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    大豆異黃酮復合軟膠囊的免疫增強作用及安全性評價

    2022-03-07 07:00:36劉靈王萌宋自娟單媛媛
    現代食品科技 2022年2期
    關鍵詞:軟膠囊異黃酮大豆

    劉靈,王萌,宋自娟,單媛媛*

    (1.西北農林科技大學食品科學與工程學院,陜西 楊凌 712100)(2.陜西華州醫(yī)藥生物工程有限公司,陜西 西安 710054)

    大豆異黃酮是大豆自然生長過程中生成的一種與雌激素結構相似的多酚類次生物,營養(yǎng)價值豐富,對機體蛋白質代謝、激素合成、細胞生長等方面都能產生一定程度的影響[1]。大豆異黃酮具有抗氧化損傷[2,3]、抗炎[4]、免疫調節(jié)[5]等作用,在食品、醫(yī)療、飼料等領域均有十分廣闊的研究及應用前景[6]。例如,大豆異黃酮可用于改善心血管疾病[7]、骨質疏松[8]、阿爾茲海默癥[9],以及煩躁、失眠等婦女更年期綜合征[10],還可以預防子宮內膜癌[11]、乳腺癌[12]、肝癌[13]等癌癥的發(fā)生。此外,在快節(jié)奏的現代生活中,免疫力低下的亞健康人群逐漸增多,大豆異黃酮在提高機體免疫功能方面的活性也逐漸受到研究者的關注,已有文獻證明,大豆異黃酮可以促進細胞因子、特異性抗原等免疫分子的釋放[14,15],增強淋巴細胞等免疫細胞的活性[16],調節(jié)胸腺等免疫器官的功能[17]。

    但是,作為一種多酚類化合物,大豆異黃酮對環(huán)境較為敏感,在光照、高溫等條件下極易發(fā)生氧化、聚合等反應,從而喪失生物活性[18]。采用軟膠囊對多酚類物質進行包埋是提高其穩(wěn)定性和加工適用性的重要手段。本研究團隊前期以明膠和甘油為主要壁材,對苷元型大豆異黃酮進行了有效的包埋,制備了大豆異黃酮苷元復合軟膠囊。目前,有關大豆異黃酮的免疫性能評價已經比較全面,但是關于膠囊化后的大豆異黃酮的研究更多集中在醫(yī)療功能上[19,20],對于其是否保留了增強免疫力的能力尚不清楚。同時,袁根良等[21]、李力[22]等研究的大豆異黃酮復合膠囊雖已被證明無毒,但本研究所制備的大豆異黃酮復合軟膠囊的有效成分及含量均有所不同,其潛在的安全性仍需進行系統(tǒng)的試驗分析。因此,本研究依據《保健食品檢驗與評價技術規(guī)范》[23],對以大豆異黃酮、大豆油、蜂蠟為芯材,以明膠、甘油、純化水、焦糖色、二氧化鈦為壁材制備的大豆異黃酮復合軟膠囊進行系統(tǒng)的提高免疫功能研究及安全性評價,以期為大豆異黃酮復合軟膠囊的合理安全應用提供科學的數據支持。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    1.1.1 試驗材料

    大豆異黃酮復合軟膠囊,自制,其標志性成分及含量為:大豆異黃酮2.20%、大豆苷0.55%、染料木苷0.70%、大豆苷元0.35%、染料木素0.60%。

    1.1.2 實驗動物

    SPF級SD大鼠和昆明種小鼠(200只雌性小鼠用于免疫功能評價試驗,其余均用于安全性試驗),由西安交通大學醫(yī)學院實驗動物中心提供,生產許可證號為:SCXK(陜)2018-001,動物飼料、墊料均由西安交通大學醫(yī)學院實驗動物中心提供。試驗動物房為屏障系統(tǒng),使用許可證號為 SYXK(陜)2018-009,溫度20~25 ℃,相對濕度45%~65%。

    1.1.3 主要試劑

    生化試劑盒,深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司;血細胞分析試劑盒、環(huán)磷酰胺、敵克松、疊氮化鈉、1,8-二羥基蒽醌、2-氨基芴,上海一基實業(yè)有限公同;TA97、TA98、TA100、TA102四種菌株,上海北諾生物科技有限公司購自Molecular Toxicology公司。

    1.2 方法

    1.2.1 免疫功能評價試驗

    (1)動物分組與給藥

    將 200只雌性小鼠隨機分為五大組,每大組 40只,每一大組再隨機分為4小組,每小組10只。第1大組用于ConA誘導的小鼠脾淋巴細胞轉化試驗、NK細胞活性測定;第2大組用于遲發(fā)型變態(tài)反應(DTH)測定、淋巴器官/體重比值測定;第3大組用于抗體生成細胞(PFC)檢測、血清溶血素測定;第4大組用于碳廓清試驗;第5大組用于腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞試驗。設置1000、670、340 mg/kg·bw三個高、中、低劑量組,分別相當于人體推薦用量的30、20、10倍。大豆異黃酮復合軟膠囊各所需濃度均用大豆油進行配置,受試鼠每日經口灌胃一次,連續(xù)30 d,陰性對照組給予等量大豆油。試驗完成后稱重并處死小鼠,取出胸腺和脾臟,稱重并計算臟器/體重比。

    (2)細胞免疫試驗

    DTH測定:于第26 d,先后用0.2 mL、20 μL 2%(V/V)SRBC間隔4 d對小鼠進行致敏和攻擊。于攻擊前、后24 h分別測量每只動物左后足跖部位厚度,每個部位測三次,計算足跖厚度差值。

    ConA誘導的小鼠脾淋巴細胞轉化試驗(MTT法):取出脾臟,研磨、洗滌,用RPMI1640培養(yǎng)液調整細胞濃度為3×106cells/mL,參照劉穎芬等[24]的試驗方法將其加入24孔培養(yǎng)板中,之后將其置于37 ℃孵育箱(5% CO2)中孵育72 h,于第68 h時,從每孔中吸出上清液0.7 mL,隨即加入與吸出上清液同體積的RPMI1640培養(yǎng)液和50 μL MTT(5 mg/mL),繼續(xù)孵育至結束,每孔加入1 mL酸性(CH3)2CHOH,溶解混勻,在570 nm波長下測定光密度值。

    (3)體液免疫實驗

    PFC檢測:將0.2 mL 2%(V/V)的SRBC注射進每只小鼠的腹腔內,免疫4 d后處死取脾,研磨、洗滌,同小鼠脾淋巴細胞轉化試驗中的方法調整細胞濃度為5×106個/mL。參照劉穎芬等[24]的PFC檢測方法處理細胞液,最后取得溶血空斑數數值。

    血清溶血素的測定:第26 d,四天的免疫方法同PFC檢測中所用的方法,之后摘眼球取血,分離血清并倍比稀釋,將100 μL不同稀釋度的血清、100 μL 0.5%(V/V)的SRBC懸液先后置于微量血凝板的每孔內,充分混合均勻,置于平盤內,放入37 ℃恒溫箱中培養(yǎng)3 h后進行血清溶血素的測定。

    (4)單核-巨噬細胞功能測定

    小鼠碳廓清試驗:給各組受試動物尾靜脈注射印度墨汁10 mL/kg·bw,分別于第2、10 min采取20 μL靜脈血,隨后將其與2 mL 0.1% NaHCO3溶液充分混合均勻,空白對照組采用NaHCO3溶液。設置紫外分光光度計波長為600 nm,測定并記錄光密度值(OD),將處死小鼠后所取的肝臟和脾臟別稱重,按照公式計算吞噬指數。

    式中:

    OD1——血樣在2 min時測定的光密度;

    OD2——血樣在10 min時測定的光密度。

    小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞試驗:每只小鼠腹腔注射1 mL 20%(V/V)雞紅細胞懸液,間隔30 min處死,腹腔注射 2 mL生理鹽水。吸腹腔洗液涂片,37 ℃下培養(yǎng)30 min,固定,Giemsa染色。記錄100個巨噬細胞中吞噬雞紅細胞數和巨噬細胞吞噬的雞紅細胞總數及其被消化的程度。

    (5)NK細胞活性測定

    按照劉穎芬等[24]的研究中的NK細胞活性測定方法進行測定大部分處理,最后在490 nm處測定光密度值(OD)。NK細胞活性計算公式如下:

    1.2.2 安全性評價試驗

    (1)大鼠急性毒性試驗

    參照《保健食品檢驗與評價技技規(guī)范》的試驗方法[23]。取雌雄各半的SD大鼠20只,以最大耐受劑量(MTD)19.76 g/kg·bw(相當于人體推薦量的 593.4倍)的劑量經口灌胃,記錄14 d內受試大鼠出現的的表現、行為異常等中毒癥狀和死亡情況,分別在1 d、7 d、14 d給受試動物稱重,隨后處死動物并進行大致解剖,觀察肝、腎、脾、心、肺等臟器的變化情況。

    (2)遺傳毒性試驗

    Ames試驗:采用平板摻入法,體外代謝活化系統(tǒng)選用多氯聯苯誘導的大鼠肝微粒體酶(S-9),菌株為 TA97、TA98、TA100、TA102四種,大豆異黃酮復合軟膠囊試驗時用 DMSO配制成所需濃度。設置5000、1000、200、40、8 μg/皿五個劑量組,另外設置溶劑對照組(DMSO)、自發(fā)回變組、陽性對照組。計數回變菌落數。

    小鼠骨髓細胞微核試驗:采用30 h給樣品法,設置10.0、5.0、2.5 g/kg·bw三個劑量組,另設溶劑對照組(大豆油)及環(huán)磷酰胺陽性對照組(CP,40 mg/kg·bw)。經口灌胃,第一次灌胃24 h后再次給樣,6 h后處死動物并取股骨骨髓制片。每只動物統(tǒng)計1000個嗜多染紅細胞(PCE)中的微核細胞數,計算干分率,計數 200個嗜多染紅細胞,計算嗜多染紅細胞/成熟紅細胞(PCE/NCE)的值。

    小鼠精子畸形試驗:設置10.0、5.0、2.5 g/kg·bw三個劑量組,另設溶劑對照組及CP(40 mg/kg·bw)陽性對照組,連續(xù)經口灌胃5 d,每日一次,對照組給樣等量大豆油。初次灌胃35 d后,處死小鼠并取雙側附睪制片,記錄1000條完整精子的畸形數、畸形類型,計算畸形率。

    (3)常規(guī)臨床指標測定

    設3.33、1.67、0.84 g/kg·bw(分別相當于人體推薦用量100、50、25倍)三個劑量組,另設溶劑對照組。連續(xù)灌胃30 d,每日觀察動物的生長發(fā)育狀況,注重觀察中毒癥狀,每周稱量一次受試鼠體重和記錄一次二次食物攝入量。試驗末期,將大鼠禁食16 h,空腹稱重后采血并處死,測定血液學指標、血液生化學指標,解剖動物觀察內臟,稱肝、腎、脾、睪丸(卵巢)濕重值并做組織病理學檢查,計算臟器/體重比值。

    1.3 數據處理與結果判定

    免疫力評價實驗均采用方差分析,小鼠骨髓細胞微核試驗采用卡方檢驗,小鼠精子畸形試驗釆用秩和檢驗。依據文獻[23]中的標準判斷,細胞免疫功能檢測、體液免疫功能檢測、單核-巨噬細胞功能檢測、NK細胞活性檢測4個方面任何2個方面的結果為陽性,即可判定該受試樣品能夠增強免疫力。

    2 結果與討論

    2.1 大豆異黃酮復合軟膠囊對小鼠免疫功能的影響

    2.1.1 大豆異黃酮復合軟膠囊對小鼠體重和臟器比值的影響

    胸腺和脾臟在機體免疫中貢獻了免疫場所和免疫細胞,發(fā)揮了十分重要的免疫作用,免疫學中常用其重量變化來評價受試物對動物免疫功能造成的影響[16,25]。大豆異黃酮復合軟膠囊對小鼠體重和臟器比值的影響如表1所示,各劑量組的小鼠各時期體重及增重與陰性對照組相比,差異不顯著(p>0.05),各劑量組與陰性對照組的小鼠臟器/體重比值維持在同一水平,差異無統(tǒng)計學意義(p>0.05)。表明大豆異黃酮復合軟膠囊對小鼠體重、臟器/體重比值無顯著影響,不能通過增加免疫器官重量來增強免疫力。

    表1 受試物對小鼠體重的影響Table 1 Effect of test substance on body weight of mice (±s)

    表1 受試物對小鼠體重的影響Table 1 Effect of test substance on body weight of mice (±s)

    注:與陰性對照組比較p>0.05。表2同。

    組別 劑量/(g/kg·bw) 動物數/只 初始重/g 中期重/g 末期重/g 增重/g 胸腺/體重(×10-3) p 值 脾臟/體重(×10-3) p 值高劑量 1.00 10 19.90±1.40 26.20±2.00 34.00+2.40 14.10±2.60 2.40±0.50 0.91 3.88±0.60 0.38中劑量 0.67 10 19.40±1.30 27.90±2.10 34.20±2.70 14.80±2.80 2.15±0.52 0.88 3.61±0.46 1.00低劑量 0.34 10 19.40±1.10 27.90±2.20 34.50±3.40 15.10±3.30 2.24±0.36 1.00 3.51±0.32 0.93陰性對照 - 10 20.00±1.60 27.50±2.10 34.90±2.70 14.90±3.00 2.28±0.52 - 3.60±0.37 -

    2.1.2 大豆異黃酮復合軟膠囊對細胞免疫和體液免疫功能影響

    以DTH和ConA誘導的小鼠脾淋巴細胞轉化能力試驗為指標,評價大豆異黃酮復合軟膠囊對細胞免疫功能的影響;以PFC和血清溶血素水平為指標評估大豆異黃酮復合軟膠囊對體液免疫功能的影響,結果如圖1所示。如圖1a所示,高劑量組SRBC誘導DTH左后足跖厚度差為0.79 mm,相對于對照組,提升了34.87%,提升效果顯著(p<0.05)。如圖1b所示,高劑量組的淋巴細胞增殖 OD差達到 0.17,相對于對照組,增長了36.07%,增長效果顯著(p<0.05)。說明大豆異黃酮復合軟膠囊可以顯著誘發(fā)DTH、提高小鼠脾淋巴細胞轉化能力,增強小鼠細胞免疫功能,結果與郭智慧[16]的研究結果一致。如圖1c所示,與陰性對照組相比,高劑量組溶血空斑數顯著增長(p<0.05),增長效果為 15.85%。如圖1d所示,相對于陰性對照組,中劑量組小鼠的血清溶血素水平有顯著提升(p<0.05),高劑量組有極顯著提升(p<0.01),提升效果分別為9.98%、12.66%。表明大豆異黃酮復合軟膠囊能顯著增加小鼠PFC數量、提高小鼠血清溶血素水平,增強小鼠體液免疫功能。

    2.1.3 大豆異黃酮復合軟膠囊對小鼠單核-巨噬細胞功能和NK細胞活性的影響

    碳廓清試驗、受試物腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞試驗和NK細胞活性試驗的結果如表2所示。巨噬細胞和NK細胞均是非特異性免疫細胞,前者主要發(fā)揮吞噬作用,后者直接殺傷靶細胞,因此前者的吞噬能力及后者的活性可以評價機體的免疫功能[16,26,27]。由表2可見,相較于與陰性對照組,各劑量組小鼠的吞噬指數、雞紅細胞吞噬率及吞噬指數有一定程度的提升,但提升效果無統(tǒng)計學意義(p>0.05)。說明大豆異黃酮復合軟膠囊不能顯著提高小鼠的碳廓清能力,無法增強小鼠的巨噬細胞吞噬功能。各劑量組小鼠 NK細胞活性與陰性對照組相比較,均無顯著差異(p>0.05)。表明大豆異黃酮復合軟膠囊不能顯著提高小鼠NK細胞活性。

    表2 受試物對小鼠腹腔巨噬細胞吞噬功能及NK細胞活性的影響Table 2 Effect of test substance on phagocytosis and NK cell activity of peritoneal macrophages in mice (±s)

    表2 受試物對小鼠腹腔巨噬細胞吞噬功能及NK細胞活性的影響Table 2 Effect of test substance on phagocytosis and NK cell activity of peritoneal macrophages in mice (±s)

    組別 劑量/(g/kg·bw) 吞噬指數a p值 吞噬百率/% p值 吞噬指數b p值 NK細胞活性/% p值高劑量 1.00 5.60±1.02 0.56 34.10±6.20 0.70 0.82±0.08 0.59 30.49±7.61 0.86中劑量 0.67 5.48±1.11 0.76 33.80±5.30 0.78 0.82±0.70 0.53 30.30±5.98 0.90低劑量 0.34 5.29±0.95 0.97 33.70±3.80 0.81 0.80±0.07 0.84 30.80±6.61 0.80陰性對照 - 5.15±0.52 - 32.00±5.20 - 0.78±0.07 - 28.62±5.87 -

    2.2 大豆異黃酮復合軟膠囊安全性評價結果

    2.2.1 大鼠急性毒性試驗結果

    大豆異黃酮復合軟膠囊對大鼠急性毒性試驗結果如表3所示。以19.76 g/kg·bw的劑量經口灌胃,14 d內,雌、雄大鼠體重均有所增長,未觀察到急性中毒癥狀及死亡現象。解剖后,觀察到小鼠肝、腎、脾、心、肺、胃、腸等主要臟器的均呈正常狀態(tài)。表明大豆異黃酮復合軟膠囊對大鼠急性毒性(MTD)大于19.76 g/kg·bw,參照急性毒性分級標準,急性毒性屬于無毒性等級。

    表3 大鼠急性毒性試驗結果Table 3 Results of acute toxicity test in rats (±s)

    表3 大鼠急性毒性試驗結果Table 3 Results of acute toxicity test in rats (±s)

    性別 動物數/只 劑量(MTD)/(g/kg·bw) 初始體重/g 第7 d體重/g 第14 d體重/g 出現中毒癥狀動物數/只 死亡數/只雌性 10 19.76 195.90±10.60 227.10±12.70 247.70±13.50 0 0雄性 10 19.76 199.20±10.80 242.10±13.90 272.70±15.00 0 0

    2.2.2 遺傳毒性試驗

    Ames試驗結果如表4所示,大豆異黃酮復合軟膠囊各劑量組在有、無S-9存在的條件下,回變菌落數均未超過自發(fā)回變菌落數的兩倍,且無劑量-反應關系,表明大豆異黃酮復合軟膠囊不會誘發(fā)菌株突變。

    表4 Ames試驗結果Table 4 Results of Ames test (±s)

    表4 Ames試驗結果Table 4 Results of Ames test (±s)

    注:以上結果為3個平皿的均值±標準差。

    劑量/(μg/皿) TA97 TA98-S-9 +S-9 -S-9 +S-9 5000 138.00±7.90 135.00±11.40 34.30±2.10 32.00±1.70 1000 134.30±10.10 135.00±9.80 36.70±2.50 35.30±1.50 200 137.70±9.00 137.70±11.20 35.00±3.60 36.30±1.50 40 137.00±10.80 135.00±8.00 35.30±3.50 34.70±2.50 8 139.30±8.60 135.30±9.00 34.30±2.50 36.00±3.00溶劑對照 135.30±9.10 138.70±11.00 34.70±2.10 34.30±3.10自發(fā)回變 134.30±8.60 142.00±7.90 36.00±2.00 37.30±1.50陽性照 2401.30±265.90 1758.70±143.40 1049.30±67.70 5588.00±330.60敵克松 2-AF 敵克松 2-AF 50.00 μg/皿 10.00 μg/皿 50.00 μg/皿 10.00 μg/皿劑量/(μg/皿) TA100 TA102-S-9 +S-9 -S-9 +S-9 5000 181.30±11.90 177.00±12.50 283.00±17.10 288.30±15.70 1000 188.70±11.00 183.70±13.70 281.70±16.000 285.70±15.40 200 182.30±14.20 191.70±13.70 276.3±12.70 276.30±17.80 40 186.30±12.10 179.30±13.80 291.00±16.70 286.30±16.10 8 190.00±12.10 182.70±11.00 289.70±12.30 286.70±17.60溶劑對照 179.00±14.20 186.30±14.40 285.70±16.00 288.30±13.70自發(fā)回變 180.00±13.70 181.30±11.00 286.70±15.30 283.70±17.20陽性照 2618.70±251.70 2678.70±221.60 833.30±66.30 909.30±86.20 NaN3 2-AF 敵克松 1,8-二羥基蒽酮1.50 μg/皿 10.00 μg/皿 50.00 μg/皿 50.00 μg/皿

    小鼠骨髓細胞微核試驗結果如表5所示,CP陽性對照組的微核率顯著高于溶劑對照組(p<0.01);各劑量組微核率與溶劑對照組相比較,均無顯著性差異(p>0.05);各劑量組的PCE/NCE值均在正常值范圍內,且各劑量組PCE值占紅細胞總數的比例均不少于溶劑對照組的20%。表明大豆異黃酮復合軟膠囊對小鼠骨髓細胞沒有致突變作用。

    表5 小鼠骨髓細胞微核試驗結果Table 5 Result of micronucleus test in mouse bone marrow cell (±s)

    表5 小鼠骨髓細胞微核試驗結果Table 5 Result of micronucleus test in mouse bone marrow cell (±s)

    注:與溶劑對照組比較,**表示p<0.01。

    性別 劑量/(g/kg·bw) 檢查PCE數/個 微核數/個 微核率/‰ (images/BZ_65_1640_393_1662_438.png±s) PCE/NCE 比值(images/BZ_65_1640_393_1662_438.png±s)雌10.0 5000 7 1.40±0.55 1000/926 1.08±0.07 5.0 5000 5 1.00±0.71 1000/928 1.08±0.08 2.5 5000 5 1.00±1.00 1000/919 1.09±0.06 0.0 5000 8 1.60±0.55 1000/918 1.10±0.09 CP(40 mg/kg·bw) 5000 108 21.60±2.61** 1000/1041 0.96±0.03雄10.0 5000 6 1.20±0.84 1000/930 1.08±0.04 5.0 5000 8 1.60±0.89 1000/938 1.07±0.08 2.5 5000 6 1.20±1.10 1000/926 1.09±0.09 0.0 5000 7 1.40±1.14 1000/929 1.08±0.07 CP(40 mg/kg·bw) 5000 112 22.40±2.70** 1000/1036 0.97±0.03

    小鼠精子畸形試驗如表6所示,CP陽性對照組精子畸形率極顯著高于溶劑對照組(p<0.01),各劑量組小鼠的精子畸形率與溶劑對照組比較,均無顯著性差異(p>0.05)。實驗中的精子畸形主要表現類型為無鉤、香蕉形、無定形。表明大豆異黃酮復合軟膠囊對小鼠精子無致畸性作用。

    表6 小鼠精子畸形試驗結果Table 6 Results of sperm malformation test in mice (±s)

    表6 小鼠精子畸形試驗結果Table 6 Results of sperm malformation test in mice (±s)

    注:與溶劑對照組比較,**表示p<0.01。

    劑量/(g/kg·bw) 動物數/只受檢精子數/條精子畸形類型 精子畸形數/條精子畸形率/%(images/BZ_65_1640_393_1662_438.png±s)無鉤 香蕉形 無定形 胖頭 尾折疊 雙頭 雙尾10.0 10 10000 19 21 118 5 0 0 0 163 1.63±0.32 5.0 10 10000 17 24 112 7 0 0 0 160 1.60±0.27 2.5 10 10000 17 23 109 5 0 0 0 154 1.54±0.23 0.0 10 10000 15 23 121 6 1 0 0 166 1.66±0.31 CP/(40 mg/kg·bw) 10 10000 64 107 375 47 3 0 2 598 5.98±0.66**

    此外,30 d試驗期間,大鼠生長情況良好,與溶劑對照組比較,各劑量組的體重、進食量、食物利用率、血液學指標、血液生化學指標的變化均無統(tǒng)計學意義(p>0.05);解剖觀察和組織病理學檢查也并未發(fā)現異常。在試驗劑量下,大豆異黃酮復合軟膠囊對大鼠各項觀測指標未產生可見毒副作用,未觀察到有害作用劑量(NOAEL)大于3.33 g/kg·bw。

    3 結論

    3.1 本研究對大豆異黃酮復合軟膠囊的免疫功能進行了評價。結果顯示,與對照組相比,高劑量組增強DTH能力、小鼠脾淋巴細胞轉化能力的效果分別為34.87%(p<0.05)、36.07%(p<0.05),說明大豆異黃酮復合軟膠囊具有提升細胞免疫的功能;高劑量組PFC 增值效果為 15.85%(p<0.05),中、高劑量組分別提升小鼠血清溶血素水平9.98%(p<0.05)、12.66%(p<0.01),說明大豆異黃酮復合軟膠囊具有提升體液免疫的功能。綜上,大豆異黃酮復合軟膠囊具有增強免疫功能的作用,這一結論為大豆異黃酮復合軟膠囊在保健品方面的合理應用提供了理論支持。

    3.2 對大豆異黃酮復合軟膠囊的安全性進行了評價。大豆異黃酮復合軟膠囊大鼠急性毒性MTD大于19.76 g/kg·bw,相當于人體推薦量的593.4倍,NOAEL大于3.33 g/kg·bw,屬無毒級。Ames試驗、小鼠骨髓細胞微核試驗、小鼠精子畸形試驗均為陰性,說明大豆異黃酮復合軟膠囊無致突變和損害生殖系統(tǒng)作用。在本試驗劑量范圍內及相應環(huán)境條件下,大豆異黃酮復合軟膠囊口服無明顯毒副作用,食用安全性較高。

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