桄榔抗性淀粉調(diào)控保加利亞乳桿菌和植物乳桿菌的增殖及耐受性

李夢(mèng)赟，任民紅，劉遠(yuǎn)森，張露，梅江洋，符珍

（廣西大學(xué)輕工與食品工程學(xué)院，廣西 南寧 530004）

抗性淀粉（resistant starch，RS）作為一種新型的膳食纖維且屬于淀粉的一部分，它有著多種類型且以“不被健康個(gè)體小腸所吸收的淀粉及其降解物”為定義，它因?qū)ξ改c中消化酶等的抗性，從而對(duì)胃腸道微生物群落的組成和活性有一定的影響，進(jìn)而影響人體健康[1]。RS具有改善胰島素敏感性，調(diào)節(jié)糖脂代謝、調(diào)節(jié)腸道菌群、促進(jìn)礦物質(zhì)的吸收和利用等多種潛在的生理功能[2-5]。RS目前可分為五大類，比如存在于在谷物或種子的蛋白質(zhì)基質(zhì)和細(xì)胞壁中的物理性包埋淀粉（physically trapped starch，RS1）、像土豆中含有的不被消化酶消化的天然抗性淀粉顆粒（resistant starch granules，RS2）、因糊化老化而產(chǎn)生的回生淀粉（retrograded starch，RS3）、以及化學(xué)改性淀粉（chemically modified starch，RS4）和直鏈淀粉-脂肪復(fù)合淀粉（amylose-lipid complexed starch，RS5）5類[6]。根據(jù)來源、處理方式和制備方法的不同，抗性淀粉呈現(xiàn)不同的顆粒形狀、不同的晶體結(jié)構(gòu)和不同的分子結(jié)構(gòu)[6，7]。

RS的功能和營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，特別是其生理意義，取決于其結(jié)構(gòu)?？剐缘矸圩鳛樾滦鸵嫔苿?，制備工藝簡(jiǎn)單、口感好、來源也廣，開發(fā)和充分利用抗性淀粉作為益生元來源成為當(dāng)前研究熱點(diǎn)。林珊[8]以壓熱法制備的蓮子淀粉飼喂小鼠發(fā)現(xiàn)蓮子抗性淀粉能夠促進(jìn)腸道益生菌的增殖及產(chǎn)酸能力；包辰等[9，10]則通過不同的加工工藝制備出多種抗性淀粉，他們的結(jié)晶區(qū)和螺旋結(jié)構(gòu)等存在差異，且有著不同的益生菌增殖效果和產(chǎn)酸能力，不僅印證了薏苡仁抗性淀粉對(duì)兩歧雙歧桿菌耐受性的增強(qiáng)作用，且展現(xiàn)出不同加工處理方法獲得的抗性淀粉之間益生元性質(zhì)的差異；崔琳琳等[11]通過苦蕎抗性淀粉的體外發(fā)酵實(shí)驗(yàn)確定了它的益生元作用，且發(fā)現(xiàn)不同劑量的苦蕎抗性淀粉對(duì)有害菌的抑制程度不同。楊玥熹等[12]研究了以玉米、綠豆和葛根等植物來源制備的B型抗性淀粉（RS），并將這幾種抗性淀粉作為碳源進(jìn)行厭氧培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)大腸埃希氏菌、干酪乳桿菌、長(zhǎng)雙歧桿菌在不同的抗性淀粉為碳源的培養(yǎng)中出現(xiàn)了不同的增殖過程和pH變化。近年來的研究證明，以蓮子、薏苡仁、苦蕎等原料制備的抗性淀粉可以被大腸桿菌發(fā)酵，并產(chǎn)生多種短鏈脂肪酸如甲酸、乙酸和丁酸等和二氧化碳、氫氣等氣體，有利于降低腸道pH值，對(duì)致病菌的生長(zhǎng)和繁殖有抑制作用，且促進(jìn)益生菌的增殖[2，3，5，13]；并且眾多實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)植物來源、加工方式以及添加劑量的不同會(huì)對(duì)抗性淀粉的益生元潛力產(chǎn)生不同趨勢(shì)的影響。因此對(duì)不同植物來源的原材料進(jìn)行研究不僅對(duì)資源開發(fā)有一定的意義，且一定程度上促進(jìn)了對(duì)抗性淀粉的益生元功用和機(jī)理更加全面地了解。在眾多原材料的研究中，很少有人對(duì)桄榔這一棕櫚科的材料進(jìn)行益生元潛力的探究，所以本實(shí)驗(yàn)主要討論該材料的益生元作用。

桄榔粉是廣西傳統(tǒng)特產(chǎn)，作為廣西四大名粉之一。它不僅富含多種微量元素，還有豐富的碳水化合物和膳食纖維。桄榔淀粉（Arenga pinnatastarch，APS）是桄榔粉的主要成分并且直鏈淀粉含量較高[14]，是制備RS優(yōu)質(zhì)原料。前期研究表明桄榔抗性淀粉（APRS）具有很好的抗酶解性和高熱穩(wěn)定性[15]。因此，本論文進(jìn)一步采用體外發(fā)酵研究考察不同濃度（0.1%、0.2%、0.5%、1%、1.5%）APRS對(duì)保加利亞乳桿菌（Lactobacillus bulgaricus，LB）和植物乳桿菌（Lactobacillus plantarum，LP）增殖作用及在模擬人體胃腸道逆環(huán)境中的耐受能力影響，以觀測(cè)APRS是否有益生元潛力。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

桄榔粉，廣西龍州農(nóng)業(yè)推廣中心；酪蛋白胨，上海源葉生物科技有限公司；瓊脂粉，上海源葉生物科技有限公司；牛肉粉、酵母粉、牛膽酸鈉、胃蛋白酶、胰蛋白酶，索萊寶科技有限公司；檸檬酸氫二銨、吐溫-80、磷酸氫二鉀、MgSO4·7H2O、MnSO4·H2O、碳酸鈣，廣西南寧楚杰生物科技有限公司；乙酸鈉、葡萄糖，廣西南寧沁田生物科技有限公司。普魯蘭酶（2000 u/mL），美國(guó)Sigma公司；α-淀粉酶（10 u/mg），Solarbio Bio-Technology Co.Ltd.；葡糖淀粉酶（100 u/mg），Doulai Bio Technology Co.Ltd.。

1.2 儀器與設(shè)備

SW-CJ-2F潔凈工作臺(tái)，蘇凈集團(tuán)蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司；G180TW高壓滅菌鍋，寧波甬安醫(yī)療器械制造有限公司；LRH-250-Z振蕩培養(yǎng)箱，廣東省醫(yī)療器械廠；CR21N超速離心機(jī)，天美（中國(guó)）科學(xué)儀器有限公司；JJ300Y電子天平，上海仁沃實(shí)業(yè)發(fā)展有限公司；722可見分光光度計(jì)，上海儀電分析儀器有限公司；TL-18M 臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)，上海市離心機(jī)械研究所有限公司。

1.3 供試菌種

保加利亞乳桿菌（Lactobacillus bulgaricus，LB），北京川秀科技有限公司；植物乳桿菌（Lactobacillus plantarum，LP），中國(guó)普通微生物菌種保藏管理中心（CGMCC，1.2469）。

1.4 試驗(yàn)方法

1.4.1 桄榔抗性淀粉的制備

根據(jù)實(shí)驗(yàn)室前期報(bào)道的方法[15]制備APRS：

淀粉乳→水浴糊化→普魯蘭酶酶解→滅酶→超聲波處理→冷藏→洗滌，離心→干燥→粉碎，過篩→抗性淀粉

對(duì)桄榔淀粉進(jìn)行稱重，并與醋酸鈉緩沖液（pH 4.5）混合，配制8%的淀粉乳液。沸水浴中糊化并持續(xù)攪拌30 min，然后冷卻至適宜溫度；加入普魯蘭酶（普魯蘭酶添加量3.74×103U/g）酶解14.3 h，沸水浴10 min滅酶，滅酶后40 ℃水浴超聲處理36 h（功率定為120 W），加入乙醇（醇:水=9:1V/V）于4 ℃回生24 h，取出后離心，于70 ℃干燥24 h，用粉碎機(jī)粉碎后過篩，制得最高含量的抗性淀粉，置于干燥器中保藏。

1.4.2 培養(yǎng)基配置

MRS基礎(chǔ)培養(yǎng)基配方：蛋白胨，10 g；牛肉粉，10 g；酵母粉，5.0 g；葡萄糖，5.0 g；乙酸鈉，5.0 g；檸檬酸氫二銨，2.0 g；吐溫-80 1.0 mL；磷酸氫二鉀，2.0 g；MgSO4·7H2O，0.2 g；MnSO4·H2O，0.05 g；碳酸鈣，0.5 g；瓊脂，13 g；蒸餾水，1000 mL；pH 6.8。PBS緩沖液（1 L）：氯化鈉，8 g；氯化鉀，0.2 g；磷酸氫二鈉，1.44 g；磷酸二氫鉀，0.24 g；pH 7.4，定容至1 L。試驗(yàn)培養(yǎng)基及配方：以不同濃度（0.1%、0.2%、0.5%、1%、1.5%）的 APRS粉替代葡萄糖作為碳源配制而成，其他成分與基礎(chǔ)培養(yǎng)基相同。

1.4.3 菌種活化

在無菌室內(nèi)，將接種環(huán)滅菌后，在 MRS固體培養(yǎng)基上蘸取凍存管中的菌液進(jìn)行劃線，37 ℃厭氧培養(yǎng)48 h，挑取菌落在10 mL MRS液體培養(yǎng)基中37 ℃厭氧培養(yǎng)24 h，菌液1 mL接種到25 mL已滅菌的MRS培養(yǎng)基中，37 ℃厭氧培養(yǎng)48 h，活化2次后得到第3代菌種，用30%甘油以1:1比例放在凍存管中，之后將凍存管放入-80 ℃冰箱凍存菌種備用。保加利亞乳桿菌的活化方法同植物乳桿菌。保加利亞乳桿菌的活化方法與植物乳桿菌相同。

1.4.4 菌懸液制備方法

吸取等體積培養(yǎng)后的液體培養(yǎng)基以3000 r/min離心15 min，去除上清液。用去離子水洗滌沉淀菌體2次后移至無菌試管，去離子水定容至15 mL，螺旋振蕩器充分振蕩試管20 s，制成菌體懸液。

1.4.5 不同濃度的APRS對(duì)LP和LB增殖作用的影響

取60個(gè)25 mL的厭氧管，分別配制25 mL葡萄糖基礎(chǔ)培養(yǎng)基和APRS的試驗(yàn)培養(yǎng)基，碳源濃度分別為：0.1%、0.2%、0.5%、1.0%、1.5%，121 ℃滅菌20 min，冷卻至室溫，用移液槍給每根厭氧管移入1 mL經(jīng) 3次活化后的植物乳桿菌和保加利亞乳桿菌菌懸液，37 ℃厭氧培養(yǎng)48 h后，在600 nm處測(cè)定各培養(yǎng)基的吸光值，每組3個(gè)重復(fù)。

1.4.6 APRS對(duì)LP和LB生長(zhǎng)過程的影響

根據(jù)不同濃度的APRS對(duì)乳酸菌增殖結(jié)果，選擇基礎(chǔ)培養(yǎng)基和試驗(yàn)培養(yǎng)基中增殖效果最明顯的碳源濃度，分別配制最適濃度的基礎(chǔ)培養(yǎng)基和試驗(yàn)培養(yǎng)基，121 ℃滅菌20 min。取活化后的植物乳桿菌和保加利亞乳桿菌菌懸液1 mL分別接種到25 mL基礎(chǔ)培養(yǎng)基和試驗(yàn)培養(yǎng)基中，37 ℃厭氧培養(yǎng)48 h。分別以不添加菌液的基礎(chǔ)培養(yǎng)基和試驗(yàn)培養(yǎng)基為空白，于0、2、4、6、8、10、12、14、16、20、24、28、32 h 取少量菌液測(cè)定600 nm處的吸光度值，每組設(shè)3次重復(fù)。以培養(yǎng)時(shí)間為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，分別繪制LP和LB的生長(zhǎng)曲線。

1.4.7 APRS對(duì)乳酸菌在模擬胃腸道逆環(huán)境中耐受性的影響

1.4.7.1 耐膽汁酸鹽試驗(yàn)

配制基礎(chǔ)培養(yǎng)基活化凍存的菌種，48 h后取出分裝在無菌的離心管中，8000 r/min離心10 min去除上清液待用。用磷酸鹽緩沖溶液調(diào)試驗(yàn)培養(yǎng)基pH至7.0，分別加入0.3%、1%、2%的牛膽酸鈉，121 ℃滅菌20 min，分別添加到待用的菌體離心管中。37 ℃厭氧培養(yǎng)，分別培養(yǎng)0、12 h后取樣稀釋涂布在無菌平皿中，測(cè)定活菌數(shù)。

1.4.7.2 耐酸性試驗(yàn)

配制基礎(chǔ)培養(yǎng)基活化凍存的菌種，48 h后取出分裝在無菌的離心管中，8000 r/min離心10 min去除上清液待用。分別用37%鹽酸溶液調(diào)試驗(yàn)培養(yǎng)基pH至1.5、2.5、3.0，121 ℃滅菌20 min，分別添加到待用的菌體離心管中。37 ℃厭氧培養(yǎng)，分別培養(yǎng) 0、3 h后取樣稀釋涂布在無菌平皿中，測(cè)定活菌數(shù)。

1.4.7.3 模擬胃腸道試驗(yàn)

配制基礎(chǔ)培養(yǎng)基活化凍存的菌種，48 h后取出分裝在無菌的離心管中，8000 r/min離心10 min去除上清液待用。用37%鹽酸溶液調(diào)試驗(yàn)培養(yǎng)基pH至3.0，121 ℃滅菌20 min后加入0.5%經(jīng)紫外線滅菌處理60 min的胃蛋白酶作為模擬胃液，充分混勻后分別添加到待用的菌體離心管中。37 ℃厭氧培養(yǎng)，分別培養(yǎng)0、3 h后取樣稀釋涂布在無菌平皿中，測(cè)定活菌數(shù)。

配制基礎(chǔ)培養(yǎng)基活化凍存的菌種，48 h后取出分裝在無菌的離心管中，8000 r/min離心10 min去除上清液待用。用磷酸鹽緩沖液調(diào)試驗(yàn)培養(yǎng)基pH至7.0，121 ℃滅菌20 min后加入1.0%經(jīng)紫外線滅菌處理60 min的胰蛋白酶作為模擬腸液，充分混勻后分別添加到待用的菌體離心管中。37 ℃厭氧培養(yǎng)，分別培養(yǎng)0、3 h后取樣稀釋涂布在無菌平皿中，測(cè)定活菌數(shù)。

1.4.7.4 LP和LB存活率

梯度稀釋后，用移液槍取100 μL菌液涂布在培養(yǎng)皿中，37 ℃條件下厭氧培養(yǎng) 48 h，選擇菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。菌落總數(shù)的計(jì)算方法是：計(jì)算兩個(gè)平板上菌落總數(shù)的平均值，再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)，即每g（mL）樣品中菌落總數(shù)。菌種存活率計(jì)算公式：

式中：

N1——處理后的活菌數(shù)，cfu/mL；

N0——初始活菌數(shù)，cfu/mL。

1.5 統(tǒng)計(jì)方法

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS進(jìn)行顯著性分析，采用Origin pro 9.1對(duì)數(shù)據(jù)作圖。

2 結(jié)果與討論

2.1 APRS對(duì)LP和LB增殖作用的影響

碳源濃度對(duì)菌體生長(zhǎng)狀況起著決定性的作用，菌液的吸光度值可作為檢測(cè)細(xì)菌增殖的指標(biāo)[16]。從圖1a可以看出，APRS濃度為0.5%時(shí)，LP的OD達(dá)到最大值為0.94；葡萄糖（Glucose，GLU）濃度為1%時(shí)，OD最大值為1.29。從圖1b可以看出，APRS濃度為0.2%時(shí)，LB的OD達(dá)到最大值為0.91；葡萄糖濃度為1%時(shí)，OD最大值為1.39。

在碳源濃度為0.5%時(shí)，與GLU相比，APRS為碳源的培養(yǎng)基中的LP的OD值達(dá)到了該培養(yǎng)基下的最高值在0.2%時(shí)，APRS為碳源的培養(yǎng)基中的LB的OD值最高，且均大于同等濃度GLU碳源下的LP和LB的OD值。表明APRS對(duì)LP和LB生長(zhǎng)的影響在低濃度下的增殖效果更佳。當(dāng)各碳源濃度大于5%時(shí)，GLU碳源的OD值大于APRS的OD值，且隨著APRS濃度的增加，目標(biāo)菌液的OD值逐漸下降。表明高濃度的APRS對(duì)LP和LB的生長(zhǎng)有抑制作用。劉樹興等[17]發(fā)現(xiàn)當(dāng)回生型抗性淀粉（RS3）的濃度達(dá)到1%時(shí)，以RS3為碳源的培養(yǎng)基中LB的OD值最大為1.77，RS3濃度為2%時(shí)，嗜酸乳桿菌OD達(dá)到最大值1.99，與GLU為碳源的培養(yǎng)基對(duì)比可知，RS3的增殖作用最為突出，但隨著RS3濃度的增大，菌體數(shù)量呈先增大后減小的趨勢(shì)。與本實(shí)驗(yàn)的對(duì)比結(jié)果及趨勢(shì)相一致，不同點(diǎn)在于兩個(gè)實(shí)驗(yàn)的碳源濃度即抗性淀粉的濃度不同。推測(cè)原因可能是LB和LP利用APRS產(chǎn)生了乙酸等短鏈脂肪酸，對(duì)菌體的生長(zhǎng)產(chǎn)生了一定程度的抑制作用；而不同的抗性淀粉制備方式使兩個(gè)實(shí)驗(yàn)的原料必然存在一定的結(jié)構(gòu)等差異，有可能是造成二者在不同的抗性淀粉濃度下出現(xiàn)相似趨勢(shì)的原因。

2.2 APRS對(duì)LP和LB生長(zhǎng)過程的影響

從圖2可看出，LP和LB在兩種碳源的培養(yǎng)基中有4 h的生長(zhǎng)遲滯期，這段時(shí)間內(nèi)菌體數(shù)量沒有發(fā)生顯著變化。4 h后乳桿菌進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，12 h后進(jìn)入穩(wěn)定生長(zhǎng)期，菌體數(shù)量不再發(fā)生明顯變化，該實(shí)驗(yàn)結(jié)果與邢海楠[18]報(bào)道的結(jié)論相似。LP和LB在APRS的培養(yǎng)基中的OD值整體高于GLU培養(yǎng)基，LP和LB在APRS培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)速率較快，菌體數(shù)量比較高，即APRS促LP和LB能力強(qiáng)于葡萄糖培養(yǎng)基，且對(duì)乳酸菌的生長(zhǎng)具有顯著的促進(jìn)作用。其他研究表明蓮子、綠豆、馬鈴薯、錐栗和板栗抗性淀粉對(duì)乳酸桿菌也具有促進(jìn)作用[8，17，19]。LP和LB都屬于乳酸桿菌，在APRS培養(yǎng)基發(fā)酵12 h左右后乳酸桿菌數(shù)量已經(jīng)趨于穩(wěn)定，而在謝濤等[19]研究發(fā)現(xiàn)乳酸桿菌的最大增值在 20 h左右出現(xiàn)。穩(wěn)定生長(zhǎng)期的不同可能與菌種的不同而產(chǎn)生差異，而最大增值的差異可能與不同原料來源的抗性淀粉的表面溝壑結(jié)構(gòu)有關(guān)。

2.3 APRS對(duì)LP和LB在模擬胃腸道環(huán)境中耐受性的影響

LP和LB生長(zhǎng)曲線結(jié)果表明APRS在非逆環(huán)境培養(yǎng)基中對(duì)乳酸菌的增殖具有顯著影響，但益生菌在腸道內(nèi)的生長(zhǎng)狀況還受胃腸道環(huán)境各因素的影響，故通過體外模擬胃腸道逆環(huán)境，以葡萄糖為對(duì)照，分別研究APRS對(duì)乳酸菌抗膽汁酸鹽以及模擬胃腸液中耐受性的影響。

2.3.1 APRS對(duì)LP和LB抗膽汁酸鹽耐受性的影響

益生菌在小腸中需要耐受住高滲透環(huán)境而存活，人體的小腸高滲透環(huán)境主要是由膽汁酸鹽造成的，成人正常小腸的膽汁濃度為0.03%～0.30%[20]。由表1可得，對(duì)比兩種不同碳源的培養(yǎng)基中兩種乳酸菌的存活率，碳源為APRS的培養(yǎng)基顯著高于以葡萄糖為碳源的培養(yǎng)基。當(dāng)膽汁酸鹽濃度為0.3%時(shí)，菌體存活率保持在80%以上，且乳酸菌在APRS的培養(yǎng)基中存活率高于葡萄糖且差異顯著（p＜0.05）。隨著膽汁酸鹽濃度增加，LP和LB在1%膽汁酸鹽環(huán)境中菌落總數(shù)有所減少，但仍然能維持在50%以上，LB的存活率略高，抗逆性較強(qiáng)[21]?？梢钥闯鯝PRS對(duì)LB和LP的耐膽酸鹽、低pH的耐受性效果良好。當(dāng)膽汁酸鹽濃度為2%時(shí)，菌體存活率急劇下降，LB在葡萄糖培養(yǎng)基中已經(jīng)無法檢出。劉樹興等[8，17]發(fā)現(xiàn)嗜酸乳桿菌、保加利亞乳桿菌在 0.5%膽汁酸鹽環(huán)境下生長(zhǎng)茂盛；2%膽汁酸鹽環(huán)境條件下無LB檢出也與林珊的結(jié)果相符。這可能是因?yàn)闃O端的酸環(huán)境并且作用時(shí)間較長(zhǎng)，導(dǎo)致乳酸菌的黏附作用被破壞，使得乳酸菌無法受到APRS的保護(hù)，改變了菌體外膜的通透性，對(duì)菌體生長(zhǎng)存活產(chǎn)生一系列的抑制作用，導(dǎo)致乳酸菌存活率下降[22，23]。

表1 LP和LB在含膽汁酸鹽的不同碳源培養(yǎng)基中的存活率/%Table 1 Survival rate of LP and LB in different carbon source mediums containing bile salts

2.3.2 APRS對(duì)LP和LB耐酸性的影響

胃酸的 pH會(huì)根據(jù)人進(jìn)食時(shí)間和所食食物的種類等因素變化，一般波動(dòng)幅度在1.5～4.5之間。由表2可知，當(dāng)培養(yǎng)基pH為3.0時(shí)，兩種菌生長(zhǎng)良好，在APRS培養(yǎng)基中的活菌數(shù)均高于葡萄糖培養(yǎng)基且差異性均顯著（p＜0.05），并且保加利亞乳桿菌和植物乳桿菌在各組培養(yǎng)基中存活率均在70%以上，表明APRS可增強(qiáng)兩種益生菌在低pH環(huán)境中的耐受性。當(dāng)培養(yǎng)基pH為2.5和1.5時(shí)，培養(yǎng)3 h后在APRS和葡萄糖為碳源的培養(yǎng)基中無法檢驗(yàn)出存活的乳酸菌，且差異性均顯著（p＜0.05），說明過低的pH對(duì)于LP和LB的生長(zhǎng)有嚴(yán)重的抑制作用。這與仝千秋[24]的在pH為2.0條件下無LB存活的實(shí)驗(yàn)結(jié)果相符。對(duì)比玉米抗性淀粉的體外發(fā)酵結(jié)果可知，在同等pH值下，抗性淀粉培養(yǎng)基中的菌種數(shù)目和生長(zhǎng)速率均高于GLU培養(yǎng)基，pH 3.0時(shí)的生長(zhǎng)速度高于pH 2.0時(shí)的生長(zhǎng)速度，且嗜酸乳桿菌的生長(zhǎng)優(yōu)勢(shì)最為突出[17]。綜上所述，APRS對(duì)LP和LB低pH耐受性較葡萄糖好，原因可能與APRS表面溝壑狀結(jié)構(gòu)為乳酸菌提供保護(hù)有關(guān)[8，17]。

表2 LP和LB在低pH值不同碳源培養(yǎng)基中的存活率/%Table 2 Survival rate of LP and LB in different carbon source medium at low pH

2.3.3 APRS對(duì)LP和LB抗模擬胃腸液耐受性的影響

APRS對(duì)LP和LB模擬胃腸液耐受性的影響結(jié)果見表3所示。由表3可知，在胃蛋白酶環(huán)境下，以APRS為碳源的培養(yǎng)基中培養(yǎng)3 h后，LP和LB的存活率與葡萄糖相比差異顯著且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＜0.05），表明桄榔 APRS可以增強(qiáng)乳酸菌模擬胃液耐受性的能力。而經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，蓮子抗性淀粉對(duì)嗜酸乳桿菌、德氏乳桿菌胃腸液耐受性無顯著影響，這可能與菌種的不同有關(guān)[8]。在模擬胰液環(huán)境下培養(yǎng)，以APRS為碳源的培養(yǎng)基中培養(yǎng)3 h后LP和LB的存活率與葡萄糖相比無明顯差異（p＞0.05），這與劉樹興等人[17]的實(shí)驗(yàn)結(jié)果相一致，可能是因?yàn)橐鹊鞍酌附档土薒P和LB對(duì)桄榔APRS的黏附作用，使益生菌暴露在腸液環(huán)境中，無法受到 APRS 特殊結(jié)構(gòu)的保護(hù)[16，25，26]。

表3 LP和LB在含模擬胃腸液的不同碳源培養(yǎng)基中的存活率/%Table 3 Survival rate of LP and LB in different carbon source mediums containing simulated gastrointestinal fluid

3 結(jié)論

隨著APRS濃度增加，LP和LB液濃度先稍微增大然后顯著降低；低濃度下APRS可促進(jìn)LB和LP的生長(zhǎng)且增殖效果優(yōu)于葡萄糖，但高濃度（1%～1.5%）不利于LB和LP的生長(zhǎng)；APRS可顯著增強(qiáng)LB和LP耐酸性環(huán)境、高濃度膽汁酸鹽以及胃液逆環(huán)境（p＜0.05）。APRS提高乳酸菌模擬腸液耐受性的能力與葡萄糖對(duì)比無差異，表明桄榔APRS可能具有較好的耐消化特性。因此，APRS具有潛在的益生元作用可為其進(jìn)一步開發(fā)提供理論參考。