗生素，為合理使用抗菌藥物提供指導(dǎo)，提高用藥的有效性和安全性，避免耐藥菌株、多重耐藥菌株的出現(xiàn)，規(guī)范用藥，值得推廣。

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（收稿日期：2021-08-09）

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